Curso de Química II.

2021
Análisis cuantitativo por medidas de absorción molecular

LABORATORIO Nº 4: Determinación de fósforo por

espectrofotometría de absorción molecular

1- OBJETIVO
Determinación cuantitativa de fosfatos inorgánicos en suelos, por medio de una técnica de desarrollo de color
con azul de molibdeno y medida de la absorción mediante un espectrofotómetro.

2- FUNDAMENTO TEÓRICO
En base a la aplicación de los métodos espectrofotométricos y sus leyes fundamentales es posible cuantificar
el fósforo (P) existente en una muestra problema.
El molibdato de amonio ((NH4)6Mo7O24), en presencia de tartrato de potasio y antimonio, reacciona en medio
ácido con disoluciones diluidas de ortofosfato (PO43 -) para formar un heteropoliácido (al ácido
fosfomolíbdico), según

El ácido fosfomolíbdico (H3[P(Mo3O10)4].xH2O) es reducido por el ácido ascórbico (agente reductor), para dar
el azul de molibdeno (cuya estructura exacta se desconoce), el cual es intensamente coloreado y presenta un
máximo de absorción, en esas condiciones, a 882 nm, el cual es estable por al menos 4 h.

La determinación cuantitativa de fosfatos inorgánicos se basa en la aplicación de la ley de Lambert-Beer. Esta

ley permite relacionar la absorbancia con la concentración de las disoluciones analizadas, las cuales presentarán
una determinada coloración que absorbe a una longitud de onda dada. Para llevar a cabo dicha determinación
es necesario realizar una curva de calibración con disoluciones patrón de fosfatos.

3- PARTE EXPERIMENTAL

3.1- Instrumental
Se utiliza un espectrofotómetro Jenway de simple haz modelo 1310.

3.2- Disoluciones y reactivos

Disolución A: Molibdato de amonio (NH4)6Mo7O24.4H2O, 40 g/L, con 1.3715 g de tartrato de antimonio y
potasio KSbOC4H4O6.1/2H2O, 500 mL de agua destilada y ácido sulfúrico 5N.

Disolución B: A 70 mL de Disolución A se le adicionan 30 mL de una solución de ácido ascórbico (1.76 g/L)

(C6H8O6). La disolución B debe ser preparada en el momento de usar, tapada y cubierta con papel de aluminio
para protegerla de la luz. Haga los cálculos para preparar 100 mL de una solución de ácido ascórbico (1.76
g/L).

3.3- Tratamiento de la muestra problema

El fosfato se encontrará libre en una disolución acuosa tratada con NaHCO3 0.5 M, este agente precipita los
iones Ca2+, Al3+ y Fe3+, como CaCO3, e hidróxidos de Al y Fe, y de esta forma quedan libre los aniones fosfatos.
Para ello se pesa 1 g de tierra y se suspende en 25.00 mL de agua destilada. Posteriormente se agrega 1 mL de
disolución de NaHCO3 0.5 M.

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3.4- Curva de calibración

A partir de una disolución madre del patrón primario KH2PO4 (250 ppm de P) se preparan las disoluciones
indicadas en el cuadro de Reacción de coloración.

REACCIÓN DE COLORACIÓN

Disolución Disolución Disolución Agua Reacción de [P]

DISOLUCIÓN
madre (μL) problema B destilada coloración (ppm)
Enrasar a
Blanco --- --- 4 mL 30 min 0
25.0 mL
Enrasar a
Estándar 1 25 4 mL 30 min 0.25
--- 25.0 mL
Enrasar a
Estándar 2 50 4 mL 30 min 0.50
--- 25.0 mL
Enrasar a
Estándar 3 75 4 mL 30 min 0.75
--- 25.0 mL
Enrasar a
Estándar 4 100 4 mL 30 min 1.00
--- 25.0 mL
Enrasar a
Problema --- 100.00 µL 4 mL 30 min ?
50.0 mL

3.5- Medidas
• Se fija la longitud de onda de trabajo (882 nm) en el espectrofotómetro indicado.
• Verificar el ajuste a cero con la cubeta elegida para la disolución blanco.
• Realizar las medidas de absorbancia de las disoluciones correspondientes a la curva de calibración.
• Realizar las medidas de absorbancia de la disolución problema con la corrección del blanco
correspondiente.

DISOLUCIÓN [P] (ppm) A1 A2 Ā

Blanco 0
Estándar 1 0.25
Estándar 2 0.50
Estándar 3 0.75
Estándar 4 1.00
Problema

3.6- Tratamiento de resultados y cálculos

Determinar la curva de mejor ajuste para representar Absorbancia vs. Concentración con las medidas de la
curva de estandarización. A partir de esta curva calcular la concentración de los problemas expresando los
resultados en ppm de P teniendo en cuenta la dilución efectuada de las muestras.

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4- PREGUNTAS
4.1. Sabiendo que los niveles óptimos de fósforo en un suelo para cultivos deben estar entre 36 y 50 ppm.
Indique si la tierra analizada cumple con dichas características.

4.2. Indique qué función cumple el ácido ascórbico de la disolución B de generación de color.

4.3. Por un problema de disponibilidad del espectrofotómetro que utiliza en su laboratorio, usted debe realizar
las determinaciones con este equipo al día siguiente. Indique las ventajas y desventajas de los siguientes
posibles protocolos:

a. Prepara las disoluciones de generación de color, Disolución A y Disolución B, y deja para el día
siguiente el tratamiento de la tierra con bicarbonato de sodio, la generación del color y la medida en el
espectrofotómetro.
b. Trata la tierra con bicarbonato de sodio y deja para el día siguiente la preparación de las disoluciones
de generación de color, Disolución A y Disolución B, la generación del color y la medida en el
espectrofotómetro.
c. Trata la tierra con bicarbonato de sodio, prepara las disoluciones de generación de color, Disolución A
y Disolución B, genera el color y deja para el día siguiente la medida en el espectrofotómetro.

5- BIBLIOGRAFIA
- APHA Standard Methods 18a ed. p. 4-78, método (1992).
- Química Analítica, Skoog D. y West D, Mc Graw-Hill, 1990. Cap. 15. - Standard Methods for the
Examination of Water and Wastewater. Método 4500 P E. 19a. Edición. 1995. American Public Health
Association, American Water Works Association, Water Environment Federation.

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ANEXO
1- Tratamiento de datos
1.1- Cuadro de valores
Estandares [ ] ppm de P Ā
Estandares 1
Estandares 2
Estandares 3
Estandares 4
Problema 1

1.2- Cálculos

1) Curva de calibración e interpolación

Para cuantificar la concentración de P en suelo se realiza la regresión lineal a partir de la curva de calibración
por medio del método de mínimos cuadrados mediante planilla excel y calculadora.

2) Cálculo del porcentaje (% m/m) de P en suelo

Método Concentración: m/m % P en suelo

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2

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