TÉCNICAS GENERALES DE

LABORATORIO
UNIDAD DIDÁCTICA 6
TÉCNICAS POTENCIOMÉTRICAS
Daniel Brell Martín
Ldo. Biología y Bioquímica
Ciclo Formativo de Grado Superior en Anatomía Patológica y Citodiagnóstico
 LAS DISOLUCIONES ELECTROLÍTICAS
• Disolución electrolítica: solución en la que el soluto se disocia en iones.
• Para su formación se requiere que el soluto sea un compuesto iónico y el disolventes sea polar.
• Los iones procedentes de la disociación de las moléculas del soluto son atraídas por las moléculas
que conforman el disolvente.

• Características generales de las disoluciones electrolíticas:

• La disociación electrolítica no constituye un cambio molecular a nivel químico, sino
únicamente a nivel de los enlaces que unen las moléculas (si retiramos el disolvente,
recuperamos el soluto).
• Son disoluciones muy estables (alta fuerza de atracción electroquímica).
• Son soluciones conductoras de la electricidad debido a la presencia de cargas iónicas que
favorecen la creación de diferencias de potencial.
• La conductividad de una disolución electrolítica es proporcional a la concentración de la misma
(a mayor conductividad, mayor concentración del soluto).
 LAS DISOLUCIONES ELECTROLÍTICAS
• En función del comportamiento químico de una sustancia en disolución electrolítica, definimos:

• Ácidos: sustancias capaces de aceptar un par de electrones, las cuales en solución acuosa se
ionizan liberando hidrones o hidrogeniones (H+).
• Bases: sustancias capaces de ceder un par de electrones, las cuales en solución acuosa se
ionizan liberando aniones hidroxilo (OH-).

• Características generales de los ácidos y las bases:

• Los ácidos presentan un sabor característico (ácido), siendo además corrosivos, mientras
que las bases presentan sabor amargo y consistencia jabonosa.
• Ambas sustancias son buenas conductoras de la electricidad en disolución acuosa.
• Al ponerse ambas en contacto se producen reacciones de neutralización.
 LAS DISOLUCIONES ELECTROLÍTICAS
• Iones resultantes
• Base conjugada de un ácido: especie que surge tras ceder un H+.
• Ácido conjugada de una base: especie que surge tras ceder un grupo OH-.

• El agua presente en una disolución y en presencia de hidrones (H+), forma un catión

específico denominado ion hidronio (H3O+), el cual es muy ácido y constituye el estándar
de referencia para evaluar el grado de acidez de otras sustancias.
• HNO3 + H2O → NO3– + H3O+
• HCl + H2O → Cl– + H3O+
 LAS DISOLUCIONES ELECTROLÍTICAS
• El grado de disociación (α) → % de ácido o de base que se encuentra en estado disociado
cuando se alcanza el equilibrio.
• Expresa la relación: [forma molecular]inicial / [forma disociada] (en situación de equilibrio).
Ambas formas

• Ej: α = 0.1 → implica que en el equilibrio, el 10% de las moléculas están ionizadas y el 90%
son válidas

restante no.
• Ej: α = 10% → implica que en el equilibrio, el 10% de las moléculas están ionizadas y el 90%
restante no.
• En función del grado de disociación, se definen los siguientes conceptos:
• Ácidos y bases fuertes → aquellos compuestos que en disolución acuosa presentan un grado
de disociación de 1 (están ionizados al 100%).
• Ej. ácidos fuertes: H2SO4, HCl, HNO3, etc. / Ej. bases fuertes: hidróxidos de metales alcalinos.
• Ácidos y bases débiles → aquellos compuestos que en disolución acuosa presentan un grado
de disociación inferior a 1 (no están completamente ionizados).
• Ej. ácidos débiles: ácido acético, ácido bórico, etc. / Ej. base débil: amoniaco (NH3).
 LAS DISOLUCIONES ELECTROLÍTICAS

Concentraciones molares y grado de disociación que presenta, generalmente, cualquier ácido o base.
 LAS DISOLUCIONES ELECTROLÍTICAS
• Las constantes de equilibrio → medida cuantitativa de la fuerza de un ácido (Ka) o base (Kb).
aA + bB → cC + dD
(deducida de la Ley de acción de masas)
• La constante varía con la tª, pero no con las concentraciones de reactivos y productos.

