Combo de Prueba Rápida de La Prueba Rápida de Dengue Ag en Casete (Sangre total/Suero/Plasma) es
un inmunoensayo de membrana para la detección cualitativa del antígeno NS1
Dengue Ab y Ag en Casete
(Sangre total/Suero/Plasma)
Instructivo de Uso
REF. IDGC-C43
Prueba rápida para la detección cualitativa de anticuerpos (IgG e IgM) y
el antígeno NS1 del virus del Dengue en sangre total, suero o plasma.
Solo para uso diagnóstico profesional in vitro.
USO PREVISTO
El Combo de Prueba Rápida de Dengue Ab y Ag en Casete (Sangre
total/Suero/Plasma) es un inmunoensayo cromatográfico rápido para la detección
cualitativa de anticuerpos IgG e IgM y el antígeno proteico no estructural del virus
del Dengue en sangre total, suero y plasma de humanos para la ayuda en el
diagnóstico de la infección por Dengue.
RESUMEN
El Dengue es un flavivirus transmitido por los mosquitos Aedes aegypti y Aedes
albopictus. Se encuentra ampliamente distribuido en todas las zonas tropicales y
subtropicales del mundo1, y causa hasta 100 millones de infecciones de dengue
al año.2 La infección clásica por Dengue se caracteriza por un inicio repentino de
fiebre, fuerte dolor de cabeza, mialgia, artralgia, y salpullido.
La Prueba Rápida de Dengue Ab en Casete (Sangre total/Suero/Plasma) es una
prueba rápida que utiliza una combinación de partículas coloreadas recubiertas
del antígeno de Dengue para la detección de anticuerpos IgG e IgM contra el
Dengue en sangre total, suero o plasma de humanos.
La infección primaria por Dengue provoca el incremento de anticuerpos IgM a un
nivel detectable entre los 3 y 5 días siguientes del inicio de la fiebre.
Generalmente, los anticuerpos IgM persisten entre los 30 y 90 días.3 La mayoría
de pacientes por Dengue en las regiones endémicas tienen infecciones
secundarias,4 dando como resultado altos niveles de anticuerpos de IgG previa
o simultáneamente con el IgM. 5 Por lo cual, la detección de anticuerpos
específicos de anti-Dengue IgM e IgG también pueden ayudar a distinguir entre
infecciones primarias y secundarias.
La Prueba Rápida de Dengue Ag en Casete (Sangre total/Suero/Plasma) es una
prueba rápida que utiliza una combinación de anticuerpos contra el Dengue
recubiertas de partículas coloreadas para la detección del antígeno NS1 del
Dengue en sangre total, suero o plasma de humanos.
La proteína NS1 es una de las 7 proteínas no estructurales del virus del Dengue
que se cree están involucradas en la replicación viral. La NS1 existe como
monómero en su forma inmadura, pero se procesa de manera rápida en el
retículo endoplásmico para formar un dímero estable. Una pequeña cantidad de
NS1 permanece asociada a organelos intercelulares donde se cree que está
involucrado en la replicación viral. El resto de NS1 se encuentra ya sea asociada
a la membrana plasmática o secretada como un hexámero soluble. La NS1 es
esencial para la viabilidad viral, pero su función biológica exacta es desconocida.
Los anticuerpos producidos en respuesta a la NS1 en la infección viral pueden
reaccionar de manera cruzada con los antígenos de superficie celular en las
células epiteliales y las plaquetas; fenómeno que se asocia con el desarrollo de
fiebre hemorrágica por dengue.
