UNIVERSIDAD NACIONAL

PEDRO RUIZ GALLO

FACULTAD DE MEDICINA
VETERINARIA

TAREA:
Diluciones

ASIGNATURA:
Inmunología Veterinaria

DOCENTE:
M.V. Zully G. Montenegro Esquives

ESTUDIANTE:
Argandoña Yep, Emma Beatriz

LAMBAYEQUE, AGOSTO DEL 2022

 Práctica N° 5

DILUCIONES

Las diluciones pueden ser:

1. Diluciones únicas:

Se denominan únicas cuando solamente se requiere esa dilución.

Para realizar una dilución única se necesita:

a) Saber la dilución y el volumen requeridos.

b) Calcular el volumen de soluto y diluente necesarios.

Si queremos preparar una dilución 1/4, en 2 mililitros (ml). Sabemos que se requiere una parte de
soluto y tres partes de diluyente; como el volumen es 2 ml, entonces:

Para calcular el volumen de soluto se tiene que dividir 2 ml (vol. Requerido) ÷ 4 = 0.5 ml y lo que
falte para los 2 ml corresponde al diluyente: 2 ml – 0.5m =1.5 ml

Si necesitamos preparar una dilución 1/10 en 5 ml, el soluto equivale a la décima parte de 5 ml: 5
ml ÷ 10 = 0.5 ml y las nueve partes restantes corresponden al diluyente: 5ml – 0.5ml = 4.5 ml;
sumando el soluto y el diluyente obtenemos 5 ml que corresponde a las partes totales (10).

2. Diluciones seriadas:

Las diluciones seriadas son la disminución de un soluto en un diluyente en forma gradual y

sistemática para lograr reducir su concentración en una secuencia ordenada y, con ello, cuantificar
su actividad biológica. Por ejemplo, si queremos saber cuántos anticuerpos hay en el suero de un
animal (título del suero), podemos ir disminuyendo su concentración a la mitad, y a la mitad, y así
sucesivamente hasta llegar a un punto en el que ya no detectemos estos anticuerpos.
Arbitrariamente podemos decir que el último tubo en el que todavía se encuentra anticuerpos es el
inverso a la cantidad de anticuerpos (título) que tiene el suero concentrado.

Existen diferentes tipos de diluciones seriadas, pero las más utilizadas en Inmunología y
Virología son las diluciones dobles seriadas, las quíntuples seriadas y las décuples seriadas. Se
llaman dobles cuando lo que se está haciendo es diluir a la mitad, quíntuples cuando se está
diluyendo a la quinta parte o décuples cuando se está diluyendo a la décima parte la
concentración del soluto.

Todas las diluciones seriadas comienzan con una dilución inicial, misma que se obtiene
exactamente igual que si fuera una dilución única. Puedo hacer una dilución seriada partiendo de
una dilución inicial cualquiera, lo importante es tener en mente que la concentración inicial se va a ir
disminuyendo a la mitad, o a la décima parte, etc.

2.1 Diluciones dobles seriadas:

Para realizar una dilución doble necesito saber:

a) La dilución inicial (que no necesariamente es 1/2, sino que puede ser cualquier otra)
b) El volumen inicial.
c) El número de tubos requerido en mi serie de diluciones.

Por ejemplo, si necesito cuantificar los anticuerpos de un suero contra H. somnus y para ello
debo realizar una dilución doble seriada, iniciando con una dilución 1/5 en un volumen de
1ml, en 4 tubos; los cálculos para hacer esta dilución serían:

a) En el primer tubo se realizan los mismos pasos descritos para las diluciones únicas: para
saber cuántos ml corresponden al soluto, divido mi volumen inicial entre 5 (1ml÷5 = 0.2ml)
y el resto es de diluente (1ml – 0.2ml = 0.8ml).
 b) Como la dilución es doble, quiere decir que en el siguiente tubo debo disminuir la
concentración a la mitad, por lo que debo transferir del tubo 1 al 2, la mitad del volumen
inicial: 1ml÷2= 0.5ml (volumen de transferencia), ésta cantidad la recibo en la otra mitad
del volumen: 1ml-0.5ml= 0.5 ml de diluente (volumen de recepción), para complementar el
volumen inicial (1 ml). Como se indicó anteriormente, en una dilución seriada se repiten los
pasos sistemáticamente de un tubo a otro, así debo transferir del tubo 2 al 3 el volumen de
transferencia (0.5 ml) y recibirlo en el volumen de recepción (0.5ml), esto se repite tantas
veces como tubos sean necesarios. Del último tubo hay que desechar el volumen
correspondiente al volumen de transferencia, para que todos los tubos queden con el mismo
volumen.

