Esto se refiere a sistemas lóticos (ríos, arroyos).

y tengo entendido que hicieron este trabajo en una laguna, un sistema léntico.

Aislamiento de microorganismos en un cuerpo fluvial artificial y su interacción en los ciclos

tarde+ Entregado 12 m 23/11.2022

biogeoquímicos.

Isolation of microorganisms in an artificial fluvial body and their interaction in biogeochemical

cycles.
Luis Alexander Baloco Sanchez, Daniela Guerrero Rivera, Anny Marcela Sanchez Guerra, Emerson
Yesid Zamora Adrada.

Laboratorio de Microbiología Ambiental, Facultad de Ciencias Básicas

e-mail: daniela.guerrero04@usc.edu.co

RESUMEN

Antecedentes. Los cuerpos fluviales albergan componentes bióticos como microorganismos y

abióticos como rocas en el ecosistema, lo cuales interactúan constantemente generando relaciones
en las que intervienen complejos enzimáticos que participan directamente en los ciclos
biogeoquímicos de los lagos (artificiales o naturales). Objetivos. Identificar la presencia de
microorganismos partícipes en el ciclo del carbono, nitrógeno y fósforo en el lago artificial.
Metodología. Para identificar microorganismos participes en el ciclo del carbono se evaluó la
capacidad celulolítica de los microorganismos sembrando el agua del lado sin diluir por superficie en
agar CMC, para aquellos fijadores de nitrógeno en agar Ashby y YMA, sin embargo para los
microorganismos solubilizadores de fósforo se realizó enriquecimiento de la muestra en medio
SMRS1 sin indicador de pH para luego generar diluciones seriadas hasta 10-5, de las cuales se
cultivaron por superficie 10-3 a 10-5 en agar agar SMRS1 con indicador de pH y agar pikovskaya.
Posteriormente se realizó tinción de Gram para la identificación de morfologías microbianas.
Resultados. Se generó gran crecimiento de microorganismos celulolíticos pero con baja capacidad
enzimática, por lo que los halos de hidrólisis eran menor a 1 cm, caso similar para los
microorganismos fijadores de nitrógeno ya que estos se formaron pero no generaron cambio de
color en el agar por la acidificación o halos de aclaramiento al rededor de las colonias, esto también
se observo en los microorganismos solubilizadores de fosfatos puesto que el hubo gran crecimiento
pero no halos de aclaramiento al rededor del agar. Sin embargo, las morfologías más presentes
fueron levaduras, cocos y microalgas. Conclusiones. El lago artificial de la universidad Santiago de
Cali presenta microorganismos con morfologías de levaduras, cocos y microalgas partícipes en los
principales ciclos biogeoquímicos (carbono, nitrógeno y fósforo) .
Palabras clave: Lagos artificiales, ciclos biogeoquímicos, Microorganismos celulolíticos,
solubilizadores de fosfato, Fijadores de nitrógeno, Tinción de Gram

ABSTRACT
Background. The fluvial bodies house biotic components such as microorganisms and abiotic
components such as rocks in the ecosystem, which constantly interact generating relationships in
which enzymatic complexes participate directly in the biogeochemical cycles of the lakes (artificial or
natural). Objectives. Identify the presence of microorganisms participating in the carbon, nitrogen
and phosphorus cycle in the artificial lake. Methodology. To identify microorganisms participating in
the carbon cycle, the cellulite capacity of the microorganisms was evaluated by seeding the water on
the undiluted side by surface in CMC agar, for those nitrogen fixers in Ashby and YMA agar, however
for phosphorus solubilizing microorganisms Enrichment of the sample was performed in SMRS1
medium without pH indicator to then generate serial dilutions up to 10-5, of which 10-3 to 10-5 were
cultured per surface on SMRS1 agar agar with pH indicator and Pikovskaya agar. Subsequently,
Gram staining was performed for the identification of microbial morphologies. Results.A great growth
of cellulolytic microorganisms was generated but with low enzymatic capacity, so that the hydrolysis
halos were less than 1 cm, a similar case for the nitrogen-fixing microorganisms since these were
formed but did not generate color changes in the agar due to acidification or clearing halos around
the colonies, this was also observed in the phosphate solubilizing microorganisms since there was a
great growth but no clearing halos around the agar. However, the morphologies most present were
yeasts, cocci and microalgae. Conclusions. The artificial lake of the Universidad Santiago de Cali
presents microorganisms with yeast, cocci and microalgae morphologies that participate in the main
biogeochemical cycles (carbon, nitrogen and phosphorus).

