Taller Examen final

Asignatura: Procesos Microbiológicos Industriales

Programa: Química Industrial

Código Grupo

1950211 A

1950228 B

1. Se produce un vertido de aguas residuales urbanas en una playa. La densidad de E. coli y de

Enterococcus faecalis en las aguas residuales es de 7,8 x 1010 y 6,2 x109 células/100 ml,

respectivamente. El factor de dilución del vertido al incorporarse a la playa es de 1/1000. Dado

que la concentración de nutrientes en la playa es baja, el crecimiento de ambos microorganismos

está ralentizado. El tiempo de generación de E. coli es de 3 horas mientras que la constante

específica de la velocidad de crecimiento de E. faecalis es 0,11 h-1. Con los datos que se indican

¿podría indicar cual será́ el número de células por mililitro, de cada una de estas bacterias, en el

agua de la playa 24 horas después del vertido?

Si es posible calcularlo, de forma que:

Cálculos para la E. coli

0,693 0,693
𝜇= = = 0,231 ℎ−1
𝑡𝑔𝐸.𝑐 3ℎ

1 −1 𝑐é𝑙𝑢𝑙𝑎𝑠
N = 𝑁0 ∗ eµt = (7,8𝑥1010 ∗ ) ∗ 𝑒 (0,231ℎ )(24ℎ) = 1,99𝑥1010
1000 100𝑚𝑙

𝑐é𝑙𝑢𝑙𝑎𝑠 𝑐é𝑙𝑢𝑙𝑎𝑠
1,99𝑥1010 = 1,99𝑥108
100𝑚𝑙 𝑚𝑙

Cálculos para le E. faecalis

 0,693 0,693
𝑡𝑔𝐸.𝑓 = = = 6,3 ℎ
𝜇 0,11 ℎ−1

1 −1 𝑐é𝑙𝑢𝑙𝑎𝑠
N = 𝑁0 ∗ eµt = (6,2𝑥109 ∗ ) ∗ 𝑒 (0,11ℎ )(24ℎ) = 8,69𝑥107
1000 100𝑚𝑙

𝑐é𝑙𝑢𝑙𝑎𝑠 𝑐é𝑙𝑢𝑙𝑎𝑠
8,69𝑥107 = 8,69𝑥105
100𝑚𝑙 𝑚𝑙

En la siguiente tabla se resumen los datos dados y obtenidos para cada una de las bacterias:

N0 en el N0 en la
𝐜é𝐥𝐮𝐥𝐚𝐬 𝐜é𝐥𝐮𝐥𝐚𝐬
Bacteria vertido FD playa tg (h) µ (h-1) t (h) N (𝟏𝟎𝟎𝐦𝐋) N( )
𝐜é𝐥𝐮𝐥𝐚𝐬 𝐜é𝐥𝐮𝐥𝐚𝐬 𝐦𝐋
(𝟏𝟎𝟎𝐦𝐋) (𝟏𝟎𝟎𝐦𝐋)
1
E. coli 7,8 x 1010 7,8 x 107 3 0,231 24 1,99 x 1010 1,99 x 108
1000
1
E. faecalis 6,2 x 109 6,2 x 106 6,3 0,11 24 8,69 x 107 8,69 x 105
1000

Se concluye que, para le E. coli se tendrá una densidad final de 1,99 x 108 células/mL, mientras

que, para la E. faecalis será de 8,69 x 105 células/mL. Esto se debe a que, el tiempo generacional

que posee la E. coli es aproximadamente la mitad del necesario por la E. faecalis, obteniendo así

una mayor densidad de la primera bacteria al cabo de 24 horas; además, se destaca que hay mayor

densidad de esta en el vertido inicial.

2. Calcular el rendimiento de producción de biomasa por gramo de carbono consumido de un cultivo

que produce 20 gramos por litro de células cuando utiliza como única fuente de carbono una

solución de glucosa al 10% (peso/volumen).

Datos: - biomasa del cultivo 20 g/L

- glucosa como fuente de carbono 10% p/v

10 𝑔
10% (p/v) = 100 𝑚𝑙 = 0,1𝑔/𝑚𝐿 = 100 𝑔/𝐿
 El rendimiento es la biomasa producida por cantidad de sustrato consumida para este caso la

glucosa, en base a los datos otorgados en el enunciado emplearemos la siguiente fórmula para el

respectivo calculo:

Biomasa producida
Y =Sustrato consumido
20 𝑔 𝑐𝑒𝑙𝑢𝑙𝑎𝑠/𝑙
Y=100 𝑔 𝑔𝑙𝑢𝑐𝑜𝑠𝑎/𝑙 = 0,2 g células/g glucosa

El rendimiento de producción de biomasa obtenido fue de 0,2 g células/g glucosa.

