Documentos de Académico
Documentos de Profesional
Documentos de Cultura
Facultad de Medicina
Microbiología
Docentes:
AÑO 2021- II
Alumno: .........................................................
1
URP
Facultad de Medicina
Microbiología
INDICE
Seminarios (1 al 3) 76
2
URP
Facultad de Medicina
Microbiología
LABORATORIO 1
A. NORMAS DE BIOSEGURIDAD
Principio de bioseguridad:
1. Contención Primaria: es la protección del personal y del medio ambiente inmediato contra
la exposición a agentes infecciosos y/o productos químicos de riesgo. Es provista por una
buena técnica microbiológica y el uso apropiado del equipo del equipo de seguridad. El
uso de vacunas aumenta el nivel de protección personal.
2. Contención Secundaria: es la protección del medio ambiente externo contra la exposición
de material infeccioso. Se logra por una combinación de las características de la
edificación y prácticas operacionales. Así prevenir el escape de éstos agentes al exterior.
1. Grupo de Riesgo I : Agestes con escaso riesgo individual y para la comunidad. Ejemplo:
Bacillus subtillis, Plasmodium.
2. Grupo de Riesgo II :Agentes que tienen riesgo individual moderado, pero limitado para la
comunidad. Ejemplo: Acinetobacter, Bordetella, Bartonella, Clostridium,
Corynebacterium, Escherichia coli, Listeria, Mycoplasma, Pseudomonas, Staphylococcus,
Treponema, Haemophylus, Campylobacter, Neisseeria, Salmonella, Shigella,
Streptococcus.
3. Grupo de Riesgo III . Agestes que presentan un riesgo individual elevado, pero limitado
para la comunidad. Ejemplo: Brucella, Histoplasma, Mycobacterium tuberculosis,
Paracoccidioides, yersinia pestis.
4. Grupo de Riesgo IV : Agestes que constituyen un alto riesgo para los indivisuos y para la
comunidad. Ejemplo: Virus de inmunodeficiencia humana. Virus de fiebres hemorrágicas,
Dengue
3
URP
Facultad de Medicina
Microbiología
4
URP
Facultad de Medicina
Microbiología
LABORATORIO 2
Instrucciones:
• Los estudiantes antes de iniciar la sesión verán la película: La tragedia de Louis Pasteur
• Link:
https://www.youtube.com/watch?v=LitDTG8l1GM&ab_channel=Fundaci%C3%B3nATALYC
5
URP
Facultad de Medicina
Microbiología
LABORATORIO 3
A. EXAMEN EN FRESO
1. Introducción
El examen en fresco tiene por finalidad apreciar el tamaño de las bacterias, que es del orden
de la micra (milésima de milímetro), su relación con las células humanas y algunas
características de interés para su identificación, como la movilidad o presencia de cápsula.
Este estudio se realiza mientras las bacterias se encuentran viables, en cultivos líquidos
jóvenes (menos de 18 horas de incubación) o en muestras biológicas recién obtenidas.
2. Materiales:
3. Procedimiento
4. Resultados
6
URP
Facultad de Medicina
Microbiología
B. OBSERVACIÓN DE CÁPSULA
1. Introducción
Esta estructura se puede observar con facilidad en forma indirecta utilizando tinta china, que
no penetra en las bacterias capsuladas, dejando un halo transparente alrededor del
microorganismo.
3. Procedimiento
4. Resultados
7
URP
Facultad de Medicina
Microbiología
C. COLORACIÓN DE VAGÓ
1. Introducción
Las espiroquetas no toman con facilidad los colorantes más usados en microbiología. Para
colorearlas se emplean las técnicas de Giemsa o impregnación argéntica. Una técnica
sencilla es la de Vago, que se describe.
