INTRODUCCIÓN

La transferencia de DNA hacia células o tejidos vegetales se realiza a través de diferentes

mecanismos, siendo uno de los más comunes la utilización de vectores biológicos como
Agrobacterium tumefaciens (Hodson, 2005). Sin embargo, el rango natural de hospederos de
esta bacteria constituye un factor limitante, ya que no todas las especies vegetales son
susceptibles de ser infectadas. En consecuencia, se han desarrollado métodos de transferencia
directa de DNA como la biobalística que permite transferir DNA desnudo sin mediación de
vectores biológicos a diferentes células y tejidos blanco (Voinnet, 2003).

La técnica de biobalística se basa en el bombardeo de micro-partículas de oro o tungsteno que

son impulsadas a gran velocidad por liberación de He o N2 a gran presión y en condiciones
previamente establecidas como presión de disparo, distancia de disparo, cantidad de DNA, entre
otras. La biobalística es aplicable en bacterias, protozoarios, algas, hongos, plantas
(monocotiledóneas, dicotiledóneas), células y tejidos animales (insectos, peces, aves y
mamíferos) (Sanford, 1988; Hodson, 2005). Adicionalmente, esta técnica es considerada entre
las estrategias que permiten transformar organelos celulares como mitocondrias y cloroplastos
de modo reproducible La pistola de genes de baja presión Helios® Gene Gun System (BioRad)
es una herramienta en biobalística útil para la transformación in vivo e in vitro de células. Esta
pistola ofrece una gran ventaja al ser portátil, ya que es posible utilizarla en laboratorio o en
campo, es altamente reproducible y requiere poca cantidad de DNA, en contraste con otros
equipos como PDS-1000/He donde el tejido blanco a transformar está limitado por el tamaño
de la cámara y el tejido diana debe ser sometido a un vacío durante los bombardeos (Manual
BioRad).

Entre las aplicaciones del método de biobalística se encuentran la expresión transitoria de genes
heterólogos de interés biotecnológico, estudios de vías metabólicas, transferencia de RNA viral.

MÉTODOS DE TRANSFORMACIÓN GENÉTICA EN PLANTAS

Consiste en modificar genéticamente a la Planta para que empiece a producir algún compuesto
ya sea de forma diferente o en mayores cantidades principalmente. Esta nueva Planta recibe el
nombre de Planta Transgénica, el término “Transgénico” hace referencia a la introducción de
un gen extraño a un organismo (del prefijo “trans” que significa atravesar distancias). En el
contexto Biotecnológico, un trans-génico es cuando se transfiere un fragmento de ADN de una
célula a otra. Esencialmente esta planta modificada genéticamente sigue siendo la misma, pero
más sin embargo alguno de sus genes han sido modificados o reemplazados por otros (de otras
plantas o de bacterias). Aunque también se considera como Planta Transgénica aquella a la cual
alguno de sus genes fue removido del genoma de la planta, igual con la finalidad de disminuir
su toxicidad.

Una de las principales finalidades de hacer esto, es para aumentar la productividad agrícola,
pues eventualmente lo que uno obtiene es toda una cosecha de plantas transgénicas, que puede
transmitir esas características a sus descendientes, en la mayoría de los casos, pues en algunos
casos estas características genéticas se pierde en las subsecuentes generaciones. También se
puede modificar genéticamente a una Planta usando métodos convencionales, como selección
embrionaria o de características fenotípicas sin necesidad de técnicas de ingeniería genética.

Este auge de la producción de Plantas Transgénicas surgió durante las década de los 80s, y a
partir del estudio de un parasito natural de plantas que puede modificar parte del genoma de la
planta mediante la inserción de su propio genoma dentro de las células de la plantas. Este
parasito ha tenido este tipo de relación simbiótica-genética con ciertas plantas por millones de
años y funcionando de forma muy eficiente, por lo que se les ocurrió a los científicos utilizar el
mecanismo genético de este microorganismo como la herramienta principal para transformar
plantas genéticamente.

COMO SE PRODUCE UNA PLANTA TRANSGÉNICA?

