Universidad de Guayaquil

Facultad de Ciencias Químicas

Carrera: Química y Farmacia
Laboratorio de Análisis Químico Clínico I G-1A
Fecha: 10-1- 23 semestre: 8vo
Integrantes:
Código: 04 Página: 4
Vergara Sanisaca Reinaldo Joel
Versión: 01 Docente: Q.F. Erazo López Dolores Beatriz, Mg Revisión:
Objetivos de la práctica de laboratorio
- Comprender la terminología de punto final, parámetros del punto final
- Utilizar el método de factor de calibración para determinar la concentración de glucosa en
suero
Marco teórico
Fundamento del Método
En el método de punto final, se incuba la disolución reaccionante con el espécimen y con el patrón
de concentración conocida, el tiempo necesario para que se complete la reacción o se alcance
el equilibrio. El nombre de punto final no debe conducir a equívoco, es más correcto el
de método de equilibrio, ya que muchas veces la reacción se produce de forma que puede
hacerse la medida antes de alcanzar el punto final.(Sandoval, 2012)

En los métodos de punto final, en lugar de utilizar un único estándar de concentración conocida
puede obtenerse una curva patrón con varios estándares y luego extrapolar en esta los valores de
absorbancia de las muestras problemas. Hay que tener en cuenta que nunca debe extrapolarse más
allá de la región que se haya calibrado. Cuando el valor de absorbancia supere la del mayor
calibrador, se diluirá el espécimen y se medirá de nuevo. Es importante señalar que cuando
se representan las curvas de calibración, a pesar de que la ley de Lambert-Beer implique que
la absorbancia de la concentración cero es cero, no debe forzarse que la línea atraviese el cero.
Hay que trazar la línea que mejor se ajuste a los puntos, bien visualmente o con métodos de
regresión.(Sandoval,2012)

En la reacción de Trinder1,2, la glucosa es oxidada a D-gluconato por la glucosa oxidasa (GOD), con
formación de peróxido de hidrógeno. En presencia de peroxidasa (POD), el fenol y la 4-
aminoantipirina (4-AA) se condensan por acción del peróxido de hidrógeno, formando una
quinonaimina roja proporcional a la concentración de glucosa en la muestra.
GOD
Β-D-Glucosa + H2O+O2→D-Gluconato +H2O2

H2O
4-AA + Fenol → Quinonaimina +H2O
POD
Significado Clínico
La glucosa es una de las mayores fuentes de energía del cuerpo humano derivada de la degradación
de los carbohidratos, incorporados a través de la dieta diaria y regulada a través de los procesos de
gluconeogénesis (síntesis endógena a partir de aminoácidos y otras sustancias) y glucogenólisis
(degradación del depósito de glucógeno hepático). El nivel en sangre se mantiene a través de la
ingesta y de hormonas reguladoras como la insulina, glucagón y epinefrina. Un aumento anormal en
la tasa de glucosa sanguínea, conocida como hiperglucemia, puede estar asociado con la diabetes
mellitus y con la hiperactividad de las glándulas adrenales, tiroides o pituitaria.
La hipoglucemia o disminución anormal por debajo de la tasa hallada en ayunas, se observa en
casos de sobredosis de insulina, tumores secretores de insulina, hipopituitarismo, enfermedad de
Addison, mixedema y condiciones que interfieren con su absorción. La determinación de glucosa
en sangre es una prueba clave para evaluar y diagnosticar desórdenes relacionados con el
metabolismo de los carbohidratos.
Reactivos de laboratorio
• Monoreactivo. Tampón fosfatos 100 mmol/L pH 7,5, glucosa oxidasa > 10 KU/L, peroxidasa
> 2 KU/L, 4-aminoantipirina 0,5 mmol/L, fenol 5 mmol/L.
• Patrón de Glucosa. Glucosa 100 mg/dL (5,55 mmol/L).
Materiales de laboratorio
• Pipeta automática de volumen variable (5-50 µl).
• Pipeta graduada de 10 ml
• Tubos de ensayo (12 x 100 mm)
• Gradilla.
• 3 Cubetas de caras paralelas (1 cm).
• Reloj cronómetro.
• Punta para pipeta color amarillo (2-200 µl).
• Probeta de 100 ml.
Equipos de laboratorio –
• Espectrofotómetro UV-VISIBLE Genesys 20
Marca Thermo Spectronic
Modelo Genesys20
Catálogo No. 4001
Serie 3S6E113009
Voltaje 250V
Potencia 1.0
Codigo de Laboratorio 005