2. Materiales
1. Mondadientes
2. Solución de Mercurio cromo al 2 % (mertiolate coloreado)
3. Solución de Violeta de Genciana al 1 %
4. Láminas portaobjetos.
5. Guantes descartables
6. Bocal con desinfectante
3. Procedimiento
4. Resultados
8
URP
Facultad de Medicina
Microbiología
LABORATORIO 4
A. COLORACIÓN DE GRAM
1. Introducción
Es la coloración mas empleada en bacteriología, puesto que permite agrupar a las bacterias
en dos categorías, las Gram Positivas, que son las que retienen el colorante violeta de
genciana y las Gram Negativas, que pierden el colorante primario por acción del decolorante
(alcohol-acetona), para luego teñirse con un colorante básico de contraste (rojo). Esta
coloración tiene relación con la composición química de la pared y se describen varias
modificaciones.
2. Materiales
3. Procedimiento
4. Resultados
Hacer esquema de la morfología y coloración de las bacterias. Las Gram positivas se tiñen
de color violeta y las Gram negativas de color rojo.
9
URP
Facultad de Medicina
Microbiología
B. OBSERVACIÓN DE ESPORAS
Algunos grupos bacterianos, como los miembros de los géneros Clostridium y Bacillus, tienen
la capacidad de formar esporas, estructura que les otorga resistencia y supervivencia a la
bacteria, en condiciones ambientales adversas de temperatura, de nutrición, de pH, etc.
Las técnicas de coloración son un tanto engorrosas, pero se les puede observar en las
coloraciones de Gram o Azul de metileno, como espacios vacíos dentro de la bacteria.
Se presentan láminas con frotices de heces, coloreadas con Gram, donde se observan
esporas que dilatan a los bacilos (deformantes), características del género Clostridium. Así
mismo se presentan frotices de cultivos envejecidos de Bacillus, con esporas que no
deforman a los gérmenes.
CUESTIONARIO
DESARROLLO
10
URP
Facultad de Medicina
Microbiología
LABORATORIO 5
A. COLORACIÓN DE ZIEHL-NEELSEN
1. Introducción
La coloración de Ziehl-Neelsen utiliza fucsina con fenol, que con la ayuda del calor se facilita
la penetración del colorante en la pared celular de la bacteria. Como decolorante emplea una
mezcla de alcohol con ácido clorhídrico. Luego las bacterias que retienen el colorante se
observan de color rojo, denominándoles bacilos ácido alcohol resistentes. Útil para el
diagnóstico de enfermedades como la tuberculosis y la lepra.
2. Materiales
1. Juego de colorantes para Ziehl-Neelsen
a. Solución de Fucsina fenicada
b. Solución de alcohol-ácido al 3 %
c. Solución de Azul de metileno 5%
2. Mechero de alcohol
3. Muestra de esputo
4. Guantes descartables
5. Bocal con desinfectante
3. Procedimiento
Hacer esquema de las estructuras celulares observadas de color azul y resaltar los bacilos
ácido alcohol resistentes, de color rojo con morfología característica.
11
URP
Facultad de Medicina
Microbiología
CUESTIONARIO:
DESARROLLO
12
URP
Facultad de Medicina
Microbiología
LABORATORIO 6
1. Introducción
La mayoría de las bacterias son capaces de desarrollar “in vitro”, en medios inertes provistos
de sustancias nutritivas, y condiciones apropiadas de pH, temperatura, oxígeno o anhídrido
carbónico. Los únicos grupos bacterianos que crecen in vitro solo en cultivos celulares, son
las Chlamydias y las Rickettsias. Se debe señalar que Treponema pallidum y Mycobacterium
leprae no desarrollan in vitro.
Según la necesidad de oxígeno las bacterias pueden ser Aerobias estrictas, que desarrollan
sólo en presencia de oxígeno, Anaerobias facultativas, que crecen en presencia o ausencia
de oxígeno, Anaerobias estrictas, que sólo crecen en ausencia de oxígeno y las Microaerófilas
que desarrollan con bajas tensiones de oxígeno.
Metabolismo bacteriano
Los microorganismos realizan diversas reacciones bioquímicas para su crecimiento. Algunas
de estas reacciones corresponden a sistemas enzimáticos codificados por genes
cromosómicos, que permite la identificación del género o especie bacteriano. Otras veces
excretan compuestos, enzimas o toxinas, que son dañinos para el organismo humano y
amerita demostrar su presencia, para identificar la especie patógena.