Key words: Artificial lakes, biogeochemical cycles, cellulolytic microorganisms, Phosphate

solubilizers, Nitrogen fixers, Gram stain

INTRODUCCIÓN liberado a partir de microorganismos

¿cuáles procesos?
Estos son procesos naturales que reciclan
elementos del medio para después generar
un intercambio de agua, carbono, nitrógeno,
oxígeno, fósforo, conectando así los
componentes vivos y no vivos de la Tierra
(Peña 2007). El carbono se encuentra en gran
abundancia, por lo que este ciclo es vital para
tránsito del elemento por los suelos, océanos,
atmósfera y así mismo ser aprovechado por
los seres vivos, los cuales se ven
involucrados en procesos fisicoquímicos y
biológicos
(Ref)
preservando el equilibrio de la
biosfera. El Ciclo del Nitrógeno es corto y con
fase gaseosa, actúa como un proceso
biológico y abiótico por el cual los seres vivos
pueden adquirir el elemento a través de una
de las 3 etapas,
(Ref)
amonificación, nitrificación y
asimilación. El fósforo es un elemento que se
encuentra en poca cantidad, por lo cual deriva
su importancia e impacto en el ecosistema,
depositado mayoritariamente en sedimentos y
solubilizadores de fósforo en ambientes
acuáticos y terrestres. (Ciencia, 2016) Los
microorganismos tienen un papel importante
en el ciclo geoquímico, ya que la función
principal de estos es degradar, solubilizar o
fijar compuestos orgánicos e inorgánicos
presentes en el medio generando productos
asimilables para los otros organismos, como
por ejemplo las algas y las cianobacterias que
contribuyen en el ciclo del carbono (Miguel,
2019). En el ciclo del nitrógeno solamente
algunos microorganismos que habitan en los
suelos son especializados en la fijación de
este elemento, lo adquieren y lo convierten en
amoniaco y de esta forma es asimilado y
utilizado por las plantas para la producción de
moléculas orgánicas (Khan, 2014). En el ciclo
del fósforo los microrganismo solubilizadores
de fósforo realizan la transformación de
compuestos orgánicos e inorgánicos a través
de procesos de mineralización e
inmovilización, los microorganismos por
 medio de la solubilización pueden producir
ácidos orgánicos o asimilar directamente los
fosfatos insolubles acumulándolos en sus
células para después liberarlo (Rodrigo,
2018). El aislamiento de microorganismos
nace de la necesidad de tener un control
sobre aquellos microorganismos que
interactúan en la biosfera de los cuerpos
fluviales naturales o artificiales, estos cuerpos
poseen un suelo junto con diferentes
elementos orgánicos e inorgánicos los cuales
se sedimentan en las profundidades de los
mismos (Chen, 2008). Algunos de los
microorganismos presentes tienen la
capacidad de producir enzimas específicas
necesarias para la degradación de la materia
orgánica, como celulasa y la amilasa;
solubilizar fósforo orgánico a inorgánico o fijar
nitrógeno; entre otros, participando así en los
ciclos biogeoquímicos del planeta. Según
Buraimoh, 2015 lograron reconocer la
presencia de algunos microrganismo como
Streptomyces, Bacillus y Paenibacillus en el
lago Lagoon de nigeria, en Bogotá mediante
el uso de secuenciación por medio del gen
16S rRNA, se identificaron microorganismos
celulolíticos como Bacillus sp, Pseudomonas
sp y Stenotrophomonas pertenecientes a los
suelos de humedales (Castelblanco, 2020).
En el reservorio de agua artificial presente en
la Universidad Santiago de Cali habitan
diversas especies que se encuentran en
constante interacción donde se tiene
principalmente microorganismos, los cuales
probablemente cumplen un papel crucial en los ciclos
biogeoquímicos, fundamentalmente en el del
(Ref)
carbono, nitrógeno y fósforo. Estos ciclos
contribuyen al óptimo funcionamiento del
ecosistema,
planeta y sus ecosistemas en gran medida
por la participación activa de los
microorganismos, por lo tanto, esta
investigación tiene como enfoque de
investigación, responder a la pregunta ¿En el
lago artificial de la Universidad Santiago de
Cali hay presencia de microorganismos
partícipes de los principales ciclos
biogeoquímicos? El objetivo es aislar del lago
artificial de la Universidad Santiago de Cali
microorganismos partícipes en los principales
ciclos biogeoquímicos. los resultados de este
se muestra la generación de un
estudio fueron que se generó gran
crecimiento de microorganismos celulolíticos
pero con baja capacidad enzimática, por lo
que los halos de hidrólisis eran menor a 1 cm,
caso similar para los microorganismos
fijadores de nitrógeno ya que estos se
formaron pero no generaron cambio de color
en el agar por la acidificación o halos de
aclaramiento al rededor de las colonias, esto
también se observo en los microorganismos
solubilizadores de fosfatos puesto que el hubo
gran crecimiento pero no halos de
aclaramiento al rededor del agar. Sin
abundantes
embargo, las morfologías más presentes
fueron levaduras, cocos y microalgas.
METODOLOGÍA
Teniendo en cuenta que la investigación se
basó en 3 tipos de microorganismos
diferentes, se presenta la metodología de
acuerdo a estos:
● Microorganismos fijadores de
nitrógeno, se cultivó 0,1 ml de la
muestra (agua del lago) en agar y el Ashby?
Ashby y por duplicado en agar YMA y
se incubó a 37°c durante 7 días.
● Para los microorganismos
celulolíticos se agregó 0,1 ml de la
muestra madre en agar CMC
presentando 2 agares por estría y 2
agares por agotamiento, los cuales se
incubaron a 37°c durante 7 días.
Posteriormente aquellas que poseían
entre 30 y 300 colonias se realizó la
revelación de los halos con rojo
congo al 1% .
● Para la identificación de
microorganismos solubilizadores de
fósforo se realizó un
preenriquecimiento con 50 ml de
muestra en 45 ml de medio SMRS1
sin indicador de pH y se llevó a
 incubar a temperatura ambiente ( 25
°c) por 4 días, posteriormente
tomando como siembra madre el
medio enriquecido se generaron
diluciones seriadas hasta 10-5 y se
sembraron de 10-1, 10-3 y 10-4 en agar
SMRS1 con indicador de pH y en
agar pikovskaya que se llevaron a
incubar a 37 °c por 48 horas.