PRINCIPIO
La Prueba Rápida de Dengue Ab en Casete (Sangre total/Suero/Plasma) es
un inmunoensayo de membrana para la detección cualitativa de anticuerpos
contra el Dengue en sangre total, suero o plasma. Esta prueba contiene dos
componentes, un componente de IgG y un componente de IgM. En el
componente de IgG, los anticuerpos anti-IgG humano están recubiertos en la
línea de la zona de prueba IgG. Durante la prueba, la muestra reacciona con las
partículas recubiertas de antígeno Dengue que se encuentra en el casete de
prueba. Luego, la mezcla se dirige hacia la membrana cromatográficamente por
capilaridad y reacciona con el anticuerpo anti-IgG humano en la zona de prueba
IgG. Si la muestra contiene anticuerpos IgG contra el Dengue, aparecerá una
línea de color en la zona de prueba IgG. En el componente IgM, los anticuerpos
anti-IgM humano están recubiertos en la zona de prueba IgM. Durante la prueba,
la muestra reacciona con el anticuerpo IgM anti-humano. Si se encuentran
anticuerpos IgM contra Dengue presentes en la muestra, estos reaccionarán con
el anticuerpo anti-IgM humano y las partículas recubiertas con antígeno Dengue
que se encuentran en el casete de prueba, este complejo es capturado por el
anticuerpo anti-IgM humano, formando una línea de color en la zona de prueba
IgM.
Por lo tanto, si la muestra contiene anticuerpos IgG de Dengue, aparecerá una
línea de color en la zona de prueba IgG, y si contiene anticuerpos IgM de Dengue,
aparecerá una línea de color en la zona de prueba IgM. Si la muestra no contiene
anticuerpos contra Dengue, no aparecerá ninguna línea en las zonas de prueba
indicando un resultado negativo. Como control de procedimiento, aparecerá una
línea de color en la zona de control, indicando que se ha añadido el volumen
adecuado de muestra y que se ha producido la absorción de la membrana.
●Recipiente para la obtención de muestra ● Centrifugadora (solo
para plasma)
del virus del Dengue en sangre total, suero o plasma. Durante el examen, la ●Micropipeta ●Cronómetro
muestra reacciona con el anticuerpo Dengue conjugado en el casete de prueba. ●Lancetas estériles (solo para muestra de sangre total por punción digital)
El anticuerpo conjugado con oro se unirá al antígeno de Dengue en la muestra,
que a su vez se unirá con el anticuerpo Anti-Dengue NS1 recubierto en la INSTRUCCIONES DE USO
membrana. A medida que los reactivos se mueven a través de la membrana, el Permitir que la prueba, la muestra, el buffer y/o los controles alcancen la
anticuerpo anti-Dengue NS1 en la membrana se unirá al complejo anticuerpo- temperatura ambiente (15-30°C) antes del análisis.
antígeno provocando la formación de una línea rosa pálida u oscura en la zona 1. Permita que el empaque alcance la temperatura ambiente antes de abrirlo.
de prueba de la membrana. La intensidad de las líneas variará dependiendo de Retire el casete de prueba del empaque sellado y utilícelo en el plazo de una
la cantidad de antígeno presente en la muestra. La aparición de la línea rosa en hora.
la zona de prueba debe considerarse como resultado positivo 2. Coloque el casete de prueba en una superficie limpia y nivelada.
REACTIVOS  Para muestras de suero o plasma:
La Prueba Rápida de Dengue Ab en Casete (Sangre total/Suero/Plasma)  Para utilizar el cuentagotas para el Dengue Ab: Mantenga el cuentagotas
contiene partículas de antígeno conjugado en oro coloidal de Dengue, anti-IgM en posición vertical, aspire la muestra alrededor de 1cm por encima de la
humano y anti-IgG humano recubiertos en la membrana. línea de llenado, y transfiera 1 gota de muestra (aproximadamente 5 μl) en
La Prueba Rápida de Dengue Ag en Casete (Sangre total/Suero/Plasma) el pozo de muestra del casete, luego añada 1 gota de buffer
contiene partículas coloidales conjugadas antígeno anti-Dengue y antígeno anti- (aproximadamente 40 μl) y active el cronómetro. Evite que se cree burbujas
Dengue recubierto en la membrana. de aire en el pozo de muestra.