La ubicación de un grupo bacteriano como familia, género o especie, depende en gran medida
de la capacidad metabólica frente a sustratos definidos (marcadores). A éste estudio se
denomina “biotipo” bacteriano. Dentro de una especie bacteriana puede haber diferencias
antigénicas entre cepas, y constituyen los “serotipos”.
13
URP
Facultad de Medicina
Microbiología
a) Utilización del carbohidrato lactosa: la bacteria lo transforma en ácido pirúvico, que acidifica
el medio; cambio de pH que puede ser demostrado a su vez, por cambio de color del indicador
rojo de fenol (amarillo en ácido)
b) Utilización del aminoácido triptófano, con la producción del metabolito Indol. Que se
demuestra por la reacciona con el p-dimetil amino benzaldehído, originando un compuesto
de color rojo soluble en alcohol amílico.
d) Pocas bacterias productoras de pigmento son patógenas para el ser humano, luego esa
característica es útil para su reconocimiento. Ejemplo: Staphylococcus aureus, Pseudomonas
aeruginosa y Mycobacterium atípicos.
2. Materiales: (Demostrativo)
14
URP
Facultad de Medicina
Microbiología
3. Procedimiento:
Tamaño
Forma
Superficie
Elevación
Borde
Consistencia
Cromogénesis
15
URP
Facultad de Medicina
Microbiología
C. METABOLISMO BACTERIANO
b. Metabolismo de Lactosa
d. Movilidad bacteriana
e. Producción de H2S
(a partir de aminoácido azufrado)
f. Observar la hemólisis
16
URP
Facultad de Medicina
Microbiología
CUESTIONARIO:
1. Para agrupar a las bacterias por el biotipo, qué procedimiento debo seguir?
2. ¿Qué interés tiene para el campo médico evaluar la capacidad de una bacteria en
producir enzimas, toxinas o metabolizar determinado sustrato?
3. ¿Cuál es la finalidad de conocer las características de una colonia bacteriana?
4. Defina usted el concepto de colonia bacteriana.
5. Describa usted su concepto de un medio de cultivo (características y utilidad)
DESARROLLO
17
URP
Facultad de Medicina
Microbiología
LABORATORIO 7
1. Introducción
El calor húmedo (baño maría hirviendo): necesita periodos superiores a 20 minutos para
destruir a las bacterias vegetativas.
A: CALOR HÚMEDO
1. Materiales:
2. Procedimiento:
18
URP
Facultad de Medicina
Microbiología
3. Resultados:
La presencia de colonias indica desarrollo bacteriano (viabilidad). Las zonas marcadas con
“0”, son los controles de viabilidad, donde siempre debe haber desarrollo.
Registrar el desarrollo bacteriano en función a la cantidad de colonias formadas:
a) Escaso (menos de 10 colonias) … 1+
b) Moderado (10 a 50 colonias) … 2+
c) Abundante (incontables) … … 3+
.
Cero minutos
1 minuto
2 minutos
5 minutos
Son radiaciones de una longitud de onda de 300 nm, que tienen propiedad bactericida cuando
actúan directamente sobre las bacterias. Se les emplea para esterilizar ambientes quirúrgicos
y cubículos de laboratorio, para eliminar las bacterias suspendidas en el aire. Estas
radiaciones no tienen la capacidad de atravesar cualquier elemento que se interponga (papel,
vidrio, etc.), luego tienen su limitación.
19
URP
Facultad de Medicina
Microbiología
1. Material
2. Procedimiento
3. Resultados
área cubierta de
las radiaciones
C. FILTRACIÓN (Demostrativo)
20
URP
Facultad de Medicina
Microbiología
LABORATORIO 8
1. Introducción:
Numerosos compuestos químicos, tanto inorgánicos como orgánicos, tienen actividad lesiva
para los microorganismos, propiedad que se utiliza en medicina para destruir a las bacterias
potencialmente patógenas para el organismo. A los que se aplican tópicamente con la
finalidad de prevenir una infección, se les denomina “antisépticos”. Los agentes químicos que
destruyen gérmenes patógenos se les denomina “desinfectantes”.
