FACULTAD DE TECNOLOGÍA MÉDICA

ESCUELA PROFESIONAL DE LABORATORIO Y ANATOMÍA

PATOLÓGICA

PRUEBAS NO TREPONEMICAS Y TREPONEMICAS EN EL

DIAGNOSTICO DE LA SIFILIS: VDRL – RPR – FTA-ABS

ASIGNATURA: Inmunología II
DOCENTES:
• Lic. TM. Hernandez Acasiete, Mirtha
• Mg. Retamal Salazar, Alejandro
• Mg. Palacios Butrón, Fernando
• Lic. TM. Rivas Cárdenas, Arturo
ESTUDIANTES:
• Aniceto Vera, Antoni
• Linares Collazos, Brenda Briggitte

2023
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ESCUELA DE LABORATORIO Y ANATOMIA PATOLOGICA
“AÑO DE LA UNIDAD, LA PAZ Y EL DESARROLLO”

ÍNDICE

I. INTRODUCCIÓN ....................................................................................................................................... 3
1.1 VDRL – TEST ............................................................................................................................................. 4
1.2.RPR – carbón ............................................................................................................................................ 14
II. CONCLUCIONES ..................................................................................................................................... 20
III. CUESTIONARIO ...................................................................................................................................... 20
IV. REFERECIAS BIBLIOGRÁFICAS ........................................................................................................ 21
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Práctica: PRUEBAS NO TREPONEMICAS Y TREPONEMICAS EN EL

DIAGNOSTICO DE LA SIFILIS: VDRL – RPR – FTA-ABS

I. INTRODUCCIÓN
La sífilis es una enfermedad infecciosa con afectación sistémica causada por el microorganismo
Treponema pallidum subespecie pallidum, perteneciente al Orden Spirochaetales, familia
Spirochaetaceae. Son organismos de diámetro exiguo, con morfología característicamente
enrollada. Presentan un movimiento rotatorio y ondulado sobre el eje central de la bacteria. De las
treponemas identificadas, solo cuatro causan enfermedad en el ser humano: T. pallidum ssp
pallidum (sífilis), T. pallidum ssp pertenue (frambesia o pian), T. pallidum ssp endemicum (bejel)
y Treponema carateum (pinta). Estos cuatro microorganismos son parásitos obligados del hombre
y no se conoce un reservorio animal. Estos treponemas son morfológica, serológica y químicamente
indistinguibles, por lo que las pruebas diagnósticas de la sífilis pueden ser usadas para diagnosticar
la frambesia, el bejel o la pinta. Las enfermedades se diferencian por las manifestaciones clínicas
que producen, le edad de la población afectada, la distribución geográfica y el modo de transmisión.
Muchas espiroquetas no pueden ser cultivadas in vitro, necesitando medios altamente enriquecidos
y en un tiempo determinado. Los conejos son los animales de laboratorio más utilizados para
mantener organismos virulentos.
DIAGNOSTICO DE LABORATORIO
Detección directa del Treponema pallidum:
• En fresco con microscopia de campo oscuro.
• Inmunofluorescencia Directa
• Demostración en tejidos
• Cultivo de Treponema pallidum
• Técnicas de biología molecular

Detección Indirecta del Treponema pallidum: Pruebas serológicas

Se detectan dos tipos de anticuerpos: los llamados reagínicos, no específicos o no
treponémicos, y los treponémicos o específicos (IgG e IgM).

Pruebas reagínicas o no treponémicas:

Los anticuerpos reagínicos son de tipo IgG e IgM dirigidos frente a un antígeno lipoideo
que es el resultado de la interacción de T. pallidum con los tejidos del huésped
(cardiolipina-colesterol-lecitina). Aunque los resultados falsos positivos son bastante
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frecuentes, son los mejores métodos de diagnóstico serológico en la sífilis latente temprana
y en la tardía. Las pruebas reagínicas se dividen en:
● Floculación microscópica: VDRL (Venereal Disease Research Laboratory), USR.
● Floculación macroscópica: RPR prueba en tarjeta de reaginas plasmáticas rápidas, ART,
TRUST, RST.
● Enzimoinmunoensayo (ELISA) no treponémico: utiliza como antígeno el del VDRL

Pruebas treponémicas específicas: Utilizan antígeno treponémico específico y podemos

distinguir las siguientes:
• Inmunofluorescencia: FTA-Abs (anticuerpos absorbidos fluorescentes anti- treponema)
o la prueba FTA-Abs DS (variante del anterior con doble tinción).