Por consiguiente, a cada placa se le realizó

tinción de gram y azul de lactofenol (de ser Figura 2: Tinción Gram del agar YMA-A el
necesario) para Identificar las morfologías de cual presenta cocos Gram positivos.
los microorganismos presentes.

RESULTADOS

Teniendo en cuenta que uno de los objetivos

era identificar la presencia de
microorganismos solubilizadores de nitrógeno,
se realizó siembra de la muestra del lago sin
diluir por duplicado (véase figura 1 y 3) donde
se generaron colonias en forma de mucosidad
alrededor de todo el agar YMA

Figura 3: Siembra del lago sin diluir en agar

YMA-B

Por consiguiente, también se realizó tinción

de Gram al duplicado de la siembra del agua
del lago sin diluir en agar YMA demostrando
morfología como levaduras gram positivas,
cocos gram negativos y algunas microalgas
(véase la figura 4 y 5).
¿estas cajas fueron cultivadas con luz o hubo alguna entrada de
Figura 1: Siembra lago sin diluir en agar luz?

YMA-A.

A la mucosidad se le realizó tinción de Gram

para identificar la morfología de los
microorganismos presentes, obteniendo
cocos Gram positivos para la primera siembra
en el agar YMA.

Figura 4: Tinción Gram 1 del agar YMA-B
presentando levaduras gram positivos
Figura 5: Tinción Gram 2 del agar YMA-B
presentando cocos gram negativos y algunas
microalgas.
Para generar mayor cobertura al momento de
identificar microorganismos con esta
capacidad enzimática, también se evaluó el
crecimiento de la muestra sin diluir en agar
Ashby (véase figura 6) donde se desarrollaron
colonias en forma de mucosidad.
Figura 6: siembra lago sin diluir en agar
Ashby
A esta mucosidad se le generó tinción de
Gram para identificar el tipo de
microorganismos presentes encontrando
cocos gram negativos y algunas microalgas
como se identifica en la figura 7.
Figura 7: Tinción Gram 1 del agar Ashby
presentando cocos gram negativos y algunas
microalgas
Teniendo en cuenta que uno de los objetivos
era identificar la presencia de los
microorganismos celulolíticos en el ciclo de
carbono y identificar con rojo congo su
actividad enzimática, se realizó siembra por
aislamientos en agar CMC sin diluir a una
muestra de lago artificial por duplicado (véase
figura 1 y 5) donde se generaron colonias de
diferentes colores.
Figura 1. Siembra por agotamiento de la
muestra de lago sin diluir en Agar CMC. Figura 4.Tinción de Gram de las colonias
blancas donde se observaron cocos Gram
A las colonias con una coloración diferente negativos.
amarillas,beige y blancas se le realizó tinción
de gram para identificar el tipo de
microorganismos presente en la muestra A
encontrando Bacilos gram negativos y cocos
gram negativos.

Figura 5. Siembra por agotamiento de la

muestra de lago sin diluir en Agar CMC
muestra B.

Figura 2. Tinción de Gram de las colonias
amarillas donde se observaron Bacilos Gram
negativos.
A las colonias con una coloración diferente
amarillas y blancas se les realizó tinción de
gram para identificar el tipo de
microorganismos presente en la muestra A
encontrando Bacilos gram positivos y cocos
gram negativos.

Figura 3. Tinción de Gram de las colonias

Beige donde se observaron Cocos Gram
negativos.

Figura 6.Tinción de Gram de las colonias
amarillas donde se observaron cocos Gram
negativos y bacilos Gram positivos.
Figura 7. Tinción de Gram de las colonias
blancas donde se observaron cocos Gram
negativos.
Se realizó rojo congo para identificar halos de
hidrólisis en una muestra de lago artificial en
los agar CMC (Véase figura 8,9, 10 y 13).
Figura 8. Agar CMC muestra de lago sin diluir
por agotamiento con rojo congo.
Figura 9. Agar CMC muestra de lago sin diluir
por agotamiento con rojo congo muestra B.
Se realizó siembra por masivo en agar CMC
sin diluir a una muestra de lago artificial por
duplicado (véase figura 10 y 13) donde se
generaron colonias de diferentes colores.
Figura 10. Siembra masiva de la muestra de
lago sin diluir con rojo congo en Agar CMC
muestra A.
A las colonias con una coloración diferente
amarillas y blancas se les realizó tinción de
gram para identificar el tipo de
microorganismos presente en la muestra A
encontrando cocos gram negativos.

Figura 11. Tinción de Gram de las colonias
amarillas donde se observaron cocos Gram
negativos.
Figura 12. Tinción de Gram de las colonias
blancas donde se observaron cocos Gram
negativos.
Figura 13. Siembra masiva de la muestra de
lago sin diluir con rojo congo en Agar CMC
muestra B.
A las colonias con una coloración diferente
amarillas y naranja se les realizó tinción de
gram para identificar el tipo de
microorganismos presente en la muestra B
encontrando levaduras, cocos gram
negativos y positivos.
Figura 14.Tinción de Gram de las colonias
amarillas donde se observaron cocos Gram
positivos y negativos.
Figura 15. Tinción de Gram de las colonias
naranja donde se observaron cocos Gram
negativos y levaduras.
Para la siembra masiva en superficie de
microorganismos solubilizadores de fósforo de
un cuerpo fluvial artificial para las placas A y B
con medio de cultivo Pikovskaya ,10-1, 10-3 y
10-4 como se puede observar en las figuras
16, 17, 18, 19, 20 y 21, presentaron un
crecimiento mayor al óptimo del rango de
30-300 colonias, donde el resultado del
recuento en placa se puede observar en la
tabla 1.
 Diluciones Muestra A Muestra B
-1 2
10 >1*10 UFC/ >1*102 UFC/ ml
ml de cuerpo de cuerpo fluvial
fluvial artificial artificial
10-3 >1*104 UFC/ >1*104 UFC/ ml
ml de cuerpo de cuerpo fluvial
fluvial artificial artificial
-4
10 6,0*107 UFC/ 6,0*107 UFC/ ml
ml de cuerpo de cuerpo fluvial
fluvial artificial artificial
Tabla 1. Recuento en placa por superficie de Figura 18. Siembra masiva en Agar
los medios de cultivo Pikovskaya. Pikovskaya de la dilución 10-3 muestra A.

