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Anteproyecto-sulfato-quinina
Química Analítica (Universidad Nacional Autónoma de México)
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Universidad Nacional Autónoma de México

Facultad de Estudios Superiores Zaragoza
Anteproyecto para la determinación del % de pureza de sulfato de quinina en

tabletas de lote y marca desconocida, mediante fluorometría por el método de
comparación de un estándar.
Grupo: Laboratorio N° L-402 Fecha de emisión: Página 1 de 17
2501 23-FEB-20
Objetivo
Determinar el % de pureza de sulfato de quinina en tabletas de lote y marca
desconocida, mediante fluorometría por el método de comparación de un
estándar.
Hipótesis
Contiene no menos del 99.0 por ciento y no más del 101.0 por ciento de sulfato de
quinina calculado como alcaloides totales y en relación con la sustancia seca.
Marco teórico
Fluorometria
Algunas sustancias pierden parte de su energía en calor y emiten el resto en
forma de radiación electromagnética con una longitud de onda mas larga de la que
han absorbido. Cuando una molécula absorbe radiación los electrones son
excitados y pasan a un orbital de mayor energía, siendo un estado de estabilidad
al tener pequeñas colisiones que posteriormente regresan a su estado primordial
de energía. Las sustancias que se analizan en fluorometria deben tener la
propiedad de luminiscencia principalmente puede analizarse estrógenos y
alcaloides tranquilizantes.
La radiación fluorescente se emite en todas direcciones, se utilizan tres
geometrías diferentes. A 90° se encuentra el diseño de los fluorometros ya que es
el, más conveniente y de bajo precio; observación a un Angulo pequeño, este
Angulo se utiliza al observar soluciones concentradas y su fluorescencia es
cercana ala superficie irradiada y el angulo lineal se utiliza para deducciones
teóricas.
Sánchez Córdova Jessica Garcia Padilla Gilberto Velázquez López Italia

Itzel Revisó Amely
Realizó Aprobó

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Figura 1. Componentes de un fluorómetro

Los componentes de un fluorometro o espectrofluorometro son muy similares a los
de un espectrómetro UV-Visible.
El diagrama de doble haz es sumamente útil para compensar por las fluctuaciones
en la intensidad de la fuente de exictación. El haz de referencia pasa a travez de
un atenuador de radiación y se ajusta este hasta hacer que la intensidad de este
has sea igual a la intensidad de haz de fluorencencia que pasa por el recipiente de
muestra cuando se encuentra en este un blanco.

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El haz de radiación dirigido al recipiente de la muestra pasa por un filtro

(fluorometo) o por un monocromador (espectrofluorometro), donde se selecciona
la longitud de onda de la radiación que se va incidir en la muestra. La radiación
fluorescente emitida por la muestra es en todas direcciones pero es mas
convenientemente medida a un angulo de 90° con respecto al haz incidente ya
que la radiación dispersada por la solución y por la celda misma puede interferir
con la radiación emitida por la especia fluorescente.
Tanto el has de referencia como el has de muestra son dirigidos a un sitema de
fototubos y posteriormente a un amplificador diferencial que se encuentra
conectadi a un sistema de lectura, tal como una escala digital o de aguja.
Fuentes de radiación: La lampara de tugteno ordinaria no da suficiente intensidad
para ser utilizada en fluorescencia. Son comunes las lamparas de Xenon y de
mercurio. La lampara de xenón es mas versátil que la lampara de mercurio, ya
que la lampara de xenón produce una intensa radiación por el paso de corriente
en una atmosfera de xenón; el espectro de este tipo de lampara es continuo de
250 a 600 nm. Con un pico de máxima de intensidad a 470 nm.
Filtros y monocromadores: Se utilizan frecuentemente filtros de absorción y filtros
de interferencia, la, mayor parte de los fluorometros usan monocromadores de red.
Las redes tienen la ventaja de dar dispersiones lineales, una mejor dispersión en
la región visible y tiene menor perdida de luz en comparación con los prismas. Los
prismas de cuarzo dan mejor dispersión en la región ultravioleta y no poseen
espectros de segundo y tercer orden.
Los filtros se utilizan para realizar dos funciones:

