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GUIA DE BIOCIENCIAS NRO 2. MITOSIS Y CICLO CELULAR DRA MONICA DIAZ

NOMBRE DE LA Nombre del
FACULTAD O UNIDAD Programa
ACADÉMICA Académico

MEDICINA MEDICINA
Asignatura/espacio académico Unidad/módulo/tema Profesor(es)
MODULO DE
BIOCIENCIAS- ETAPAS DEL CICLO CELULAR Y INFORMACION MONICA DIAZ
MICROSCOPÍA OPTICA GENETICA LOPEZ

Semestre ubicación de la Fecha creación Fecha actualización

asignatura en el plan de ENERO DE 2020 JULIO DE 2020
estudios
PRIMERO

ETAPAS DEL CICLO CELULAR Y MITOSIS

COMPETENCIAS

Indicadores de Logro en el Indicadores de Logro en el Indicadores de Logro en

Ámbito Conceptual Ámbito Procedimental el Ámbito Actitudinal

Exhibe un comportamiento
Realiza correctamente la
de compromiso en la
Integra conceptos teóricos de simulación de observación.
realización de las
ciclo celular con su
actividades que involucran
visualización en laminas Describe e identifica las
la aplicación de llos
microscópicas. características de cada una de
conceptos de ciclo celular y
las fases del ciclo celular
mitosis
observadas a través del
microscopio óptico

PREREQUISITOS

NA
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MARCO TEORICO

DIVISION CELULAR
La división celular es un aspecto biológico que está presente y caracteriza a los seres vivos,
desde cianobacterias (fisión binaria) hasta animales y vegetales en donde se denomina
mitosis.
La división celular por mitosis es un proceso por medio del cual las células
animales (somáticas) y vegetales se dividen de tal forma que el material genético se reparte
equitativamente entre las células hijas, dando como resultado el origen de dos células
genéticamente idénticas.
En animales este evento se presenta en células somáticas, que son aquellas células que
participan en el crecimiento de tejidos y órganos de un ser vivo, mientras que en organismos
adultos la división celular interviene en el reemplazo de las células pérdidas por desgaste,
deterioro o por muerte celular programada (apoptosis), con el fin de mantener el estado de
equilibrio del organismo, de tal suerte que si la división celular se detiene o se incrementa
el individuo moriría o presentaría organomegalia (agrandamiento de órganos) o
tumoraciones y procesos de cáncer.
En las células vegetales la mitosis se produce sobre todo en los meristemos, que son los
tejidos que permiten el crecimiento de la planta y que se encuentran, entre otros lugares,
en los extremos de los tallos y de las raíces cuya función es la adquisición de nutrientes.
Previo a los procesos de división celular la gran mayoría de las estirpes celulares doblan su
masa y duplican todos sus organelos citoplasmáticos. De este modo, durante el ciclo
celular, un conjunto complejo de procesos citoplasmáticos y nucleares deben coordinarse
para que el proceso de división sea exitoso.
Una aproximación práctica del proceso de mitosis se puede observar en células del
meristemo de una cebolla a través de una coloración básica, la cual evidencia el material
genético de la célula (ácido nucléico) poniendo de manifiesto el arreglo de los cromosomas
durante las diversas fases que conforman el proceso de mitosis. Este abordaje experimental
tiene como objeto reforzar lo visto en clase sobre este aspecto biológico, en el cual el
estudiante se ve inmerso como ser vivo.
La información genética de las plantas, animales y otros organismos eucariotas reside en
las moléculas de ADN, y están empaquetadas dentro de los cromosomas. Por ejemplo,
cada célula humana posee 46 cromosomas, mientras que cada célula de una cebolla
cabezona (Allium cepae) posee 8 pares de cromosomas,2n=16.
Todas las células deben replicar su ADN al dividirse. Durante la replicación del ADN, las
dos hebras de la doble hélice de ADN se separan, y para cada cadena original se produce
una nueva cadena complementaria, produciendo dos moléculas de ADN idénticas. La
replicación del ADN produce un par idéntico de moléculas de ADN (llamadas cromátidas
hermanas) unida a una región llamada centrómero.
La mayor parte del tiempo de un célula se encuentra en interfase. A pesar de que pueda
parecer que durante la interfase la célula es relajada, esto realmente no es el caso porque
la célula se va a través de la G1, S y G2 fases en preparación para la división. En la fase
G1, la célula está aumentando el número de la misma de proteínas y orgánulos y creciendo
en tamaño. En S, la replicación del ADN y los cromosomas se produce el doble para formar
cromátidas hermanas. La fase G2 también realiza la síntesis de proteínas. El material
genético se presenta en esta etapa como filamentos de cromatina.
La replicación del ADN en eucariotas es seguido por el proceso llamado MITOSIS que
asegura que cada célula hija recibe una copia de cada uno de los cromosomas replicados.
Durante el proceso de la mitosis, los cromosomas pasan a través de varias etapas
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conocidas como la profase, metafase, anafase y telofase. La división real del citoplasma se
llama citocinesis y se produce durante la telofase. Durante cada una de las etapas
anteriores, se producen eventos particulares que contribuyen a la distribución ordenada de
los cromosomas replicados antes de la citocinesis.