Figura 19. Siembra masiva en Agar

Figura 16. Siembra masiva Agar Pikovskaya
de la dilución 10-1 muestra A. Pikovskaya de la dilución 10-3 muestra B.

Figura 20. Siembra masiva en Agar

Pikovskaya de la dilución 10-4 muestra A.
Figura 17. Siembra masiva en Agar
Pikovskaya de la dilución 10-1 muestra B.
 Diluciones Muestra A Muestra B
10-1 >1*10 UFC/ >1*102 UFC/
2

ml de cuerpo ml de cuerpo
fluvial fluvial
artificial artificial
-3
10 >1*10 UFC/ >1*104 UFC/
4

ml de cuerpo ml de cuerpo
fluvial fluvial
artificial artificial
-4 7
10 6,4*10 6,5*107
UFC/ ml de UFC/ ml de
Figura 21. Siembra masiva Agar Pikovskaya
cuerpo cuerpo
de la dilución 10-4 muestra B. fluvial fluvial
Se debe tener en cuenta que para realizar el artificial artificial
recuento en placa de la dilución 10-4 se dividió Tabla 2. Recuento en placa por superficie de
la placa en cuatro y se realizó el conteo a uno los medios de cultivo SMRS1 con indicador de
de los cuadrantes y luego se multiplicó por 4 pH.
para calcular un recuento aproximado, como
se puede observar en la figura 7.

Figura 22. Recuento en placa en Agar Figura 23. Siembra masiva en Agar SMRS1
Pikovskaya de la dilución 10-4 muestra A y B. con indicador de pH de la dilución 10-1
muestra A.
Para la siembra masiva en superficie de
microorganismos de un cuerpo fluvial artificial
para las placas A y B con medio de cultivo
SMRS 1 con indicador de pH 10-1, 10-3 y 10-4
como se puede observar en las figuras 22, 23,
24, 25, 26 y 27, presentaron un crecimiento
mayor al óptimo del rango de 30-300 colonias,
donde el resultado del recuento en placa se
puede observar en la tabla 2.

Figura 24. Siembra masiva en Agar SMRS1

con indicador de pH de la dilución 10-1
muestra B.
Figura 25. Siembra masiva en Agar SMRS1
con indicador de pH de la dilución 10-3
muestra A.
Figura 26. Siembra masiva en Agar SMRS1
con indicador de pH de la dilución 10-3
muestra B.
Figura 27. Siembra masiva en Agar SMRS1
con indicador de pH de la dilución 10-4
muestra A.
Figura 28. Siembra masiva en Agar SMRS1
con indicador de pH de la dilución 10-4
muestra B.
Se debe tener en cuenta que para realizar el
recuento en placa de la dilución 10-4 se dividió
la placa en cuatro y se realizó el conteo a uno
de los cuadrantes y luego se multiplicó por 4
para calcular un recuento aproximado, como
se puede observar en la figura 28.
Figura 29. Recuento en placa en Agar
SMRS1 con indicador de pH de la dilución
10-4 muestra A y B.
Los resultados arrojados por la tinción de
Gram para la siembra masiva en Agar
Pikovskaya de las diluciones 10-1, 10-3 y 10-4
fueron bacilos Gram negativos y Levaduras
como se pueden observar en las figuras 30,
31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40 y 41.
Figura 30. Tinción de Gram de las colonias
blancas transparentes donde se observaron
levaduras y bacilos Gram negativos de la
dilución 10-1 de la muestra A.
Figura 31. Tinción de Gram de las colonias
blancas transparentes donde se observaron
levaduras y bacilos Gram negativos de la
dilución 10-1 de la muestra B.
Figura 32. Tinción de Gram de las colonias
blancas transparentes donde se observaron
levaduras y bacilos Gram negativos de la
dilución 10-3 de la muestra A.
Figura 33. Tinción de Gram de las colonias
blancas transparentes donde se observaron
levaduras y bacilos Gram negativos de la
dilución 10-3 de la muestra B.

