Catalina Artola Pereira 2do Año Cs Biológicas 2022 Genética Profa.

Gabriela Martínez

Práctico 2 - Cruzamiento de distintas cepas de Drosophila

melanogaster
(+/ebony)
GRUPO 1 - Acevedo, D. Artola, C. Càbula, V.

PROBLEMA:

Determinar cómo será el patrón de herencia de la variante mutante Ebony, mediante a la

identificación de los fenotipos obtenidos en F1 y F2, a través del cruzamiento entre la
variante Ebony y el tipo salvaje.

HIPÓTESIS

-Para la F1: Del cruzamiento de moscas Drosophila machos salvajes y hembras ebony
tendremos una descendencia netamente salvaje fenotípicamente debido a que el alelo salvaje
es el dominante.
-Para la F2: Del cruzamiento de los individuos tomados de la F1 (2 machos y 6 hembras)
obtendremos una descendencia fenotípicamente correspondiente tanto a la variedad salvaje
como a la ebony.

PREDICCIONES

-En proporciones fenotípicas, para la F1 obtendremos un 100% de individuos

salvajes.

-En proporciones fenotípicas para la F2, obtendremos un %75 de individuos

salvajes y un 25% de individuos ebony (proporción 3:1).

-Todos los individuos de la generación F1 presentan características fenotípicas del tipo

salvaje, debido a que se trata de un patrón de herencia autosómico recesivo para la variante
ebony.

-El patrón de herencia de esta mutación es recesivo ya que se salta la generación F1

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FUNDAMENTACIÓN

OBTENCIÓN DE HEMBRAS VÍRGENES

En las cruzas experimentales de Drosophila, para estudiar los patrones de herencia se requiere
que machos con un genotipo conocido fertilicen a hembras con genotipo diferente, para lo
cual se necesita que las hembras de la cruza sean vírgenes pues, éstas, una vez fecundadas,
almacenan las gametas masculinas en la espermateca, y pueden producir de manera
ininterrumpida huevecillos fertilizados durante toda su existencia.

Para realizar un cruzamiento experimental se necesita entonces utilizar hembras vírgenes. Ya

que los machos rara vez copulan con hembras cuya edad sea menor a las 8 horas de
emergidas (a 25ºC), las hembras adultas que se obtengan en las 6 a 8 horas siguientes serán
vírgenes. Para ello conviene retirar todas las moscas del cultivo, preferentemente en la
mañana, en que las pupas están a punto de eclosionar y colectar hembras vírgenes a las 8
horas siguientes e inmediatamente separar los machos de las hembras. Las hembras suelen
completar antes su ciclo biológico por lo cual, en las primeras horas o días de nacimiento de
una generación,son más abundantes que los machos, situación que se va invirtiendo poco a
poco. Machos de cualquier edad, pero preferentemente jóvenes (de una semana) pueden ser
utilizados en cruzamientos.
Existen varios métodos que permiten separar ambos sexos en otras etapas del ciclo de vida.
Una forma es…
Otro método que permite identificar hembras (♀) vírgenes se basa en la presencia de restos de
meconio en el intestino de las moscas que tienen pocas horas de haber emergido; es
particularmente útil cuando no se han controlado periodos de menos de ocho horas, por
ejemplo, durante la noche. En cuanto abandonan el pupario, las moscas tardan algunas horas
en secar sus alas, durante este tiempo no ingieren alimento y esporádicamente defecan el
meconio intestinal que es de color oscuro. Como el cuerpo tarda cierto tiempo en adquirir la
coloración característica, puede observarse los restos del meconio como una mancha oscura
en la parte ventral del
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abdomen. Es casi seguro que las hembras en las que se observe esta mancha serán
vírgenes.

MATERIALES

● Lupa
● Tablilla blanca de 12 x 8 cm aproximadamente
● Pincel número 00 de cerdas suaves y punta redondeada
● Trietilamina
● Piseta con algodón
● Tubo de plástico anestesiador con tapón de polyfón
● Marcador de tinta indeleble
● Tubos falcon con medio de cultivo y tapones de goma espuma o de algodón
● Pinza
● Almohadilla
● Material biológico: cepas ebony de Drosophila

PROCEDIMIENTO:

ACTIVIDAD

FECHAS DÍAS HORA

COLECTA DE HEMBRAS VÍRGENES A PARTIR DE

IMAGOS

1. Se colocan 2 individuos macho de la variedad salvaje en

medio de cultivo nuevo
4/08 1
2. Se colocan dos individuos hembra de la variedad ebony en
medio de cultivo nuevo
Se van a reproducir cada cepa por su cuenta.

