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- DISRUPCIÓN CELULAR Y
OPERACIONES DE
SEPARACIÓN DE PRODUCTOS
INSOLUBLES
2.1. INTRODUCCIÓN
disrupción celular:
Solubilización
Corte (cuchillas)
Molturación
Mecánicas Sonicación
Homogeneización *
Molino de bolas*
- Membrana plasmática:
o Separa el interior de la célula del medio extracelular y permite el intercambio selectivo
de sustancias con exterior.
o Es una bicapa lipídica, compuesta mayormente
por fosfolípidos, con grupos hidrofílicos en parte
superior e inferior y cadenas hidrofóbicas entre
ambos, entre los que se insertan colesterol y
proteínas.
CHOQUE OSMÓTICO
El fenómeno de ósmosis se produce cuando dos disoluciones
de diferente concentración se ponen en contacto a través de
una membrana semipermeable, que permite el paso del
disolvente pero no de los solutos.
-[C] +[C]
En la disolución más concentrada, se genera una presión: presión osmótica (π). Podemos definirla
como la presión que se debe aplicar a una solución para detener el flujo neto de disolvente a través de
una membrana semipermeable.
CHOQUE OSMÓTICO
Método:
Contacto con
Aumento de
disolución Ruptura celular
presión osmótica
hipotónica
ENZIMAS Y ANTIBIÓTICOS
Usando enzimas y antibióticos obtenemos protoplastos.
TENSIOACTIVOS
Se utilizan como solubilizantes de la membrana.
Los tensioactivos no iónicos (Tween 20) tienen menor tendencia a desnaturalización de bioproductos
que los iónicos. Requieren uso de antiespumantes.
DISOLVENTES ORGÁNICOS
Solubilizan la mb celular: disuelven lípidos de la envoltura celular. Se emplean para células eucariotas.
Suelen tener carácter aromático
➢ Disolvente común → Tolueno (ej: levaduras, aunque no efectivo con todas)
➢ Acetona → células animales; ayuda a precipitar el producto (ej: proteinas)
ÁLCALIS
Solubilización membrana celular a pH alto en presencia de tensioactivo (SDS). El NaOH es ampliamente
usado
Los métodos mecánicos implican fuerzas de compresión y cizalla. A nivel industrial, se prefiere
disrupción mecánica respecto a la química.
Los métodos de corte, molturación y sonicación tienen un alto costo energético: a nivel de laboratorio
consumen 500 kW/m3 de medio de cultivo, por lo que pasarlo a nivel industrial sería muy caro.
A nivel industrial, por tanto, se emplea Homogeneización a alta presión y Molino de bolas. Estas se
diferencian en el modo de trabajo: contínuo y discontínuo (lotes), respectivamente.
El homogeneizador de alta presión tipo Malton-Gaulin es el más usado en industria. El sistema de flujo
contínuo se compone de:
T2 ≤ Tdesnaturalización
Para calcular la potencia de la bomba, consideramos flujo del fluido al pasar por la bomba se considera
isotérmico, continuo y en estado estacionario. De forma que:
EJEMPLO 2: Selección de homogeneizador y condiciones de trabajo
MOLINO DE BOLAS
Los molinos de bolas son habitualmente empleados para la molienda (transformación de sólidos en
polvo fino) de minerales y pigmentos.
Consisten en cilindros verticales u horizontales refrigerados que contienen un relleno de esferas (de
vidrio) que son agitadas mediante un agitador de discos rotatorios, lo cual provoca disrupción celular.
