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PRACTICA DE ANLISIS INSTRUMENTAL Pgina 1

PRACTICA DE ANLISIS INSTRUMENTAL
CURVA DE CALIBRACIN PARA DETERMINACIN
ESPECTROFOTOMTRICA DE AMONIO
I. OBJETIVOS:
1. Preparar soluciones acuosas de sulfato de amonio y diluir a la
concentracin deseada.
2. Leer la absorbancia de un conjunto d soluciones patrn de sulfato de
amonio.
3. Graficar la curva patrn Absorbancia-ppm amonio.
4. Aplicar el mtodo de los mnimos cuadrados para obtener la ecuacin
de ppm en funcin de la absorbancia.

II. FUNDAMENTO TERICO:
El mtodo de Nessler emplea una solucin alcalina de yoduro de potasio
y mercurio que acta sobre el amonio presente en la muestra, formando
un compuesto coloreado al cual se mide su absorbancia a una longitud
de onda de 380 nm en un espectrofotmetro. El reactivo de Nessler
debe ser recin preparado dicho reactivo.

La curva de calibracin sirve para determinar la concentracin de una
sustancia en una muestra, tendiendo la lectura de su absorbancia en un
espectrofotmetro. Esta tcnica analtica permite evaluar un gran
nmero de muestras en un tiempo mucho menor, comparando con
mtodos volumtricos o gravimtricos.

III. MATERIALES, EQUIPOS Y REACTIVOS:
Fiola de 200 ml (01)
Fiolas de 50 ml (07)
Tubos de ensayo (18)
Balanza analtica
Vasos precipitados de 100
ml
Pipetas de 1 ml
Pipetas de 10 ml
Frasco mbar de 250 ml
Agua destilada
Centrfuga
Espectrofotmetro
Cocina elctrica
KI
HgCl
2

KOH
I
2

Tratado de sodio y
potasio





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IV. PROCEDIMIENTO:
1. Preparacin del reactivo Nessler
Para preparar el reactivo de Nessler se disuelve 10 g de KI de agua,
aparte se disuelve 5 g de HgCl
2
en 20 ml de agua caliente; luego
ambas soluciones se mezclan. A esto se le adiciona la solucin
obtenida al disolver 30 g de KOH en 60 ml de agua. A mezcla
resultante se afora a 200 ml. Finalmente, se separa por centrifugacin
el lquido sobrenadante y se almacena en un frasco mbar. La duracin
mxima del reactivo de Nessler es de un mes.

2. Preparacin de otras soluciones
La solucin de yodo 0,01 N se prepara disolviendo 40 g de KI en poca
agua, se le adiciona 1,27 g de yodo y una vez disuelto se afora a 1 litro.
La solucin de tartrato de sodio y potasio al 50% (p/v) se prepara
disolviendo 5 g de tartrato de sodio y potasio en agua hasta un
volumen de 10 ml.

3. Determinacin espectrofotomtrica de amonio
a. Encender el espectrofotmetro media hora antes de iniciar las
lecturas.
b. En el espectrofotmetro, seleccionar la longitud de onda de 380 nm.
c. Pipetear 5 ml de la solucin a una fiola de 50 ml.
d. Aadir agua destilada hasta la mitad de la fiola.
e. Agregar 1 ml de solucin de yodo 0,01N.
f. Agregar dos gotas de solucin de tartrato de sodio y potasio al 50%
(p/v).
g. Adicionar 2 ml de reactivo de Nessler y aforar la fila. Hasta aqu, la
solucin se habr diluido 10 veces.
h. Preparar un blanco, solo agua destilada con los reactivos
indicadores en (e), (f) y (g).
i. Con el blanco, calibrar a cero de absorbancia el espectrofotmetro
a 380 nm.
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j. Leer la absorbancia de la muestra a 380 nm en el
espectrofotmetro.
Los datos de concentracin de amonio (X) y la lectura de absorbancia (Y) de
cada muestra a 380 nm se ajustan a recta con el mtodo de los mnimos
cuadrados como se indica en la tabla 02. Las ecuaciones correspondientes al
mtodo de los mnimos cuadrados son:

V. RESULTADOS:

1. Preparacin de 5 soluciones de sulfato de amonio para 1 litro,
que contiene las ppm de amonio indicadas en la tabla 01:

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Para no preparar un litro de solucin, el resultado lo convertimos en gramos
de sulfato de amonio para 50 ml (0,05L) de solucin:

Como el valor resultante es muy pequeo y no se puede medir correctamente,
se pasar 1000 veces ms, se prepara la solucin y luego se diluir 1000
veces para tener recin la solucin que necesita. Realizar un clculo similar
para las otras soluciones.