Retirar los progenitores para que no se confundan con los

nuevos individuos que emergen una vez que ya se ven las pupas.
Identificar la presencia de huevos. Registrar aspectos
11/08 7 tales como tamaño, color, ubicación.
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16/08 12 Eliminar moscas que hayan emergido por la noche

Eclosión de los jóvenes entre 1 semana y 10 días. A partir del

momento en que eclosionan los jóvenes hay un lapso de 8h
20/8 16 12 antes de que maduren las hembras y puedan ser fertilizadas por
A.M. los machos que maduran antes.
a. a. Retirar las moscas que hayan emergido,
b. Separarlas por sexo
c. Colocarlas en frascos con medio de cultivo nuevo.

CRUZAMIENTO MONOHÍBRIDO DE DISTINTAS CEPAS

Realizar cruzamiento. Utilizar una proporción de 3 hembras

20/8 vírgenes por cada macho.

A los 5 días de realizar la cruza retire a los progenitores para

evitar que se confundan con la progenie, la cual empezará a
29/8 emerger a partir del día 10.
25 Una vez emergida la F1:
a. Analizarlas fenotípicamente,
cuantitativamente y por sexo.
b. Seleccionar 3 hembras y un macho y
cruzarlos.

MARCO TEÓRICO:
Drosophila Melanogaster
La mosca de la fruta, cuyo nombre científico es Drosophila melanogaster, es utilizada
como organismo modelo para la genética desde su introducción por el genetista Thomas Hunt
Morgan, en 1909 debido a múltiples factores: corto tiempo
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de gestación (9-10 días) en condiciones ambientales relativamente comunes, gran cantidad de

descendientes, fácil manipulación y bajo costo.
Si nos limitamos a sus características genéticas podemos determinar que poseen un número
de cromosómico bajo, correspondiente a 2n=8. También que posee cromosomas gigantes en
las glándulas salivales y sus complejos enzimáticos son muy similares al de los mamíferos.
También cabe destacar que existen
numerosas líneas mutantes, como por
ejemplo la que se remite este informe, la
variante ebony. Otras líneas mutantes
conocidas serán la variedad White, taxi,
etc. A continuación, adjunto una tabla
que indica el tipo de variante, su
nomenclatura y sus principales
características:

extraido de: https://sites.google.com/site/drosophilamelanogastermkl/

Características morfológicas:

Para referirme a las características morfológicas adultas del adulto salvaje (+) comenzaré
separando su estructura en tres sectores principales: cabeza, tórax y abdomen, cada uno de
estos a su vez se diferencia es distintos segmentos.
Por un lado, en la cabeza, encontraremos cinco segmentos. En el primero de estos, se ubican
las antenas, y luego aristas, ojos compuestos, ocelos y setas respectivamente.
El tórax, se subdivide en tres segmentos, protórax, donde distinguimos los distintos
segmentos de la pata y en los machos el peine sexual. Mesotórax, donde
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encontramos las alas y el segundo par de patas y el metatórax, donde distinguimos los
balancines (segundo par de alas) y el tercer par de patas.
Por último, el abdomen de las hembras presenta 7 u 8 segmentos, mientras que el de los
machos posee 5. Allí encontramos: tergitos, escleritos dorsales (placas tegmentales, uno por
segmento), esternitos, escleritos ventrales (uno por segmento), espiráculos abdominales (7 en
cada lado del abdomen) y finalmente la región genital. La coloración difiere de machos a
hembras, como desarrollaré a continuación, con respecto a la mutación que trabajaremos,
Ebony (e) se observa que la mosca adquiere un color mucho más oscuro, tendiendo al negro
brillante.

Diferencias sexuales entre machos y hembras de D. melanogaster.

Una de las características más notables entre machos y hembras es el tamaño, siendo las
primeras considerablemente más grandes que los segundos. Por otro lado, al observarlas con
la lupa, podremos notar que el abdomen de las hembras se encuentra en punta hacia la parte
inferior, mientras que el de los machos está redondeado al final. El macho, en los segmentos
finales de la cara dorsal del abdomen posee una gran mancha negra, lo que los hace ver más
oscuros que las hembras.
Como en muchas especies, las regiones genitales de machos y hembras están bien
diferenciadas, por un lado, la hembra, en su placa genital posee un ovopositor, mientras que
el macho posee
múltiples piezas de coloración oscura:
arco genital y pene.
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Ciclo de vida