2. Materiales:
3. Procedimiento:
1. Dividir una placa petri con Agar en cuatro áreas : Control (C), Mertiolate (M) ,
Aseptil Rojo (AR) y Alcohol (A)
2. Con la ayuda de asa de siembra, depositar una asada de la suspensión bacteriana
y dispersarla zona marcada con “C” control de viabilidad
3. A cada solución de desinfectante, añadirle 5 gotas de la suspensión bacteriana.
Dejar actuar durante 5 minutos dicha mezcla.
4. Seguidamente tomar una asada de cada mezcla y dispersarla en la superficie del
agar rotuladas con “M”, “AR”y “A”, respectivamente.
5. Esperar unos minutos hasta que el inóculo se seque e incubar la placa a 37°C
durante 24 a 48 horas.
6. Guantes descartables
4. Resultados:
Comparar el desarrollo y número de colonias de la zona de control con los de la mezcla con
desinfectantes.
21
URP
Facultad de Medicina
Microbiología
Microorganismo: Staphylococcus sp
Comentari0
---------------------------------------------------------------------------------------------------------------------
------------------------------------------------------------------------------------------------------------
B. EVALUAR LA CONCENTRACIÓN DEL ANTISÉPTICO
1. Material
2. Procedimiento
1 minuto
Comentario
---------------------------------------------------------------------------------------------------------
22
URP
Facultad de Medicina
Microbiología
LABORATORIO 9
ANTIBIOGRAMA
1. Introducción
La actividad de los antibióticos y quimioterápicos debe ser evaluada “in vitro” para obtener la
información que permita decir si un microorganismo es susceptible o resistente a determinado
producto y pueda ser utilizado con éxito en el paciente.
La concentración mínima inhibitoria (MIC) es una medida que representa la mínima cantidad
de quimioterápico necesaria para impedir el desarrollo bacteriano.
Dos son los procedimientos empleados para obtener ésta información, el método de dilución
en tubo o placa y el de disco difusión en agar.
2. Material
1. Se presenta una gradilla con diez tubos en los que se han realizado diluciones
sucesivas, al medio, a partir de una solución de antibiótico con 200 microgramos.
Con ello se han obteniendo concentraciones decrecientes de 100 – 50 – 25 – 12,5
– 6,25 – 3.12 – 1.56 – 0.78 – y 0.39 mcg/ml. del antibiótico.
El último tubo no contiene antibiótico. (control de viabilidad de la bacteria)
A cada tubo se le ha añadido 0.5 ml de un cultivo de 18 horas de la bacteria en
estudio. Toda la gradilla de tubos ha sido incubada a 37°C durante 24 horas.
3. Procedimiento
Tubo 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
desarrollo
MIC:
23
URP
Facultad de Medicina
Microbiología
1. Materiales
2. Procedimiento:
5. Resultado
24
URP
Facultad de Medicina
Microbiología
Ampicilina AM 10 - 13 14 – 16 + 17
Amikacina AK 30 - 15 16 – 16 + 17
Ac nalidíxico AN 30 - 13 14 - 18 + 19
Cefalotina CF 30 - 14 15 – 17 + 18
Cefoxitina CTX 30 - 15 16 – 20 + 21
Ceftriaxona CRO 30 - 13 14 – 20 + 21
Cloranfenicol C 30 - 14 15 – 17 + 18
Kanamicina K 30 - 13 14 – 17 + 18
Nitrofuranos FD 300 - 14 15 – 16 + 17
Sulfatrimetoprim SXT 231 - 10 11 – 15 + 16
Ciprofloxacina CIP 5 - 15 16 – 20 + 21
Tetraciclina T 30 - 14 15 – 18 + 19
Penicilina P - 18 19 – 27 + 28
25
URP
Facultad de Medicina
Microbiología
CUESTIONARIO:
DESARROLLO
26
URP
Facultad de Medicina
Microbiología
LABORATORIO 10
Protocolos 1,2,3
27
URP
Facultad de Medicina
Microbiología
LABORATORIO 11
STAPHYLOCOCCUS
1. Introducción
2. Materiales (Demostrativo)
3. Procedimiento
Coagulasa
28
URP
Facultad de Medicina
Microbiología
STREPTOCOCCUS
1. Introducción
2. Materiales (Demostrativo)
3. Procedimiento
4. Resultados
29
URP
Facultad de Medicina
Microbiología
Enterococcus
30
URP
Facultad de Medicina
Microbiología
31
URP
Facultad de Medicina
Microbiología
LABORATORIO 12
ENTEROBACTERIAS
1. Introducción
Son un grupo de microorganismos que habitan el intestino del hombre y de los animales, la
materia orgánica en descomposición, el suelo y como contaminantes del agua. La mayoría
de las especies son saprofitas u oportunistas; algunas especies son agentes causales de
infecciones sistémicas (Salmonella typhi) o intestinales (Shigella sp); y otras están
relacionadas con las infecciones nosocomiales.