ETAPAS DE LA MITOSIS

1. PROFASE. En la profase, fibras de cromatina se vuelven más fuertemente enrolladas y

plegadas, formando cromosomas discretos. Los nucleolos desaparecen y los cromosomas
aparecen como dos CROMÁTIDAS HERMANAS idénticas unidas por el centrómero. Los
husos mitóticos comienzan a formarse y sin envoltura nuclear, estos husillos pueden
alcanzar los cromosomas. Los husos se unen a los CINETOCOROS y se mueven los
cromosomas al centro de la célula.
Durante la profase, los cromosomas se encuentran super-enrrollados y las fibras del huso
mitótico se empiezan a formar entre los centrosomas situados en el polo de las células. La
membrana nuclear o envoltura nuclear también se desintegra o desensambla en este
momento, los cromosomas en el citoplasma se liberan al espacio circundante.

2. PROMETAFASE. Durante prometafase, algunas de las fibras se unen al centrómero de

cada par de cromátidas hermanas y comienzan a moverse hacia el centro de la célula.
La envoltura nuclear se fracciona en una serie de cisternas que ya no se distinguen del RE,
de manera que se vuelve invisible con el microscopio óptico.
También los nucleolos desaparecen, se dispersan en el citoplasma en forma de ribosomas.

3. METAFASE. En la metafase los cromosomas han llegado a descansar a lo largo del

plano central de la célula. El COMT se encuentra en los extremos opuestos de la célula y
los husos mitóticos se han formado completamente entre ellos. Todos los cromosomas se
unen arriba en el centro de la célula en un lugar llamado la placa de metafase.
Los cromosomas muestran el máximo acortamiento y condensación, y son desplazados por
los microtúbulos hasta que todos los centrómeros quedan en el plano ecuatorial.

4. ANAFASE. Durante la anafase, los centrómeros se dividen y las cromátidas hermanas

comienzan a migrar hacia los polos opuestos de la célula.
Esta separación ocurre porque las proteínas del cinetocoro, que se encuentran cerca del
centrómero se trasladan a los COMT con la ayuda de ATP.
Se separan las cromátidas.
Cada juego de cromosomas migra hacia un polo de la célula.
El huso mitótico es la estructura que lleva a cabo la distribución de los cromosomas en
los dos núcleos.
El movimiento se realiza gracias a la actividad de los microtúbulos cromosómicos, que se
van acortando en el extremo unido al cinetocoro.
Los microtúbulos polares se deslizan en sentido contrario, distanciando los dos grupos de
cromosomas hijos.