A continuación se muestra un esquema de cómo se realiza la dilución seriada de nuestro ejemplo:

Las diluciones que quedan en cada tubo al terminar la dilución seriada corresponden a:
 NOTA: Como se podrá observar, el volumen final en todos los tubos corresponde a la mitad del
volumen inicial (0.5 ml). Si quisiéramos que los tubos queden con 1 ml de volumen final, tendríamos que
iniciar la dilución con el doble del volumen (2 ml). Para hacer una dilución doble seriada, iniciando con
una dilución 1/8 en un volumen inicial de 4 ml en 5 tubos se necesita:

Dilución inicial (tubo1):

Cantidad de soluto: 4ml (volumen inicial) ÷ 8 (dilución inicial 1/8) = 0.5 ml

Cantidad de diluente: 4ml – 0.5 ml (soluto) = 3.5 ml
Dilución seriada (tubos 2 a 5)
Volumen de transferencia: 4ml (volumen inicial) ÷2 (dilución doble seriada) = 2 ml
Volumen de recepción: 4ml (volumen inicial) - 2ml (volumen de transferencia) = 2 ml

Dilución final obtenida en cada tubo:

Tubo 1 = 1/8
Tubo 2 = 1/16 (1/8 X 1/2)
Tubo 3 = 1/32 (1/16 X 1/2)
Tubo 4 = 1/64 (1/32 X 1/2)
Tubo 5 = 1/128 (1/64 X 1/2)

Los datos obtenidos se pueden resumir en el siguiente cuadro:

Nº TUBO 1 2 3 4 5
Dilución obtenida 1/8 1/16 1/32 1/64 1/128
Vol. de soluto 0.5ml
Vol. de diluyente 3.5ml 2ml 2ml 2ml 2ml
Vol. de transferencia 2ml 2ml 2ml 2ml 2ml
Vol. final 2ml 2ml 2ml 2ml 2ml

2.2 Diluciones décuples seriadas:

En las diluciones décuples seriadas (1/10) se deberá transferir una décima parte del volumen
del tubo que estamos trabajando y recibirla en nueve partes de diluente.
Estas diluciones suelen expresarse en forma logarítmica (10-1 )P

Al igual que en las diluciones dobles, para realizar una dilución décuple necesito saber:

a) La dilución inicial (que no necesariamente es 1/10, sino que puede ser cualquier otra)
b) El volumen inicial
c) El número de tubos requerido en mi serie de diluciones.
Supongamos que queremos realizar una dilución décuple seriada en 5 tubos, partiendo
de una dilución inicial 1/8 en un volumen de 4ml; los cálculos para hacer esta dilución serían:
 a) En el primer tubo se realizan los mismos pasos descritos para las diluciones únicas: para
saber cuántos ml corresponden al soluto, divido mi volumen inicial entre 8 (4ml÷8 = 0.5ml)
y el resto es de diluyente (4ml – 0.5ml = 3.5ml).
b) Como la dilución es décuple, quiere decir que en el siguiente tubo debo disminuir la
concentración a la décima parte, por lo que debo transferir del tubo 1 al 2, la décima
parte del volumen inicial: 4ml÷10= 0.4ml (volumen de transferencia), ésta cantidad la
recibo en las nueve décimas partes restantes: 4ml-0.4ml= 3.6ml de diluyente (volumen
de recepción), para complementar el volumen inicial (4ml). Como se indicó anteriormente,
en una dilución seriada se repiten los pasos sistemáticamente de un tubo a otro, así
debo transferir del tubo 2 al 3 el volumen de transferencia (0.4ml) y recibirlo en el
volumen de recepción (3.6ml), esto se repite tantas veces como tubos sean necesarios.

A continuación se muestra un esquema de cómo se realiza la dilución seriada de nuestro ejemplo:

Las diluciones que quedan en cada tubo al terminar la dilución seriada corresponden a:

Para hacer una dilución décuple seriada, iniciando con una dilución 1/2 en un volumen inicial de
5 ml en 4 tubos se necesita:

Dilución inicial (tubo1):

Cantidad de soluto: 5ml (volumen inicial) ÷ 2 (dilución inicial 1/2) = 2.5ml
Cantidad de diluyente: 5 ml – 2.5 ml (soluto) = 2.5ml
Dilución seriada (tubos 2 a 4)
Volumen de transferencia: 5 ml (volumen inicial) ÷ 10 (dilución décuple seriada) = 0.5 ml
 Volumen de recepción: 5 ml (volumen inicial) – 0.5 ml (volumen de transferencia) =
4.5 ml
Dilución final obtenida en cada tubo:
Tubo 1 = 1/5
Tubo 2 = 1/50 (1/5 X 1/10)
Tubo 3 = 1/500 (1/50 X 1/10)
Tubo 4 = 1/5000 (1/500 X 1/10)

Los datos obtenidos se pueden resumir en el siguiente cuadro:

# TUBO 1 2 3 4
Dilución obtenida 1/5 1/50 1/500 1/5000
Vol. de soluto 2.5ml
Vol. de diluyente 2.5ml 4.5ml 4.5ml 4.5ml
Vol. de transferencia 0.5ml 0.5ml 0.5ml 0.5ml
Vol. final 4.5ml 4.5ml 4.5ml 4.5ml

3. Diluciones en pasos:
Cuando se requiere hacer una dilución alta, no siempre es factible o conveniente hacerla
directamente, por lo que es necesario empezar con una dilución más concentrada que la
que necesitamos y a partir de ésta, realizar una o mas diluciones hasta llegar a la dilución que
queremos obtener.