Estos gérmenes son bacilos Gram negativos, no esporulados, que desarrollan fácilmente en
los medios de cultivo. Todas fermentan la glucosa y poseen una diversidad de enzimas que
permite clasificarlos en géneros de acuerdo al substrato metabolizado (biotipo). Carecen de
la enzima citocromo oxidasa.
Para el aislamiento e identificación de las enterobacterias se emplean medios de cultivo cuya
composición permite aislarlas sólo a las especies de éste género.
A. AISLAMIENTO
2. Materiales
3. Procedimiento
32
URP
Facultad de Medicina
Microbiología
B IDENTIFICACIÓN
1. Materiales (Demostrativo)
1. Tubos con medios diferenciales: TSI (tres azúcares y hierro) y LIA (lisina hierro y
agar), Citrato y Urea y agar movilidad, sembrados con las cepas de Escherichia
coli, Klebsiella, Proteus, Salmonella y Shigella.
2. Procedimiento
TSI LIA
Color negro:
producción de SH2 Color negro (H2S)
Desaminación (acidez)
Color guinda
3. Resultados
33
URP
Facultad de Medicina
Microbiología
Mac
Conkey
SS agar
Glucosa
Gas
Lactosa
H2S
Desami-
nación
Decarboxi-
lación
Citrato
Urea
Movilidad
34
URP
Facultad de Medicina
Microbiología
LABORATORIO 13
EXPOSICION DE PROTOCOLOS 1, 2 y 3
35
URP
Facultad de Medicina
Microbiología
LABORATORIO 14
Protocolos: 4,5 y 6
36
URP
Facultad de Medicina
Microbiología
LABORATORIO 15
A. VIBRIOS
1. Introducción
Todos ellos son de forma bacilar recta o curvada, gram negativos y con movilidad polar.
Desarrollan con facilidad en los medios de cultivo, fermentan glucosa y poseen una potente
enzima citocromo oxidasa. Las especies patógenas más frecuentes en el ser humano son
Vibrio cholerae, Vibrio parahaemolíticus y Aeromonas.
2. Materiales (Demostrativo)
1. Fritices de heces de pacientes con enterocolitis por cólera, coloreados con gram.
2. Cultivo de Vibrio cholerae en caldo agar TCBS (sacarosa, bilis, citrato y thisulfato)
3. Cultivo de Vibrio parahemolíticus en agar TCBS
3.Procedimiento y resultados
B. CAMPYLOBACTER
1. Introducción
37
URP
Facultad de Medicina
Microbiología
2. Materiales (Demostrativo)
3.Resultado
Gram Vagó
C. HELICOBACTER
1. Introducción
La especie Helycobacter pylori se asocia con gastritis y úlcera gástrica, para el diagnóstico
se debe investigar su presencia en biopsias o por la producción de ureasa.
2.Materiales:(Demostrativo)
1. Cortes histológicos de mucosa gástrica
3. Procedimiento y resultados
38
URP
Facultad de Medicina
Microbiología
CUESTIONARIO
DESARROLLO
39
URP
Facultad de Medicina
Microbiología
“VACUNAS”
40
URP
Facultad de Medicina
Microbiología
LABORATORIO 16
1. Introducción
Microorganismos de diferentes géneros habitan en el medio ambiente o forman parte de la flora normal del
cuerpo humano. Son saprofitos, pero patógenos oportunistas. Un grupo de ellos, tienen en común la
incapacidad para metabolizar los carbohidratos por vía fermentativa, e incluye a Pseudomonas,
Acinetobacter, Alcalígenes, Cromobacterias, Flavobacterias, etc.
