Pregrado

SESIÓN 02: HEMOGRAMA

Nelson Miguel Rodriguez Gueorguiev

–
Medico Patólogo Clínico
Tabla 1. Tipos de he'l"'l"llogramas d~ acuerdo con su tecnologia y sus co..-nponente-s (10]

Tipos de hemogramas
Parámet:ros
Tipo 1 Tipo 1 Tipo 11 Tipo IV TipoV Tipo VI
1 1
Componentes er"lt:l"OC.it-ralo.s

Recuento de er'ltroeltos M M M M M M

Hll'moelobl "ª M M M M M M

Hematocrlto M M e e e e
Volumen corpuscular m-edlo e e M M M M

Hemogloblna corpuscular med1a e e e e e e

Concent:raclón
corpuscular
media de la hemoglobina e e e e e e
Ancho de dls-rrlbucfón de '°s er"l't.rocltos e e e
Recue nt.o de ret:fculocftos M

FracclOO de r-edculocitos lnmaduros M

Hll'moelobl "ª rll'ticu loc:ltarla M

Recuento de er·ltrobl411stOS crn:u l~ntes M

Componentes lauc.ocl~ar5os

Recuento total de l~oocltos M M M M M M

Recuento dlfef"enclal de leucOCJt.os M M M M M M

Recuento de granulodt.os Inmaduros M

Mala ria M

Componentes plaquetarios

Recuento de plaquetas M M M M M

Volumen medio pl.aquetarlo M M M

Plaquetoerito e e e
AnchO ele dlstrlbo.>eló" de tas plaquet:as e e e
Fraccló<i ele ptaqueuas lnmadu ras M
Se localizan en dos compartimentos:
uno central o medula ósea (progenitores y precursores
eritropoyéticos)y otro periférico o sangre (eritrocitos).
 Eritropoyesis

15 a 18d de vida embrionaria Saco vitelino (fase mesoblástica),

A partir del día 35 y hasta el 42 Hígado y el bazo (fase hepatoesplénica),

después del nacimiento y Se aloja de forma definitiva,, en la

cavidad medular de los huesos (fase
durante la vida adulta, mieloide)

J. Sans-Sabrafen. Hematología clínica, Quinta edición . España

 EL SISTEMA ERITROIDE

El correcto funcionamiento depende del equilibrio entre:

Formación de GR por la su eliminación por l

medula ósea (eritropoyesis) macrófagos (hemólisis

fisiológica).

J. Sans-Sabrafen. Hematología clínica, Quinta edición . España

 Medula Ósea
• La medula ósea puede ser:
1. M.O Roja.
2. M.O Amarilla.

• Las funciones de la M.O

hematopoyética:
 Formación de varios tipos de células
sanguíneas (Hematopoyesis).
 Fagocitosis y destrucción de
microorganismos o células rojas y
leucocitos senescentes.
 Producción de anticuerpos.

• Las funciones de la M.O No

hematopoyética es de reserva de
lípidos.
 MEDULA
ÓSEA

Una población muy

heterogénea de células
Estroma
hemáticas.

Compartimiento Red de fibras

Compartimiento vascular. reticulares y
células reticulares
celular.

Venas, Las células reticulares

Islotes de células van acumulando grasa
arterias y
hematopoyéticas sinusoides
en su citoplasma=
Medula ósea amarilla
y macrófagos
 Paciente de 80 años
% de celularidad = aprox 100-edad Leucemia.
Recuentos manuales
en Hematología
 HEMOGRAMA
• El hemograma de Shilling, comprende las
siguientes prueba:

• Recuento leucocitario.
• Recuento de glóbulos rojos.
• Recuento de plaquetas.
• Determinación de volumen globular (hematocrito).
• Dosaje de hemoglobina.
 RECUENTO LEUCOCITARIO

• Principio
Evidenciar los leucocitos, manteniéndolos visibles, mientras
que los eritrocitos son hemolizados. El recuento del número
de leucocitos o glóbulos blancos se expresa por milímetro
cúbico.
• Equipos
– Microscopio.
– Hemocitómetro (Cámara de Neubauer).
– Lámina portaobjetos gruesa.
– Laminilla cubreobjetos ópticamente plana.
 HEMOGRAMA MANUAL
Recuento manual de eritrocitos
• Cada cuadrícula mide 3 mm de lado y se
divide en 9 cuadrados grandes. Cada uno de
los cuales mide 1 mm de superficie, que se
subdivide a su vez en 16 cuadrados
medianos.
• El cuadrado grande central se divide en 25
cuadrados pequeños y cada uno de ellos en
16 cuadraditos. Cada cuadrado mediano
mide 0,2 mm de lado (0,04 mm de
superficie), cada cuadradito mide 0,05 mm
de lado (0,0025 mm de superficie)
 RECUENTO LEUCOCITARIO
• Materiales y reactivos requeridos
– Pipeta de Thoma o pipeta automática (de 0 a 100
ml).
– Diluyente de glóbulos blancos: Solución de Turk al
1%.
– Contador manual (Sólo si fuera necesario).
– Papel filtro.
 RECUENTO LEUCOCITARIO