Figura 34. Tinción de Gram de las colonias
blancas transparentes donde se observaron
levaduras y bacilos Gram negativos de la
dilución 10-4 de la muestra A.
Figura 36. Tinción de Gram de las colonias
blancas transparentes donde se observaron
levaduras y bacilos Gram negativos de la
dilución 10-1 de la muestra A.

Figura 35. Tinción de Gram de las colonias Figura 37. Tinción de Gram de las colonias
blancas transparentes donde se observaron blancas transparentes donde se observaron
levaduras y bacilos Gram negativos de la levaduras y bacilos Gram negativos de la
dilución 10-4 de la muestra B. dilución 10-1 de la muestra B.
Los resultados arrojados por la tinción de
Gram para la siembra masiva en Agar SMRS1
con indicador de pH de las diluciones 10-1,
10-3 y 10-4 fueron bacilos Gram negativos y
Levaduras como se pueden observar en las
figuras 20, 21, 22, 23, 24 y 25.
Figura 38. Tinción de Gram de las colonias Figura 40. Tinción de Gram de las colonias
blancas transparentes donde se observaron blancas transparentes donde se observaron
levaduras y bacilos Gram negativos de la levaduras y bacilos Gram negativos de la
dilución 10-3 de la muestra A. dilución 10-4 de la muestra A.

Figura 41. Tinción de Gram de las colonias

blancas transparentes donde se observaron
Figura 39. Tinción de Gram de las colonias
levaduras y bacilos Gram negativos de la
blancas transparentes donde se observaron
dilución 10-4 de la muestra B.
levaduras y bacilos Gram negativos de la
dilución 10-3 de la muestra B.
DISCUSIÓN DE RESULTADOS