TELOFASE. Durante la telofase, los cromosomas en cada extremo de la célula, comienzan

a agruparse, lo que facilita la formación de una nueva membrana o envoltura nuclear.
Dos nuevos nucleolos se reensamblan y las fibras de cromatina de cada cromosoma se
desenrollan en su interior. Por último, los husos mitóticos desaparecen y la mitosis está
terminado. Una manera de identificar que la telofase ha comenzado es mediante la
búsqueda de la formación de la placa celular, la nueva formación de la pared celular entre
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las dos células.
Comienza cuando los cromosomas hijos llegan a los polos de la célula.
Los cromosomas hijos se alargan, pierden condensación, la envoltura nuclear se forma
nuevamente a partir del RE rugoso y se forma el nucleolo a partir de la región organizadora
del nucleolo de los cromosomas SAT. (aquellos cromosomas donde se encuentra la
NOR(región organizadora nucleolar).).
Los cromosomas hijos inician la reconstrucción del núcleo en los polos de la célula.
El aparato mitótico desaparece y se desarrolla nueva membrana nuclear, alrededor de cada
colección de cromosomas.

La CITOCINESIS no es una parte de la mitosis, sin embargo, es necesario para la

replicación de la célula y ocurre normalmente durante la finalización de la telofase. En las
células animales, el citoplasma desarrolla una división a manera de surco que se encuentra
a lo largo de la célula. En el surco hay una serie de microfilamentos compuestos de actina
miosina II, proteínas que ayudan a que se contraiga, conformando un ANILLO
CONTRACTIL. El surco sigue contrayéndose y se profundiza el surco hasta que finalmente
la célula madre se divide en dos. Sin embargo, el proceso es diferente en células vegetales,
debido a que contienen una pared celular. En primer lugar, se forman una serie de vesículas
que contienen material de la pared celular, las cuales se acumulan en el medio de la célula
madre. Entonces, las vesículas se fusionan, formando una nueva pared celular, conocida
como PLACA CELULAR o FRAGMOPLASTO. La placa celular crece hacia el exterior con
la adición de más vesículas hasta que se fusiona con la membrana plasmática, donde la
célula madre se divide en dos células hijas.

MATERIALES:

• Bulbos de cebolla • Acido Clorhidrico HCl al 50%

cabezona(Allium cepae) con • Agua destilada
meristemos (creciendo por 7 • Pinza de madera
dias en agua) • Portaobjeto
• Bisturi. Hoja de bisturí o Tijeras • Cubreobjeto
de tejido. • Papel de filtro o Servilleta de
• Vidrio de reloj papel
• Orceina A y B o acetoorceina • Lapiz con borrador
• Acido Acetico

PROCEDIMIENTO:

Montaje de bulbos de cebolla germinados.

Para poder observar células mitóticas es indispensable tener una fuente de
material en
división. El ápice de las raíces es un tejido (meristemo) que se está
dividiendo activamente
in vivo, por lo que es un material ideal para observar
cambios celulares durante la mitosis.

En este caso, se trabajará con las raíces de cebolla, las cuales se obtienen
al germinar
los bulbos de dicha planta entre 4-8 días antes de la práctica.

Para ello, se
colocan los bulbos en un recipiente con agua, tal como se indica en la figura
2, de manera
que sólo el disco radicular quede en contacto con el líquido.
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Figura 2. Ubicación del disco radicular en contacto con agua para estimular la germinación.

Fijación del tejido.


Los tejidos que van hacer tratados con colorantes para su observación deben ser
fijados
previamente, ya que los procesos de maceración y coloración pueden distorsionar
las
estructuras celulares a observar por no haber sido fijadas. Para el caso de la mitosis,
se requiere la observación de la cromatina no condesada y condensada (cromosomas) en
sus diferentes fases, en este sentido, los cromosomas fijados deben en lo posible mantener
las mismas características de los tejidos vivos.
(Ver figura 3). se selecciona tres raíces
cuya longitud sea de 2 a 3 cm, con una tijera o pinza se cortan y sumergen en el fijador
(ácido acético) por 5 minutos.

Posteriormente se sumergen las raíces fijadas en agua destilada durante 5 minutos para
retirar el exceso de fijado.

Figura 3. Para fijar el tejido meristemático de los ápices radicales del bulbo de la cebolla se selecciona tres
raíces cuya longitud sea de 2 a 3 cm, con una tijera o pinza se cortan.

Maceración.