PRECAUCIONES  Para utilizar el cuentagotas para el Dengue Ag: Mantenga el cuentagotas
 Solo para diagnóstico profesional in vitro. No utilizar después de la fecha de en posición vertical y transfiera 3 gotas de suero o plasma
caducidad. (aproximadamente 75 μl) en el pozo de muestra del casete y active el
 No comer, beber o fumar en la zona en que se manipulan las muestras y los cronómetro. Ver ilustración posterior.
casetes de prueba.  Para muestras de sangre total (venopunción/punción digital):
 Manipular todas las muestras como si contuvieran agentes infecciosos.  Para utilizar el cuentagotas para el Dengue Ab: Mantenga el cuentagotas
 Seguir las medidas de precaución establecidas frente a peligros en posición vertical, aspire la muestra alrededor de 1cm por encima de la
microbiológicos durante la prueba, así como los procedimientos estándar para línea de llenado, y transfiera 1 gota de sangre total (aproximadamente 10
la adecuada eliminación de las muestras. μl) en el pozo de muestra del casete, luego añada 1 gota de buffer
 Utilizar ropa protectora como batas de laboratorio, guantes desechables y (aproximadamente 40 μl) y active el cronómetro.
 Para utilizar el cuentagotas para el Dengue Ag: Mantenga el cuentagotas
gafas de protección cuando se estén analizando las muestras.
 La humedad y la temperatura pueden afectar negativamente los resultados. en posición vertical y transfiera 3 gotas de sangre total (aproximadamente
ALMACENAMIENTO Y ESTABILIDAD 75 μl) en el pozo de muestra del casete, luego añada 1 gota de buffer
Conservar dentro del empaque sellado a temperatura ambiente o refrigerado (2- (aproximadamente 40 μl) y active el cronómetro. Ver imagen posterior.
 Para utilizar una micropipeta para el Dengue Ab: Pipetee y dispense 10 μl
30°C). La prueba está segura hasta la fecha de caducidad impresa en el
empaque sellado. La prueba debe permanecer dentro del empaque sellado hasta de sangre total en el pocillo de la muestra del casete, luego añada 1 gota
de buffer (aproximadamente 40 μl) y active el cronómetro.
su uso. NO CONGELAR. No utilizar después de la fecha de caducidad.
OBTENCIÓN Y PREPARACIÓN DE LA MUESTRA 3. Espere a que aparezcan las líneas de color. Lea los resultados en 10 minutos.
No interprete los resultados después de 20 minutos.
 El Combo de Prueba Rápida de Dengue Ab y Ag en Casete (Sangre
total/Suero/Plasma) se puede realizar usando sangre total, suero o plasma.
 Para extraer muestras de sangre total por punción digital:
o Lavar las manos del paciente con jabón y agua tibia o limpiar con un
algodón con alcohol. Dejar secar.
o Masajear la mano sin tocar la zona de punción frotando la mano hacia la
yema del dedo medio o anular.
o Punzar la piel con una lanceta estéril. No utilizar la primera gota de sangre
para el análisis.
o Frotar la mano con suavidad desde la muñeca hacia la palma y hasta el
dedo para formar una gota de sangre redonda sobre la zona de punción.
o Añadir la muestra de sangre total obtenida por punción digital al casete de
prueba empleando un cuentagotas o una micropipeta que mida 5 μl o un
cuentagotas o una micropipeta que mida 25 μl. El cuentagotas de 5 μl o 25
μl incluido con la prueba dispensa aproximadamente 5 μl o 25 μl por gota
incluso si se aspira más sangre en el cuentagotas.
 Separar el suero o el plasma de la sangre lo antes posible para evitar
hemólisis. Utilizar solo muestras no hemolizadas.