• Tiempo de operación necesario: suele ser de 10 min. Se estima según las siguientes
ecuaciones:
o Molinos que trabajan por lotes:
EJEMPLO 3:
2.5. OPERACIONES DE SEPARACIÓN DE PRODUCTOS INSOLUBLES
FILTRACIÓN
• Filtración convencional
o Flujo perpendicular a superficie filtrante
o Fuerza impulsora: ΔP
o Usa como soportes: papel, tela y lechos de partículas
• Filtración tangencial sobre membrana (será vista en el tema 4)
o Flujo paralelo
o Fuerza impulsora: ΔP, ΔC, ΔV
o Usa como soporte: membranas semipermeables
*debemos tener en cuenta las unidades en las cuales se puede expresar el valor del flujo son
𝒗𝒐𝒍𝒖𝒎𝒆𝒏 𝑚3 𝑚
→ 𝑒𝑛 𝑆𝐼: = (𝑢𝑛𝑖𝑑𝑎𝑑𝑒𝑠 𝑢𝑠𝑎𝑑𝑎𝑠 𝑒𝑛 𝑡𝑎𝑏𝑙𝑎 2.4)
𝒕𝒊𝒆𝒎𝒑𝒐·𝒔𝒖𝒑𝒆𝒓𝒇𝒊𝒄𝒊𝒆 𝑠·𝑚2 𝑠
𝐿 𝑐𝑚
𝑚𝑖𝑒𝑛𝑡𝑟𝑎𝑠, 𝑒𝑛 𝑙𝑎 𝑡𝑎𝑏𝑙𝑎 2.5. 2 = 0,1 (𝑓𝑙𝑢𝑗𝑜 𝑙𝑒𝑛𝑡𝑜 𝑎𝑡𝑒𝑛𝑑𝑖𝑒𝑛𝑑𝑜 𝑡𝑎𝑏𝑙𝑎 2.4)
𝑚 ·ℎ ℎ
Como podemos observar en la tabla 2.5, los flujos de filtración para los microorganismos en la
producción de bioproductos suele ser lenta. Por ello, en algunos casos se usan (EXAMEN):
Filtro Nutsche
Filtro de prensa
▪ Discontinuo: por lotes. Una vez hay poco flujo, se recoge la torta.
▪ Consta de una serie de placas y marcos colocados de forma alterna; entre las placas hay medio
filtrante (puede ser papel, nitrocelulosa, etc.)
o La suspensión pasa a través de tuberías y cuando
llega a placa, pasa por el tubo (tiene una serie de
perforaciones que permiten pasar la suspensión)
dentro de la cámara
o El líquido pasa a través del medio filtrante y los
sólidos se retienen en forma de torta en su
superficie (en la cámara del medio filtrante); el
líquido se recupera por otro canal (arriba derecha)
▪ Es barato y muy flexible (permite aumentar el área del
medio filtrante mediante aumento nº capas). Permite
trabajar con suspensiones de gran consistencia
▪ Filtro contínuo
▪ Se compone de un tambor giratorio sobre el que se pone
la tela filtrante (aprox 1/3 del filtro está sumergido en la
suspensión)
o El filtrado es aspirado a través del medio
filtrante debido a que se aplica el vacio en el
centro → se filtra al interior el líquido dejando las partículas sólidas en el exterior
(sobre la superficie del medio filtrante que está sobre el tambor)
▪ La frecuencia de rotación es pequeña: 1 o 2 rpm
▪ Admite grandes producciones de hasta 2500kg/m2·h y es económico.
Flujo de filtración (J) o velocidad superficial de filtración (u): volumen de líquido claro producido por
unidad de tiempo y superficie. Velocidad superficial del líquido en el filtro.
La circulación de un fluido a través de un lecho poroso (torta) sigue un régimen de flujo laminar, cuando
el número de Reynolds (Re) < 100:
Cuando esta condición se cumple, y por tanto, nos encontramos en un flujo laminar => podemos aplicar
la Ley de Darcy:
Definimos a la resistencia total, R (m-1 ), como la suma de la del medio filtrante, RM, y la del torta,RC, ya
que son resistencias en serie:
En resumen, podemos calcular el flujo de filtración mediante las siguientes expresiones equivalentes:
1 𝑑𝑉 ∆𝑃 ∆𝑃
𝐽= · =𝑢=𝑘· = 𝑒𝑐[2.17]
𝐴 𝑑𝑡 𝜇 · 𝐿 𝜇 · (𝑅𝑀 + 𝑅𝐶 )
Por tanto, operando a ΔP constante: Rc incrementa con el tiempo de filtración conforme crece el
espesor de la torta (aumenta el grosor porque se van depositando las partículas) por lo que el caudal
del líquido filtrado (J) disminuye. (EXAMEN)
*C = cantidad solidos depositada en filtro por unidad de masa filtrada es aproximadamente igual a
[sólidos] ya que podria haber solidos muy pequeños capaces atravesar filtro no retenidos en él
Esta ecuación la podemos sustituir en la Ley de Darcy, quedando:
Además, definimos la altura de la torta formada h(t), está relacionada con los valores de V y t, a través
de la ec [2.18] de Rc:
La mayoría de microorganismos son compresibles. Así pues, para poder aplicar las ecuaciones vistas
hasta ahora, se ha de corregir la resistencia específica de la torta, α.