Una vez fijado el tejido debe ser ablandado y separadas sus células. Para ello, es necesario
romper la pared celular que mantiene unidas las células; si esta se destruye las uniones
desaparecen quedando las células aisladas. El HCl al 50% produce ese efecto, y a esta
concentración permite el grado adecuado de ablandamiento e hidrólisis del tejido.


En una cápsula de Petri, se coloca una gota de HCl al 50%, y con ayuda de una pinza, se
sumerge en ella una raicilla por un período de 10 minutos. Transcurrido los minutos, se
lavan las raíces con agua destilada dos o tres veces, para dejarlas en agua reposar.

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Coloración.

Para observar las fases de la mitosis, es necesario observar los cromosomas en sus
diversos desplazamientos. El colorante aceto-orceína es una substancia que se ocupa
para teñir los cromosomas y verlos en sus distintas fases en división. Con esta técnica de
tinción se ven los cromosomas impregnados por la orceína en color morado y el resto de
las estructuras celulares de otro color. Primero se debe limpiar tres porta objetos y cubre
objetos con etOH 70% para desengrasarlos. Se secciona el ápice de una raicilla, ya
macerada. Se coloca sobre una gota pequeña de colorante aceto-orceína, en un porta
objetos, dejando teñir por 5 minutos.

Si la preparación tiende a secarse se le añade otra gota pequeña del colorante.
Ver Figura
4.

Figura 4. Raices teñidas con orceina.

Squash.

El squash es una técnica de aplastamiento y dispersión del tejido. Con este último
procedimiento se da por hecha la preparación una lámina microscópica permanente o
semipermante.
La técnica consiste en cubrir la preparación con un cubre
objetos. Se deja
caer sobre la muestra tapada el borrador de un lápiz o el mango de una pinza de disección,
de modo que la preparación se extienda debajo del cubre objetos (Ver Figura 5).

Figura 5.Se debe sostener el cubre objeto por el borde, para evitar el desplazamiento de lámina al momento de
dejar caer el lápiz o el aguja de disección.

Se ubica la lámina dentro de una toalla doblada de papel
absorbente. Se elimina el exceso

de colorante, tocando con cuidado el área alrededor del cubre objetos y se procede a
realizar el squash, presionando suavemente con el pulgar, por encima del papel, el cubre
objetos, evitando el desplazamiento y ruptura del mismo. Ver figura 6.

Figura 6. Ubicación de lamina cubreobjetos por técnica de squash.

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Se visualizan los procesos de mitosis en el microscopio, como se muestra en la figura 7.

Figura 7

PREGUNTAS DE ANÁLISIS DE ESTE LABORATORIO.

REALICE ESTOS PUNTOS PREVIAMENTE A SU INGRESO AL LABORATORIO:
DE RESPUESTA A LOS SIGUIENTES INTERROGANTES ARGUMENTANDO CON SUS
PROPIAS PALABRAS, UTILICE LOS CONCEPTOS TRABAJADOS EN LA GUÍA,
ILUSTRE Y DESCRIBA SEGÚN CORRESPONDA:

1. En el siguiente dibujo del microscopio, señale sus partes

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2. El término "mitosis" viene de la palabra griega que significa "hilo". Explique por qué
esta palabra puede ser útil en la descripción de este proceso de división nuclear.
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3. Explique cómo el proceso de la mitosis ayuda a un organismo a crecer en tamaño.
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4. ¿Por qué se utilizan las raíces de Allium cepae para la visualización de la mitosis?
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5. Que significa el nombre científico o clasificación taxonómica de un ser vivo?

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6. Con que tinciones se realiza la visualización de los cromosomas de Allium cepae?

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7. ¿Por qué debe dejarse crecer los meristemos de cebolla y analizarlos en fresco?
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8. Explica cómo mitosis conduce a dos células hijas, cada uno de los cuales es diploide
y genéticamente idéntica a la célula original.
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9. ¿Qué función y cuáles son los componentes del citoesqueleto involucrados en el
proceso de mitosis?
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10. ¿Qué actividades están sucediendo en la célula durante la interfase?