 La prueba deberá realizarse inmediatamente después de la recolección de
muestras. No dejar las muestras a temperatura ambiente por tiempo
prolongado. Las muestras de suero y plasma se pueden conservar a 2-8 °C
hasta 3 días. Para almacenamiento a largo plazo, las muestras se deberán
conservar por debajo de -20 °C. La muestra de sangre total obtenida por
venopunción deberá conservarse a una temperatura de 2 a 8 °C si la prueba
se va a realizar en el plazo de 2 días desde la recolección. No congelar las
muestras de sangre total. La sangre total obtenida por punción digital deberá
analizarse de inmediato.
 Colocar las muestras a temperatura ambiente antes de analizarlas. Las
muestras congeladas deben descongelarse por completo y mezclarse bien
antes de analizarlas. Las muestras no se deben congelar y descongelar
repetidamente.
 Si las muestras deben ser transportadas, deberán empaquetarse en
conformidad con la normativa local que cubre el transporte de agentes
etiológicos.
MATERIALES
Materiales suministrados
●Casete de prueba ●Cuentagotas
●Solución Buffer ●Instructivo de uso
Materiales requeridos, pero no incluidos
 INTERPRETACIÓN DE LOS RESULTADOS Resultados de pruebas IgM/IgG por infección primaria de Dengue 1. Halstead SB, Selective primary health care: strategies for control of disease
POSITIVO: *Aparecen dos o tres líneas diferentes de color. Una línea de color Método ELISA in the developing world: XI, Dengue. Rev. Infect. Dis. 1984; 6:251-264
debe aparecer en la zona de la línea de control (C); y otra, en la zona de la línea Positivo 2. Halstead SB, Pathogenesis of dengue: challenges to molecular biology.
de prueba (T). *NOTA: la intensidad del color en la zona de prueba IgG y/o IgM Prueba Rápida de Resultados Negativo Science 1988; 239:476-481
IgM IgG
variará dependiendo de la concentración de anticuerpos Dengue presentes en la Dengue Ab en 3. Ruechusatsawat K, et al. Daily observation of antibody levels among dengue
IgM 15 0 0
muestra. Por lo tanto, cualquier tono de color en la zona de la línea de detección Casete (Sangre Positivo patients detected by enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). Japanese J.
total/Suero/Plasma) IgG 3 0 0
(IgG y/o IgM) debe considerarse positiva. Negativo 0 0 0 Trop. Med. Hygiene 1994; 22: 9-12
NEGATIVO: Una línea de colore aparece en la zona de control (C). No 4. Lam SK. Dengue haemorrhagic fever. Rev. Med. Micro. 1995; 6:39-48
Sensibilidad relativa 83.3% / /
aparece ninguna línea de color en la zona de prueba (IgG y/o IgM). 5. Dengue haemorrhagic fever: diagnosis, treatment, prevention and control.
Resultados de pruebas IgM/IgG por infección secundaria de Dengue
NO VÁLIDO: No aparece la línea de control. Volumen de buffer insuficiente o 2nd edition. Geneva: World Health Organization
un error en el seguimiento del procedimiento son las razones más frecuentes de Método ELISA 6. Yamada K, et al. Antibody responses determined for Japanese dengue fever
invalidación de la prueba. Revise el procedimiento y repita la prueba con un Positivo patients by neutralization and hemagglutination inhibition assays demonstrate
Prueba Rápida de Resultados Negativo
nuevo kit. Si el problema persiste, interrumpa inmediatamente el uso del kit y IgM IgG cross-reactivity between dengue and Japanese encephalitis viruses. Clin Diagn
Dengue Ab en
comuníquese con su distribuidor. IgM 37 0 0 Lab Immunol. 2003 Jul; 10(4): 725-8.
