Frotis y Tiniciones Hematologicas-1

UNIVERSIDAD DE AQUINO BOLIVIA – COCHABAMBA
CARRERA DE BIOQUÍMICA Y FARMACIA
FICHA DE IDENTIFICACIÓN DE TRABAJO DE INVESTIGACIÓN
Título FROTIS SANGUÍNEO Y TINCIONES

HEMATOLÓGICAS
Nombres y Apellidos Código de estudiantes
n
Autor Chambi Terán Karen 77298
Jimenez Espinoza Rosmey 67529
Fernandez Herbas Fabiola 77543
Numbela Cristhian Edson 60547
Orellana Miranda Paola Dalinne 75076
Rojas Merida Marvin 79557
Fecha 16/09/2023
Carrera Bioquímica y Farmacia

Asignatura Hematología y Banco de Sangre
Grupo C2
Docente Dra. Milka Luba Zenteno Díaz
Periodo Académico 6to Semestre II/2023
Subsede Cochabamba
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INTRODUCCION
En hematología nos referimos a los métodos de frotis y tinción para identificar las células sin
alterar en forma significativa y su morfología.
En su mayor parte las células son demasiado pequeños para observarse a simple vista
Estos microorganismos difieren en características tales como forma de nutrición, estructura,
tamaño, composición entre otros aspectos; es por ello que se emplea el estudio microscópico el
cual facilita notablemente la observación, principalmente en las bacterias se facilita al tratarlas
con colorantes o tintes los cuales facilitan también la observación de ciertas estructuras
celulares.
Un frotis de sangre es una muestra de sangre que se esparce en una plantilla de vidrio y se
somete a un tratamiento especial. En el pasado, todos los frotis de sangre se examinaban bajo
un microscopio por profesionales de laboratorio.
Ahora son sistemas digitales automáticos pueden usarse para ayudar a examinar el frotis de
sangre.
El frotis de sangre se examina con el propósito de revisar el tamaño, la forma y el número de
tres tipos de células sanguíneas:
TINCIÓN.
Una tinción o coloración es una técnica auxiliar utilizada en microscopía para mejorar el
contraste en la imagen vista al microscopio. Los colorantes y tinturas son sustancias que
usualmente se utilizan en biología y medicina para resaltar estructuras en tejidos biológicos que
van a ser observados con la ayuda de diferentes tipos de microscopios. Los diferentes
colorantes pueden ser utilizados para aumentar la definición y examinar grandes cortes de
tejido o poblaciones celulares.
Estos procedimientos no se pueden realizar en cualquier lugar, ni por personas que no tienen la
facultad y formación académica, este procedimiento tiene que realizarse con mucho cuidado en
laboratorios en condiciones favorables y por profesionales capacitados para su ejecución con el
respectivo material de bioseguridad
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OBJETIVO:
OBJETIVO GENERAL
 conocer el tamaño, la forma y el número de los tipos de células
sanguíneas
Objetivos específicos
o Conocer las propiedades de las diferentes tinciones usadas para
realizar el frotis sanguíneo y entender cada uno de los pasos
necesarios
o Identificar los beneficios de un frotis y una tinción sanguínea
o Indagar información de la función de las células RBC -WBC -PLT
o Desarrollar una buena técnica de un frotis y una tinción sanguínea
FROTIS SANGUÍNEO
Un frotis de sangre es una muestra de sangre que se esparce en una plantilla de vidrio y se
somete a un tratamiento especial. En el pasado, todos los frotis de sangre se examinaban bajo
un microscopio por profesionales de laboratorio. Ahora, sistemas digitales automáticos pueden
usarse para ayudar a examinar el frotis de sangre.