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11. Realice un dibujo de una célula en interfase, con todos sus organelos.
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12. ¿Cómo se diferencian en la mitosis las células de plantas y animales?

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13. ¿Cómo la mitosis vegetal acomoda una pared celular rígida inflexible?
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14. ¿Cuál es el papel del centrosoma (el área que rodea los centriolos)?
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¿Esta área es necesaria para la mitosis?

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REALICE ESTOS PUNTOS DE LA GUIA EN EL LABORATORIO VIRTUAL.
DE ACUERDO AL ENUNCIADO, SEA BREVE,CONCRETO Y CONCISO
RESPECTO A CADA FASE:
1. Interfase
• Describir el contenido de un núcleo durante la interfase.
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• ¿Está nucléolo y una membrana nuclear presente en la célula?

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• ¿Qué término se utiliza para describir los contenidos nucleares durante la interfase?
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• ¿Qué eventos importantes se producen en los filamentos de cromatina durante la

interfase?
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• Realice aquí la visualización de microscopio.(EN LABORATORIO)

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2. Profase
• ¿Son los cromosomas ahora visible durante la profase?
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• Describir los cambios que han ocurrido en el nucléolo y la membrana nuclear de

interfase a la profase.
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• Explique por qué cromosomas ahora se pueden observar pero no eran observables
durante la interfase.
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• Realice aquí la visualización de microscopio.

3. Metafase
• Describir donde los cromosomas se encuentran ahora en relación a la célula.
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• ¿Puede evidenciar la duplicación del cromosoma (replicación) ahora se observa?

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• ¿Cómo se llaman las fibras que se hacen visibles durante esta fase?
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• ¿Qué término se utiliza para describir la estructura en la que cada fibra se une a un
cromosoma?
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• Realice aquí la visualización de microscopio.

4. Anafase
• Describir lo que está ocurriendo a cada par de cromosomas durante la anafase.
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• Hacia qué área de la célula son los cromosomas se dirigen?

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• ¿Qué estructura es responsable del movimiento de los cromosomas durante esta

fase?
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• Realice aquí la visualización de microscopio.

5. Telofase / Citocinesis
• ¿Qué partes celulares comienzan a aparecer durante esta fase?
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• ¿Cuántas células ya han formado a partir de una célula original?

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_______________________________________________________________.

• Realice aquí la visualización de microscopio.

BIBLIOGRAFIA:
1. Chromosomes in root tips, David B. Fankhauser, Ph.D., University of Cincinnati
Clermont College, Lab protocol, Dec (2008)
2. Mitosis, Meiosis and Genetics, J. L. Stein Carter & D. B. Fankhauser, Genetics, 18
Dec (2010).
3. Alberts, Bruce, Alexander Johnson, Julian Lewis, Martin Raff, Keith Roberts and
Peter Walter. Molecular Biology of the Cell. 6th ed. New York: Garland Science,
Taylor and Francis Group, LLC, 2014.
4. Brooker, Robert. Genetics: Analysis and Principles. New York: McGraw-Hill
Publishing, 2005.
5. Cooper, GM. La Celula. Editorial Marban. Sexta Edicion. 2014.
6. De Robertis, E. Fundamentos de Biología celular y Molecular de De robertis. 2004.
4a ed. Ed. El ateneo. Buenos Aires, Argentina. pp. 321-337.
7. Karp, G. 2006. Biología Celular y Molecular: Compuestos y experimentos. 4a ed.
Ed. Mcgraw-Hill Interamericana. pp. 1320-1340.

8. Lodish, Harvey, Arnold Berk, S. Lawrence Zipursky, Paul Matsudaira, David
Baltimore and James Darnell. Molecular Cell Biology. 4th ed. New York: WH
Freeman and Company, 2000.


WEBLIOGRAPHY

1. http://www.marietta.edu/~biol/introlab/Onion%20root%20mitosis.pdf

2. http://staff.jccc.net/pdecell/celldivision/oniontip.html

3. http://www.wisc-online.com/objects/ViewObject.aspx?ID=BIO204