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El primero es permitir que solamente una luz de una onda especifica pueda pasar
a la celda de muestra y exictar una molecula espécifica. Los filtros de exictación
son simpre de banda corta (NB). Los filtros de emisión son generalmente agudos
de corte (SC), que permite que solo la luz emitida por encima de la longitud de
onda especifica pueda pasar en el tubo fotomultiplicador. Puesto que el tubo
fotomultiplicador es sensible a una amplia gama de longitudes de onda, un filtro
permite al usuario elegir el intervalo de longitud de onda detectada por el tubo
fotomultiplicador, para reducir el ruido de fondo y asi aumentar la sensibilidad.
Filtro de paso de banda estrecha (NB)
Este filtro se utiliza cuando las longitudes de onda de exictación y emisión están
muy juntas, los anchos de banta típicos están en el rango de 8 a 10 nm. Se
requieren técnicas de fabricación de precisión y cuestan mas que los otros tipos
de filtros. El filtro sonsiste en un interferómetro miniatura en conjunto con los
vidrios de bloqueo. Algunos filtros de paso de banda estrecha se componen de
unas gafas especiales opticas, o una comninación de vidrio o material de gelatina
y tienen anchos de banda de 50 a 100 nm. Estos filtros son particularmente útiles
cuando se requiere una alta sensibilidad y una resolución mas baja no es un factor
para distinguir entre los diferentes restos de fluorescentes presentes en la
solución.
Filtros agudos de corte SC
En este tipo de filtro pasa toda la luz de una longitud de onda a un valor dado y
bloquea toda la luz de longitudes de onda más cortas. La transición de cero a la
transmitancia total (aproximadamente 80-90 por ciento), por lo general tiene lugar
en una región de alrededor de 40 nm.

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La longitud de onda característica de un filtro de agudo de corte SC se define

como la longitud de onda a la que el filtro tiene una transmitancia de 37 por ciento.
Con la mayoría de los fabricantes de filtros, no se trata de una tolerancia de 10 nm
en la ubicación de las mas largas longitudes de onda de la luz emitida que se
puede emitir.
Compatibilidad de los filtros
Dos filtros son compatibles y pueden ser utilizados como filtros de excitación y de
emisión de las longitudes de onda de la luz que trasmiten no se solapan
significativamente. Si una superposición de luz presente, dispersada a partir de
una muestra incluso ligeramente turbia o de un defecto óptico en la cubeta, llega al
túbulo fotomultiplicador y es registrada como fluorescencia.
Cabe mencionar que es muy importante la elección de la anchura de a rendija. Es
necesario llegar a una situación de compromiso ente resoluciones y sensibilidad.
Las anchuras de rendija grandes dan mucha sensibilidad, pero poca resolución y
aumentan la cantidad de luz parasita y dispersada. Normalmente lo mejor es
ajustar la rendija del monocromador de excitación separadamente de la del
monocromador de emisión.
Al registrar el espectro de excitación es conveniente mantener la rendija de
excitación poco abierta (para que haya buena resolución) e ir ensanchando la
rendija de emisión (para que la sensibilidad sea buena)
Cubetas: Las cubetas y disolventes pueden ser fluorescentes y se han de recoger
cuidadosamente. Las cubetas de vidrio con adecuadas para la mayor parte de los
análisis por fluorescencia; por debajo de 320 nm puede usarse el cuarzo.

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Obviamente, la muestra luz fluorescente en todas direcciones. La medida de la

intensidad de fluorescencia en la dirección de propagación de la radiación de
excitación es extremadamente difícil, porque comparte la medida de la luz emitida
respecto a una alta intensidad de fondo de luz trasmitida. Este problema se supera
observando la fluorescencia en ángulo recto con el haz de excitación.
Determinada parte de la luz trasmitida se puede dispersar en esta dirección y esta
luz indeseable se separa mediante el filtro de fluorescencia (filtro secundario), que
se selecciona de modo que tenga máxima transmisión en el máximo de
fluorescencia.
A continuación, la fluorescencia alcanza un foto túbulo o fotomultiplicador,
produciendo así una señal eléctrica que se amplia y mide con un medidor para
indicar la intensidad de fluorescencia.
Detectores: debido a que la señal de florescencia es de baja intensidad se
requiere de un potente sistema de amplificación. Por esto son preferidos los tubos
fotomultiplicadores, aunque también se usan comúnmente los túbulos. Es
imprescindible usar detectores muy sensibles; muchos instrumentos utilizan tubos
fotomultiplicadores de alta gama, tales como los RCA 1P28 y 2P21. El margen de
respuesta especial de estos tubos es entre 210 y 670 y entre 310 y 670 nm,
respectivamente. Ambos tienen una ganancia alta y una corriente oscura baja,
siendo el 1P21 ligeramente mejor en los dos aspectos.
Influencia de la estructura molecular en la luminiscencia:
La primera condición para que una molécula pueda presentar fluorescencia
fosforescencia es que absorba radiación ultravioleta o visible. En general, cuando
más absorba una molécula más intensa ser la luminiscencia. Esta condición
elimina virtualmente todos los compuestos orgánicos cíclicos saturados y