El ciclo del nitrógeno es el proceso biológico

de la transformación de ciertos elementos que
pueden mantener de manera correcta el
estado del agua en un ambiente controlado o
no, este se realiza mediante la oxidación del
amoniaco (nh3) a nitritos (no2) y nitratos (no3)
a través de diferentes bacterias nitrificantes
(El ciclo del nitrógeno en los estanques y
cuales lagos
lagos, s. f.). comúnmente en estos lagos
artificiales se ha encontrado la presencia de
bacterias, levaduras y algunas cianobacterias,
esto debido a las conducciones presentes en
los lagos, tales como pH óptimo, nutrientes
ideales y temperatura apta para el crecimiento
de estos microorganismo (López, 2016).
Algunos de los géneros bacterianos de vida
libre comúnmente asociados a procesos de
fijación de nitrógeno en ambientes de suelo y
agua son del orden de las pseudomonas y
enterobacterias como azotobacter, klebsiella,
clostridium, rhodobacter, algunas
cianobacterias con especies de anabaena y
nostoc, y principalmente Rhizobium
(González, 2019), sin embargo, como
podemos observar en las figuras 2, 4, 5 y 7 la
microscopia en base a la tinción Gram no
corresponde a los géneros de las bacterias
descritas anteriormente, las observadas en
dichas figuras corresponden a cocos Gram
positivos (figura 2), levaduras Gram positivas
(figura 4) y cocos Gram negativos (figura 5 y
7) con la presencia de algunas microalgas.
Para la determinación de estos
microorganismo la implementación de medios
de cultivos como el agar YMA el cual permite
el desarrollo de Rhizobium durmientes y la
diferenciación de contaminantes (Hernández,
2012), es comúnmente aceptado para la
identificación de microorganismo con
capacidad de fijar nitrógeno, además del uso
de la prueba del rojo congo, el cual permite
diferenciar microorganismos contaminantes
de rizobios los cuales suelen presentar una
coloración en sus colonias de un blanco
transparente; el medio de cultivo Ashby o agar
Ashby es especial que por estar libre de
nitrógeno facilita la identificación de
potenciales cepas de bacterias para la fijación
de nitrógeno (Lemos, 2019), siendo
importante recalcar que estos dos agares
están especializados para el crecimiento de
microorganismo fijadores de nitrógeno en
matrices sólidas o semisólidas como lo son
suelos o lodos, por eso es imperativo
reconocer que la falta de crecimiento
microbiano fijador de nitrógeno como se
muestra en las figuras de la 1 a la 7 puede
estar relacionado a que la matriz proveniente
de lago artificial usado en estos agares puede
no ser la adecuada en comparación con
muestras de suelo para los mismos
(Rodríguez, 2020).
Para la siembra por agotamiento y masiva de
la muestra del cuerpo fluvial artificial sin diluir
en agar CMC como se puede observar en las
figuras 8, 9, 10 y 13 aunque se ve presencia
de halos, no se pudo realizar una medición de
los mismos debido a que las colonias
presentaban poco espacio entre ellas debido
a que a la muestra analizada no se realizó
diluciones previas antes de la siembra, por lo
tanto se afirma que si hay presencia de
microorganismos celulolíticos en el cuerpo
fluvial artificial aunque se desconoce de
manera puntual cuáles de las colonias
presentaron halos de hidrólisis.
Para las tinciones realizadas tanto de las
siembras por agotamiento como por masivo,
como se puede observar en las figuras 3, 4, 6,
7, 11, 12, 14 y 15 presentaron morfología de
cocos, de los cuales 7 son Gram negativos y
1 es Gram positivo, capaces de degradar la
celulosa, debido a que el agar utilizado (CMC)
