COLEGIO LIBRE DE ESTUDIOS UNIVERSITARIOS

MANUAL DE PRÁCTICAS
DE LABORATORIO.

MATERIA:

TOXICOLOGIA.

NOMBRE DEL ALUMNO: ______________________________________

GRADO: _______________ GRUPO: ________________

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PRACTICA I

ASPECTOS DE SEGURIDAD EN LA RECOLECCION,

TRANSPORTE Y ALMACENAMIENTO DE LAS MUESTRAS
TOXICOLOGICAS.
OBJETIVO DE LA PRÁCTICA:
Que todo alumno que asista al laboratorio de toxicología, conozca, recuerde y
utilice y haga cumplir las reglas y normatividades para el manejo de sustancias y
muestras toxicas.

1. INTRODUCCIÓN:
La toxicología analítica es uno de los campos fundamentales de la toxicología,
pues en cualquiera de las ramas de ésta, se deben utilizar los métodos de análisis
químicos, entre otros.

La obtención de la muestra constituye el primer eslabón de ese proceso y es el

que condicionará las etapas siguientes del análisis hasta llegar al resultado.

En el presente se plantean distintos aspectos del análisis toxicológico, desde

los estrictamente técnicos como criterios sobre selección, preparación y conservación
de las muestras, hasta los aspectos legales asociados a los análisis como cadena de
custodia y confidencialidad de los resultados.

SEGURIDAD EN EL MANEJO DE PRODUCTOS QUIMICOS:

El riesgo que supone el manejo de sustancias químicas viene determinado por

la exposición a las mismos y por el peligro que éstas representan. Para poder
protegernos adecuadamente nosotros mismos y el medio ambiente, hemos de poner
en práctica medidas preventivas que tengan en cuenta ambos factores para asegurar
su correcta y segura manipulación, el adecuado almacenamiento y su correcta
eliminación.

LA EXPOSICIÓN:

Las características de la exposición incluyen fundamentalmente la duración del

periodo de contacto, junto con la intensidad (concentración) y las circunstancias de la
misma. En un anexo se incluyen las “normas generales de seguridad en el
laboratorio”, cuyo fin primordial consiste en tratar de evitar la exposición.

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Con relación a las vías potenciales de entrada de los compuestos al ser

humano, destacan:

- Vía respiratoria: Es la más frecuente e importante en medios laborales. Los

contaminantes (polvos, humos, aerosoles, gases, vapores) son inhalados y
absorbidos rápidamente por los pulmones. - Vía digestiva: suele producirse por
aspiración al pipetear, por conservar un producto en un envase de alimentos, o por
comer o fumar con las manos contaminadas.

- Vía percutánea: Además de provocar efectos corrosivos e irritantes, diversos

compuestos modifican las barreras facilitando la entrada de otros, o atraviesan las
membranas siendo absorbidos directamente hacia la sangre.

LOS PICTOGRAMAS O SÍMBOLOS DE PELIGROSIDAD:

Los símbolos de peligrosidad o pictogramas que aparecen en las etiquetas

informan mediante un dibujo, del peligro que conlleva su manejo y de las
precauciones que deberán aplicarse.

Existen 10 símbolos distintos. Los cuatro primeros están relacionados con la

posibilidad de provocar una explosión, iniciar un incendio o favorecer la amplitud de
incendios ya declarados. Es fundamental que las sustancias que lleven cualquiera de
estos símbolos se almacenen en el laboratorio en lugares convenientes, debidamente
aislados y alejados de las fuentes de calor. Los otros seis símbolos están
relacionados con el potencial tóxico de las sustancias para los seres vivos, sus
propiedades corrosivas e irritantes.

MATERIAL Y EQUIPO:
 Bata
 Lentes de protección
 Guantes
 Cubre bocas
 Zapato cerrado.
 Material y equipos de uso común para cualificaciones y cuantificaciones
toxicológicas.
 Reactivos químicos de uso común para cualificaciones y cuantificaciones
toxicológicas.
 Agua
 Cloro

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MÉTODO O INDICACIONES:

1. El profesor describirá el manejo y la precaución que se debe tener con el

manejo específico para el tipo y el tamaño de los contenedores, Las
instrucciones para el rotulado de los contenedores individuales, las condiciones
aceptables para el embalaje y el transporte.

2. El profesor demostrará el manejo correcto del material y equipos de uso común

para cualificaciones y cuantificaciones toxicológicas.