PSEUDOMONAS aeruginosa
2. Materiales (Demostrativo)
4. Resultados
Pseudomonas Acinetobacter
41
URP
Facultad de Medicina
Microbiología
1. Introducción
Los Lactobacillus son un grupo de gérmenes saprofitos, que tienen la capacidad de producir
ácido láctico, como producto final del metabolismo de los hidratos de carbono. La especie
Lactobacillus acidóphilus (bacilo de Doderlein) habita las vías genitales femeninas,
metaboliza el glucógeno y produce la acidez necesaria para evitar la contaminación vaginal
por bacterias entéricas.
Gardnerella: son bacilos que colorea variablemente con el gram, anaerobio facultativo, que
invade las células epiteliales vaginales, dando una imagen característica denominada células
clave (clu cells).
Mobiluncus: son bacilos curvados, en hoz, gram variable, anaerobios.
2. Materiales (Demostrativo)
3. Procedimiento y resultados
42
URP
Facultad de Medicina
Microbiología
1. Introducción
2. Materiales (Demostrativo)
3. Procedimiento
Colorear los frotices presentados con Gram y observar con lente de inmersión. Apreciar la
forma bacilar corta, gruesa y en empalizada
43
URP
Facultad de Medicina
Microbiología
LABORATORIO 17
A. BARTONELLA
1. Introducción
Los países andinos (Perú, Bolivia y Ecuador) comparten una enfermedad endémica en las
regiones andinas (zonas verrucógenas), que es transmitida por un mosquito hematófago
(Luszomia verrucarum) y produce la enfermedad de la bartonelosis.
La enfermedad tiene dos formas clínicas de presentación: la fase hemática, cuyo diagnóstico
se hace mediante la búsqueda de los microorganismos en los hematíes, por microscopía,
cultivos incubados a 29°C o con técnicas moleculares; y la fase histioide dérmica (verruga),
que se diagnostica mediante biopsia y estudios con técnicas moleculares.
2.Materiales (Demostrativo)
3.Procedimiento y resultados
44
URP
Facultad de Medicina
Microbiología
B. BRUCELLA
1. Introducción
Este microorganismo es muy pequeño, tipo coco-bacilar, Gram negativo, desarrolla con
lentitud en los medios de cultivo (3 a 7 días) dando colonias características.
2. Materiales (Demostrativo)
3. Procedimiento
Gram Hemocultivo
45
URP
Facultad de Medicina
Microbiología
D. LISTERIA
1. Introducción
Listeria monocitógenes es una especie bacteriana saprofita, que habita en el intestino de los
animales y en los vegetales como contaminante. La infección humana está relacionada a la
ingesta de alimentos, que luego hace diseminación sanguínea con ubicación en útero,
placenta y sistema nervioso. Los cuadros clínicos son aborto, sepsis neonatal y meningitis en
adultos inmuno comprometidos.
La identificación se orienta por la morfología bacilar corta, gram positivo, desarrolla en agar
sangre produciendo una discreta hemólisis. Lo más característico es la capacidad de
desarrollar a temperatura de refrigeración (5°C) y poseer movilidad sólo a 22°C y no a 37°C
2. Materiales (Demostrativo)
3. Procedimiento
37 °C 22 °C Gram
46
URP
Facultad de Medicina
Microbiología
CUESTIONARIO
DESARROLLO
47
URP
Facultad de Medicina
Microbiología
LABORATORIO 18
A. NEISSERIA gonorrhoeae
1. Introducción
El género agrupa a cocos gram negativos, que se agrupan en pares y que poseen la enzima
citocromo oxidasa. Son exigentes para el desarrollo in vitro, para lo cual se emplea el medio
de “Tayer Martín”. N. gonorrhoeae es una bacteria que durante el proceso infeccioso induce
la respuesta inflamatoria intensa (pus).
2. Materiales (Demostrativo)
3. Procedimiento
Citocromo oxidasa
48
URP
Facultad de Medicina
Microbiología
B. TREPONEMA pallidum
1. Introducción
El Treponema pallidum, agente causal de la sífilis o Lues, es una espiroqueta que no cultiva
en medios inertes; luego el diagnóstico se fundamenta en la observación de la bacteria en las
lesiones y la demostración de anticuerpos en sangre.