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Tabla 01: Soluciones de sulfato de amonio para preparar la curva patrn con
reactivo de Nessler
Numero
Muestra
Ppm NH
4

(mg/L)
(NH
4
)
2
SO
4
(mg/L)
(NH
4
)
2
SO
4
(g/50mL)

NH
4
)
2
SO
4
(g/50mL)x 1000

1 2 7.333 3.67 x 10
-4
0.367
2 4 14.667 7.33 x 10
-4
0.733
3 6 22.000 1.10 x 10
-3
1.100
4 8 29.333 1.47 x 10
-3
1.470
5 10 36.667 1.83 x 10
-3
1.830

Si preparamos la solucin de acuerdo a la ltima columna de la Tabla 1, la
debemos diluir 1000 veces para tener la concentracin de amonio indicada en
la segunda columna de la misma Tabla. Al realizar la evaluacin
espectrofotomtrica del amonio, la solucin se diluye 10 veces ms con los
reactivos del mtodo de Nessler.
Para diluir cada solucin 1000 veces, se debe tener 3 tubos de ensayo
numerados y con 9 mL de agua destilada en cada uno. Pipetear 1 mL de la
solucin (muestra) 1al primer tubo de ensayo, agitar enrgicamente. Pipetear
1mL del tubo 1 al 2, agitar enrgicamente. Pipetear 1 mL del tubo 2 al tubo 3,
agitar enrgicamente. En el tubo 3 la solucin estar diluida 1000 veces.
Proceder de manera similar con las otras muestras.
2. Lectura de la absorbancia de las soluciones patrn.
Tabla 02: Linealizacion con el mtodo de los mnimos cuadrados para obtener
la ecuacin de ppm NH
4
en la funcin de la absorbancia a 380 nm con
reactivo de Nessler.
Nro.
Muestra
Ppm NH
4

(X)
Absorbancia
(Y)

XY

X
2

1 0.2 0.713 0.143 0.04
2 0.4 0.765 0.306 0.16
3 0.6 0.790 0.474 0.36
4 0.8 0.824 0.659 0.64
5 1.0 0.905 0.905 1.00
N =5 X =3.0 Y=3.997 XY=2.487 X
2
=2.2





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3. Graficar Absorbancia ppm NH4 en papel milimetrado
En el eje X va las ppm de amonio y en el eje Y la Absorbancia.











4. Determinacin de la ecuacin para ppm de amonio en funcin de
la absorbancia.
Reemplazar los datos de la tabla 2 en la ecuacin.

Reemplazando:

Despejar b
0
en funcin de b
1.
Despejando: 5 b
0
=

b
0
=

Reemplazar los datos de la tabla 2 en la ecuacin:

Reemplazando:

Reemplazar b
0
por su equivalente

en la ecuacin anterior:
Calcular b
0
y b
1
:
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Reemplazando:

2.487 -
=

12.435 11 b
1
= 11.991 9b
1


0.444 = 2b
1
b
1
=

b
1
= 0.222
Entonces:

1.999 =

= 0.666
Reemplazar b
0
y b
1
en la ecuacin:

Reemplazando:
Entonces:

Despejar ppm de amonio (X) en funcin de la absorbancia (Y):
Ppm NH
4
=

Ppm NH
4
=

ppmNH
4
= 0.21
Ppm NH
4
=

ppmNH
4
= 0.45
Ppm NH
4
=

ppmNH
4
= 0.56
Ppm NH
4
=

ppmNH
4
= 0.71
Ppm NH
4
=

ppmNH
4
= 1.08









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VI. CONCLUSIONES
Al utilizar la ecuacin de los mnimos cuadrados se encontr que b
1

es igual a 0.222 y b
0
igual a 0.666 llegando a obtener la ecuacin
final que , pero al reemplazar las variables X y Y,
por ppm de NH
4
y absorbancia se obtuvo que .

Mientras ms concentracin tiene las muestras de NH
4
, mayor es la
absorbancia de radiacin.

se prepar las soluciones de sulfato de aluminio y se hizo sus
diluciones correspondientes se para llegar a las concentraciones
adecuadas de acuerdo a lo dicho en la gua.


VII. RECOMENDACIONES.
Cuando se realizar las diluciones observar que la intensidad de
color entre una muestra y otra sea un poco variable, pero si una o
varias de las muestras tienden a adquirir otro color o colores
distintos.
Se debe tomar en cuenta el manual o gua al momento de realizar la
para no tener inconvenientes al momento de hacer las diluciones,
concentraciones, coger los reactivos, etc.
Al momento de coger las celdas de la muestra, coger por los
costados opacos, ya que si se lo hace por los lados donde ingresa
la radiacin, las huellas de la mano van a interferir en los resultados
de absorbancia que se desea adquirir.

VIII. BIBLIOGRAFA

ocw.usal.es/ciencias-experimentales/analisis-aplicado.../Tema_1.pdf

www.xtec.cat/~gjimene2/llicencia/students/07tecnicas.html

html.rincondelvago.com/analisis-fisico-quimico-del-agua_1.html

200.69.103.48/comunidad/estudiantes/dlilian/marco_5.htm