CROMATOGRAFÍA DE ADSORCIÓN EN COLUMNA (CC)

En la figura 1 se muestra esquemáticamente una columna cromatográfica. La fase estacionaria

consiste en un sólido adsorbente empaquetado en una columna de vidrio. La mezcla a separar
(muestra) se deposita sobre la superficie superior de la fase estacionaria quedando adsorbida en
ella. A continuación, se vierte la fase móvil (eluyente) en la parte superior de la columna y se
permite su paso a través de la fase estacionaria. Durante el proceso cromatográfico los
componentes de la muestra son arrastrados por la fase móvil a distintas velocidades efectuándose
la separación. La velocidad de arrastre de cada componente depende de su grado de adsorción en
la fase estacionaria y de su afinidad por la fase móvil.

Fig. 1 Para que la separación de los componentes de la mezcla sea efectiva, su velocidad de
migración a lo largo de la columna debe ser suficientemente diferente y la longitud de la columna
adecuada.

Algunos adsorbentes comúnmente utilizados son: gel de sílice, alúmina, sacarosa y almidón. La
fase móvil consiste en un disolvente o mezcla de disolventes, seleccionado en base a su polaridad
con el fin de optimizar la separación de los componentes de la muestra en la columna.

De forma orientativa se puede establecer el siguiente orden de polaridades para los disolventes
usados con mayor asiduidad: Éter de petróleo, tetracloruro de carbono, ciclohexano, éter etílico,
acetona, benceno, acetato de etilo, cloroformo, etanol, metanol, agua, piridina, ácido, acético.

La fase móvil se desplaza a lo largo de la fase estacionaria debido a la fuerza de la gravedad.

Materiales:

1.- Columna de cromatografía

2.- Matraces Erlenmeyer (4 x 50 ml; 2 x 100)

3.- Vaso de precipitados (100 ml)

4.- Varilla de vidrio

5.-Soporte metálico

6.-Pinza Nuez

7.- Pipeta

8.- Aspirador de pipeta (perilla o geringa)

9.- bascula o pesa

10.- Parrilla

11.-Algodón

Reactivos/disolventes:

1.-Gel de sílice

2.-Metanol

3.- Acetona

4.-Hexano recuperado del extracto de buganvilia

5.-Extracto de buganvilia

Procedimiento

1.-Armar el soporte metálico y colocar la pinza nuez a una altura de aproximadamente 30 cm y en

la pinza colocar la columna de cromatografía dejando espacio para que debajo de ella entre un
matraz Erlenmeyer de 100 ml.

2.- Pesar 30 gramos de gel de sílice.

3.- mezclarlo con el hexano recuperado para que sea más fácil entrar en la columna de
cromatografía

4.- colocar un pedacito de algodón hasta el fondo de la columna

5.- colocar el matraz debajo de la columna, cerrar la llave de la columna y agregar la solución de
gel de sílice con el hexano hasta llenar ¾ de la columna

6.- Poner el extracto de buganvilia en el vaso de precipitado posteriormente poner a hervir el

extracto de buganvilia en la parrilla para que este se concentre más.

7.- Abrir la llave y agregar el concentrado de buganvilia poco a poco en la parte superior de la
columna.

8.- agregar hexano poco a poco sin dejar que este se consuma por completo ya que si no se
cristaliza la columna y hay que repetirlo.
9.-repetir el paso 8 esperar a que la columna se divida en colores para saber de qué color será
cada extracto que saldrá.

10.- esperar a que termine de salir todo el color de la primera división, después poner a hervir el
matraz con el extracto para concentrarlo y posteriormente se pone en un frasquito de muestra de
5 o 10 ml.

11.- cambiar el matraz y seguir agregando hexano para seguir sacando más colores y ponerlos
hervir para concentrarlos e irlos agregando en los frasquitos de muestra hasta que quede blanca la
mayor parte de la columna

12.- del extracto de buganvilia solo salieron 3 colores distintos con el hexano.

13.- posteriormente queda color en la parte superior todavía, entonces en el vaso de precipitado
se agrega hexano con 10 ml de acetona para comenzar a bajar parte del color que había en la
parte superior

14.-Cuando baje cada color se vacía en un vaso de precipitado y se pone a hervir para concentrarlo
y posteriormente se deposita en los frasquitos de muestra

15.- en el extracto de buganvilia añadiendo acetona solo se obtuvieron 2 colores

16.- después como todavía queda color que no bajo completamente se agregan unos 30 ml de
hexano con 10 ml de metanol y también se vierten en la parte superior de la columna poco a poco
hasta que baje completamente el color y se pone a hervir para concentrarlo y agregarlo en un
frasquito de muestra.

17.- finalmente se lava todo el material y se cuentan cuantos extractos se obtuvieron con el
extracto de buganvilia se extrajeron solo 7 extractos o colores.

Conclusión

Podemos observar que la cromatografía en columna se basa en la diferencia de velocidad con que
se desplazan los componentes de una mezcla de compuestos que se encuentran en dos fases en
íntimo contacto para poder salir y con ello saber qué color saldrá más rápido de acuerdo a su
polaridad.