BMblga Marianella H.

Salinas Fuentes
marianella.salinas@única.edu.pe
Objetivo 
‐ Aplicarlas técnicas las coloraciones de Gram y de Ziehl Neelsen en diferentes 
muestras biológicas 

Objetivos específicos 
‐ Adiestrarse en la coloración Ziehl Neelsen, realizar los estudios 
morfológicos, reconociendo las diferenciaciones de las bacterias Acido 
Alcohol Resistentes (BAAR) y la No Acido Alcohol Resistentes. 
‐ Adiestrarse en la coloración Gram, realizar los estudios morfológicos, 
reconociendo las diferenciaciones de las paredes microbiana. 
‐ Comprender los fundamentos teóricos en que se basan las diferentes 
técnicas de tinción 

Competencias a desarrollar 
‐ Diferencia las bacterias Gram positivas de las Gram negativas aplicando la 
técnica de la coloración Gram. 
‐ Diferencia las bacterias acido alcohol resistente en una muestra clínica 
aplicando la técnica de la coloración de Ziehl Neelsen 
 SON AQUELLAS QUE SE EMPLEA DOS O MÁS
COLORANTES.ESTAS TÉCNICAS DIFERENCIAN LAS
CÉLULAS BACTERIANAS, PARTES DE UNA MISMA CÉLULA,
DEBIDO A LAS DIFERENTES REACCIONES QUÍMICAS QUE SE
ORIGINAN CON LOS CONSTITUYENTES QUÍMICOS DE LA
ESTRUCTURA INTERNA Y EXTERNA DE LA CÉLULA
BACTERIANA
 COLORACIÓN GRAM

 COLORACION DE ZIEHL NEELSEN

 Fue descrita por primera vez por el médico danés
Christian Gram en 1884 y aplicada posteriormente por
Friendlander a la bacteriología
 La tinción de Gram permite clasificar las bacterias en
Gram positivas (+) o Gram negativas(-) según las
características de su pared celular, Además permite
observar la morfología de los microorganismos
 Los gram (+) son los que retiene el complejo cristal
violeta-yodo observándose de color azul violeta. Los gram
(-) no retienen el complejo y lo pierden por acción del
decolorante, tomando la coloración del segundo colorante
 El colorante de contraste más utilizado es la safranina o
fucsina por lo que se observa de color rojo,
reconociéndose que las personas daltónicas utilicen el
pardo de Bismarck
 Es importante tener en cuenta que esta tinción se debe
realizar en cultivos jóvenes de 24 horas o menos.
 OBJETIVO
Adiestrarse en la coloración Gram, realizar los estudios
morfológicos, reconociendo las diferenciación de las
bacterias Gram positivas y Gram negativas
 Diseño experimental
 Cultivo de 24 horas de bacteria gram positivas y gram
negativas
 Mechero, asa bacteriológica
 Láminas portaobjeto.
 Colorantes: Cristal violeta, safranina
 Mordiente: lugol
 Decolorante: Alcohol cetona
 Microscopio compuesto
 Solución salina estéril, aceite de inmersión
 PROCEDIMIENTO:
 Preparar una extensión a partir de un cultivo bacteriano de 24 horas
y fíjelo.
 Cubrir el preparado con gotas del colorante cristal violeta y deje
actuar durante 30”
 Lavar con agua corriente
 Cubrir el preparado con lugol deje actuar 1 a 2 minutos
 Lavar con agua corriente
 Decolorar con alcohol cetona
 Cubrir el preparado con safranina deje actuar 1 minutos
 Lavar con agua corriente y secar
 Observar la lamina coloreada con objetivo de inmersión utilizando una
gota de aceite de inmersión
 Anote sus resultados.
Toma de Extensión
muestra y fijación
 Observar con
Objetivo de inmersión
Bacilos Gram positivos y Gram negativos
Bacillus subtilis (Bacilos Gram positivos)
Escherichia coli (Bacilos Gram negativo)
Pseudomonas aeruginosa (Bacilos Gram negativo)
Staphylococcus aureus (cocos Gram positivos)
Streptococcus sp (cocos Gram positivos)
 La tinción fue descrita por primera vez por dos médicos alemanes, Franz Ziehl
(1859 to 1926), un bacteriólogo y Friedrich Neelsen( 1854 to 1894), un patólogo.
 La tinción de Ziehl - Neelsen (BAAR) es una técnica de tinción diferencial rápida y
económica, que se basa en que las paredes celulares de ciertos bacterias contienen
ácidos grasos (por ejemplo, el ácido micólico de cadena larga (50 a 90 átomos de
carbono) que les confieren la propiedad de resistir la decoloración con alcohol-
ácido
 La coloración clásica de Ziehl-Neelsen requiere calentamiento para que el colorante
atraviese la pared bacteriana que contiene ceras
 Es una coloración de diagnostico:
Micobacterium tuberculosis (Tuberculosis) y Mycobacterium leprae (Lepra).
 Bacterias del género Nocardia → Nocardiosis (similar a tuberculosis) y Micetoma
actinomicótico (micosis subcutánea).
 losBAAR poseen una pared celular rica en lípidos y ácidos
carboxílicos (ácido micólico) que tienen la propiedad de unirse
excepcionalmente fuerte al colorante (fuscina de fenicada)
cuando se usa el calor como mordiente. Una vez que se forma
este complejo colorante-pared, ni siquiera la acción conjunta
del ácido y del alcohol pueden deshacerlo, ya que las paredes
retienen el colorante en forma "resistente".
PASOS METODO BAAR NO ACIDOS ALCOHOL
RESISTENTES