• Procedimiento
1. Sangre en EDTA o sangre capilar del dedo, aspirar 0.5 ml de muestra con pipeta
de Thoma y limpiar la punta con papel absorbente.
2. Introducir la pipeta en el tubo que contenga solución de Turk y absorber 11ml
(no debe haber burbujas).
3. Tapar ambos extremos y proceder a mezclar manualmente o en un rotador
automático por 2 ó 3 minutos.
4. Monte la laminilla de vidrio en la cámara para recuento limpia y seca.
5. Agitar la pipeta y descartar las cuatro primeras gotas para luego colocar una gota
pequeña de esta solución en la cámara.
 RECUENTO LEUCOCITARIO

• Procedimiento
6. Deje reposar por 3 minutos para que las células se
sedimenten.
7. Enfocar con objetivo de 10x y contar en 4
cuadrados grandes angulares.
• 8. Pipeta automática: Muestra de 20 mL (0,02 mL),se diluye en un tubo
que contenga 380 mL de solución de Turk (dilución 1:20).
 RECUENTO LEUCOCITARIO

• Lectura

• La lectura se realiza en los campos 1, 3, 7 y 9.

• Incluyen: Leucocitos contados dentro de cada uno de los cuadrantes, deben contar
todos los leucocitos que se encuentren adheridos en la línea horizontal superior y
vertical exterior, o de lo contrario, todos los leucocitos, adheridos a la línea
horizontal inferior y vertical interior.
 RECUENTO LEUCOCITARIO
Resultados
 RECUENTO LEUCOCITARIO
• Corrección de valores para restar eritrocitos nucleados
Los normoblastos no se destruyen (lisis) en el
líquido de dilución, por lo tanto pueden
observarse al realizar el recuento leucocitario y
confundirse con los leucocitos, de tal manera
que se debe emplear la siguiente fórmula:
 Recuento leucocitario
Ventajas Desventajas
• Utiliza en recuentos de basofilos y • Incompatible con grandes rutinas.
eosinofilos sin automatización • Poca precisión
• Confirmación de recuento
automatizado en extremo
leucopenico
 RECUENTO ERITROCITARIO
• Principio
– Consiste en la determinación de numero de eritrocitos por mm3 en una
cámara de Neubauer.
• Equipos
• Microscopio.
• Hemocitómetro (cámara de Neubauer).

• Materiales y reactivos requeridos

– Pipeta de glóbulos rojos (De Thoma) o pipeta automática (de 0-100 mL).
– Boquilla para aspirar.
– Diluyente : Cloruro de Sodio al 0,9% .
– Diluyente de Hayem.
– Contador manual (sólo si fuera necesario).
– Papel filtro.
 RECUENTO ERITROCITARIO

• Procedimiento

– Mezclar la sangre en EDTA o tomar sangre capilar.

– Muestra de 0.5 ml en la pipeta thoma, para realizar una dilución
de 1/200, y si se carga hasta 1ml., la dilución será 1/100.
– Limpiar la punta con gasa o papel absorbente.
– Introducir la pipeta en el tubo o frasquito conteniendo diluyente
(Hayem) y llenar de líquido de dilución hasta la marca de 101.
– Rotar automáticamente o manualmente por 2 a 3 minutos.
– Agitar bien la pipeta y descartar 3 a 4 gotas del tallo, colocar una
gota pequeña cerca de un extremo de la cámara para que por
capilaridad se llene exactamente.
– Hacer el recuento con objetivo de 40x.
 RECUENTO ERITROCITARIO

• Procedimiento
– Pipeta automática: Muestra 20 mL (0,02mL), se deposita en
tubo de 12 x 75 con 4 mL de solución de Hayem ( dilución
de 1:200).
– Se deja reposar aproximadamente 5 minutos y se procede a
cargar la cámara con la misma pipeta usando un nuevo tip.
– Dejar en reposo por 3 minutos.
– Enfocar la cuadrícula a 10x, luego con el objetivo de 40x
contar sobre el cuadrado grande central de la cámara sólo
en 5 cuadrados pequeños: uno central y cuatro angulares
(80 cuadraditos en total).
 RECUENTO ERITROCITARIO
Lectura