Un frotis de sangre o extendido de sangre es una técnica científica que consiste en la extensión
de una gota de sangre sobre la superficie de un portaobjetos o de un cubreobjetos, con el fin de
analizarla posteriormente al microscopio
El frotis de sangre se examina con el propósito de revisar el tamaño, la forma y el número de
tres tipos de células sanguíneas:
Los glóbulos rojos, que transportan oxígeno de los pulmones al resto del cuerpo
Los glóbulos blancos, que combaten las infecciones
Las plaquetas, que ayudan a que la sangre coagule
Otros nombres: frotis de sangre periférica, extensión sanguínea, extensión, análisis de
extensión sanguínea
EL FROTIS DE SANGRE
Es la técnica mas útil y económica para observar las características morfológicas de las células
sanguíneas, por lo que su adecuada realización asegura una buena interpretación del estado
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hematológico del paciente.
Este corresponde a un extendido de una gota de sangre obtenida idealmente de punción venosa
y tiene zonas claramente identificables
MATERIALES
Los materiales que se necesitan para poder realizar el frotis son:
 Portaobjetos limpios, secos y sin grasa
 Capilares para la sangre
 Muestra: sangre obtenida por punción venosa, en tubo con anticoagulante (EDTA)
dentro de las primeras dos horas.
TÉCNICA
1. Tomar un portaobjeto y colocarlo en una posición horizontal
2. Depositar una gota de sangre sobre el portaobjeto
3. Colocar el portaobjeto extensor sobre el portaobjeto en un ángulo adecuado según el
volumen de la gota depositada
4. Deslizar el portaobjeto hacia la gota
5. Dejar que la gota de sangre tome contacto con todo el borde del portaobjeto
6. Deslizar el portaobjeto por el portaobjeto, con la gota, a una velocidad y ángulo
constante
7. Secar al aire y posteriormente rotular.
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PARA QUÉ SE USA

El frotis de sangre se usa para diagnosticar y vigilar muchas afecciones, como trastornos de la
sangre, insuficiencia renal repentina y el tratamiento de ciertos cánceres.
Es necesario un frotis de sangre si tiene resultados anormales en un conteo sanguíneo completo
(CSC). Un CSC es una prueba de rutina que mide los diferentes componentes de la sangre.
 Fatiga
 Ictericia, afección que causa un tono amarillento de la piel y los ojos
 Sangrado inusual, incluyendo hemorragia nasal
 Fiebre que dura tiempo o va y viene
 Dolor de huesos
 Anemia
 Moretones que aparecen con facilidad
 Un bazo más grande de lo normal
TIENE ALGÚN RIESGO ESTA PRUEBA

Los riesgos de un análisis de sangre son mínimos. Tal vez sienta un dolor leve o se le forme un
moretón en el lugar donde se inserta la aguja, pero la mayoría de los síntomas desaparecen
rápidamente.
RESULTADOS
Los resultados por sí mismos de un frotis de sangre no diagnostican ningún problema médico.
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El profesional de la salud utilizará los resultados junto con su historia clínica, síntomas y los
resultados de otras pruebas para hacer un diagnóstico.
En general, los resultados del frotis de sangre describen la apariencia y el número de glóbulos
rojos, glóbulos blancos y plaquetas. Sus resultados mostrarán cualquier cosa inusual en su
sangre.
Resultados de glóbulos rojos que no son normales podrían ser un signo de:
 Anemia
 Enfermedad de células falciformes
 Anemia hemolítica, un tipo de anemia en el que el cuerpo destruye glóbulos rojos antes
de poder reemplazarlos
 Talasemia
 Enfermedades de la médula ósea
 Enfermedad del hígado
 Cáncer que se ha extendido a los huesos
 Resultados de glóbulos blancos que no son normales podrían ser un signo de:
 Infección o inflamación
 Alergias
 Leucemia
 Enfermedades de la médula ósea
 Resultados de plaquetas que no son normales pueden ser un signo de:
 Trombocitopenia, una afección en la cual la sangre no tiene suficientes plaquetas, lo
cual incrementa el riesgo de sangrado
 Trastornos plaquetarios hereditarios (poco común), como síndrome de Bernard-Soulier
Un frotis de sangre pude utilizarse para ayudar a encontrar ciertos tipos de parásitos en la
sangre, los que pueden causar afecciones como:
 Malaria, la cual se contagia por picadura de mosquitos infectados
 Babesiosis, la cual se contagia principalmente por mordedura de garrapatas infectadas
 Enfermedad de Chagas, la cual se contagia principalmente por picaduras de vinchucas o
chinches besuconas (insectos triatominos)
El profesional de la salud puede pedir esta prueba si usted vive o viaja a áreas donde usted pudo
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haberse infectado y tiene síntomas. Los síntomas dependen del tipo de parásito. Síntomas
comunes incluyen fiebre, fatiga, dolor corporal, sarpullido y problemas digestivos.