Comenzaré la descripción del ciclo de vida de la mosca de la fruta, haciendo referencia a los
huevos de las mismas. Las hembras adultas son capaces de poner huevos dos días después de
emerger del estado de pupa, pudiendo llegar a poner hasta 50 o 75 huevecillos por día. Los
ponen sobre la superficie del alimento. Respecto a las características de los mismos,
podemos decir que es ovoide, con dos pequeñas proyecciones que emergen de un extremo,
éstas son aplanadas yson utilizadas para que el huevo no se hunda en el medio de cultivo,
pueden verse asimple vista, sin necesidad de utilizar una lupa.
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Su desarrollo total, demora aproximadamente 24 hs, y de ellos emerge la larva. Siguiendo

con el proceso, al observar la larva, que mide aproximadamente 4 mm de largo, podemos
determinar que es blanca, segmentada y vermiforme (con forma de gusano). En la región
cefálica posee ganchos mandibulares, a través de los cuales come en grandes cantidades para
crecer. Además, se desplazan arrastrándose mientras van comiendo ya que no poseen
extremidades y son completamente ciegos por no poseer ojos. Su respiración se da a
través de tráqueas y de poros aéreos que poseen en los extremos anteriores y posteriores del
cuerpo.
La fase larvaria consiste de tres subdivisiones llamadas estadios.
El primero y segundo estadio terminan en mudas. Cada muda implica una eliminación
completa de la piel y partes orales de la larva y es el mecanismo por el cual ésta crece. El
tercer estadio termina en la pupación. Inmediatamente antes de la pupación la larva deja de
comer, se arrastra hacia una superficie relativamente seca, y se revierten sus espiráculos
anteriores. La fase larvaria dura alrededor de 4 días a 25º.

La pupa es considerada la fase reorganizativa del ciclo donde se destruyen la mayor parte de
las estructuras larvarias y se desarrollan las estructuras adultas a partir de tejidos
embrionarios. Estos tejidos embrionarios han permanecido latentes en el animal desde su
diferenciación en el huevo. El animal empupa dentro de la última piel larval, la cuál es en un
inicio suave y blanca pero gradualmente se endurece y adquiere un color más oscuro. La fase
de pupa tarda alrededor de 4 días a 25 º centígrados, para el final de la misma, está
desarrollado estructuralmente el individuo adulto llamado imago.

La adultez en la mosca Drosophila, es considerada la fase reproductiva del ciclo. Aquí,

eclosiona del pupario forzando su salida por el extremo anterior del mismo. Enun inicio, la
mosca adulta es de forma elongada con las alas no expandidas. Pasadauna hora
aproximadamente, las alas se expanden y el cuerpo gradualmente adquiere su forma adulta
definitivamente. Al principio son de coloración relativamente clara, pasando luego de las
primeras horas a oscurecer, adquiriendo su coloración característica.
Los adultos de D. melanogaster pueden aparearse 6 horas después de haber emergido del
pupario. El esperma es almacenado en las espermatecas y en los
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receptáculos ventrales de la hembra y es liberado gradualmente al oviducto a medida que se

producen los huevos.
A los 2 días de haber emergido, la hembra comienza a depositar huevos. La producción de los
mismos, disminuye con el paso de los días. El promedio de vida de las moscas adultas es de
37 días a 25º C.

extraído de: https://blogs.ead.unlp.edu.ar/geneticamuseo/files/2019/06/Gu%C3%ADas-TP-2019-Segunda-parte.pdf

RESULTADOS DE LOS INDIVIDUOS EMERGIDOS EN F1

Luego de realizar los cruzamientos correspondientes para la obtención de hembras vírgenes

se cruzan dos machos salvajes y seis hembras mutantes ebony (+/ebony). Obteniendo un total
de 36 individuos de los cuales trece fueron machos y veintiséis hembras.
Al observar los individuos con lupa; determinamos que todos ellos corresponden
fenotípicamente al tipo salvaje por lo que nuestra primera hipótesis: “para F1, del
cruzamiento de moscas Drosophila machos salvajes y hembras ebony obtendremos
una descendencia netamente salvaje fenotípicamente debido a que el alelo salvaje
es el dominante” ha sido comprobada.
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También podemos determinar que al no aparecer el fenotipo ebony en la primera generación

filial, la dominancia del tipo salvaje sobre la mutación ebony.

