Métodos de transformación

Células vegetales
Transformación por protoplastos
● Eliminación de la pared celular por medio de enzimas.
● Son células desnudas que presentan menos
impedimentos a la introducción del ADN externo.
● Mayor confiabilidad para conseguir organismo no
quiméricos.
● Se pueden obtenerse a partir de líneas celulares de
callos iniciados desde embriones inmaduros,
inflorescencias inmaduras, la base de hojas inmaduras.
Procedimiento
● Pueden ser transformados directamente con ADN
exógeno por adición de polietilenglicol en el tampón.
● Mediante incubación con Agrobacterium, mediante
electroporación o por tratamiento con liposomas.
Transformación por electroporación
● Consiste en la aplicación de pulsos eléctricos de
elevado voltaje en tiempos cortos.
● Se crean poros temporales en las barreras externas de
las células vegetales y se permite la entrada del ADN
extraño.
● Presenta baja reproducibilidad, no es una técnica muy
empleada.
Biolística
● Bombardeo de la célula vegetal con partículas de oro o
tungsteno recubiertas de ADN.
● La aceleración de las partículas puede producirse por
medio de pólvora, gases como el CO2 o el helio, o por
medio de una descarga eléctrica.
● Este método puede utilizarse con éxito en casi todos
los organismos vivos.
En células vegetales:
● Mejoras en la producción de transformantes al aplicar
algunas variaciones al protocolo general:
○ Pre-cultivo de los explantes a transformar.
○ Uso de pantallas deflectoras.
○ Utilización de microproyectiles.
○ Pretratamiento osmótico.
Desventajas
● Los vegetales obtenidos por esta técnica presentan
patrones complejos de integración de los transgenes.
● Es difícil que se den eventos individuales de
integración.
● La técnica es complicada cuando se pretende integrar
genes de un gran tamaño, debido a mecanismos de
rotura del ADN.
Ventaja
● La potencia de la biolística permite la integración del
ADN exógeno en organelos subcelulares como el
cloroplasto.
Transformación por Agrobacterium
● La opción más utilizada es Agrobacterium tumefaciens.
● Esta bacteria infecta determinados tipos de plantas,
especialmente dicotiledóneas, a través de lesiones
físicas.
● El mecanismo de integración está dirigido por el
conjunto de genes bacterianos vir, cuya expresión se
induce en presencia de compuestos fenólicos liberados
por las propias plantas en crecimiento.
Ventajas
● Permiten integración sencilla en los cromosomas.
● Económico.
● Equipos y protocolos sencillos.
● Más utilizado.
Desventajas
● Preferencia por las dicotiledóneas.
● Baja eficiencia en monocotiledóneas.
Transformación de Cloroplastos
● Genoma presente en algo número de copias.
● Número de cloroplastos muy elevado.
● Introducción de miles de copias del ADN de interés.
Mecanismos de selección
Categorías
● Positiva, permiten el desarrollo de las células
transformadas.
● Negativa, causan la muerte de las células
transformadas.
● Condicional, requiere sustratos externos.
● No condicional, no requiere sustratos externos.
Positivos condicionales
● Antibióticos
● Herbicidas Riesgosos
● Compuestos químicos tóxicos

● Sustratos para el crecimiento

● Inducción del crecimiento Seguros
● Diferenciación de los transformantes
Positivos no condicionales
● Alterna los procesos fisiológicos del desarrollo de las
plantas.
● Aumento de fitohormonas para el desarrollo de tallos.
● Se introducen con promotores de naturaleza
inducibles.
Regeneración de las plantas
Embriogénesis somática
● La célula somática vegetal tiene la capacidad de
desarrollarse en un embrión (totipotencia) a partir de
la manipulación de condiciones de cultivo y la
aplicación de sustancias reguladoras de crecimiento.
● Pueden generar plantas completas conservando
íntegramente el genotipo de la planta donante.

https://revista.ibp.co.cu/index.php/BV/article/view/563/html
Organogénesis
● Es la formación de un primordio unipolar a partir de
una yema para el desarrollo de un brote vegetativo,
existiendo siempre una conexión entre los nuevos
brotes y el tejido paterno.

https://www.ecured.cu/Organog%C3%A9nesis_%28Biotecnolog%C3%ADa_Vegetal%29
Transformación in planta
● Los transgenes se introducen en el vegetal intacto.
● Se prefiere el momento de la formación del zigoto.
● Eficiencia de transformación baja.