El protocolo utilizado utilizado para la transformación genética de plantas incluye

varias etapas. Generalmente, a partir de la definición de un problema o limitante de
producción, y el aislamiento y disponibilidad de un gen de interés a partir de cualquier
organismo (que permita enfrentar el problema), se realiza la transferencia y la integración
estable de ese gen al genoma de las células vegetales mediante la preparación de un vector y un
sistema de transformación genética adecuado. Para la transferencia exitosa de genes, uno de
los factores más importantes es el de tener disponible un gran número de células
competentes, tanto para la transferencia de genes, como con la capacidad de regeneración
de plantas a partir de sistemas de cultivo de tejidos. En el proceso, se seleccionan las células
transformadas y se obtiene la regeneración de plantas completas en las cuales se evalúa
tanto la presencia del transgene, como el fenotipo deseado en el momento requerido. El
desarrollo de brotes y su arraigo en un medio que contenga el agente selectivo generalmente es
indicativo de transformación exitosa. El transgene debe transferirse a la descendencia
preferentemente en forma mendeliana.

TRANSFERENCIA DE GENES MEDIANTE DISPARO DE PARTÍCULAS O

BIOBALÍSTICA

Biobalística

La técnica de biobalística se basa en el bombardeo de macropartículas de oro o tungsteno que

son impulsadas a gran velocidad por liberación de He o N2 a gran presión y en condiciones
previamente establecidas como presión de disparo, distancia de disparo, cantidad de DNA, entre
otras. La biobalística es aplicable en bacterias, protozoarios, algas, hongos, plantas
(monocotiledóneas, dicotiledóneas), células y tejidos animales (insectos, peces, aves y
mamíferos). Adicionalmente, esta técnica es considerada entre las estrategias que permiten
transformar organelos celulares como mitocondrias y cloroplastos de modo reproducible.
Microcañón con partículas metálicas rodeadas de ADN.

Con el objeto de hacer más fácil y eficiente la transferencia de ADN hacia células o tejidos
vegetales, se han desarrollado diferentes métodos de transformación genética, que se pueden
dividir en dos clases de acuerdo con el mecanismo utilizado para la transferencia:

 Si las partículas atraviesan las membranas y son atrapadas en el núcleo, el ADN puede
integrarse de forma estable en los cromosomas mediante un proceso de recombinación
al azar, lo que se considera como transformación estable.
 La transformación estable ocurre a muy baja frecuencia, por lo que es necesario utilizar
un sistema de selección in vitro que permita distinguir células transformadas y no
transformadas.

Técnica de Biobalística

Si bien en la actualidad es posible obtener plantas transgénicas de diferentes especies con

Agrobacterium, el rango natural de hospedantes de la bacteria se constituyó en un importante
factor limitante. En consecuencia, se desarrollaron métodos alternativos de transferencia directa
de ADN basados en procedimientos de naturaleza química, fisicoquímica, o mecánica. Estos
nuevos métodos, permiten transferir ADN desnudo (sin mediación de vectores biológicos), y el
más ampliamente utilizado en la transformación genética de plantas es el “bombardeo con
micropartículas” también conocido como biobalística. Con este método se logró el
mejoramiento genético de plantas como arroz, maíz o soja, que hasta entonces no se habían
podido transformar con Agrobacterium.

El término biobalística deriva de la conjunción de “biología y balística” o “balística biológica”.

Este es un método muy original ideado en la década de 1980 por un grupo de investigadores de
la Universidad de Cornell (EE.UU.), que permite introducir ADN a virtualmente cualquier tipo
de célula. En este procedimiento el ADN es introducido en las células por medio de partículas
microscópicas aceleradas a velocidades supersónicas, que atraviesan la pared y la membrana
celular. Las partículas son aproximadamente esféricas (de 0.4 a 2.0 micrómetros de diámetro),
están hechas de materiales densos como oro o tungsteno, y se recubren con el ADN que se desea
transferir a las plantas.

Para que las micropartículas puedan atravesar las membranas celulares y llegar al núcleo de las
células blanco, son impulsadas a gran velocidad por explosión de pólvora seca, liberación de
gas comprimido a alta presión (aire, helio, CO2 o N2), o por una descarga eléctrica de una gota
de agua.

La transformación por biobalística depende de factores físicos, químicos y biológicos

Parámetros físicos y químicos que influyen en la transferencia del ADN

 Método de aceleración de las micropartículas.