3. El profesor describirá el manejo y la precaución que se debe tener con los

reactivos químicos de uso común para cualificaciones y cuantificaciones
toxicológicas.

CUESTIONARIO:

 Investiga la siguiente simbología:

_____________ _______________ ______________

_____________ ________________ _______________

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______________ _______________ _______________

______________ ______________ _______________

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PRACTICA II
DETERMINACION DE SALICILATOS
POR COLORIMETRIA

OBJETIVO DE LA PRÁCTICA:
Que todo alumno que asista al laboratorio de toxicología, conozca, recuerde y
utilice y haga cumplir las reglas y normatividades para el manejo de sustancias y
muestras toxicas.

INTRODUCCIÓN:

El Ácido O – Acetilsalicílico es el ariléster más conocido y su nombre común es

Aspirina. La Aspirina es un analgésico eficaz contra el dolor de cabeza, es también un
agente antiinflamatorio que proporciona alivio a la inflamación asociada a la artritis y
heridas menores. También es un compuesto antipirético, ya que reduce la fiebre.

Para la síntesis de aspirina se utilizan dos reactivos de gran importancia: el

Anhídrido Acético, que se obtiene a partir de la reacción de cetona ( C2H2O) con
Ácido Acético (C4H6O3) y el Ácido Salicílico que se obtiene al hacer reaccionar
Fenóxido Sódico ( C6H5ONa) con Dióxido de Carbono (CO2) a 125 ºC y a 100 atm,
para dar Salicilato Sódico( C7HO3Na) que en medio ácido da como producto Ácido
Salicilico (C7H6O3), el Ácido Salicílico se prepara mediante la síntesis de Kolbe-
Schmitt, en la cual los fenoles o sus sales sódicas sufren una orto carboxilación
altamente regio selectiva con dióxido de carbono, alta temperatura y presión. luego la
reacción es llevada a medio ácido.

MATERIAL Y EQUIPO:
 Bata
 Lentes de protección
 Guantes
 Cubre bocas
 Zapato cerrado
 Pipetas
 Matraces volumétricos.
 Capsulas de porcelana
 Tubos de ensayo
 Balanza analítica
 Agua
 Cloro
 ácido nítrico 0.07 N
 ácido nítrico 0.01N
 Nitrato ferrico 10%

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PREPARACION DE SOLUCIONES
Solución de Ácido Nítrico al 0.01 N
1. Medir 0.63 mililitros de ácido nítrico concentrado
2. colocarlo en un matraz volumétrico de 1lt
3. aforar con agua destilada.

Solución de Ácido Nítrico al 0.07 N

1. Medir 4.69 mililitros de ácido nítrico concentrado
2. colocar en un matraz volumétrico de 1lt
3. aforar con agua destilada.

Solución de Nitrato férrico al 1 %

 pesar 1 gr. de nitrato férrico

 colocar en un matraz volumétrico de 100 ml.
 disolver y aforar con ácido nítrico 0.01N

MÉTODO O INDICACIONES:
DETERMINACIÓN DE SALICILATOS EN SANGRE
Separar de la muestra de sangre 1 ml de suero
Colocar en la cápsula de porcelana
Añadir 1 gota de nitrato férrico al 1%

DETERMINACIÓN DE SALICILATOS EN ORINA Y/O SUERO

Colocar en una cápsula de porcelana 0.2 ml de muestra
Agregar 0.8 mililitros de ácido nítrico 0.07 N
Añadir 1.0 mililitros de nitrato férrico al 1 %.

PRUEBA RÁPIDA EN ORINA

Colocar 1 ml de la muestra en un tubo de ensayo

Agregar 3 gotas de solución de Nitrato férrico al 10%

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RESULTADOS

En caso positivo aparecerá una coloración púrpura o violeta.

BLANCO CONTROL SANGRE ORINA

POSITIVO

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PRACTICA III

DOSIFICACION DE ALCOHOL ETILICO POR EL

METODO DE NICLOUX.

OBJETIVO DE LA PRÁCTICA:
El alumno determinara la concentración de miligramos de alcohol por cada
100 mililitros en sangre y orina, con la finalidad de establecer los diferentes grados
de ebriedad.

INTRODUCCIÓN:
Dentro de los tóxicos volátiles, los alcoholes Etanol y Metanol son sustancias de
Importancia toxicológica dada su acción farmacológica depresora del sistema
nervioso central (SNC) y el abuso creciente del consumo de bebidas alcohólicas. Esto
último, presenta importancia médico - legal debido a que los individuos alcoholizados
pueden ser causa de trastornos y accidentes, de los cuales son imputables.