• S es el factor de compresibilidad de la torta que depende del tamaño y forma de las partículas
→ su valor varía entre 0,1 y 0,9. Preguntar si consideramos adimensional
CONSECUENCIAS PRÁCTICAS: RESOLUCIÓN DE PROBLEMAS
Anteriormente introducimos que el filtro rotatorio a vacío es el filtro contínuo + usado. Recordamos que
consta de un tambor giratorio parcialmente sumergido.
Nos vamos a encargar de analizar la capacidad de filtración de los filtros (relacionado con etapa 1) y
también estudiaremos el volumen y tiempo de lavado necesarios (relacionados con etapa 2).
En un filtro rotatorio, la alimentación, filtrado y descarga de la torta fluyen a velocidad constante. Sin
embargo, las condiciones de un elemento de superficie filtrante son no estacionarias => formación de
torta en estado transitorio. En cambio, la caída de presión a través del filtro es cte (ΔP = cte); por lo que
ec [2.19] es aplicable para caracterizar el primer proceso en serie; considerando RM despreciable.
De tal forma, obtenemos el flujo medio de filtrado que determina la capacidad de filtración del filtro.
Donde:
En ambas ocasiones observamos que el valor del flujo de filtrado medio es inversamente proporcional a
la raíz de la viscosidad y tiempo de ciclo. Además, a partir de ambas ecuaciones es posible calcular el
área de filtración necesaria para el proceso.
Una vez que se ha formado la torta, esta contiene disolvente+soluto que puede resultar de valor. Este
último se puede desplazar mediante el lavado de la torta
Para hacer el lavado, se precisa mayor volumen de líquido de lavado que líquido retenido en la torta.
Esto es debido a que el producto acumulado en las zonas de retención y su transferencia al agua de
lavado tiene lugar por difusión. Esta difusión es más lenta que el flujo convectivo del lavado a través de
la torta.
Para tortas incompresibles la siguiente ecuación relaciona el tiempo de lavado, tW, con el volumen de
agua de lavado, VW.
*EJEMPLO 7*
En la práctica, un filtro industrial no se diseña con los valores de α y Rm (como el ejemplo 4), sino que se
utilizan directamente los datos del filtro de laboratorio, extrapolando a flujo constante: J1=J2 (flujo filtro
lab = flujo filtro industrial)
• Datos de laboratorio necesarios: volumen de filtrado, tiempo, presión del filtro y temperatura
del filtrado (además de concentración sólidos).
MÉTODO DE ESCALADO
Se considerará que los flujos obtenidos en función del tiempo, a vacío constante, sobre un área reducida
(filtro laboratorio), son los mismos que se producirán en el filtro industrial, sobre un área más grande
con igual vacío. Por tanto, en el método de extrapolación sólo será necesario aumentar el Área del filtro,
ya que formación de la torta, el aspirado, velocidad, espesor etc se mantendrán constantes entre ambas
escalas.
*MIRAR EJEMPLO 8*
CENTRIFUGACIÓN
• Sedimentación: emplea f.gravedad => consigue baja veloc. sedimentación → requiere grandes
superficies
• Centrifugación: emplea f.centrífuga, que puede ser 100.000 ≥ f.gravedad → obtiene grandes
superficies de sedimentación en reducido espacio (a costa de trabajar con velocidades de
sedimentación mayores). El campo de fuerza se obtiene por rotación de tubos y canales en los
que se crea un campo de fuerza centrífuga aplicando velocidades de rotación elevadas.