• Aplicando la fórmula a los ácidos y bases que hemos estudiado, tenemos que:
▪ Cuanto menor sea [compuesto molecular]
en situación de eq., más disociado estará el
• AH → A- + H+ compuesto (α será mayor).
• BOH → B+ + OH- ▪ A mayor Ka → mayor fuerza del ácido.
▪ A mayor Kb → mayor fuerza de la base.
▪ pKa = -log Ka
▪ pKb = -log Kb
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• Compuestos con varias constantes
• Compuesto monoprótido → ácidos o bases capaces de liberar un solo hidrón (H+) / anión hidroxilo
(OH-).
• Compuesto poliprótido → ácidos o bases capaces de liberar más de un hidrón (H+) anión hidroxilo
(OH-). Este último tipo implica que dicho compuesto tendrá distintas K a.
pKa = 2,2 (la forma ionizada es H2PO4–)
• Ej: el ácido fosfórico (H3PO4) tiene 3 puntos de eq.:
pKa = 7,2 (la forma ionizada es HPO42–)
pKa = 12,7 (la forma ionizada es PO43–)
▪ Algunas propiedades inherentes de los átomos que componen los ácidos y bases aumentan la fuerza con que se
atrae a los electrones y por tanto el hidrón se puede liberar con mayor facilidad:
▪ Al aumentar la electronegatividad del átomo central del compuesto, aumenta la acidez.
▪ En un mismo átomo, al aumentar el número de oxidación aumenta la acidez.
▪ Al aumentar la carga positiva en los cationes, también aumenta la acidez.
▪ Al aumentar el tamaño de la base conjugada también aumenta la acidez.
 LAS DISOLUCIONES ELECTROLÍTICAS
• El pH → medida de la acidez o alcalinidad de una disolución.
• Esta determinado por la actividad de los iones hidronio (H3O+) en la disolución.
• Se expresa como: pH = -log [H3O+] / pOH = -log [OH-].
• Sustancias anfóteras → aquellas que pueden actuar como ácidos (ceden H+, formando iones
hidronio H3O+) y como bases (ceden OH-).
• Ej: el agua, cuya situación de eq. es: 2H2O → H3O+ + OH-

La relación entre las ctes.
de acidez y de basicidad de
una pareja de ácido-base
conjugados es igual a Kw
(Ka × Kb = Kw = 10–14)
• Producto iónico del agua / cte. de ionización del agua: Kw = [H3O+] · [OH-]
• Esta cte. para el agua pura a 25 ºC es Kw = [H3O+] · [OH-] = 10-14 (equivalente a 10-14 M2).
• Puesto que las [ ] de ambos iones son iguales en eq.
• Por tanto, en el agua pura:
• [H3O+] = 10–7; como pH = −log [H3O+] → pH = 7
• [OH–] = 10–7; como pOH = −log [OH–] → pOH = 7
 LAS DISOLUCIONES ELECTROLÍTICAS
• Escala del pH → se toma el valor de pH / pOH del agua como referencia de neutralidad (pH = 7).
• En base a esto, puede realizarse la siguiente clasificación:
• Cualquier disolución con pH < 7 será ácida.
• Cualquier disolución con pH > 7 será básica.
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• Las reacciones de neutralización
• Son reacciones químicas que acontecen cuando se unen un ácido y una base.
• La reacción de neutralización se fundamenta en la siguiente expresión: Ácido + Base → Sal + Agua
• Disolución patrón → disolución de concentración conocida que se
agrega lentamente mediante bureta a otra disolución de volumen
conocido con el fin de conocer la concentración de un determinado
analito en esta, hasta neutralización completa (punto de equivalencia).

