NOMBRES: Jeinny Katherine Zapata Amaro (1621027), Anyela Fernanda Sánchez

Moreno (1621025), Angie Daniela Duarte Contreras (1621049), Alfredo Jesús Córdoba
Clavijo (1621045).

ARTICULOS

1. La modificación genética de organismos de índole vegetal ha sido estudiada por los

años y el uso de métodos tradicionales, como también avanzados ha dado fruto a
través del tiempo. Encontramos métodos de transformación de plantas que han sido
desarrollados con el objeto de hacer más fácil y eficiente esta metodología. Estos
métodos se dividen en:

• Transformación mediada por Agrobacterium Tumefaciens

• Métodos de transformación genética directos.

Siendo Agrobacterium una de las técnicas más precisas y eficientes en el mundo de

la ingeniería genética. Dicho método consiste en la inserción de una bacteria
modificada a la planta u organismo vegetal que se quiera modificar. La capacidad
patogénica de esta bacteria se asocia a la presencia de plásmidos Ti (inductor de
tumor). Se ha demostrado que un fragmento de estos plásmidos, llamado ADN-T
(ADN de transferencia), es transferido a la célula vegetal donde se integra al ADN
cromosómico de la planta. La transferencia de ADN es inducida por la expresión de
unos genes llamados vir que se encuentran en el plásmido Ti por fuera de la
secuencia que se transfiere. Dentro del ADN-T hay agentes que participan de la
síntesis de unos compuestos llamados opinas que se aprovechan del metabolismo de
la planta para su propio beneficio.

Fuente: Técnica de Agrobacterium Tumefaciens

2. Los métodos para la modificación de plantas consisten en varios métodos (Directos

e Indirectos) que se pueden llevar a cabo para la trasformación de las mismas. Entre
los más importantes, tenemos:

Agrobacterium Tumefaiciens: La transformación de plantas utiliza una amplia

gama de herramientas, a través de las cuales se puede introducir información
genética foránea sin afectar la calidad agronómica y comercial del cultivo. Este es
un proceso complejo que involucra varias etapas:

• Identificación y aislamiento del gen de interés.

• Desarrollo del casete de expresión o construcción quimérica.
 • Vectores apropiados que permitan el clonaje o transferencia de la
construcción quimérica.
• Método para la introducción del DNA de manera estable en el genoma de la
célula vegetal (protocolo de transformación).
• Sistema de cultivo de tejidos que permita regenerar plantas completas.
• Procedimiento para la distinción de los individuos transformados de aquellos
no transgénicos (selección de transformantes).
• Métodos analíticos para detectar el gene foráneo y sus productos en la planta
transformada.

El método de transformación utilizado actualmente es obtener células

transgénicas mediante cultivo de tejidos y selección in vitro y luego restaurar
plantas intactas y fértiles. El sistema Agrobacterium es el sistema más utilizado
en la producción de plantas transgénicas porque presenta varias ventajas sobre
otros sistemas de transformación. Estos incluyen: la simplicidad técnica del
protocolo; no se requiere equipo complicado; se pueden usar diferentes tipos de
tejidos vegetales; la integración de T-ADN es un proceso relativamente preciso;
determinar la región de ADN que se transferirá; baja probabilidad de
reordenamiento; permitir la introducción de fragmento de ADN largo; bajo
número de copias de T-ADN transferido. Las deficiencias del sistema
Agrobacterium incluyen: el tejido infectado debe tener daño físico; el vector
solo está diseñado para infectar el núcleo; la necesidad de usar antibióticos para
eliminar las bacterias en el tejido infectado; la gama de huéspedes es limitada a
su susceptibilidad a la infección, sin embargo, con la implementación de nuevas
tecnologías y procedimientos, muchas de estas deficiencias se han superado con
la implementación de nuevas tecnologías en la técnica actualmente.

Vectores Virales: Se le conoce a este como un método indirecto para la

transformación de platas mediante la inserción de virus modificados que
previamente son clonados. Se han desarrolla dos estrategias para la construcción de
vectores virales. En la más empleada, el gen foráneo, es introducido dentro del virus
completo, por lo general, precedido por el promotor duplicado de la proteína de la
capside del virus (promotor fuerte) o fusionado a ésta, para que el gen de interés sea
expresado como un RNA subgenómico separado.

Liposomas: En los métodos para variación planta la transferencia de genes mediada

por liposomas es individualidad de los más difíciles y, pero en una razón éste
mostró durar activo su empleo ha sido muy limitado. En este método el
magnetófono de semblante es encapsulado en garra firmamento lipídica (liposoma)
que permite o facilita su paso a través de la sección planta por endocitosis ya sea por
el plasmodesmo o directamente por la pared incomunicado inclusive el corazón.
 Biobalística: Este sistema de transformación requiere de un dispositivo mecánico
que permita realizar el bombardeo de los tejidos vegetales. Para que los micro
proyectiles puedan calar las membranas celulares y llegar al entraña de las células
objetivo deben pertenecer impulsados a velocidades supersónicas Para ello se
desarrollaron terceto sistemas por explosión de explosivo seca por innovación de
fuerza de celeridad a través de desembarazo eléctrica o por fuga de gas tableta a
admisión aplastamiento (aire helio CO2 oN2) Los micro proyectiles empleados
estilo partículas alrededor esféricas (microesferas) elaboradas de materiales densos
tal el caudal o volframio de calibre variados que pueden ir desde los 0 4 μm incluso
4 μm El magnetófono de prueba con los genes de interés puede ir o no en un radio
ya que no es requerido para el técnica de clonación.