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alifáticos. El estudio de las moléculas con dobles enlaces conjugados,

especialmente los que tienen una gran energía de resonancia, da buenos
resultados. Los hidrocarburos aromáticos especialmente las de estructuras multi
cíclica rígida y planos son los componentes ideales. Los anillos aromáticos que
contiene heteroátomos suelen ser mas bien fosforescentes que fluorescentes.
La luminiscencia de la molécula suele estar muy influida por los sustituyentes,
Generalmente existe correlación entre estos efectos y los observados en los
espectros de absorción, Aunque no pueden darse reglas rígidas pueden indicarse
una serie de generalidades útiles:
 Los grupos donadores de electrones aumentan, en general, la florescencia
ya que tienden a aumentar la probabilidad de la transición entre el estado
excitado siguiente de menor energía y el estado fundamental. Los grupos
NH2 y -OH son especialmente adecuados.
 Los sustituyentes que interaccionan solo ligeramente con los electrones π,
tales como el grupo alquilo, -SO3 y NH3, influyen poco en la luminiscencia.
 La introducción de un átomo de numero atómico elevado en un sistema de
electrones π suelen aumentar la fosforescencia y disminuir la fluorescencia.
 Los grupos electrón atrayentes tales como -COOH, -NO2, N=N- y haluros,
disminuyen e incluso eliminan la fluorescencia.
La formación de quelatos con iones metálicos favorece, en general, la
fluorescencia, ya que aumenta la rigidez y disminuye las vibraciones internas.
La presencia de oxígeno, este último efecto es uno de los más problemáticos
más molestos de la fluorescencia; el oxigeno disminuye la intensidad de la
fluorescencia de un compuesto orgánico por que lo oxida, pero normalmente el
oxígeno actúa sobre los estados singuletes y tripletes excitados favoreciendo el

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cruzamiento de sistemas mediante choques con las especies excitadas

formando un complejo de transferencia de carga transitoria.
Relación entre intensidad de luminiscencia y concentración:
La intensidad de la radiación fluorescente If o fosforescente Ip debe ser
directamente proporcional a la concentración de las especies capaces de emitir
radiación fluorescente o fosforescente presentes en la muestra. Aunque la
relación entre la intensidad de la emisión medida y la concentración de la
especie luminiscente es fundamentalmente de la misma en fluorescencia y en
fosforescencia,
Fosforescencia
Se refiere a que una fuente de luz irradiada cobre una sustancia que excita a
los electrones a un nivel de mayor energía, al apagarse la fuente de luz los
electrones pasan lentamente a su estado basal y la luz absorbida en la
sustancia va desapareciendo poco a poco.
Luminiscencia
Es la propiedad de ciertas sustancias de emitir luz cuando son sometidas a una
radiación electromagnética. La luminiscencia se divide en: quimioluminiscencia,
fotoluminiscencia, fluorescencia, fosforescencia, etc,
Espectro de excitación y emisión
Los espectros de luminiscencia poseen un monocromador entre la fuente y la
muestra que se denomina monocromador de excitación y existe otro
monocromador entre la muestra y el detector que se llama de emisión. Si el
monocromador de emisión se mantiene a una longitud de onda fija y se varia la

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longitud de onda de excitación de obtiene un espectro de excitación y si se

realiza lo contrario se obtiene un espectro de emisión.
Método oficial
Imagen 1. Fragmento de la FEUM pp. 1297, 1298 11va ed.