TINCIONES HEMATOLOGICAS
Las tinciones hematológicas son un conjunto de procesos que conducen a la coloración de las
estructuras que componen las células sanguíneas. Esto tiene por objeto aumentar el contraste
entre esas estructuras y el medio que las rodea, y permite por tanto que las células sean
visualizadas microscópicamente con mayor facilidad.
Los colorantes más comúnmente usados para las tinciones hematológicas son los derivados de
la anilina: los colorantes de Romanowsky.
La tinción de tipo Romanowsky es muy importante en el laboratorio de hematología porque
con ella puede obtenerse una cantidad significativa de información a partir de un frote
sanguíneo bien teñido. La coloración consiste en azul de metileno y sus productos de oxidación
(azul B), y eosina.
La tinción de la muestra permite distinguir la forma, tamaño y contorno de los eritrocitos,
leucocitos y plaquetas y el núcleo, citoplasma y granulaciones de las distintas células ya que
adquieren diferentes colores: azul, púrpura, rosa o salmón.
Esta separación por colores es el llamado efecto Romanowsky, que tiñe de púrpura a los
núcleos y gránulos neutrofílicos y de color rosa a los eritrocitos. Los ácidos nucleicos, las
proteínas y el
citoplasma se tiñen de azul, evidenciando a los parásitos sanguíneos protozoarios (Plasmodium,
Trypanosoma y Leishmania).
Las propiedades de tinción de las tinciones de Romanowsky dependen del enlace de los
colorantes a las estructuras químicas de la célula y, de las interacciones del azul B y la eosina
Y. Las tinciones con efecto Romanowsky usadas con frecuencia para las tinciones
hematológicas de rutina son Wright y Giemsa.
Para el estudio de las células sanguíneas se recomienda utilizar el colorante de Wright, mientras
que para la tinción de parásitos sanguíneos se usa el colorante de Giemsa.
Pueden ocurrir defectos en la tinción de los frotes sanguíneos como la coloración
excesivamente azul, debida a frotes muy gruesos, lavado con poca agua, por un corto tiempo o
tinción muy prolongada. También puede resultar una coloración con una tonalidad en exceso
rosada, así como también puede ocurrir la presencia de precipitados a causa de una acción
excesiva del colorante, lo cual se puede evitar con filtración del colorante.
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TINCIÓN DE WRIGHT
La tinción de Wright permite suministrar un medio para estudiar la sangre y determinar las
variaciones y anormalidades de estructura, forma y tamaño de los eritrocitos, su contenido de
hemoglobina y sus propiedades de coloración. La información obtenida de un frote de sangre
periférica depende en gran parte de la calidad del frote y la coloración.
El colorante de Wright se coloca durante un minuto sobre el frote sanguíneo, evitando el secado
del mismo para evitar precipitación. El tiempo de la tinción puede prolongarse dependiendo de
la maduración del colorante que se utilice en cada laboratorio. Posteriormente, se coloca una
solución amortiguadora, agua destilada o agua del chorro; durante 10 minutos. El color (tonos
de azul o rojo), puede variar, aumentando o disminuyendo el tiempo en la solución
amortiguadora. La médula ósea debe teñirse durante al menos 3 minutos y tamponarse entre 3 a
10 minutos.