• Hemaglutinación: TPHA y MHA-TP, ésta última adaptación de la anterior con una

placa de micro titulación.

• ELISA de anticuerpos treponémicos.

• Enzimoinmunoensayo de membrana (western-blot) treponémico.

• Prueba de inmovilización de T. pallidum (TPI)

1.1 VDRL – TEST

Suspensión antigénica estabilizada para realizar la prueba VDRL modificada (USR) de

detección de sífilis.
FUNDAMENTOS DEL METODO
Las "reaginas", presentes en individuos infectados por T. pallidum se detectan en suero por la
reacción con un antígeno cardiolipínico purificado y estabilizado. Si la muestra contiene reagina,
ésta se unirá al antígeno produciendo una floculación visible en microscopio. Las reacciones
inespecíficas se evitan con el empleo de antígeno altamente purificado y el agregado de cloruro de
colina característica de la técnica USR (Unheated Serum Reagin) en la que no es necesario inactivar
la muestra.
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VDRL TEST:
Materiales
-Agitador rotativo ajustable a 180 rpm.
-Placa de vidrio transparente con sectores de 14 mm de diámetro cada uno.
-Micropipetas para medir los volúmenes indicados.
-Microscopio
-bocal
-lejia al 5%
-suero fisiologico al 10% y 9%
-tubos 13x100
-LCR
-Sueros

Procedimiento
En Suero:
Prueba cualitativa
1.-lavado de manos, uso de Epps y preparación de materiales a usar.
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En la placa transparente rotulamos con “C+” para el control positivo y “C- “para el control
negativo.
Control Positivo:
Como el “Reactivo A” no venía con estándar, usamos un suero positivo como estándar,
colocamos 50ul de este y le echamos una gota del “Reactivo A” y mezclamos con un palito
desechable.
Control Negativo:
Colocamos 50ul de suero fisiológico, 50ul del “Reactivo A” y mezclamos con un palito
desechable.

Realizamos los controles para verificar que nuestro reactivo este vigente y evitar falsos
positivos/negativos.
Llevamos nuestra placa al girador rotativo a 180rpm por 4 minutos, pasado este tiempo lo
llevamos a la lampara de lectura.
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Como era de esperar el control positivo ya que hubo presencia de Floculación en cambio en el
control negativo no hubo presencia de floculación, esto nos indica que nuestro Reactivo A
funciona correctamente y procedemos a realizarlo con nuestros sueros.
Sueros problemas:
Después de los controles, pasamos a realizar la prueba con los sueros “01A2023”; “13A2023”
y el suero “VDRL (+)3”

Rotulamos la placa con números el 1 para “01A2023”, 2 para “13A2023”, 3 para el “VDRL
(+)3” y seguimos con el procedimiento

SUERO REACTIVO A
1(01A2023) 50ul 1 gota
2(13A2023) 50ul 1 gota
3 (VDRL (+)3) 50ul 1 gota
Mezclamos con nuestras baguetas descartables y lo llevamos al girador rotativo a 180rpm por
4 minutos, pasado este tiempo pasamos a la lectura.
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Resultados:

FLOCUACION REPORTE
01A2023 No hay presencia NO REACTIVO
13A2023 No hay presencia NO REACTIVO
VDRL (+) 3 Si hay presencia REACTIVO

El Suero “VDRL (+) 3” es Reactivo a la prueba, a continuación, realizamos la prueba

semicuantitativa/titulación.
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Prueba semicuantitativa / Titulación

Rotulamos los tubos del 1 al 8, cada número representa una dilución:

1 2 3 4 5 6 7 8
1:2 1:4 1:8 1:16 1:32 1:64 1:128 1:256

En cada tubo colocaremos

SOLUCIÓN MEZCLA SUERO

SALINA ANTERIOR
1:2 100 ul --- 100 ul
1:4 100ul 100ul ---
1:8 100ul 100ul ---
1:16 100ul 100ul ---
1:32 100ul 100ul ---
1:64 100ul 100ul ---
1:128 100ul 100ul ---
1:256 100ul 100ul ---

Luego de hacer las disoluciones, rotulamos las placas cada cuenco tendrá la disolución
rotulada, colocamos las mezclas en la placa y el reactivo:

MEZCLA REACTIVO A
1:2 50ul 1 gota
1:4 50ul 1 gota
1:8 50ul 1 gota
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1:16 50ul
“AÑO DE LA UNIDAD, LA PAZ Y EL DESARROLLO” 1 gota
1:32 50ul 1 gota
1:64 50ul 1 gota
1:128 50ul 1 gota
1:256 50ul 1 gota
Mezclamos con nuestras baguetas descartables y lo llevamos al girador rotativo a 180rpm por
4 minutos, pasado este tiempo pasamos a la lectura.