Correlación genética mendeliana

Al observar que la primera generación filial obtenida es fenotípicamente 100% del tipo
salvaje, podemos determinar que se cumple el principio mendeliano de uniformidad; en el
cual se establece que los individuos de la F1 serán fenotípicamente iguales entre sí y a uno de
sus progenitores, en este caso al individuo macho salvaje del parental.
También podremos determinar la dominancia/recesividad de estos alelos, siendo
dominante para el tipo salvaje y recesivo para la mutación debido a la desaparición de los
rasgos de la misma en F1.
Otros principios planteados por Mendel para cruces monohibridos es, por un lado, el
denominado “factores en pareja” que establece que todos los individuos recibimos un gen
de cada parental (uno de nuestra madre y uno de nuestro padre) y por el otro el de
segregación, que determina que la separación de los genes es al azar, de manera que cada
gameto recibirá uno u otro con la misma probabilidad.
Establecido esto, podemos contrastarlo con nuestros resultados y explicarlos: todos los
gametos de la mosca mutante reciben una copia del gen mutado y todos los gametos de la
mosca del tipo salvaje reciben una copia del gen salvaje, como establece el principio de
segregación en la segunda meiosis, a través de la separación de cromátidas hermanas, que
migrarán hacia los gametos permitiendo la segregación de los factores hereditarios. Luego de
la fecundación, todos los hijos de la F1 recibirán un gen de cada progenitor para restablecer el
par que se necesita para esta especie. Es debido al principio de dominancia/recesividad que
todos los organismos serán fenotípicamente salvajes.
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ANEXO

Pupas en su medio de cultivo

Anestesiamiento de D. Melanogaster con trietilamina

Individuo macho del tipo salvaje.

Observación en lupa de Drosophila tipo salvaje para diferenciación sexual.
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Múltiples individuos machos y

hembras salvajes en tubo
anestesiador con tapón de polyfón
listo para anestesiarse.
Individuo hembra del tipo salvaje vista dorsal (arriba) y ventral (abajo).

Drosophila Melanogaster tipo salvaje observada con

lupa. Individuos de ambos sexos.

todas las (imágenes fueron obtenidas en clase con celular)

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PARTE 2

La segunda parte de este trabajo corresponderá al análisis de los individuos obtenidos del cruce de dos
individuos de F1, fenotípicamente 100% del tipo salvaje.
Para obtener la F2 se cruzaron un total de hembras obtenidas en F1 y de machos, la fecha de este cruce
correspondió al 15/09. Pasados los 5 días correspondientes retiramos a los progenitores para que no se
mezclen con la progenie.
El 26/09 analizamos los individuos obtenidos, nuestros resultados fueron:

TOTAL

+♂ 17

+♀ 12

Ebony♂ 6

Ebony ♀ 4

Como se observa en la tabla, vemos que de un total de 39 individuos obtenidos 29 poseen

características fenotípicas correspondientes a la mutación salvaje (+) mientras que los 10
restantes poseen características fenotípicas correspondientes al tipo Ebony. De esto se
desprende que se cumple también para la F2, es decir, para la segunda generación filial, el
principio de segregación. El fenotipo dominante para Drosophila será el salvaje, que
aparece un 100% en la F1, siendo los alelos correspondientes a la mutación Ebony
recesivos respecto a este. Al observar los resultados vemos que ¾ partes son de fenotipo
salvaje (dominante), mientras que el restante ¼ será fenotípicamente ebony (recesivo). Esto
se debe a que cuando los híbridos procedentes de la F1 forman gametos, los alelos que se
encuentran en el mismo locus, se segregan dando lugar a un 50% de gametos con el alelo
dominante y 50% con el alelo recesivo. Estos alelos, se unirán sin patrón especifico, es
decir, al azar, es gracias al principio de dominancia/recesividad, que aquellas moscas que
reciban un alelo recesivo y un alelo dominante, expresarán fenotipo dominante, en este caso
salvaje. Para que se pueda expresar el fenotipo de la mutación ebony, los alelos deberán
presentarse en homocigosis recesiva.

Para esclarecer los resultados, realizaré el cuadro de Punnett con el fin de demostrar cómo
se heredó la mutación genotípica y fenotípicamente desde los parentales hasta la F2:
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Fenotipo SALVAJE (+) x Ebony (E)

Genotipo EE x ee

Gametos E e

F1 Como vimos en la primera parte del informe, nuestra F1 será:

fenotípicamente 100% salvaje y genotípicamente 100% heterocigota.

♀ /♂ E E

e Ee Ee

e Ee Ee

Autofecundación de F1 para obtener F2

Cruce F1

Fenotipo + x +

Genotipo Ee x Ee

Gametos E e E e

En cambio, en F2, reaparece el rasgo que había desaparecido en F1 en una proporción

fenotípica

3:1 siendo: ♀ /♂ E e

¾ TIPO SALVJE E EE Ee
¼ MUTANTE EBONY e Ee ee

Las proporciones genotípicas corresponderán a:

50% homocigoto: 25% dominante EE para el tipo salvaje

25% recesivo ee para la variedad Ebony
50% heterocigoto salvaje.
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ANEXO PARTE 2

Esquina superior: macho salvaje

Esquina inferior: macho ebony

Separación por sexo y tipo de la F2

Macho ebony

Hembra ebony.