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Lista de material
Tabla 1. Material a utilizar en la practica
Material Equipo Reactivos
-Vaso de -Balanza - 5 tabletas de sulfato de quinina de

precipitado analítica 200mg
- Matraz aforado -Fluorómetro -Ácido sulfúrico 0.1N
-Espátula -12.5 mg de sulfato de quinina de analito
-Vidrio de reloj
-Pipetas graduadas
-Probeta
-Agitador de vidrio
-Brocha
-Celdas de plastico
-Pizeta
-Espatula
-Mortero con pistilo
Nota: La cantidad de cada material a utilizar puede cambiar, además de la
capacidad.
Método propuesto
• Preparación de 250 ml de ácido sulfúrico a 0.1 N

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1. En una balanza granataria colocar un vaso de precipitado de 250 ml

previamente etiquetado, al peso obtenido del vaso se le agregara 0.66 ml de
H2SO4 con una pipeta graduada 1/100.
2. Al vaso se le agrega agua destilada, aproximadamente 250 ml llegando a la

marca del volumen que tiene el vaso, disolver las lentejas por medio de agitación.
• Preparación de la disolución estándar de sulfato de quinina
1.-Pesar en un papel glaseen 13x13 cm aproximadamente con exactitud 12.5 mg

de sulfato de quinina en una balanza analitica, verter en un matraz aforado de 25
ml, H2SO4 0.1 N y agitar el matraz, sujetando la tapa esmerilada para que no
salga la disolución, invirtiendo el matraz
2.-Tomar una alicuota de la disolución anterior con una pipeta volumétrica de 1 ml

y verter en un matraz volumétrico de 25 ml, aforar con H2SO4 0.1 Ne invertir 3
veces el matraz sujetando la tapa esmerilada.
3.-Tomar una alicuota con una pipeta volumétrica de 1 ml de la dilución del paso 2
y colocar en un matraz aforado de 10 ml, aforar con H2SO4 0,1.
4.-Posteriormente de la disolución 2 tomar una alicuota de 1 ml y verter en un

matraz volumétrico de 10 ml y aforar H2SO4 0.1 N.
5.-Con una pipeta volumétrica de 1 ml tomar de la disolución 2 una alícuota y

verter en un matraz aforado de ml, llevando a su aforo con H2SO4 0.1 N. •
Preparación de muestra problema

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6.- Se pesan aproximadamente con exactitud en un vidrio de reloj 5 tabletas de

sulfato de quinina comercial en la balanza analítica, posteriormente se trituran en
un mortero de porcelana hasta obtener un polvo fino. Al tener conocimiento del
peso de la muestra mediante reglas de tres se calcula el peso de una sola tableta,
a su vez si una tableta contiene 200 mg de principio activo de sulfato de quínina se
calcula cuánto se debe pesar del polvo para obtener el valor correspondiente de
principio activo.
7.-Pesar aproximadamente con exactitud el polvo de sulfato de quinina en un

papel glaseen de 5x5, se coloca en un matrąz aforado de 25 ml y se llega al aforo
con H2SO4 0.1 N, agitar hasta que se disuelve parcialmente el paracetamol
(invirtiendo el matraz 3 veces, sujetando la tapa para que no se salga parte de la
disolución). NOTA: Se realizan las pesadas por triplicado
8.-Tomar una alícuota con una pipeta volumétrica de 1 ml de la disolución anterior

y verter en un matraz aforado de 25 ml, llegar al aforo con H2SO4 0.1N.
9.-A un matraz aforado de 10 ml agregar una alicuota de la disolución 8 con una

pipeta volumétrica de 1 ml y aforar con H2SO4 0.1N.
10.-Encender el fluorómetro
11-. Colocar el blanco (H2SO4 0.1 N) en la celda de plástico y apretar el botón que
dice 0.000 para calibrar el aparato. Automáticamente nos dará una lectura de
absorbancia en 0.
12.-Colocar en una celda la disolución problema, introducir en el porta celdas que

contiene el aparato de manera que la parte rayada de la celda quede hacia
adelante.

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13.-Sacar la celda del instrumento, verter el contenido en un frasco de residuos y

limpiar la celda con un pedazo de papel suavemente.
14.-En otra celda colocar la disolución del paso 3 e introducir en el porta celdas
para tomar la lectura de su absorbancia. Al obtener la lectura, sacar la celda del
aparato, verter el contenido en el frasco de residuos y limpiar con un papel
suavemente la celda.
15.-En la celda anterior previamente limpiada repetir el mismo procedimiento para

las disoluciones del paso 4,5 y 9.
16.- Con las lecturas de absørbancia de las disoluciones 3,4 y 5 se realizará la

curva estándar, a partir de ella se conocerá la concentración de la disolución 9.
Cálculos
Preparación de solución problema:
( pesadaAforo )( Aforo 2 )( Aforo 3 )( Aforo 4 )=¿

de problema Alicuota 1 Alicuota 2 Alicuota 3
1
Pesada: La cantidad que se propone pesar de sulfato de quinina estándar(g)