Las vías de absorción de los alcoholes son la digestiva, la respiratoria, y la

absorción a través de la piel. En el caso del etanol, la intoxicación más frecuente
ocurre cuando el individuo ingiere cantidades excesivas de esta sustancia por el
consumo de bebidas alcohólicas fermentadas y/o destiladas.

En la actualidad existe una gran variedad de técnicas a disposición para dosificar

alcoholes que abarcan desde los clásicos métodos no instrumentales como las
reacciones colorimétricas y tests micro cristalinos, hasta los métodos instrumentales
más sofisticados capaces de medir propiedades físicas o químicas que permiten
identificación y cuantificación del el alcohol etílico y otros alcoholes o cetonas,
altamente volátiles que se ha determinado son consumidos como bebidas
embriagantes y algunos métodos bioquímicos que emplean reacciones de oxído-
reducción (Truhaut-Boudéne, Newman, pentóxido de yodo, Nicloux) son aceptables
como métodos presuntivos .

Los tipos de muestras generalmente usados para estas determinaciones son:

sangre (alcoholemia) , orina, otros fluidos biológicos, vísceras, alimentos, etc.
Las muestras de sangre se obtienen por punción venosa, teniendo la precaución de
no utilizar alcohol como antiséptico local. Se recomienda usar solución jabonosa o
solución acuosa de cloruro mercúrico 0.05%.

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La conservación de las muestras de sangre requiere el empleo de recipientes de

plástico con cierre hermético (no usar tapones de goma) conteniendo fluoruro de
sodio (anticoagulante y preservador) o bien oxalato y citrato (anticoagulante) y su
almacenamiento refrigerado a una temperatura de 4ºC.
El fluoruro de sodio impide el desarrollo de microorganismos que pueden
consumir o generar etanol. Los tapones de goma contienen vulcanizantes que son
sustancias reductoras capaces de dar falsos positivos en los métodos químicos. El
cierre hermético es necesario dado el carácter volátil del etanol y además, es
importante que no exista cámara de aire en el recipiente de recolección de las
muestras dado que el oxígeno presente podría oxidar al etanol y también para
minimizar pérdidas por volatilización.
En el caso de muestras de orina, se aplicaría una metodología similar para la
recolección y conservación de las mismas, pero cabe considerar que dicho fluido
biológico no presenta una correlación apreciable con una intoxicación debida a etanol.
El alcohol etílico se separa de las vísceras y tejidos mediante la técnica de
destilación ácida. A continuación, se procede a la dosificación del alcohol sobre una
alícuota del destilado mediante el método de Nicloux

METODO DE NICLOUX:

FUNDAMENTO:

Se basa en la dosificación del alcohol sobre una alícuota del producto de la

destilación por oxidación con mezcla sulfocrómica en caliente.

3C2H5OH + 2K2Cr2O7 + 8H2SO4 3CH3COOH + 2Cr2(S04)3 + 2K2SO4 + 11 H20

Reactivo de ANSTIE

Acido pícrico: C2H5OH

Acido sulfúrico: H2SO4

Dicromato de potasio: K2Cr2O7

Se cuantifica mediante titulación con punto final visual (cambio de color

verde azulado a verde amarillento). *** Los cuerpos cetónicos también dan positiva
esta reacción.

Muestras: destilado de sangre, orina, contenido de vísceras

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MATERIAL Y EQUIPO:
 Bata
 Lentes de protección
 Guantes
 Cubre bocas
 Zapato cerrado.
 Solución clorada.
 Matraz de destilación 250 ml.
 5.0 mililitros de sangre obtenida mediante punción venosa.
 5.0 mililitros de orina.
 Solución de ácido pícrico
 Reactivo de Anstie.
 Agua destilada.
 Refrigerante.
 Plato caliente o parrilla.
 Tubos de ensayo cónicos graduados.
 Vaso de precipitado de 250 ml.
 Manguera y tapones para destilación.
 Curva de concentración de alcohol etílico.

MÉTODO O INDICACIONES:

1.-Colocar en un matraz 5 mililitros de sangre u orina.