• Baño de Agua
Marca MLW
Modelo U15
Referencia 4801119
Temperatura Requerida 37°C
Código de Laboratorio 005

Actividades por desarrollar/ técnica operatoria o procedimiento

1. Equilibrar reactivos y muestras a temperatura ambiente.
2. Pipetear en tubos rotulados:
TUBOS Blanco Muestra Cal. Patron
R! Monoreactivo 1,0 mL 1,0 mL 1,0 mL
Muestra - 10µL -
Cal. Patron - - 10µL
3. Mezclar y reposar los tubos 10 minutos a temperatura ambiente ó 5 minutos a 37ºC.
4. Leer la absorbancia (A) de la muestra y el patrón a 500 nm frente al blanco de reactivo.
El color es estable 2 horas protegido de la luz.

Resultados obtenidos
 A muestra= 0.213
A estándar o patrón =0.487
C estándar o patron = 100 mg/dl
𝐴 𝑚𝑢𝑒𝑠𝑡𝑟𝑎
× 𝐶 𝑝𝑎𝑡𝑟𝑜𝑛 = 𝐶 𝑚𝑢𝑒𝑠𝑡𝑟𝑎
𝐴 𝑝𝑎𝑡𝑟𝑜𝑛

F= C muestra / A muestra
C muestra =
0.213
× 100 𝑚𝑔/𝑑𝑙 F= 43.74 mg/dl / 0.213
0.487
F= 205
C muestra= 43.74 mg/dl

Descripción Resultado
Fecha 4/1/2023
Identificación de la Muestra 001
Hora de inicio del ensayo 11:00 pm
Absorbancia del blanco 0,00 nm
Concentración del estándar 100 mg/dL
Absorbancia del estándar 0,487nm

Factor de Calibración 205

Total, de muestra con reactivo 1,01 µL
Absorbancia de la muestra 0,213 nm
Concentración de la muestra 43.74mg/dL
Hora fin del ensayo 1:00 pm
Analista Reinaldo Vergara S
Observaciones • Temperatura adecuada
• Material limpio
• Equipos calibrados y estandarizados
• Tiempo adecuado de espera
• Prueba en suero

Conclusión
- Se logro Comprender la terminología de punto final, parámetros del punto final
- Se logro Utilizar el método de factor de calibración para determinar la concentración de
glucosa en suero

Recomendaciones
- Uso obligatorio de equipo de protección personal.
- Manejo adecuado del espectrofotómetro y escoger la longitud de onda adecuada en el
momento de la lectura.
- Mantener lo mas posible la calma si llegase a ocurrir un accidente dentro del laboratorio
- Limpiar la cubeta del espectrofotómetro antes de colocarla en la porta cubeta.
- Realiza los periodos de incubación en los tiempos y temperaturas registradas según la técnica
y no alterar los tiempos.
Bibliografía
- BioSystems S.A. (2006). GLUCOSA. [Inserto] Recuperado de
https://studylib.es/doc/6942951/inserto
- Castillo Aguilar, B., & González Hernández, R. (1996). Protocolo de validación de métodos
analíticos para la cuantificación de fármacos. Revista cubana de farmacia, 30(1), 0–0.
 Recuperado de http://scielo.sld.cu/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0034-
75151996000100009
Elaborado: Vergara Reinaldo Revisado: Vergara Reinaldo Aprobado: Vergara Reinaldo