• Incluyen las células que cubren o tocan por dentro o por fuera las líneas
limitantes superior e izquierda en el cuadrado pequeño de recuento.
• No incluyen: Los del límites inferior y derecho.
• Se hace el recuento en los puntos ABCD y E .
 RECUENTO ERITROCITARIO
Resultados
 RECUENTO ERITROCITARIO
• Comentario
– Laborioso, impreciso y impracticable en rutina general.
– ¿Satisfactorio? : Tiempo, experiencia, control estricto
Hemocitómetro y uso de recuento repetitivo.
– Variaciones < 10 % : leucocitos no se lisan , salvo en
anemias severas.
 RECUENTO PLAQUETARIO
MANUAL
• Métodos Directos:
• Método de Brecher & Cronkite, 1950. (2001), referencia por el IC-SH
hasta el 2001
• Fundamentos:
» Se realiza en hemocitómetro de Neubauer, después de una dilución de sangre total
en solución hipotónica para los eritrocitos y obtener el numero de plaquetas por
mm3 de sangre.

• Materiales:
• Tubo EDTA
• Liquido diluyente: Solución oxalato de amonio al 1%
• Cámara de Neubauer
• Papel filtro
 RECUENTO PLAQUETARIO
MANUAL
• Muestras no plaquetopénicas
1. Muestra 20 ul de sangre total en 380 ul de diluyente ( 1:20)
2. Limpiar parte externa de la punta de pipeta con papel absorbente
3. Mezclar por aspiración y expulsión.
4. Llenar hemocitómetro de Neubauer.
5. Reposo por 20 minutos en cámara húmeda .
6. Realizar lectura en microscopio a 400x.
• Muestras plaquetopénicas
1. Diluciones de 20 ul de muestra en 180 ul de diluyente (1:10) o
100 ul de sangre para 900 ul de diluyente.
 RECUENTO PLAQUETARIO
MANUAL
• Muestras gravemente plaquetopenicas:
1. A pesar de la dilución 1:10 no se podrá visualizar
150 plaquetas por lo que se tendrá que aumentar
el número de campos leídos.

Lectura : Plaquetas observadas en los cinco cuadrados del cuadrante central

A: P: H1+ H2 + H3 + H4 + H5 x 1000.
B: P: H1+ H2 + H3 + H4 + H5 x 500.
C: P: H1+ H2 + H3 + H4 + H5 + … H25 x 100
 RECUENTO PLAQUETARIO
MANUAL
• Cálculos :
Plaq/mm3 sangre: P x Fd x Fv.  Plaq/mm3 sangre: Px1000.
P: H1+ H2 + H3 + H4 + H5.
Fd: Factor de dilución (20).
Fv: Factor de corrección para el volumen ( área x altura del retículo) = 50 .

• Observación:
• Criterio de calidad para obtener resultado
reproductibles obtener un recuento mínimo de 150
(200) plaquetas al final del recuento.
 RECUENTO PLAQUETARIO
MANUAL
• Métodos Directos:
» Método Maspes & Jamra, modificado por Oliverira & barreto (2003).

• Fundamentos:
• Separación de los eritrocitos del plasma por sedimentación espontánea o
baja fuerza centrífuga, cuando la capa plasmática separada corresponde de
10 a 20 % de volumen total de la muestra.
• Plaquetas queden distribuidas correctamente en plasma manteniendo
valores constantes , buena parte del plasma libre de plaquetas quede
retenido entre los eritrocitos sedimentados (plasma sobrenadante sea
superconcentrado en plaquetas).
• Dependa del hematocrito y un factor de corrección.

Materiales : Muestra plasma, diluyente de Maspes ( sulato de sodio a 3 gr , clorato

de sodio 0.7 g, tween -80 0.2 ml, agua destilada.
 RECUENTO PLAQUETARIO
MANUAL
• Muestras no plaquetopénicas
1. Muestra dejar reposar o centriugar a 1000 rpm en 1 minuto.
2. Muestra 20 ul de plasma en 980 ul de diluyente ( 1:50)
3. Limpiar parte externa de la punta de pipeta con papel absorbente
4. Mezclar por aspiración y expulsión.
5. Llenar hemocitómetro de Neubauer.
6. Reposo por 20 minutos en cámara húmeda .
7. Realizar lectura en microscopio a 400x.
• Muestras plaquetopénicas
1. Diluciones de 20 ul de muestra en 380 ul de diluyente (1:20).
2. Diluciones de 20 ul de muestra en 180 ul de diluyente (1:10).
 RECUENTO PLAQUETARIO