2.-Agregar 5 mililitros de solución de ácido pícrico.
3.-Destilar y recoger 2 ml del destilado en un tubo de ensayo cónico graduado
4.-Decantar 1 mililitro en un tubo de ensayo rotulado con la identificación de la
muestra.
5.-Añadir 3 mililitros del reactivo de Anstie.
6.-Colocar en baño maría por 5 minutos.
7.-Retirar del baño maría y dejar enfriar.
8.-Analizar en espectrofotómetro a 610 nm.
9.-Comparar con la curva de calibración y sacar la concentración de la muestra.

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ANEXO: 1

ANEXO: 2

Concentración de
Grado de
alcohol en sangre Influencia del estado alcohólico
Intoxicación
(mg/dl)
10 - 50 Estado subclínico -
Estado eufórico (disminución de la capacidad de atención,
concentración, y otras funciones intelectuales, nivel de
30 - 120 energía aumentado, equilibrio medianamente perturbado, Leve
reflejos espinales reducidos, nistagmus, reacciones lentas
de pupilas).
Estado de excitación (Se acentúan los síntomas anteriores,
90 - 250 Medio
inestabilidad emocional)
Estado de confusión (A lo anterior se suman: disturbios
180 - 300 visuales, desinhibición social, aparecen disturbios en la Moderado
marcha, desorientación)
Estado de estupor (Pronunciados disturbios en la marcha y
250 - 400 en el habla, aumento de la confusión mental, desorientación, Severo
amnesia)
Estado de coma (anestesia alcohólica, falta de reflejos,
350 - 500 Muy severo
depresión respiratoria, hipotermia)
> 450 Muerte

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RESULTADOS:

CONCENTRACION DE GRADO DE
TIPO DE MUESTRA
ALCOHOL INTOXICACION

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PRACTICA IV
PRUEBAS PRESUNTIVAS PARA
IDENTIFICACION DE DROGAS

OBJETIVO DE LA PRÁCTICA:
El alumno determinara en las muestras de polvos, pastillas y vegetal verde o
seco los métodos recomendados de análisis de drogas así como su peso exacto
de acuerdo a la Ley General de Salud vigente.

INTRODUCCIÓN:
El fenómeno de las drogas ha experimentado en los últimos años un profundo
proceso de transformación, en paralelo a la evolución de las sociedades
desarrolladas. En la actualidad, las drogas están vinculadas a la cultura del ocio, a
diferencia de lo que sucedía en los años 80, donde el consumo de drogas,
fundamentalmente de heroína, estaba asociado a la marginalidad y a la delincuencia.

La heroína ha sido sustituida por sustancias como el cannabis, la cocaína o el

éxtasis, combinadas entre sí o mezcladas con alcohol y tabaco. Este cambio de las
sustancias también se ha acompañado de nuevos patrones de consumo.

Drogas de síntesis, es el nombre por el que se conoce a un amplio grupo de

sustancias producidas por síntesis química entre las que cabe señalar el éxtasis, el
GHB, la ketamina, el PCP o “polvo de ángel”. En general contienen distintos derivados
anfetamínicos o de otras sustancias que poseen efectos estimulantes y/o
alucinógenos de intensidad variable, y que se encuentran en el mercado en diversas
formas (pastillas, cápsulas, polvo, líquidos...) que pretenden resultar atractivas para
los más jóvenes. Muchas de estas drogas fueron descubiertas hace años por
compañías farmacéuticas, que decidieron abandonar las investigaciones por los
efectos indeseables que detectaron en este tipo de sustancias. La fabricación en
laboratorios clandestinos y el desconocimiento de su composición final, las convierte
en especialmente peligrosas, pues los consumidores nunca saben exactamente qué
están ingiriendo, por lo que sus efectos no son claramente previsibles .

La cocaína es un potente estimulante del sistema nervioso central y una de

las drogas más adictivas y peligrosas. Se trata de una droga que se obtiene a partir
del procesamiento químico de las hojas del arbusto de coca Erythroxylum coca. A
finales del siglo XIX, se consiguió aislar el principio activo contenido en estas hojas y
surgieron diversas formas de consumo de la cocaína (esnifada, fumada, inyectada,

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etc.) que producen efectos más rápidos e intensos que la hoja mascada y por tanto
aumentan el riesgo de desarrollar adicción y dependencia.

El cannabis es una droga que se extrae de la planta Cannabis sativa, con

cuya resina, hojas, tallos y flores se elaboran las drogas ilegales más consumidas:
el hachís y la marihuana. Sus efectos sobre el cerebro son debidos principalmente a
uno de sus principios activos, el Tetrahidrocannabinol o THC, que se encuentra en
diferentes proporciones según el preparado utilizado.