RESULTADOS DE LA PRUEBA SEMICUANTITATIVA:

FLOCUACION REPORTE
1:2 Si hay presencia REACTIVO
1:4 Si hay presencia REACTIVO
1:8 Si hay presencia REACTIVO
1:16 Si hay presencia REACTIVO
1:32 Si hay presencia REACTIVO
1:64 No hay presencia NO REACTIVO
1:128 No hay presencia NO REACTIVO
1:256 No hay presencia NO REACTIVO

INTERPRETACION DE LA LECTURA

El suero “VDRL (+) 3” en la

prueba semicuantitativo dio
REACTIVO hasta disolución
1:32.
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EN LCR:
La muestra de LCR fue centrifugada a 3500 rpm x 10 minutos, luego fue decantada en dos
tubos para repartir a las mesas.

Según el inserto que se usó, el Reactivo A tenía que ser diluido en 1:2 con solución
fisiológica al 10% al cual le llamaremos “Reactivo B”.

Procedemos a rotular nuestra placa, un cuenco para el LCR y otro cuenco(c-) para el control
negativo que lleva suero fisiológico y el “Reactivo B”.

LCR Suero Reactivo B

fisiológico
LCR 50ul -- 10ul
C- -- 50ul 10ul
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Mezclamos con nuestras baguetas descartables y lo llevamos al girador rotativo a 180rpm por
8 minutos, pasado este tiempo pasamos a la lectura.

Para la lectura necesitamos la ayuda de un

microscopio, pusimos la placa en la platina y con
el objetivo de 10x

Resultados:
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C-:
No reactivo

LCR:
Reactivo

INTERPRETACION DE LA LECTURA

La muestra de LCR es reactiva a la prueba de VDRL.

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1.2.RPR – carbón

Determinación cualitativa de reaginas plasmáticas

PRINCIPIO DEL MÉTODO

RPR-carbón es una técnica no treponémica de aglutinación en
porta para la detección cualitativa y semicuantitativa de reaginas
plasmáticas en suero humano. Las partículas de carbón
sensibilizadas con una mezcla de lípidos, son aglutinadas en
presencia de reaginas presentes en la muestra del paciente afectado
por sífilis.

MATERIALES

• Sueros • Control positivo y negativo

• Micropipetas y puntas • Porta

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• Bocal • Mezcladoras descartables

• RPR carbón
• Plumón indeleble

• Suero problema

• Agitador rotatorio

• Tubos de ensayo
• Gradilla
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• Solución salina estéril • Campo

PROCEDIMIENTO
1. Lavado de manos y correcto uso de EPPs. Procedemos a preparar nuestra mesa
de trabajo, desinfectar con lejía al 5% y adecuar todos los materiales a nuestro
alcance.

2. Procedemos a realizar los controles tanto positivo como negativo en la

porta previamente rotulada como corresponde. Depositaremos una gota de
cada control y procedemos a depositar 1 gota del reactivo sobre cada uno de
ellos.
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3. Seguidamente con la ayuda de una micropipeta tomaremos 50 ul de los sueros

01A2023, 13A2023 y del suero problema (X) entregado por la docente y
procedemos a depositar una gota del reactivo RPR carbón. Resaltar que el porta
debe estar rotulado adecuadamente para evitar equivocaciones.

4. Procedemos a esparcir con la ayuda de un palillo o mezcladora descartable por

todo el círculo completo. Es importante utilizar mezcladora diferente para
esparcir cada suero y luego de su uso desechar. Seguidamente, llevaremos la
porta al agitador rotatorio durante 8 minutos a 100 rpm. Al finalizar el tiempo
correspondiente, procedemos a realizar la lectura de manera inmediata.

5. La lectura fue la siguiente

*Control positivo: Reactivo

*Control negativo: No reactivo

*Suero 01A2023: No reactivo

*Suero 13A2023: No reactivo

*Suero problema: Reactivo

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6. Ya que el suero problema fue reactivo, procedemos a realizar la prueba

semicuantitativa, para ello es necesario hacer las diluciones correspondientes.
Para ello, necesitaremos solución salina estéril y tubos de ensayo.