3. Con el objetivo de hacer una curva de crecimiento de la bacteria E. coli en caldo nutritivo se

inocula un matraz con caldo nutritivo (37 °C, 100 r.p.m.). Cada hora se extraen 2 mL del matraz y

se mide la absorbancia, obteniendo los siguientes resultados:

Tiempo (h) Absorbancia Tiempo (h) Absorbancia

0 0,0022 6 0,1108
1 0,0021 7 0,1643
2 0,0088 8 0,1905
3 0,0192 9 0,2732
4 0,0315 10 0,2603
5 0,0506 11 0,2611

Paralelamente, a partir de un cultivo de E. coli, se preparan diferentes suspensiones celulares en

las que se determina el número de bacterias/mL y la absorbancia, obteniéndose siguiente ecuación:

𝑐é𝑙𝑢𝑙𝑎𝑠
ln 𝑁0 ( ) = 20,688 𝐴𝑏𝑠 + 15,387
𝑚𝑙

𝑟 = 0,97
Datos obtenidos empleando la ecuación de la recta:

Tiempo (h) Absorbancia ln No No (células/mL)

0 0,0022 15,4325 5,04E+06
1 0,0021 15,4304 5,03E+06
2 0,0088 15,5691 5,78E+06
3 0,0192 15,7842 7,16E+06
4 0,0315 16,0387 9,24E+06
5 0,0506 16,4338 1,37E+07
6 0,1108 17,6792 4,76E+07
7 0,1643 18,7860 1,44E+08
8 0,1905 19,3281 2,48E+08
9 0,2732 21,0390 1,37E+09
10 0,2603 20,7721 1,05E+09
11 0,2611 20,7886 1,07E+09

Grafique y calcule μ y tiempo generacional:

Gráfica de células vs tiempo:

t vs No
1,60E+09
1,40E+09
1,20E+09
No (𝑐é𝑙𝑢𝑙𝑎𝑠/mL)

1,00E+09
8,00E+08
6,00E+08
4,00E+08
2,00E+08
0,00E+00
0 2 4 6 8 10 12
Tiempo (h)

Gráfica del ln No vs Tiempo:

 t vs ln N
22,0

21,0

20,0
ln N (células/mL)

19,0

18,0

17,0

16,0

15,0
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12
Tiempo (h)

❖ La fase exponencial se observa desde 5 a 9 h.

Cálculo de μ tomando la fase exponencial, comprendida entre 5 a 9 horas:

𝑐é𝑙𝑢𝑙𝑎𝑠
1,37 ∗ 109
𝑚𝐿
𝑋𝑓 ln 𝑐é𝑙𝑢𝑙𝑎𝑠
ln 𝑋 1,37 ∗ 107 𝑚𝐿
0
𝜇= = = 1,151 ℎ−1
∆𝑡 (9 − 5)ℎ

El tiempo generacional de la bacteria será de:

0,693 0,693
𝑡𝑔 = = = 0,602 ℎ = 36,13 𝑚𝑖𝑛
𝜇 1,151 ℎ−1

4. Previamente a la realización de una curva de crecimiento de la levadura Kloeckera apiculata en

caldo YNB, se establecieron las relaciones Absorbancia vs. Densidad celular y Absorbancia vs.

Peso seco. Para ello, a partir de una suspensión densa de levadura, se prepararon 10 diluciones a

las que se mide la absorbancia (600 nm), y se determinaron la densidad celular y el peso seco,

obteniéndose los siguientes resultados:

 Absorbancia Densidad celular (x 105 cel/mL) Peso seco (mg/mL)

0,203 15,43 0,06

0,076 7,08 0,02

0,079 7,18 0,02

0,325 28,80 0,08

0,11 10,90 0,038

0,095 5,33 0,035

0,47 47,00 0,169

0,237 24,90 0,06

0,865 87,50 0,40

0,68 68,00 0,25

Posteriormente, se inoculó un matraz con 100 ml de caldo YNB con aproximadamente 106

levaduras/ml. El matraz se incubó a 37°C con una agitación de 100 r.p.m. Periódicamente, se

extrajeron submuestras de 2 ml del matraz para medida de la absorbancia:

Tiempo (h) Absorbancia

0 0,11
1 0,25
2 0,47
3 1,01
4 1,03
5 1,10
6 1,05

¿Cuál es la densidad del cultivo cuando entra en fase estacionaria? ¿Cuál es el peso seco del

cultivo cuando entra en fase estacionaria?

 Absorbancia Densidad Celular (x105 cel/ml) In Densidad Celular Peso seco(mg/ml)

0,203 15,43 14,24923913 0,06

0,076 7,08 13,4701997 0,02
0,079 7,18 13,48422485 0,02
0,325 28,8 14,87330085 0,08
0,11 10,9 13,90168825 0,038
0,095 5,33 13,1862767 0,035
0,47 47 15,36307307 0,169
0,237 24,9 14,72779327 0,06
0,865 87,5 15,98456426 0,4
0,68 68 15,73243317 0,25

Para determinar los valores de densidad celular y peso seco en la fase estacionaria se empleó la

ecuación de la recta tomando Absorbancia vs. Densidad celular y Absorbancia vs. Peso seco.