• Dependiendo de la fuerza de las soluciones, el punto de

equivalencia varía:
• Ácido fuerte + Base fuerte → disolución neutra (pH = 7).
• Ácido fuerte + Base débil → disolución ácida (pH < 7).
• Ácido débil + Base fuerte → disolución básica (pH > 7).
Evolución del pH durante una valoración ácido y base fuertes.
 LAS DISOLUCIONES ELECTROLÍTICAS
En la valoración de un ácido débil con una base fuerte, por ejemplo vinagre con sosa,
al principio de la titulación el pH se eleva más rápidamente que en la anterior valoración.
Hay que tener en cuenta que la sal formada sufrirá hidrólisis:
CH3COO–(ac) + H2O CH3COOH(ac) + OH–(ac)
En el punto de equivalencia el pH será básico.

En la valoración de una base débil con un ácido fuerte, por ejemplo amoniaco con
ácido clorhídrico, la gráfica obtenida es similar a la anterior pero en sentido opuesto,
comenzamos a un pH básico que baja rápidamente.
NH4OH(ac) + HCl(ac) " NH4Cl(ac) + H2O
Se forma una sal que sufrirá hidrólisis:
NH4–(ac) + H2O NH3(ac) + H3O+(ac)
En el punto de equivalencia el pH será ácido.
 LAS DISOLUCIONES ELECTROLÍTICAS
• Los indicadores ácido-base → sustancias que cambian de
color en función de la [H3O+], permitiendo determinar el final de
una valoración.
• Los indicadores son, normalmente, ácidos o bases débiles
cuya forma conjugada presenta un color distinto:

Ind-H + H2O (Color A) → Ind- + H3O+ (Color B)

• El indicador debe tener el intervalo de viraje de color
comprendido en la zona en la que se produce el salto de
pH (zona vertical de la gráfica).
• Cuanto más cercano se encuentre el intervalo de viraje al
punto de equivalencia de la disolución, mejor se apreciará el
punto final de la valoración.
 LAS DISOLUCIONES ELECTROLÍTICAS
• Las soluciones amortiguadoras → también llamadas soluciones tampón o buffers, son aquellas
Principales soluciones disoluciones que mantienen el pH cte. cuando se añaden
amortiguadoras del organismo pequeñas cantidades de ácidos o bases.
▪ Tampón bicarbonato: compuesto por Características de las soluciones amortiguadoras
ácido carbónico (H2CO3) y bicarbonato
(HCO3–), con valor de pKa de 6,1. • Las soluciones amortiguadoras más sencillas son disoluciones de:
Constituye el tampón más importante • Ácido débil (o sal del mismo tipo) + Base fuerte
de la sangre (pH = 7.4) representa el (Ej: CH3COOH + NaCH3COO).
75% de la capacidad buffer total de la
sangre. • Base débil (o sal del mismo tipo) + Ácido fuerte (Ej: NH3 + NH4Cl).
▪ Tampón fosfato: tampón inorgánico que
• Capacidad reguladora de un amortiguador: cantidad de ácido o base
se encuentra en los líquidos intracelulares
y mantiene el pH en torno al 6,86. que puede añadirse a un litro de tampón para variar el pH en una unidad.
▪ Otras sustancias que tienen actividad • Depende de la [ácido] o de la [sal]: a mayor concentración, más
reguladora: aminoácidos y hemoglobina. capacidad amortiguadora.
LAS DISOLUCIONES ELECTROLÍTICAS

Variación del pH de una solución

amortiguadora formada por ácido acético
(CH3COOH) y su base conjugada (CH3COO-),
en respuesta a la adición de iones hidroxilo
procedentes de la disociación de una base.
 TÉCNICAS ELECTROQUÍMICAS
• Técnicas electroquímicas → aquellas técnicas de análisis basadas
en las propiedades electroquímicas de una determinada solución para
determinar la concentración de un analito en ella.