Casete (Sangre Positivo
CONTROL DE CALIDAD total/Suero/Plasma) IgG 15 52 0 7. Dobler G, et al. Cross reactions of patients with acute dengue fever to tick-
En la prueba se incluye un control del procedimiento. La aparición de una línea Negativo 0 0 0 borne encephalitis. Wien Med Wochenschr (in German). 1997; 147(19-20): 463-
de color rojo en zona de control (C) se considera control de procedimiento interno. Sensibilidad relativa 71.2% >99.9% / 4
Esto confirma el volumen suficiente de buffer y la adecuada absorción de la Resultados de pruebas IgM/IgG por infección no relacionada de Dengue 8. Makino Y, et al. Studies on serological cross-reaction in sequential flavivirus
membrana. Método ELISA infections. Microbiol Immunol. 1994; 38(12): 951-5.
Los estándares de control no se incluyen con este kit de prueba; sin embargo, se Positivo
recomienda que se realicen análisis de control positivos y negativos como buena Prueba Rápida de Resultados Negativo
IgM IgG
práctica de laboratorio para confirmar el procedimiento de la prueba y verificar un Dengue Ab en
IgM 0 0 0
rendimiento adecuado de prueba. Casete (Sangre Positivo
total/Suero/Plasma) IgG 0 0 0
LIMITACIONES
Negativo 0 0 338
1. El Combo de Prueba Rápida de Dengue Ab y Ag en Casete (Sangre
Sensibilidad relativa / / >99.9%
total/Suero/Plasma) está destinada únicamente para diagnóstico in vitro. Esta
prueba debe realizarse para la detección de anticuerpos contra el Dengue y el Sensibilidad relativa: (15+52)/(18+52)=95.7% (95%CI*: 88.0% ̴ 99.1%);
antígeno NS1 solo en muestras de sangre total, suero o plasma. Ni el valor Especificidad relativa: 338/338=>99.9% (95%CI*: 99.1% ̴ 100.0%);
cuantitativo ni la tasa de aumento de concentración de anticuerpos contra el Precisión: (15+52+338)/(18+52+338)=99.3% (95%CI*: 97.9% ̴ 99.8%);
Dengue y el antígeno NS1 se pueden determinar mediante esta prueba *Intervalos de confianza
cualitativa. Prueba ELISA para
Método Resultado
2. En la etapa temprana de la fiebre, las concentraciones de anticuerpos IgM anti- Dengue Ag
total
Dengue pueden estar por debajo de los niveles detectables. Para la infección Prueba Rápida de Resultados Positivo Negativo Fabricado para Mont Group SAC
primaria, el ensayo de inmunoabsorción ligado a enzimas con captura de Dengue Ag en Positivo 69 4 73 Importado por Mont Group SAC
anticuerpos IgM (MACELISA) mostró que el 80% de pacientes examinados por Casete (Sangre
total/Suero/Plasma) Negativo 3 102 105
Dengue presentaron niveles detectables de anticuerpos IgM a partir del quinto
día después de la infección, y el 99% de los pacientes examinados, dieron Resultado total 72 106 178 Número: RP5310300
positivo para anticuerpos IgM a partir del día 10. Se recomienda que los Sensibilidad relativa: 69/72*100%=95.8% (95%CI*: 88.3% ̴ 99.1%); Fecha efectiva: 17-09-2019
pacientes se hagan la prueba dentro de este tiempo. Para la infección Especificidad relativa: 102/106*100%=96.2% (95%CI*: 90.6% ̴ 99.0%);
secundaria, los anticuerpos se caracterizan por presentar una fracción molar Precisión: (69+102)/(69+3+4+102)*100%=96.1% (95%CI*: 92.1% ̴ 98.4%);
baja de anti-Dengue IgM y una fracción molar alta de IgG ampliamente *Intervalos de confianza
reactivos a flavivirus.5 La señal de IgM puede ser leve y puede aparecer una Precisión
reacción cruzada en la zona de prueba IgG. Intraensayo
3. La reactividad serológica cruzada en todo el grupo de flavivirus (dengue 1, 2, La precisión intraensayo se ha determinado empleando 15 réplicas de cinco
3 y 4, Encefalitis de San Luis, Virus del Nilo Occidental, Encefalitis japonesa y muestras: una negativa, una IgG positiva, una IgM positiva, una IgG/IgM positiva
Virus de la Fiebre amarilla) es común. 6, 7, 8 Los resultados positivos deben ser y una NS1 positiva, las cuales se identificaron correctamente >99% de los casos.