  Naturaleza química y física, densidad y volumen de las micropartículas.
 Naturaleza, preparación, adherencia y concentración del ADN.
 Vacío y distancias de bombardeo.
 Diámetro de apertura de la placa de retención.
 Número de bombardeos.

Parámetros relacionados con la construcción genética utilizada

 Vector, promotores, intrones, genes reporteros y genes marcadores de selección

Hay algunas desventajas que se presentan, como:

 Un porcentaje de éxito variable.

 Silenciamiento génico.
 Una introducción inestable del transgen.
 Presencia de rearreglos en el DNA transferido.
 Presencia de daños en los tejidos.
 El sistema llega a ser muy costoso.

Biobalística versus Agrobacterium tumefaciens

Transparencia 100

La transformación genética de plantas se remonta a principios de los años 80, década en que se
demostró la capacidad del Agrobacterium para transferir ADN a células vegetales. Durante las
décadas siguientes, se realizaron avances significativos en mejorar los sistemas basados en
Agrobacterium, así como en desarrollar nuevos métodos que permitieron la transferencia
directa de ADN. Entre estos últimos, se incluyen métodos como el bombardeo de
micropartículas (biobalística), la permeabilización de membranas celulares por corrientes
eléctricas (electroporación) y/o por tratamientos químicos con policationes (PEG, PVP) o
fusógenos lipídicos, la abrasión con fibras de carburo de silicio y la microinyección. Si bien
varios de los sistemas de transferencia directa han resultado en aplicaciones exitosas, el
bombardeo de micropartículas es actualmente el más ampliamente utilizado. Por otra parte,
aunque existen muchos reportes sobre el uso de virus como vectores, Agrobacterium resulta el
vector biológico más usado para la transformación vegetal. La biobalística fue desarrollada
como una alternativa para resolver la ausencia de interacción entre muchas especies vegetales
y las distintas cepas de Agrobacterium. Sin embargo, desde la década del 90, el uso de cepas
supervirulentas de la bacteria ha permitido la obtención de plantas transgénicas en especies que
hasta ese momento no eran susceptibles a Agrobacterium y que, por el contrario, habían podido
ser transformadas por biobalística. Por su parte, el uso de los cañones génicos está limitado por
la capacidad regenerativa de las células bombardeadas y por la integración estable del ADN.
Además, la biobalística ha evidenciado una alta frecuencia de integración de secuencias re-
arregladas y/o truncadas, como también la inserción de múltiples copias del transgén, lo que
redunda en una alta probabilidad de ocurrencia de silenciamiento génico. Por el contrario, el
Agrobacterium produce generalmente integraciones que involucran a una o a pocas copias del
transgén. Este aspecto ha determinado que, siempre que sea posible, la mayoría de los
investigadores prefieran la técnica basada en Agrobacterium. Sin embargo, deben considerarse
también las crecientes evidencias que muestran que la inserción del ADN por la bacteria no es
tan definida como se creía anteriormente. En este sentido, se ha hallado que secuencias de ADN
ubicadas fuera de los bordes de la región T de Agrobacterium pueden integrarse también en el
genoma de la planta receptora. Además, la persistencia de Agrobacterium en los tejidos de las
plantas regeneradas es otro problema que aún resta resolver y que tiene implicancias sobre
aspectos de bioseguridad. Por estas razones, aunque existe una tendencia a elegir el método de
Agrobacterium para transformar plantas, tanto éste como la biobalística seguirán constituyendo
sistemas complementarios durante muchos años.

BIBLIOGRAFÍA

 Hodson, E. 2005. Transformación genética de plantas para resistencia a virus. Acad. Col.
Cien. 29(110):5 - 24.
 Universidad Interamericana (2018). Métodos De Transformación Genética En Plantas.
Recuperado de: https://www.lainter.edu.mx/blog/2018/03/05/metodos-de-transformacion-
genetica-en-plantas/?fbclid=IwAR1_8rIKSVjvqi08otGc-qNFT1GbzqYAObiZAW-
ULkVQfJ0nlwGm6_uNNp8
 Sanford, J. 1988. The biolistic process. Trends Biotechnol. 6:299 - 302.
 Voinnet, O.; Rivas, S.; Mestre, P.; y Baulcombe, D. 2003. An enhanced transient
expression system in plants based on suppression of gene silencing by the p19 protein of
tomato bushy stunt virus. The Plant Journal 33(5):949 - 956.