Existen diferentes tipos de centrífugas, siendo más usadas las centrífugas de discos:
Cada equipo de separación de sólidos actúa según diferentes rangos de tamaños de partícula y
concentraciones de sólidos.
• Análisis de la velocidad terminal de partículas de un fluido por ACCIÓN DE LA GRAVEDAD
Las fuerzas, por tanto, que actuarán sobre esas partículas esféricas que
tienen mayor densidad que el agua son:
La partícula se acelera hasta que el rozamiento va aumentando y se iguala al peso efectivo (es la
diferencia entre el peso y la flotación) → velocidad se hace constante u = cte. A partir de ese momento
se denomina, ut, velocidad de caída libre o terminal, obteniéndose la ecuación de Stokes para la
velocidad terminal:
El movimiento circular de la centrífuga induce una fuerza centrífuga debida a l efecto de la inercia.
Sobre una masa puntual m. Esta fuerza es:
Insertando en esta ecuación la Vg: velocidad de sedimentación por gravedad (valor constante), llegamos
a la siguiente expresión:
A partir de la ec [2.50], podemos calcular el tiempo que tarda una partícula para recorrer una
determinada distancia de una en la centrífuga.
FUNCIONAMIENTO DE CENTRÍFUGAS TUBULARES
Una centrifuga tubular va a trabajar en semicontinuo. Entra corriente de alimentación por
la parte inferior y el sólido se va depositando en la pared conforme avanza la suspensión
sobre la centrífuga. El líquido que sale por la parte superior es un líquido clarificado.
Una vez transcurre cierto tiempo centrifugación y se ha acumulado sólidos en la pared de la centrífuga,
no se puede seguir operando. Hay que parar operación, limpieza y volver a operar (semicontínuo).
Considerando una partícula que entra por la parte inferior de la centrífuga, en la figura 2.25 vemos los
componentes del vector velocidad (VZ y VR) y su trayectoria:
La suma de los componentes VZ y VR da lugar al vector velocidad, cuya dirección será tangente a la
trayectoria.
Caudal teórico máximo o caudal de ruptura: caudal de suspensión que puede tratar la centrífuga →
ecuación obtenida integrando ec[2.56] entre {R=R1;z=0} y {R=R0;z=L}:
Consta:
A partir de ésta, mediante integración entre [R0, R1] y [0,a] podemos obtener el caudal máximo teórico o
caudal de ruptura de la centrífuga: caudal máximo que puede tratar la centrífuga.
Σ representa la superficie teórica que deberá tener un tanque de sedimentación para realizar la misma
separación que se produce en una centrífuga.
Σ como vemos, tiene valores muy altos, lo cual se relaciona con una gran dimensión del sedimentador
por gravedad equivalente. Con esto, podemos afirmar que una centrífuga es capaz de concentrar en un
espacio pequeño una superficie de sedimentación muy grande.
Diferentes expresiones matemáticas para el cálculo de sigma en función del tipo de centrífuga:
*EJEMPLO 9*
• Cálculo del rendimiento de una centrífuga
La teoría de la sigma no se cumple totalmente, de forma que necesita factores de corrección. Se define
como rendimiento respecto al caudal teórico
Realizando test preliminares en una centrífuga piloto, se puede hacer una idea del valor que se obtiene
de la variable Qreal/Σ.
Esta magnitud se utiliza como criterio de cambio de escala, ya que representa la velocidad de
sedimentación de las partículas y ésta es constante para una suspensión y Tª dada.
Para el escalado, hacen las pruebas en una centrífuga de planta piloto a la que se le impone una serie de
condiciones (o se le impone a la centrífuga industrial):
Bajo estas condiciones, se aplica la siguiente fórmula para la igualdad de factores de semejanza para el
cambio de escala:
De acuerdo con los catálogos de máquinas industriales, se especifica la centrífuga que tenga el valor de
sigma dado por la ecuación. La ecuación presupone que el rendimiento de las dos máquinas es el
mismo.