El frote sanguíneo coloreado se coloca en el microscopio y con pequeño aumento, se revisa la
calidad de la coloración, la cantidad aproximada de glóbulos blancos y se escoge la zona ideal
para iniciar el recuento. Se coloca una gota de aceite de inmersión y se enfoca a un aumento de
100x. Para la interpretación, se observa el color de los glóbulos rojos (cantidad de
hemoglobina) y se examina detenidamente su forma y tamaño. También debe observarse la
presencia de plaquetas, su agrupación y distribución.
Posteriormente, se hace el recuento diferencial de glóbulos blancos en 100 células, para lo cual
se deberá conocer las diferencias entre neutrófilos, eosinófilos, linfocitos, monocitos y formas
inmaduras (p. ej.: cayados). Una extensión de sangre bien teñida debe caracterizarse por una
buena diferenciación de las estructuras subcelulares en los leucocitos, una coloración rosada de
los eritrocitos y la ausencia de precipitados.
TINCIÓN CON GIEMSA
 Material
 Frotis sanguíneo seco y rotulado.
 Cubeta.
 Varillas paralelas.
 Frasco lavador con agua destilada.
 Pipetas pasteur.
 Cronómetro.
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 Reactivos
 Metanol como solución fijadora.
 Colorante de Giemsa.
Técnica
1. Llenar de agua la cubeta para que los colorantes no se peguen al fondo.
2. Colocar las varillas paralelas sobre los bordes de la cubeta.
3. Colocar las extensiones sanguíneas sobre las varillas paralelas.
4. Cubrir las extensiones con metanol y esperar 4-5 minutos.
5. Decantar para eliminar el metanol.
6. Cubrir las extensiones con solución extemporánea de Giemsa recién diluída a 1/10 (1
gota de Giemsa por 9 gotas de agua destilada) y dejar actuar durante 25 minutos.
7. Lavar las extensiones con agua destilada para eliminar los restos de colorante.
8. Secar las extensiones al aire, colocas en vertical.
9. Observar los frotis sanguíneos teñidos al microscopio óptico.
TINCION: Panóptico rápida
La tinción rápida en hematología se utiliza para el diagnóstico y caracterización de leucocitos.
Permite una tinción fácil y rápida. El kit contiene soluciones para la tinción rápida de frotis
sanguíneos por
inmersiones sucesivas en cada una de ellas. Se obtienen resultados de calidad equivalente a las
técnicas clásicas (May Grünwald-Giemsa o Pappenheim) en tan solo unos segundos.
Las tinciones hematológicas son un conjunto de procesos que conducen a la coloración de las
estructuras que componen las células sanguíneas. Esto tiene por objeto el aumentar el contraste
entre esas estructuras y el medio que las rodea, y permite por tanto que las células sean
visualizadas microscópicamente con mayor facilidad.
Para ello se utilizan combinaciones de colorantes que dan lugar a tinciones polícromas. Una
coloración es panóptica cuando se utilizan sucesivamente sustancias colorantes.
Frente a las técnicas de tinción clásicas, donde el colorante se extiende sobre el frotis, éste, en
cambio, es un método de inmersión, donde el frotis se sumerge en la solución colorante durante
un tiempo determinado.
PRINCIPALES VENTAJAS
• Coloración fácil y rápida de las estructuras celulares.
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• Todos los reactivos que intervienen en la tinción están listos para su uso.
• Muy buena estabilidad: el kit es estable durante 3 años almacenado a temperatura entre 15 ºC
y 25ºC. A
PROCEDIMIENTO
1. Una vez realizada la extensión de la muestra en un portaobjetos, dejar secar al aire.
2. Sumergir el portaobjetos en un recipiente con el Fijador para tinción rápida (Panóptico Nº 1)
5 veces durante 1 segundo cada vez. Dejar escurrir el exceso de líquido sobre un papel de filtro.