• Absorbancia vs. Densidad celular

Absorbancia vs Ln Densidad celular

18
16
14
Densidad Celular

12
10 y = 3,391x + 13,433
R² = 0,881
8
6
4
2
0
0 0,2 0,4 0,6 0,8 1
Absorbancia

Y= 3,391 x + 13,433
Mediante la ecuación obtenida tenemos que
Y = Ln densidad celular
X= Absorbancia.
Reemplazando en la ecuación se obtienen los siguientes resultados:

Tiempo (h) Absorbancia Ln Densidad Celular Células/mL

0 0,11 13,81 9,95E+05
1 0,25 14,28 1,59E+06
2 0,47 15,026 3,36E+06
3 1,01 16,86 2,10E+07
4 1,03 16,93 2,25E+07
5 1,1 17,16 2,83E+07
6 1,05 16,99 2,39E+07

2,10E+07 + 2,25E+07 + 2,83E+07+ 2,39E+07

x̄= 4
= 2,39 x 107 células/mL

Se obtiene que la densidad promedio del cultivo cuando entra en fase estacionaria es de: 2,39x107
células/mL.

• Absorbancia vs. Peso seco

Absorbancia vs Peso seco(mg/ml)

0,45

0,4

0,35

0,3
y = 0,4445x - 0,0264
Peso Seco

0,25 R² = 0,962

0,2

0,15

0,1

0,05

0
0 0,2 0,4 0,6 0,8 1
Absorbancia

Y= 0,4445x – 0,0264

Mediante la ecuación obtenida tenemos que

Y = peso seco (mg/ml)
X= Absorbancia.
 Reemplazando en la ecuación se obtienen los siguientes resultados:

Tiempo (h) Absorbancia Peso seco (mg/mL)

0 0,11 0,224
1 0,25 0,084
2 0,47 0,183
3 1,01 0,422
4 1,03 0,431
5 1,1 0,463
6 1,05 0,44

0,422 + 0,431 + 0,463 + 0,44

x̄= = 0,439 mg/mL
4

Se obtiene que el peso seco promedio del cultivo cuando entra en fase estacionaria es de 0,439
mg/mL.

5. Teniendo estos datos referidos a un cultivo bacteriano, calcular μ, g y cosecha máxima

Tiempo (h) células/mL ln No

0 1000000 13,8155106
1 1100000 13,9108207
2 1600000 14,2855142
3 2620000 14,7786849
4 3650000 15,1102377
5 6080000 15,6205153
6 9900000 16,1080453
7 18000000 16,7058823
8 28100000 17,1512801
9 39100000 17,481633
10 70100000 18,0654334
11 102000000 18,4404834
12 121000000 18,6113011
14 105000000 18,4694709
Gráfica de los datos de células /mL en función del tiempo:

N vs t
140000000
N (Células/mL) 120000000
100000000
80000000
60000000
40000000
20000000
0
0 2 4 6 8 10 12 14 16
t (h)

Gráfica del ln No en función del tiempo:

t vs ln N
18,5
ln N (Células/mL)

17,5

16,5

15,5

14,5

13,5
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15
t (h)

❖ Se observa una fase exponencial entre 1 a 12 horas.

Cálculo de 𝝁 en la fase exponencial, comprendida entre 5 a 12 horas:

𝑐é𝑙𝑢𝑙𝑎𝑠
121000000 𝑚𝐿
𝑋𝑓 ln 𝑐é𝑙𝑢𝑙𝑎𝑠
ln 𝑋 1100000 𝑚𝐿
0
𝜇= = = 0,427 ℎ−1
∆𝑡 (12 − 1)ℎ
Tiempo generacional:

0,693 0,693
𝑔= = = 1,623 ℎ = 97,38 𝑚𝑖𝑛
𝜇 0,427 ℎ−1

El cálculo de cosecha máxima se da tomando el valor de N al final de la fase exponencial, donde

llega a la mayor cantidad de biomasa producida (presente la ubicada a las 12h), menos la biomasa

inicial. Siguiendo así la siguiente ecuación:

𝑀 = 𝑀𝑡 − 𝑀0

𝑐é𝑙𝑢𝑙𝑎𝑠
𝑀 = 121000000 − 1000000 = 120000000
𝑚𝐿

La cosecha máxima será de 1,2 x 108 células/mL.

Tras calcular μ, g y cosecha máxima y, sabiendo que la concentración de sustrato inicial es

de 5 mg/ml y se agota durante el crecimiento, calcular el rendimiento.

Para el rendimiento se toman las mismas consideraciones que en el cálculo de cosecha máxima,

expresando su relación en cuanto al sustrato que se suministró, siguiendo la ecuación:

𝐵𝑖𝑜𝑚𝑎𝑠𝑎 𝑝𝑟𝑜𝑑𝑢𝑐𝑖𝑑𝑎 𝑀𝑡 – 𝑀0
𝑌= =
𝑆𝑢𝑠𝑡𝑟𝑎𝑡𝑜 𝑐𝑜𝑛𝑠𝑢𝑚𝑖𝑑𝑜 𝑆0 – 𝑆𝑡

Entonces:

(121000000 − 1000000) 𝑐é𝑙𝑢𝑙𝑎𝑠/𝑚𝐿

𝑌= = 24000000
(5 − 0) 𝑚𝑔/𝑚𝐿

El rendimiento obtenido fue de 2,4 x 107 células/mg sustrato.