El examen microscópico con condensador de campo oscuro, se realiza a partir de las lesiones
dérmicas, en la zona de inoculación, denominado chancro duro (primera etapa) y en las
formaciones papulosas en toda la piel, denominada roseola (segunda etapa).
Para la demostración de anticuerpos se dispone de dos categorías de pruebas, las que usan
antígeno NO treponémico: VDRL, RPR, Kahn, Wasserman, de gran sensibilidad pero poca
especificidad y las que utilizan un treponema como antígeno: fluorescencia (FTA),
inmovilización del treponema (ITP), denominadas confirmatorias. Las pruebas de ELISA
emplea antígeno de treponema.
2. Materiales
3. Procedimiento
1. Depositar una gota (0.05 ml) de suero problema en una lámina o tarjeta.
2. Añadir una gota de antígeno y mezclar por rotación durante 3 minutos
3. Observar la formación de grumos o pérdida de la homogeneidad de la suspensión
cuando la reacción es positiva (precipitación)
4. Bocal con desinfectante
49
URP
Facultad de Medicina
Microbiología
C. HAEMOPHILUS ducreyi
1. Introdución
2. Material (Demostrativo)
3. Procedimiento
50
URP
Facultad de Medicina
Microbiología
LABORATORIO Nº19
EXPOSICION DE PROTOCOLOS: 4, 5 y 6
51
URP
Facultad de Medicina
Microbiología
LABORATORIO 20
MYCOBACTERIUM
1. Introducción
El género Mycobacterium incluye a dos especies patógenas para el hombre, que producen
enfermedades de importancia en Salud Pública, son la tuberculosis y la lepra.
Estos micoorganismos tiñen con una coloración específica, la de Ziehl-Neelsen, por lo que se
utiliza como medio diagnóstico en muestras clínicas, denominada “baciloscopía”. La
observación microscópica nos aporta la presencia de bacilos ácido alcohol resistentes.
Además del M. tuberculosis y M. bovis se describen los “atípicos”, que son clasificados en
cuatro grupos de acuerdo a la velocidad de desarrollo y formación de pigmento:
A. MICROSCOPÍA
1. Materiales
3. Procedimiento y resultados
52
URP
Facultad de Medicina
Microbiología
B. CULTIVO
1. Materiales (Demostrativo)
53
URP
Facultad de Medicina
Microbiología
LABORATORIO 21
1. Introducción
El diagnóstico de las enfermedades producidas por virus se ha fortalecido con los avances
en los conocimientos y las técnicas en inmunología y biología molecular. La información que
se obtiene al confeccionar la historia clínica del paciente es de mucha importancia, ya que
permiten llegar a un diagnóstico presuntivo, orientador para los estudios en el laboratorio.
2. Examen microscópico
Si bien los virus tienen un tamaño muy pequeño que no pueden ser observados con el
microscopio de luz, algunos virus tienen la capacidad de formar estructuras intracelulares
denominadas “cuerpos de inclusión”, que se pueden reconocer con el microscopio
corriente, y son patognomónicas de ciertos virus. Se pueden observar directamente en el
tejido afectado (rabia) o en cultivos celulares, para lo cual se empelan las coloraciones
histológicas clásicas, o con la ayuda de anticuerpos específicos marcados con fluoresceína.
Citomegalovirus rabia
54
URP
Facultad de Medicina
Microbiología
3. Cultivo
Para cultivar los virus “in vitro” y aislarlos, se requiere previamente preparar cultivos de células
donde se puedan multiplicar, y poder observar los cambios celulares producto de la infección
viral, denominado “efecto citopático”. Cuando tienen efecto lítico se observan cambios: a)
disminución del tamaño celular, b) redondeamiento, c) picnosis y d) lisis.