3. Sumergir en otro recipiente con la Eosina para tinción rápida (Panóptico Nº 2) 5 veces
durante 1 segundo cada vez. Dejar escurrir.
4. Sumergir en otro recipiente con el Azul para tinción rápida (Panóptico Nº 3) 5 veces durante
1 segundo cada vez. Dejar escurrir.
5. Enjuagar el frotis con solución tampón pH 7,2.
6. Secar y observar al microscopio.
Dependiendo del tipo de tejido y grosor de la muestra puede modificarse el tiempo de
inmersión en los colorantes
El fijador panóptico nº 1
Las tinciones no vitales son tinciones hematológicas que se realizan sobre células muertas.
Estas
técnicas requieren un paso previo, que es la fijación de dichas células haciendo uso de metanol,
con
el fin de mantener inalteradas las estructuras de los diferentes componentes celulares.
Eosina panóptico nº 2
Es un colorante xanteno halogenado con tres grupos arilo (4 átomos de Bromo por molécula)
que
le confiere carga eléctrica negativa que les proporciona cualidades óptimas como colorante
citoplasmático. Tiene especial afinidad por las estructuras básicas de las células, como por
ejemplo
la hemoglobina. Al ser un colorantes aniónico (ácido), se unirá a las estructuras celulares
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básicasacidófilas-y los gránulos de los eosinófilos.
Azur B panóptico nº 3
Es un colorante básico, que forma parte de un grupo de sustancias denominadas tiacina. Tiene
especial afinidad por las estructuras ácidas de las células, como por ejemplo los ácidos
nucleicos,
gránulos en neutrófilos y proteínas ácidas que se tiñen de un color rojo púrpura más o menos
intenso. Como colorante catiónico (básico) se unirá a las estructuras ácidas-basófilas, y quedará
en tonos azulados (ADN, mitocondrias ribosomas y células con mucha actividad biosintética –mucho
ARN)
TINCIONES ESPECIALES
Las técnicas especiales son aquellas que se usan en situaciones específicas. Pueden ser
tinciones citoquímicas o inmunomarcaje. Las tinciones citoquímicas se efectúan generalmente
en frotis de sangre periférica o en médula ósea y permiten reconocer componentes químicos de
las células de tipo enzimático o no enzimático. Las enzimas reveladas pueden ser oxidantes o
hidrolíticas y las estructuras no enzimáticas que se pueden observar son el glucógeno y lípidos.
Son pruebas muy importantes para diferenciar los tipos de leucemias; también se usan en el
diagnóstico de otras enfermedades hematopoyéticas.
Entre las tinciones citoquímicas más comunes se encuentran la tinción de Mieloperoxidasa
(MPO), el ácido periódico de Schiff (PAS) o el Sudán negro B (SBB):
 La mieloperoxidasa es una enzima presente en los gránulos primarios de eosinófilos,
neutrófilos y en monocitos.
 La tinción de MPO es útil para distinguir la leucemia linfoide aguda (LLA) de la
leucemia mieloide aguda (LMA).
 La tinción de PAS se utiliza para diagnosticar algunas leucemias linfoides agudas
(LLA) y leucemias mieloides agudas (LMA).
 EL SBB tiñe lípidos y se emplea para diferenciar entre leucemia linfoide aguda (LLA)
y leucemia mieloide aguda (LMA).
Para el inmunomarcaje se emplean anticuerpos poli o monoclonales que reconocen marcadores
antigénicos característicos de los tipos celulares que se quieren identificar. A microscopía
óptica, la demostración del inmunomarcaje se puede realizar mediante inmunofluorescencia,
utilizando fluorocromos unidos al anticuerpo, que cuando son estimulados por una luz con una
longitud de onda adecuada emiten una radiación visible, de un color característico. Los
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fluorocromos más utilizados en esta técnica son fluoresceína (verde) y rodamina (rojo). El otro
método habitual de revelado del inmunomarcaje es el uso de enzimas unidas a un anticuerpo
(ensayo inmunoenzimático), cuya actividad se pone de manifiesto por un producto de reacción
coloreado. Entre las más utilizadas se encuentra la peroxidasa (técnica de la
inmunoperoxidasa), que se revela usando diaminobencidina.