confirmados por otros medios. Interensayo
4. La presencia o ausencia continua de anticuerpos y del antígeno NS1 no puede La precisión interensayo se ha determinado mediante15 ensayos independientes
ser utilizada para determinar el éxito o falla de la terapia. en las mismas cinco muestras: una negativa, una IgG positiva, una IgM positiva,
5. Como ocurre con todas las pruebas de diagnóstico, todos los resultados una IgG/IgM positiva y una NS1 positiva. Se han analizado tres lotes diferentes
deberán estudiarse junto con el resto de la información clínica que dispone el del Combo de Prueba Rápida de Dengue Ab y Ag en Casete (Sangre
médico. total/Suero/Plasma) utilizando estas muestras, las cuales se identificaron
6. Si el resultado es negativo y persisten los síntomas clínicos, se recomienda correctamente >99% de los casos.
una prueba adicional utilizando otros métodos clínicos. Un resultado negativo Reacción cruzada
no descarta, en ningún caso, la posibilidad de una infección por Dengue. El Combo de Prueba Rápida de Dengue Ab y Ag en Casete (Sangre
VALORES ESPERADOS total/Suero/Plasma) se ha analizado con muestras positivas de HAMA, RF,
La infección primaria por Dengue se caracteriza por la presencia de anticuerpos HBsAg, HbsAb, HBeAg, HBeAb, HBcAb, Sífilis, HIV, HCV, H.Pylori, MONO,
IgM a los 3-5 días siguientes del inicio de la infección; y la infección secundaria, CMV, Rubeola y TOXO. Los resultados no mostraron reactividad cruzada.
por la elevación del IgG específico del Dengue. En la mayoría de los casos, este Sustancias interferentes
es acompañado por niveles elevados de IgM. Las siguientes sustancias potencialmente interferentes se añadieron a muestras
Se comparó el Combo de Prueba Rápida de Dengue Ab y el Ag NS1 en Casete de Dengue negativas y positivas.
(Sangre total/Suero/Plasma) con la prueba comercial ELISA para Dengue, Acetaminofén: 20 mg/dL Cafeína: 20 mg/dL
demostrando una sensibilidad de 83.3% para la infección primaria IgM, >99.9% Ácido Acetilsalicílico: 20 mg/dL Ácido Gentísico: 20 mg/dL
para la infección secundaria IgG y el >96% para el Ag NS1. Ácido Ascórbico: 2g/dL Albumina: 2 g/dL
CARACTERÍSTICAS DE EJECUCIÓN Creatina: 200 mg/dL Hemoglobina 1000mg/dL
Sensibilidad y Especificidad Bilirrubina: 1g/dL Acido Oxálico: 600mg/dL
Se ha evaluado el Combo de Prueba Rápida de Dengue Ab y Ag en Casete Ninguna de las sustancias en la concentración analizadas interfirió en el
(Sangre total/Suero/Plasma) con muestras obtenidas de una población ensayo.
sintomática y asintomática. Se confirmaron los resultados con la prueba BIBLIOGRAFÍA
comercial ELISA para Dengue. Los resultados muestran que la sensibilidad
relativa en general para la infección primaria y secundaria de Prueba Rápida de
Dengue Ab en Casete (Sangre total/Suero/Plasma) es 95.7%, la especificidad
relativa es >99.9% y la precisión relativa es 99.3%; y, para la Prueba Rápida del
Ag Dengue NS1 en Casete (Sangre total, suero o plasma) es 95.8%, la
especificidad relativa es 96.2% y la precisión de 96.1%.