COLORANTE BÁSICO FUCSINA FENICADA SE TIÑE ROJO SE TIÑE ROJO

MORDIENTE CALOR PERMANECE ROJO PERMANECE ROJO

DECOLORANTE ALCOHOL ACIDO PERMANECE ROJO SE DECOLORA

COLORANTE DE AZUL DE METILENO PERMANECE ROJO SE TIÑE AZUL

CONTRASTE
 OBJETIVO
Adiestrarse en la coloración Zielh Neelsen, realizar los estudios
morfológicos, reconociendo las diferenciación de las bacterias Acido
Alcohol Resistentes (BAAR) y la No Acido Alcohol Resistentes
 Diseño experimental
 Esputo de pacientes sintomáticos respiratorios
 Mascarillas N95, guantes
 Mechero, aplicadores
 Láminas portaobjeto.
 Colorantes: Fucsina fenicada, azul de metileno
 Decolorante: Alcohol ácido
 Microscopio compuesto
 aceite de inmersión
PROCEDIMIENTO:
 Preparar una extensión a partir de una muestra de esputo y
fíjelo.
 Cubrir el preparado con gotas del colorante fucsina fenicada y
caliente el preparado con el mechero hasta que desprenda
vapores ( no hervir) por 3 a 5 minutos
 Lavar con agua corriente
 Decolorar con alcohol ácido
 Cubrir el preparado con azul de metileno por 1 a 3 minutos
 Lavar con agua corriente
 Observar la lamina coloreada con objetivo de inmersión
utilizando una gota de aceite de inmersión
 Anote sus resultados.
 Utilizar mascarilla de protección
 Muestra de esputo

Muestra cultivo bacteriano

 Partir el aplicador

Seleccionar la partícula más purulenta

Depositar en el portaobjetos

Extender la muestra uniformemente

Fijar el extendido cuando esté totalmente

seco
 bueno grueso fino

mal decolorado No homogéneo Escaso material

 Observar con
Objetivo de inmersión
BAAR

MICROORANISMOS
NO AAR
Cuida tus Pensamientos...
porque se volverán Palabras.
Cuida tus Palabras...
porque se volverán Actos.
Cuida tus Actos...
porque se harán Costumbre.
Cuida tus Costumbres...
porque forjarán tu Carácter.
Cuida tu Carácter
porque formará tu destino
Y tu Destino será tu vida.

Mahatma Gandhi