LA OBSERVACIÓN
Para la observación de citologías, debe realizarse un screening sistemático. Se deben hacer
varios tipos de observación:
A muy bajos aumentos (con el objetivo 4x):
Se realiza un barrido de la muestra para comprobar la calidad del frotis.
A pocos aumentos (con el objetivo 10x):
Se valora la distribución celular, cantidad de poblaciones, presencia o ausencia de artefactos y
estructuras. Localizar la zona monocapa
A muchos aumentos (con el objetivo 40x):
Determinación de morfología y alteraciones en la serie roja.
Determinación de morfología, recuentos manuales de la serie blanca.
Determinación de morfología de la serie plaquetaria.
En inmersión (con el objetivo 100x):
ANEXOS
Set de técnica de tinción hematologica
12
Proceso de tinción
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CONCLUSIÓN
El presente trabajo tiene como objetivo determinar las alteraciones sanguíneas mediante el frotis
sanguíneo, para evaluar el tamaño, formas, color y el estudio citológico de las células sanguíneas en
pacientes que conlleva esta alteración. La sangre por estas alteraciones provoca un deterioro
progresivo en sus células. Se considera que la sangre es deficiente cuando no puede cumplir su
función respiratoria, coagulante y defensiva para combatir las infecciones y las enfermedades. El
frotis sanguíneo representa un método rápido objetivo y cuantitativo. El principio en el que se basa
esta técnica es simple: poner una gota de sangre total en la placa porta objeto y con otra placa
esmerilizada extender hasta obtener una capa muy fina dejar secar y poner la tinción de Wright,
colocar agua destilada descartar el sobrenadante y poner a secar. Para leer las células se agrega una
gota de aceite de inmersión en la placa y llevar al microscopio y ver con el lente 100x. El recuento
de los glóbulos rojos es el método más empleado; ya que constituye una medida directa del conteo
de sus células.
El frotis de sangre es un examen que proporciona información acerca del número y forma de las
células sanguíneas a través de una inspección visual con la ayuda del microscopio. Es útil como
complemento de la biometría hemática que es de utilidad para establecer el diagnóstico de gran
parte de las enfermedades hematológicas. La presente revisión se hace con el objetivo de ofrecer
una actualización que puede tener utilidad en un mejor conocimiento propio, se desarrollara los
puntos importantes a este estudio implicados en lo que es el valor de este estudio, las alteraciones
morfológicas, síndromes implicados en este, los diferentes tipos de anemias, el significado
fisiopatológico de las alteraciones implicadas morfológicamente
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Los resultados obtenidos en esta investigación son aplicados con materiales bibliográficos,
documentos pdf.
BIBLIOGRAFIA
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 https://www.celainfob.com/post/tinciones-hematol
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 https://labdemicrobiologia.wixsite.com/scientist-site/t-cnicas-y-tipos-de-tinci-n
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h&sa=X&ved=2ahUKEwi5yMKdy7X-
AhUaKbkGHdZvCRMQ_AUoAXoECAEQAw&biw=1093&bih=480&dpr=1.25#i
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 Reyes, R.(2016) Diagnóstico de filariasis canina, mediante la coloración de
romanowsky, en aldeas el zunzo y monterrico del municipio de taxisco,
santa rosa. Universidad de San Carlos de Guatemala
15
 Rodríguez, F. (2017) Tinción de Giemsa. Blog de Laboratorio Clínico y
Biomédico. https://www.franrzmn.com/tincion-de-giemsa/
 Vives, J., y Aguilar, J. (2006). Manual de técnicas de laboratorio en
hematología. España: Elsevier
16

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