• Potenciometría: técnica electroanalítica que permite determinar

la concentración de una especie electroactiva en una disolución
empleando un electrodo de referencia, un electrodo indicador y
un voltímetro).
• pH-metro → determina la [H+] (iones hidronio, especie
activa).
• Consiste en dos electrodos (generalmente, combinados) y un
voltímetro que miden la diferencia de potencial entre ellos.
• Generalmente, llevan además una sonda que registra la tª
y corrige las posibles variaciones en el pH. Electrodo indicador y electrodo de
referencia en una medición electroquímica.
 TÉCNICAS ELECTROQUÍMICAS
• pH-metro
• Tipos de electrodos de referencia
• Electrodo de hidrógeno → considerado el estándar, pero de difícil mantenimiento.
• Electrodo de calomelanos → formado por mercurio metálico con calomelanos (moléculas de cloruro
de mercurio). Su potencial varía bastante al subir la tª por encima de los 60 ºC.
• Electrodo de plata/cloruro de plata → consiste en una varilla de plata recubierta de cloruro de plata
e introducida en una disolución de iones de cloro. Presenta una gran estabilidad frente a cambios de tª.
• Tipos de electrodos indicadores
• Electrodo metálico → fabricados en oro, plata o platino. Permiten medir potenciales redox.
• Electrodo de membrana → formados por una membrana que separa el electrodo de la disolución y
que permite el paso selectivo del analito a medir. Se distinguen varios tipos:
• Electrodos ion – selectivos (ISE) → específicos para medir iones.
• Electrodo de vidrio → son los más habituales, específicos para medir cationes, siendo
selectivos para determinados analitos según la proporción de óxido de aluminio (Al2O3) en la
membrana de vidrio.
• Electrodos sensibles a gases → específicos para la medición de O2 y CO2.
 TÉCNICAS ELECTROQUÍMICAS
• Calibración del pH-metro → el pH-metro debe calibrarse:
▪ El pH-metro se debe calibrar: ▪ Después de medir bases fuertes (pH > 12).
▪ Una vez al día. ▪ Después de medir soluciones muy densas porque
▪ Antes de cada uso. pueden obturar la membrana.
▪ Después de cambiar el electrodo. ▪ Dependiendo del rango de pH que queramos medir, se
▪ Después de medir ácidos fuertes (pH < 2). pueden usar uno de estos tres tipos de calibración:

• Calibración en un punto: requiere un solo calibrador y la aplicamos cuando vamos a medir valores de
pH cercanos al valor del tampón utilizado.
• Calibración en dos puntos: requiere dos calibradores. Constituye la calibración más habitual, cuando
se sabe si lo que se va a medir es ácido o básico. Se llevan a cabo dos
calibraciones sucesivas, limpiando y secando bien el electrodo entre ambas.
• Calibración en tres puntos: recomendados cuando se mide en toda la escala de pH (calibradores a pH
7, 4 y 9) o cuando se requiere mucha precisión en una determinada zona
(por ejemplo pH 2, 4 y 7).
 TÉCNICAS ELECTROQUÍMICAS
• Mantenimiento del pH-metro → requiere seguir las instrucciones del fabricante, aunque
generalmente suelen ser las siguientes, comunes a la mayoría
de equipos de medición del pH:
• Mantener el electrodo humedecido con su solución de conservación, suele ser KCl 3M en una
cápsula que cubre la membrana de vidrio.
• Si el electrodo se seca, se deberá sumergir unas dos horas en agua destilada.
• Si se necesita una limpieza del electrodo, se sumerge la membrana en una disolución de HCl
0,1 M o HNO3 0,1 M durante media hora.
• Si las impurezas son de origen proteico se añade pepsina al 1%.
• Si las impurezas son grasas se utiliza una disolución con detergente o metanol a una
temperatura de unos 40 ºC.