MATERIAL Y EQUIPO:
 Bata
 Lentes de protección
 Guantes
 Cubre bocas
 Zapato cerrado
 Pipetas
 Microscopio Estereoscópico
 Capsulas de porcelana
 Tubos de ensayo
 Balanza analítica
 Agua
 Cloro
 Formaldehido
 ácido Sulfúrico
 ácido Nítrico
 Nitrato de plata
 Azul de ortodianicidina.

DETERMINACION DE ANFETAMINAS POR COLORIMETRIA

Las anfetaminas Pertenecen al grupo de sustancias llamadas simpático-

miméticas, se usaron en medicina para estimular las funciones cerebrales, para
cierto tipo de retraso mental, para rebajar de peso, para dormir, como estimulante
en los centros respiratorios, en la actualidad su uso está restringido y solo se
encuentran en el mercado derivados de anfetamina, siendo los principales:

ANFEPRAMONA, CLOROFERTENMINA, FENPROPOREX, FENTERMINA,

METILFENIDATO

Las anfetaminas producen daño cerebral y debilitan al organismo, haciéndolo

muy vulnerable a las enfermedades, llegando a causar paranoia, incremento de la
presión arterial y paro cardiaco.

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REACCIÓN DE MARQUIZ: (Anfetaminas)

Utilizarlo siempre recién preparado, a la muestra se coloca sobre un tubo y se

agrega dos gotas de formaldehído y adicionar 1 mililitro de ácido sulfúrico.
En caso positivo coloración naranja que puede cambiar a café oscuro.

PROCEDIMIENTO ANALITICO PARA LA DETERMINACION DE

COCAINA POR COLORIMETRIA

La cocaína es un alcaloide que es estimulante del sistema nervioso central, su

uso es ilegal y su determinación es útil para identificar su presencia en muestras
varias.
REACCION DE TIOCIANATO DE COBALTO. (Cocaína)
Sobre trazas del polvo o muestra problema adicionar unas gotas del reactivo de
tiocianato de Cobalto. Observar color azul en caso positivo.
REACCION DE VITALIS (cocaína)
Añadir a la muestra 1 o 2 ml de ácido nítrico concentrado, Observar color amarillo
en caso positivo
REACCION DE CLORUROS
Se coloca una pequeña cantidad del polvo o muestra en un tubo agregar 1 ml de
agua destilada agitar y agrega unas gotas de solución de Nitrato de plata en caso
positivo se observara un precipitado blanco.

PROCEDIMIENTO ANALITICO PARA LA DETERMINACION DE

MARIHUANA POR COLORIMETRIA
Los ensayos de color del cannabis se encuentran entre los ensayos de color
más detallados que existen (solo algunas plantas como la alhena, la nuez moscada, la
macis y la agrimonia dan resultados falso positivos), No obstante, un ensayo de color
con resultado positivo solo es indicio de la posible presencia de material con
contenido de cannabis, pero no lo identifica de forma definitiva.

El Cannabis sativa puede identificarse por las estructuras microscópicas que

presenta la superficie de la planta, es decir, por los tricomas (formaciones semejantes
a un cabello proyectadas desde una célula epidérmica de la planta). Existen dos tipos
de tricomas, que pueden observarse con un microscopio binocular dotado de un factor
de aumento de 40.

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a ) Los tricomas no glandulares son abundantes, monocelulares, rigidos y con

forma de cabellos curvos, y presentan un fino apice puntiagudo:

La presencia simultánea de estos tricomas con forma de garra de oso en la

superficie superior, y de los finos y sutiles tricomas no cistoliticos en la superficie
inferior de las hojas es una característica del cannabis.

b ) Tricomas glandulares. Se presentan como:

Glándulas sésiles, es decir, tricomas sin peciolo, presentes por lo general en la parte
inferior de la epidermis; Pequeños tricomas bulbosos y glandulares con peciolos de
una sola célula; Largos tallos pluricelulares situados en torno a las flores femeninas
(tricomas glandulares con peciolos pluricelulares).

REACTIVO DE AZUL RÀPIDO”B” (Cannabis THC)

Medir 1 ml de Metanol, Colocarlo en un tubo de ensayo y Pesar 20 mg de Azul de
ortodianicidina
REACCION DE AZUL RAPIDO B (cannabis THC)
Se Colocar la muestra en un tubo de ensaye y se Agregar 1ml de reactivo de azul
rápido B, en caso positivo se observa un color Rojo.

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