solo presentaba como fuente de carbono
carboximetilcelulosa, el cual lo hace un medio
de cultivo óptimo para el aislamiento de
microorganismos con actividad celulolítica
(Alvarado, 2019).
La presencia de microorganismos encargados
de la asimilación y desasimilación en los
cuerpos fluviales artificiales son de gran
importancia ya influyen positivamente en la
 calidad del ecosistema acuático, mejorando la
vida de los peces y las plantas ya que se
encargan de degradar materia orgánica que
párrafo
de una se encuentre en el cuerpo fluvial como hojas
sola frase.
caídas, desechos de los peces, lodo y
estiércol de aves (Barroso, 2021), también se
tiene que tener en cuenta que este tipo de
microorganismos cuentan con maquinaria
enzimática y metabolómica crucial para las
rutas del carbono, lo que lo hace un recurso
de interés su aislamiento e identificación para
conocer cómo influyen estos en el ciclo del
carbono (Lopéz, 2019).
La situación con el ciclo de carbono actual es
preocupante ya que se ha visto un incremento
de carbono almacenado en océanos, ríos y
lagos debido a la actividad humana ya que en
teoria deberia ser equivalente la cantidad de
carbono que se emite con la que se absorbe
en las fuentes hídricas ya que hay un
alteraciones significante en los nutrientes de
estas fuente que afectan a todas las especies
(Smart Water Magazine, 2020).
Durante el estudio de los resultados de los
microorganismos solubilizadores de fósforo se
logra observar algunos microorganismos con
potencial para solubilizar el fósforo presente
en los fosfatos de un medio, teniendo en
cuenta que la mayoría de los
microorganismos solubilizadores hacen parte
del grupo PGPM, que son aquellos con
potencial promotor para el crecimiento de las
plantas, en el cual no solo se encuentran
bacterias si no algunos hongos que presentan
la capacidad de solubilizar fosfatos minerales
que han sido fijados en los medios como en el
agar Pikovskaya o el medio SMRS1
enriquecido con fosfato tricálcico, los cuales
permiten un óptimo crecimiento de estos
microorganismos (Beltrán, 2015). Entre los
géneros de microorganismos comúnmente
asociados a los procesos de solubilización del
fósforo se encuentran algunos hongos y
bacterias siendo entre las bacterias los
géneros Bacillus spp. los más comunes cómo
se logra observar en las figuras de la 16 a la
26, en la cual se puede diferenciar la
presencia de bacilos Gram negativos y
algunas levaduras (Innovatione Agro Food
Design, 2021). Estos microorganismos en
especial el género Bacillus sp tiene un buen
crecimiento en medios enriquecidos como lo
son el agar Pikovskaya debido a su
composición que consta de fosfatos como lo
son el fosfato de calcio y cloruro de fósforo,
que son recomendados para detectar la
solubilización de estos por microorganismos
(Pikovskaya Agar, 1919), y el agar SMRS1 el
cual está enriquecido con fosfatos tricalcicos
que permite crear una zona clara en los
alrededores de las colinas debido a la
solubilización de fosfatos mediante enzimas
bacterianas como lo son las fosfatasas, que
catalizan la hidrólisis de ésteres y anhídridos
del ácido fosfórico (Corrales, 2014). Como se
puede evidenciar en las figuras de la 16 a la
29 el crecimiento de los microorganismos
supera las capacidades contables en las
diluciones 10-1 y 10-3 como se observar en la
tabla 1 y 2 para el recuento en placa por
superficie, esto pudo ser debido al
pre-enriquecimiento realizado en el caldo
¿hubo cambios de
SMRS1 sin indicador de pH que al sembrarlo coloración en el
medio?
