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Noticias y vistas Publicado:27 abril 2023

organoides
Una guía desde el estómago hasta las células β
Jin Hyuk Choi ,Fritz Cayabyab yEiji Yoshihara  

Nature Cell Biology ( 2023 )

186 Accesos Métrica

Las conversiones directas ofrecen un enfoque alternativo para generar células

productoras de insulina para la terapia celular en la diabetes. Un estudio informa
sobre un método para convertir células madre gástricas derivadas del estómago
humano en células productoras de insulina funcionales a través de una ruta de
diferenciación única.

En los últimos años, los científicos han comenzado a utilizar factores de transcripción
específicos de linaje para dirigir la conversión de un tipo de célula en otro. En particular,
la generación de células β productoras de insulina utilizando estos enfoques ha atraído
la atención de los investigadores en el campo de la medicina regenerativa para la
diabetes. Sin embargo, en general, los enfoques de conversión directa no logran inducir
eficientemente células productoras de insulina funcionales. Las células madre adultas
residentes en tejidos son multipotentes y exhiben tanto la capacidad de
autorrenovación como de diferenciación en un número limitado de tipos de células. Se
sabe que uno de estos tipos de células, las células madre gástricas humanas (hGS),
forman organoides, que son estructuras tridimensionales (3D) autoorganizadas que se
pueden mantener in vitro durante varias semanas 1 . En este número deBiología celular
de la naturaleza , Huang et al. 2 informan sobre el desarrollo de una estrategia para
generar organoides secretores de insulina gástrica (GINS) funcionales, utilizando
células hGS como un potente recurso celular (Fig. 1 ).

Fig. 1: Carácter de los organoides GINS.

Los organoides GINS se generan a partir de células hGS (LGR5 + , MUC1 + , SOX9 + y Ki67 + ).
Las células hGS se pueden expandir hasta en 10 pases (~68 días). Los organoides GINS (INS + ,
PDX1 + , MAFA + , G6PC2 + , NKX6-1 – y GAL – ) se generan en ~10 días mediante la inducción
temporal de Ngn3 ( Ngn3 temp) y la inducción posterior de Pdx1 y Mafa ( Pdx1 / Mafa↑) en
medio de diferenciación optimizado. Esto es más corto que la preparación de organoides
similares a islotes derivados de células hPS (que contienen células similares a β, células
similares a α, células similares a δ, células similares a ε, células similares a γ y células
similares a conductos pancreáticos). Célula hiPS, célula madre pluripotente inducida humana.

Investigaciones anteriores han identificado que el tejido estomacal es más susceptible a

la adopción de un destino de células β que los tejidos intestinales 3 . Para generar células
productoras de insulina, Huang et al. 2, por lo tanto, aislaron células hGS de biopsias de
estómago humano y expandieron las células en cultivos 2D. Para efectuar la conversión
de las células hGS en células productoras de insulina, los autores utilizaron un enfoque
de reprogramación directa basado en la sobreexpresión de los factores de transcripción
clave específicos del linaje. Un estudio pionero anterior ha demostrado que la expresión
del factor de transcripción específico del páncreas ectópico en el hígado, como Pdx1 ,
induce células que expresan insulina, lo que mejora la hiperglucemia en ratones
diabéticos inducidos por estreptozotocina 4. Además, la coexpresión forzada de Ngn3,
Pdx1 y Mafa convirtió el destino celular en células productoras de insulina en muchos
tipos de células diferenciadas 5 , 6 . Como la expresión de NGN3 aumenta
transitoriamente durante el curso de la diferenciación en el desarrollo normal de los
islotes pancreáticos humanos, en este estudio, se indujo la activación de NGN3 durante
dos días usando el sistema de fusión del receptor de estrógeno Ngn3 ( Ngn3 ER) con
tratamiento con 4-hidroxitamoxifeno, seguido de Pdx1 y mafaexpresión durante cuatro
días. Este enfoque de activación secuencial mejoró significativamente la inducción de la
expresión de insulina. El cribado de moléculas pequeñas identificó que el inhibidor de la
rho-quinasa, la nicotinamida y un inhibidor de ALK5, junto con la agregación 3D de los
precursores de GINS, mejoraron la expresión de genes clave del factor de transcripción
de células β. Usando este proceso de tres pasos (expansión de células hGS, inducción de
NPM y estimulación paso a paso de moléculas pequeñas), los investigadores generaron
organoides GINS que contenían aproximadamente el 70% de las células productoras de
insulina. Es importante destacar que los organoides GINS exhibieron una sólida
secreción de insulina estimulada por glucosa (GSIS) in vitro.