• Muestras gravemente plaquetopenicas:

1. Utilizar la dilución 1:10 no se podrá visualizar 150
plaquetas por lo que se tendrá que aumentar el
número de campos leídos.
Lectura : Plaquetas observadas en los cinco cuadrados del cuadrante central
A: P: H1+ H2 + H3 + H4 + H5 x 2500.
B: P: H1+ H2 + H3 + H4 + H5 x 1000.
C: P: H1+ H2 + H3 + H4 + H5 x 500.
D: P: H1+ H2 + H3 + H4 + H5 + … H25 x 100
 RECUENTO PLAQUETARIO
• Cálculos :

Plaq/mm3 sangre: Plaq/mm3 en plasma x Fc.  Plaq/mm3 sangre: Px1000.

P: H1+ H2 + H3 + H4 + H5.
FC: [(100 – {Ht + Ht/2}/100].

• Observación:
• Criterio de calidad para obtener resultado
reproductibles obtener un recuento mínimo de 150
(200) plaquetas al final del recuento.
 RECUENTO PLAQUETARIO

• Métodos indirectos (Método de recuento en frotis de lamina) :

» Métodos clásicos: Metodos de Rabl (1896), modificado por Gottieb y

FÖNIO (1912).
» Método de Nosanchuk – Abbey , Apibal y bell (1978, 1979 y 1980)

• Fundamento:
• Se realiza en el lugar de la extensión donde los eritrocitos
estén bien dispersos pero con algunos tocándose,
independientemente del numero de eritrocitos que se
encuentren en el campo
 RECUENTO PLAQUETARIO
• Procedimiento:
1. Método clásico:
I. Realiza con aumento de el objetivo de inmersión (100X)
y ocular 10X
II. Correlación de proporción eritrocito/plaquetas por mm3.
III. Se determina promedio de plaquetas y eritrocitos.
• Calculo:

EJEMPLO: Diez campos: 150 eritrocitos, 6,0 plaquetas y eritrocitos 2500000/ mm 3..

Plaquetas mm3: Promedio plaquetas contadas X eritrocito totales / eritrocitos

contados.
Resultado: 100000 Plaquetas mm3 .
 RECUENTO PLAQUETARIO

• Procedimiento:
1. Método clásico:
I. Realiza con aumento de el objetivo de inmersión (100X) y ocular 10X
II. No es importante la proporción eritrocito/plaquetas por mm 3.
III. Multiplica por un factor de 20000, obtenido de contadores automatizados.
IV. Se determina promedio de plaquetas y eritrocitos.
• Calculo:

EJEMPLO: Diez campos: 7,5..

Plaquetas mm3: Promedio plaquetas contadas X factor de corrección 20000.

Resultado: 150000 Plaquetas mm3 .
 RECUENTO PLAQUETARIO
• Recomendaciones:
– En métodos no clásicos el CV es alrededor 30%,
aunque se realice por triplicado y un operador
experimentado, poca precisión para medidas
profilácticas para transfusión de plaquetas.
– Plaquetopénicas: Si existe divergencia de entre
recuento automatizado y estimación de lamina <
40 mil, se debe realizar por método directo.
 Recuentos
Automatizados
en Hematología
 Principio de impedancia
Recuento automatizado de
eritrocitos

.La célula al pasar por el orificio o tubo

de apertura interrumpe
momentáneamente la corriente
eléctrica entre el ánodo y el cátodo. El
número de interrupciones (caídas de
voltaje) es proporcional al número de
partículas, que en el caso del
eritrograma corresponde a eritrocitos, y
la intensidad del voltaje es proporcional
al tamaño de las mismas, que en el caso
de los eritrocitos corresponde al
volumen corpuscular medio.
 Principio de impedancia

Mediante la computadora incorporada al

equipo, con el número y el tamaño de los
pulsos se construye un histograma conocido
como histograma de volúmenes. El número de
pulsos determina el número células de
acuerdo con la dilución de éstas en la solución
conductora; a su vez, la intensidad de los
pulsos determina el tamaño de las células. La
distribución y el tamaño de los mismos
identifica las poblaciones celulares y los
coeficientes de variación de cada una de ellas
en el histograma
Recuento automatizado de leucocitos
Se hace similar al recuento de eritrocitos en la mayoría de los autoanalizadores
de
hematología, mediante la tecnología de impedancia, previamente descrita e
incorporada al autoanalizador de hematología.

Recuento diferencial de leucocitos

 Recuento Electrónico de plaquetas
La plaquetas pueden ser contadas y analizadas mediante la impedancia y la
dispersión óptica.
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RANGO DE LIMITES
NORMALES
Gracias