Aforo 1: Capacidad del matraz en que se prepara la disolución de sulfato de
quinina.
Alícuota 1: Capacidad de la pipeta volumétrica para tomar la alicuota de la
disolución anterior de sulfato de quinina (ml).
Aforo 2: Capacidad del segundo matraz donde se colocará la alícuota 1 (ml)

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Alícuota 2: Capacidad de la pipeta volumétrica con la cual se tomará la alícuota de

la disolución de sulfato de quinina del segundo matraz (ml)
Aforo 3: Capacidad del matraz donde se colocará la alícuota 2 (ml)
Alícuota 3: Capacidad de la pipeta volumétrica con la cuał se tomará la alícuota de
la disolución de sulfato de quinina del tercer matraz(ml).
Aforo 4: Capacidad del matraz donde se colocará la alícuota 3(ml).
( 12500
25 mL )( 25 mL 10 mL 10 mL )
µg 1mL
)( 1 mL
)( 1mL
=0.2 µg /mL
Se requiere pesar 12.5mg de sulfato de quinina para preparar la solución

problema.
 Preparación de 250mL de ácido sulfúrico 0.1N
m=N V Peq
Donde:
m: masa del ácido sulfúrico (g)

N: normalidad de ácido sulfúrico (eq/L)
Peq: peso equivalente de ácido sulfúrico (g/eq)
m=( 0.1 N ) ( 0.25 L ) ( 98.07

2 eq )
g
=1.2258 g de H 2 SO 4
Ya que el ácido sulfúrico no es sólido, se ajusta con su densidad:
m
ծ=
v

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Donde:
Ծ: Densidad de ácido sulfúrico= 1.84g/cm3

M: masa calculada de ácido sulfúrico= 1.2258g
V: volumen a calcular
m
v=
ծ
Sustituyendo en la ecuación:
1.2258 g
v= =0.6661 mLde H 2 SO 4
1.84 g /cm3
Propiedades Físicas, Químicas y Toxicológicas
Reactivo Propiedades Propiedades Toxicidad

físicas químicas
Sulfato de quinina P.M= 782g/mol El producto no El contacto
Sólido blanco presenta peligros repetido o
Poco soluble en debido a su prolongado con el
agua reactividad. producto, puede
P. Fus: 225-dec°C Mantener alejado causar la
Punto/ Intervalo de agentes eliminación de la
de ebullición: oxidantes y de grasa de la piel,
992.5°C materiales dando lugar a una
fuertemente dermatits de

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alcalinos o ácidos, contacto no

a fin de evitar alérgica y a que
reacciones se absorba el
exotérmicas. producto a través
de la piel. Las
salpicaduras en
los ojos pueden
causar irritacióin y
daños reversibles.
Diagrama de flujo

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Preparación de la
Preparar la solución Preparar la solución de
disolución de H2SO4 a
Estandar la muestra problema
0.1 N
Colocar la cantidad de
Medir absorbancia de
Realizar curva estandar cada reactivo en los
cada uno
tubos de ensayo
Trazar la curva y
Anotar los resultados
determinar la cantidad
del desarrollo
de contenido de la
experimental
muestra problema
Bibliografía
1. Skoog D, West D, Holler J, Crounch S. Química analítica. 7a edición.

México: McGraw Hill; 2001.
2. Farmacopea de los Estados Unidos Mexicanos, 11va edición, págs.
1297,1298.
3. Olsen Eugene D. Métodos Ópticos de Análisis, España. Editorial Reverté;
1990.
4. Operator's Reference Manual Model 450 digital Fluorometer. USA; 1987

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1. En una balanza granataria colocar un vaso de precipitado de 250 ml

2. Al vaso se le agrega agua destilada, aproximadamente 250 ml llegando a la

• Preparación de la disolución estándar de sulfato de quinina

1.-Pesar en un papel glaseen 13x13 cm aproximadamente con exactitud 12.5 mg

2.-Tomar una alicuota de la disolución anterior con una pipeta volumétrica de 1 ml

4.-Posteriormente de la disolución 2 tomar una alicuota de 1 ml y verter en un

5.-Con una pipeta volumétrica de 1 ml tomar de la disolución 2 una alícuota y