7. Procedemos a rotular los tubos de ensayo y en cada tubo agregaremos:

*Dilución ½: 100 ul solución salina estéril + 100 ul de suero problema.

*Dilución ¼: 100 ul solución salina estéril + 100 ul dilución ½.

*Dilución 1/8: 100 ul solución salina estéril + 100 ul dilución 1/4.

Dilución 1/ 16: 100 ul de solución salina estéril + 100 ul dilución 1/8.

*Dilución 1/32: 100 ul solución salina estéril + 100 ul dilución 1/16.

*Dilución 1/64: 100 ul solución salina estéril + 100 ul dilución 1/32.

8. Rotularemos la porta correctamente para así con la ayuda de una micropipeta

tomar 50 ul de cada dilución y depositar una gota del reactivo RPR carbón.
Además, esparciremos y mezclaremos con los palillos descartables por todo el
círculo. (utilizar distintos palillos)
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9. Procedemos a llevar la porta al agitador rotatorio durante 8 minutos a 100 rpm.

10. Al finalizar el tiempo correspondiente, procedemos a realizar la lectura de

manera inmediata.

INTERPRETACIÓN DE LECTURA
En la prueba semicuantitativa fue reactiva en 1/16
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II. CONCLUCIONES
1.-El control de calidad de los reactivos es de suma importancia para evitar los falsos
negativos o falsos negativos.
2.-En cuadros patológicos como hepatitis, influencia, brucelosis, entre otras la prueba
Cualitativa de VDRL puede dar Positivo por eso es de suma importancia hacer la
titulación y trabajar de la mano con la historia clínica del paciente.
3.-Siempre hay que centrifugar nuestra muestra de LCR, ya que esta puede contener
glóbulos rojos u otros artefactos (bacterias, paracitos, células) y dependerá de esto si
la muestra es apta para la prueba.
4.-si la prueba del RPR te sale positiva, debemos de verificar y asegurarnos con una
prueba de ayuda al diagnóstico como la FTA-ABS.

III. CUESTIONARIO

1._En la prueba de FTA-Abs ¿Qué función cumple el sorbente?

Su función principal es absorber y eliminar los anticuerpos no específicos presentes en

la muestra de suero sanguíneo del paciente, de manera que solo los anticuerpos
específicos contra el antígeno de Treponema pallidum puedan ser detectados. Esto
mejora la especificidad de la prueba y reduce la posibilidad de resultados falsos
positivos.

2.- El grado de brillantes observado en la lectura de las treponemas en la prueba

de FTA-Abs ¿con que está relacionado?

La intensidad de la fluorescencia en la prueba FTA-ABS refleja la cantidad

de anticuerpos contra la sífilis en la sangre del paciente.
Cuando los anticuerpos específicos contra Treponema pallidum están
presentes en la muestra de suero, se unen a las treponemas utilizadas en
la prueba. Luego, una sonda fluorescente se utiliza para marcar estos
anticuerpos, y la intensidad de la fluorescencia emitida es proporcional a
la cantidad de anticuerpos presentes en la muestra.
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IV. REFERECIAS BIBLIOGRÁFICAS

Arando Lasagabaster, M., & Otero Guerra, L. (2019). Sífilis. Enferm. infecc.
microbiol. clín.(Ed. impr.), 398-404.

Ros-Vivancos, C., González-Hernández, M., Navarro-Gracia, J. F., Sánchez-Payá, J.,

González-Torga, A., & Portilla-Sogorb, J. (2018). Evolución del tratamiento de la sífilis a lo
largo de la historia. Revista española de quimioterapia, 31(6), 485.

Nayak, S. y Acharjya, B. (2012). Prueba VDRL y su interpretación. Revista india de

dermatología , 57 (1), 3.

Izzat, NN, Bartruff, JK, Glicksman, JM, Holder, WR y Knox, JM (1971). Validez de
la prueba VDRL en líquido cefalorraquídeo contaminado con sangre. Revista Británica de
Enfermedades Venéreas , 47 (3), 162.

Lee, JH, Lim, CS, Lee, MG y Kim, HS (2014). Comparación de una prueba
automatizada de reagina plasmática rápida (RPR) con la prueba de tarjeta RPR convencional
en las pruebas de sífilis. BMJ abierto , 4 (12), e005664.