Si queremos preparar una dilución 1/3500, podemos partir de una más concentrada por ejemplo
1/100. Lo que necesitamos es calcular la dilución intermedia para lo cual tendríamos que dividir la
dilución deseada entre la dilución inicial: 3500÷100 = 35

Este número (35) representa la dilución intermedia, es decir: necesitamos diluir 35 veces la dilución
inicial (1/100) para obtener la dilución requerida (1/3500). Dicho de otra forma: para hacer la dilución
1/3500 debo hacer una dilución 1/100 y a partir de ésta, una dilución 1/35 en el volumen requerido.
Es importante mencionar que el soluto necesario para la dilución 1/35 deberá tomarse de la dilución
1/100:

El volumen de la dilución inicial se obtiene arbitrariamente, lo único importante es:

 o Utilizar el menor volumen de soluto (sobretodo si es un reactivo caro a hay poca disponibilidad
del mismo)
o Tener el volumen suficiente para cubrir el volumen de la dilución final requerida. Suponiendo que
se requirieran 7ml de la dilución 1/3500, los cálculos aritméticos necesarios serían:

1. Saber cuánto se requiere de soluto y diluyente para la segunda dilución (1/35) Dilución 1/35,
volumen 7ml:

Soluto: 7 ÷ 35 = 0.2ml
Diluyente: 7 – 0.2 = 6.8ml

2. Obtener el soluto y diluente para la dilución inicial (1/100); el volumen de esta debe
ser el suficiente para poder realizar la siguiente dilución (1/35). En nuestro ejemplo
éste es de por lo menos 0.2ml; generalmente se utiliza un volumen mayor para poder medir
adecuadamente por lo que podemos aumentar el volumen por ejemplo a 1ml.

Dilución 1/100, volumen 1ml:

Soluto: 1ml ÷ 100 = 0.01ml
Diluyente: 1ml – 0.01 ml = 0.99ml

La dilución se realizaría de la siguiente forma:

Los datos obtenidos se pueden resumir en el siguiente cuadro:

# TUBO 1 2
Dilución obtenida 1/100 1/3500
(1/100X1/35)
Vol. de soluto 0.01ml
Vol. de diluyente 0.99 ml 6.8ml
Vol. de transferencia 0.2ml 0.2ml
Vol. final 7.0ml

4. Soluciones Porcentuales:

Como se indicó al inicio de la práctica, una dilución puede expresarse en forma porcentual.
La expresión “tanto por ciento”, por ejemplo 8%, quiere decir que de cada 100 partes totales, 8
corresponden al soluto y el resto (92) al diluyente.
 Para preparar una solución porcentual necesito saber:
1) a que concentración la quiero,
2) que cantidad o volumen necesito preparar.

Si deseo preparar 40ml de una suspensión de glóbulos rojos al 3%, quiere decir que cada 100 ml de
esta suspensión tendrán 3 ml de glóbulos rojos. Si requiero un volumen de 40 ml, entonces debo
hacer una regla de tres:

3 ml de glóbulos rojos son para 100ml, ¿cuántos ml de glóbulos rojos (X) son para 40ml totales?,
entonces: 3 :100 :: x : 40, ó
ml de glóbulos
rojos ml totales

3 100
X 40

3 X 40 = 120
120/100= 1.2 ml

Necesito 1.2ml de glóbulos rojos (soluto) y 38.8 ml de solución salina como diluente (40ml -1.2ml=
38.8ml)

Si deseo preparar una solución salina al 0.85%, quiere decir que cada 100 ml de esta solución tendrán
0.85 gr de NaCl. Si requiero un volumen de 30ml, entonces debo hacer una regla de tres:

0.85g son para 100ml, ¿cuántos gramos (X) son para 30ml?: 0.85 :100 :: x : 30 ó

gramos ml totales de
NaCl
0.85 100
X 30
30 x 0.85= 25.5
25.5/100= 0.255 gr

Para esta solución necesito poner 0.255gr de NaCl (soluto); en este caso no pueden restarse los
gramos de NaCl al volumen total por lo que debo usar una probeta para aforar al volumen deseado; es
decir, agregar diluyente cuanto baste para (c.b.p.) 30ml.

MATERIALES

Azul de metileno
Agua destilada
Tubos de ensayo
Pipetas
Gradilla

PROCEDIMIENTO

Dilución al doble, al quinto y al décuple seriadas. Colocar en una gradilla cinco (5) tubos de ensayo y
seguir las instrucciones descritas en los acápites correspondientes