La secuenciación de ARN de una sola célula (scRNA-seq) es una herramienta valiosa para
la identificación de estados celulares intermedios e identidades celulares a nivel de una
sola célula. Los autores compararon el conjunto de datos scRNA-seq de organoides GINS
con conjuntos de datos de islotes humanos disponibles públicamente y encontraron
que GINS contenía cuatro células secretoras de hormonas: células similares a β
productoras de insulina, células similares a α productoras de glucagón, células similares
a δ productoras de somatostatina células y células tipo ε productoras de grelina. Sin
embargo, carecían de células similares a γ productoras de polipéptidos pancreáticos,
que normalmente se encuentran en los islotes humanos. scRNA-seq reveló que las
células similares a β en GINS expresaban la mayoría de los marcadores clave de células β.
Un camino de diferenciación único que involucra SOX4 alto endocrino y galactina altoLos
precursores de GINS indicaron la fuente de organoides GINS. La madurez funcional de
las células β se caracteriza por la cantidad de producción de insulina, la solidez de la
función GSIS, la expresión de genes marcadores de maduración de células β clave y el
cableado metabólico adecuado regulado por las mitocondrias 7 . Se observan distintos
problemas de madurez entre GINS generados in vitro y organoides similares a islotes
derivados de células madre pluripotentes humanas (hPS) (los islotes de células hPS
incluyen células madre embrionarias humanas y células madre pluripotentes inducidas
por humanos). Curiosamente, los organoides GINS expresaron MAFA y G6PC2 a niveles
comparables a los de las células β humanas primarias, pero no expresaron NKX6-1., un
factor clave de transcripción específico del linaje de células β. Esta es una característica
considerablemente distinta de los organoides GINS en comparación con los islotes de
células hPS in vitro, que normalmente expresan niveles altos de NKX6-1 pero niveles
bajos de MAFA y G6PC2 (ref. 8 ). Además, los organoides GINS exhibieron
hipersensibilidad a los agonistas de GLP-1. Estos resultados proporcionan información
sobre las diferencias significativas entre los organoides GINS, los islotes de células hPS y
los islotes humanos.

Sin embargo, los organoides GINS generados in vitro mostraron varias características de
inmadurez. Los análisis de trasplante mostraron un efecto de normalización de glucosa
sólido y a largo plazo durante 100 días. De forma similar a los islotes de células hPS, en
los injertos de GINS se observó una maduración in vivo, caracterizada por una mayor
sensibilidad a la glucosa y una inducción de genes relacionados con la madurez, como la
de UCN3 .

Las ventajas notables de la tecnología GINS sobre los islotes de células hPS son: (1) una
gran parte del cuerpo gástrico está clínicamente disponible para generar células hGS;
(2) la tecnología requiere un tiempo significativamente más corto (<10 días) para
inducir organoides productores de insulina funcionales; y (3) la expresión de MAFA y
G6PC2 con o sin coexpresión de insulina sugiere que el método induce potencialmente
rutas de estos genes relacionados con la diferenciación y la maduración que
actualmente se desconocen (Fig. 1). Por el contrario, la tecnología GINS implica: (1)
expansión limitada para células hGS; (2) el período relativamente más corto de
mantenimiento del GSIS funcional de los organoides GINS (<10 días) en comparación
con el de los islotes de células hPS (>100 días); y (3) cantidades más pequeñas de células
tipo α y tipo δ, que pueden limitar la regulación contrarreguladora de la secreción de
insulina de las células β para prevenir el riesgo potencial de hipoglucemia.