Fuente: Método de Transformación Genética de Plantas

3. La creación de plantas o especies vegetales transgénicas mediada por

Agrobacterium Tumefaciens se da por fases que están conformadas por los diversos
procesos de implementación que asume esta técnica al llevarla a cabo. En cuestión,
el factor responsable de la elaboración molecular es dicha bacteria, donde esta se
comporta como un agente externo que cumple la función de reproducirse y tomar
control de una parte del individuo vegetal afectado. Esta misma cuenta con la
capacidad de otorgar material genético de su procedencia al individuo. De manera
positiva, esta intervención se puede alterar. Comenzando por el plásmido TI
causante del inductor de tumor en las plantas, para ello antes de hacer la inserción se
comprueba y se hace un análisis respectivo de la planta y la efectividad que tendrá
respecto a los otros métodos de transformación ya existentes. Se sabe que no en
todos funciona la clonación y adaptación del gen de interés mediante un agente
externo, ya que existen factores que median la transformación, por lo tanto, es
totalmente independiente del organismo seleccionado para el experimento.

La integración del ADN-T dentro del cromosoma de la planta esta mediada por la
proteína VirD2 que contiene dominios con actividad parala recombinación y
ligación. Con el objetivo de inducir la expresión de los genes vir y facilitar la
transformación se han utilizado diferentes inductores de la transformación como son
los compuestos glucosa, acetosiringona y azacitidina; los resultados en el porcentaje
de plantas transformadas varían de acuerdo a la especie vegetal evaluada y a la
concentración utilizada.

Unas de las principales aplicaciones mediante Tumefaciens son:

• Transformación en plantas.
• Transformación en hongos.
 Transformación genética medida por Agrobacterium Rhizogenes, ha sido
utilizado para la formación e incremento dependen de los radicales que han sido
apropiados para la producción de metabolitos secundarios por su estabilidad y
alta producción.

Transformación genética medida por otras bacterias: Hasta hace muy poco
Agrobacterium era el único genero conocido con la capacidad para transferir
genes en las plantas. Sin embargo, muy recientemente se ha demostrado que
otras especies de bacterias incluyendo, Rhizobiumsp, Sinorhizobium mieloti y
Mesorhizobium loti pueden volverse competentes para integrar genes en las
plantas si se les introduce un plásmido Ti desarmado y un vector binario.

Fuente: Transformación de Plantas Mediadas por Agrobacterium

4. La transformación genética normalmente es producida por la misma naturaleza en

seres vivos que generan cambios en sus características. Estos cambios son inducidos
por las bacterias del género Agrobacterium. Inicialmente se les encuentra en los
subsuelos, donde con su capacidad causan tumores en las raíces de las plantas
creando la modificación de manera natural. Se demostró los rasgos y diferencias
entre una especie modificada y una natural, las cuales se argumentó mayor
durabilidad y resistencias a herbicidas por parte de las que contienen el plásmido TI
modificado en la bacteria inducida. A raíz de esto, Las plantas transformadas
mediante Agrobacterium fueron diseñadas para que expresen una característica
particular, por ejemplo, resistencia a herbicidas, producción de un nuevo
compuesto, mejoramiento de la productividad, etcétera.

Fuente: La Bacteria Tumefaciens como Herramienta Biotecnológica

5. El desarrollo e implementación del proyecto que se llevó a cabo fue al surgimiento

del problema que se presenta en los países que producen la legumbre Frijol, debido
a que se producen en gran escala en diferentes países exportadores. La cantidad que
se produce es reducida en un tanto por ciento, debido a que el frijol común (no
modificado) presenta problemas en la durabilidad y resistencia del mismo a
diferentes factores como: la baja fertilidad de los suelos, enfermedades, plagas y
sequía.

Además, se ve reflejado por factores anti nutricionales para el ser humado en ciertos
sentidos. La implementación que se ha llevado a realizado es mediante bombardeo o
(Biobalística), pero es un método complicado y un algo costoso a diferencias de los
otros actualmente existentes. Para ello se asumió la tarea de tratar de hacerlo
mediando Agrobacterium Tumefaciens, basado en los protocolos existentes para
Soya. Método el cual la tendencia a generar inserciones únicas y limpias (sin
insertos de ADN no deseados), y el menor costo operacional constituyen una
considerable ventaja sobre los mecanismos de transferencia directa de genes con
biobalística.

Para llevar a cabo el proceso de transformación se utilizaron semillas de frijol de las

variedades andinas Chauchachuga, Calima e Ica Quimbaya. En cada una de estas
semillas se siguió el mismo proceso de transformación para mirar los cambios
potencialmente transgénicos en las mismas. Como resultado después de días de
haber culminado el proceso, se pudo concluir con la prueba PCR a las 3 semillas las
potencialmente transgénicas dieron negativo para la producción de semillas, en
cuanto a la otra parte si siendo también transgénicas. Podemos afirmar que el
desarrollo del método A. Tumefaciens es efectivo en cuanto a la producción y
calidad para determinadas especies de origen vegetal.

Fuente: Transformación Genética Mediada por Agrobacterium Tumefaciens en

Frijol Común