en los agares Pikovskaya y SMRS1 con ¿Qué cambios de color
en el medio esperaban,
indicador de pH favorece al crecimiento si hubiera cambiado el
pH?
microbiano siendo su recuento de >1*102
UFC/ ml de cuerpo fluvial artificial y >1*104
UFC/ ml de cuerpo fluvial artificial en las
diluciones por duplicados (Ramírez, 2017).
Para las diluciones en 10-4 en agar
Pikovskaya se logró obtener un recuento de
6,0*107 UFC/ml de cuerpo fluvial artificial en
las muestras por duplicado (tabla 1) debido a
que esta era la dilución mayor, la cual
presentaba una concentración menor de
microrganismos como se evidencia en las
figuras 20 y 21; al igual que en el agar
SMRS1 la dilución 10-4 en la muestra A
presentó un recuento de 6,4*107 UFC/ ml de
cuerpo fluvial artificial mientras que para la
muestra b el recuento fue de 6,5*107 UFC/ ml
de cuerpo fluvial artificial (tabla 2). Se
esperaba evidenciar la formación de halos de
aclaramiento en los medios SMRS1 con el fin
de determinar si los microrganismos aislados
presentaban capacidad enzimática para
solubilizar el fosfato tricálcico presente en
este medio además de un cambio de color del
medio por el indicador de pH (Becerra, 2011),
sin embargo esto no se logró evidenciar como
se puede observar en las figuras de la 16 a la
28 principalmente porque los microrganismos
asilados aunque tengan forma de bacilos y
pertenezcan al género Bacillus spp, estos no
poseen la capacidad enzimática de solubilizar
los fosfatos, además la falta de presencia de
halos de hidrolisis, se puede deber a la
cantidad de microrganismos en el recuento ya
que es más del estimado en su densidad
poblacional impidiendo así la formación de
halos en el medio. Finalmente
complementando el análisis de los resultados
obtenidos se encuentra que en las tinciones
realizadas tanto para los microorganismos en
el agar Pikovskaya y el agar SMRS1 el
género que se evidencio fue Bacillus sp Gram
negativos con morfologías macroscópicas de
colonias blancas transparente; además de la
presencia de algunas levaduras, posiblemente
pertenecientes al género Hanseniaspora
presentes comúnmente en lagos artificiales
(Silva Bedoya, L. 2012).
CONCLUSIONES
La importancia de los microorganismos
participes en el ciclo del nitrógeno en lagos
artificiales se ve reflejada en las reacciones
de oxidación del nitrógeno presente en los
organismos involucrados y en el mismo
ecosistema, donde la interacción microbiana
realizan este proceso fisicoquímico logrando
mantener en un balance adecuado para todos
los seres asociados en este tipo de ambiente,
siendo así como la identificación de
microorganismo fijadores presentes en los
lagos nos permite tener un conocimiento
sobre cómo estos interactúan en base a sus
funciones y el uso de diferentes tipos de
agares facilita la obtención de estos
microorganismos.
Con este estudio no se logró evidenciar halos
de hidrólisis de los microorganismos
solubilizadores de fósforo debido al alto
crecimiento poblacional de los
microorganismos, más no por la falta de los
mismos en el cuerpo fluvial artificial. Por otro
lado, a pesar de que sí se evidenciaron halos
de hidrólisis para la actividad celulolítica no se
pudo identificar cuál de las colonias era que
presentaba esta actividad, por lo tanto se
constató que en el cuerpo fluvial artificial
analizado si influyen microorganismos
asociados al ciclo del carbono, los cuales
permiten un equilibrio en el ecosistema al
encargarse de degradar desechos que
puedan encontrarse.
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