Este estudio proporciona un enfoque único para generar células productoras de

insulina funcionales. Todavía quedan preguntas pendientes, incluido, por ejemplo, el
hecho de que no está claro si las células β generadas a partir de los precursores GINS con
alto contenido endocrino
y galactina de SOX4 darán como resultado las mismas células
productoras de insulina funcionales, o si tienen diferentes capacidades para
sensibilidad a la glucosa, desdiferenciación, proliferación o tumorigénesis. Además, las
células β PDX-1 low y MAFA low también contribuyen a la función adecuada de los islotes mediante la
modulación de los procesos metabólicos y la sincronización de las células β vecinas 9
. ¿Expresión
constitutiva de Pdx1 y Mafa ?en la mayoría de las células β alteran la heterogeneidad
funcional adecuada de las células β? ¿El linaje de las células β derivadas de células hGS
recapitula las células enteroendocrinas humanas que expresan insulina 10 durante el
desarrollo fetal? Un estudio anterior en moluscos bivalvos de agua dulce mostró que las
células productoras de insulina funcionales en el tracto gastrointestinal pueden regular
el metabolismo de los carbohidratos 11 , lo que sugiere que las células productoras de
insulina de origen no pancreático también pueden proporcionar maquinaria nativa para
la regulación de la glucosa. La tecnología GINS puede proporcionar información sobre
la vía de diferenciación actualmente desconocida de las células productoras de insulina
de origen no pancreático. Se necesita investigación futura para responder a las
preguntas restantes.

En general, este estudio avanza en nuestra comprensión de la regulación del destino

celular alterada por enfoques directos de reprogramación y transdiferenciación, y
proporciona una plataforma única para generar organoides similares a islotes
funcionales a partir de células madre gástricas adultas. Esta tecnología también puede
brindar nuevas oportunidades para futuros recursos clínicos en terapias regenerativas
para pacientes con diabetes insulinodependiente.

Referencias

1.
Sato, T. et al. Naturaleza 459 , 262–265 (2009).

2.
Huang, XGW et al. Nat. Biol celular. https://doi.org/10.1038/s41556-023-01130-y
(2023).

3.
Ariyachet, C. et al. Cell Stem Cell 18 , 410–421 (2016).

4.
Ferber, S. et al. Nat. Medicina. 6 , 568–572 (2000).

5.
Zhou, Q. et al. Naturaleza 455 , 627–632 (2008).

6.
Banga, A. et al. proc. Academia Nacional. ciencia EE. UU. 109 , 15336–15341 (2012).
7.
Yoshihara, E. Frente. Desarrollo celular Biol. 10 , 854604 (2022).

8.
Yoshihara, E. et al. Naturaleza 586 , 606–611 (2020).

9.
Nasteska, D. et al. Nat. común 12 , 4521 (2021).

10.
Egozi, A. et al. Nat. Medicina. 27 , 2104–2107 (2021).

11.
Plisetskaya, E. et al. Compensación general Endocrinol. 35 , 133-145 (1978).

Author information

Authors and Affiliations

The Lundquist Institute for Biomedical Innovation, Harbor-UCLA Medical Center, Torrance, CA, USA
Jinhyuk Choi, Fritz Cayabyab & Eiji Yoshihara

David Geffen School of Medicine at University of California Los Angeles, Los Angeles, CA, USA
Eiji Yoshihara

Contributions

J.C. and F.C. contributed equally to this work.

Corresponding author

Correspondence to Eiji Yoshihara.

Ethics declarations

Competing interests

The authors declare no competing interests.

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Choi, J., Cayabyab, F. & Yoshihara, E. A guide from the stomach to β cells. Nat Cell Biol (2023).
https://doi.org/10.1038/s41556-023-01140-w

Published
27 April 2023

DOI
https://doi.org/10.1038/s41556-023-01140-w

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Subjects Adult stem cells • Diabetes • Insulin signalling • Regeneration

Nature Cell Biology (Nat Cell Biol) ISSN 1476-4679 (online) ISSN 1465-7392 (print)

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