El primer tejido utilizado para el desarrollo de un virus fue la membrana corioalantoidea del
embrión de pollo (Virus de influenza, Herpes). Los cultivos celulares primarios, son los que
provienen de células de fibroblastos de embrión, riñón o placenta, que se reproducen in vitro
sólo uno o dos pasajes, y luego mueren. En cambio los más usados son los de líneas
continuas, que provienen de células tumorales adaptadas en el laboratorio y se multiplican
indefinidamente (Hela, Hep2, Vero, etc.).
4. Identificación
Para identificar un virus que ha producido efecto citopático en un cultivo celular, debemos
disponer de los anticuerpos específicos de cada especie viral, el cual al añadirlo a un nuevo
cultivo, inhibirá el efecto citopático u otra propiedad de dicho virus (hemaglutinación).
Las técnicas de inmuno fluorescencia permiten reconocer la presencia del virus en forma
específica. Pueden ser en forma directa (virus + anticuerpo) o en forma indirecta (virus +
anticuerpo del paciente + antiglobulina humana marcada con fluoresceina). Con éste
concepto se empelan diversas técnica inmunológicas: aglutinación de latex, enzima inmuno
ensayo, radio inmuno ensayo e inmuno precipitación.
Las técnica moleculares (reacción en cadena de la polimerasa, sondas de ADN, etc.) son de
gran ayuda, por su especificidad, sensibilidad y rapidez.
55
URP
Facultad de Medicina
Microbiología
56
URP
Facultad de Medicina
Microbiología
LABORATORIO 22
57
URP
Facultad de Medicina
Microbiología
LABORATORIO 23
HONGOS AMBIENTALES
1. Introducción
Los hongos ambientales son los que viven a expensas de la materia inerte, no dependen de
células vivas. La mayoría son saprofitos, algunas especies son fuente de antibióticos,
enzimas, y otros pueden actuar como alergenos ocasionando sensibilización.
2. Materiales (Demostrativo)
3. Procedimiento
4. Resultados
:
colonias pulverulentas de color azul verdoso.
Hifas tabicadas con conidióforos ramificados
en el extremo distal.con la apariencia de pincel
y conidias dispuestas en cadena .
:
colonias filamentosas de color blanco, amarillo,
verde, marrón o negro.
Hifas tabicadas con ensanchamiento en su extremo
distal que da origen a esterigmas de donde nacen
las conidias en cadena.
58
URP
Facultad de Medicina
Microbiología
:
colonias algodonosas de color rosado.
Hifas tabicadas que dan origen a
conidióforos y macroconidias multiseptadas
fusiformes y curvadas.
:
colonias algodonosas blanco grisáceas con puntos
negros (esporangios).
Hifas no septadas agrupadas como raíces, a partir
de las cuales se proyectan filamentos largos
(esporangióforo) formando en su extremo una estructura
redonda oscura que contiene gran cantidad de esporas.
:
colonias cremosas de color rosado.
Al microscopio se observan células ovoides o redondas.
59
URP
Facultad de Medicina
Microbiología
HONGOS LEVADURIFORMES
1. Introducción
Las levaduras son hongos que se caracterizan porque sus células fundamentales son
redondas u ovoides, y se multiplican por gemación. Algunas especies forman parte de la flora
normal del ser humano, algunas colonización un tejido y pueden producir infección.
En patología humana se reconocen a los agentes: Cándida albicans, que produce micosis
superficiales y sistémicas, Criptococcus neoformans, que produce meningoencefalitis y
Pityrosporum ovale, causante lesiones superficiales o pitiriasis versicolor.
2. Materiales (Demostrativo)
3. Procedimiento
1. Observar con objetivo de inmersión el frotis de flujo vaginal. Apreciar las levaduras
y los pseudomicelios.
2. Describir las características del cultivo de Cándida albicans.
3. Hacer una preparación en fresco a partir de la suspensión de cándida en suero.
Observar con objetivo 40X y apreciar las prolongaciones digitiformes, característico
de la Cándida albicans
4. Observar las preparaciones en fresco con tinta china, apreciar la presencia de
cápsula del Critococcus neoformans como un halo transparente alrededor de las
esporas.
4. Resultados
60
URP
Facultad de Medicina
Microbiología
61
URP
Facultad de Medicina
Microbiología
LABORATORIO 24
HONGOS DERMATOFITOS
1. Introducción
Los hongos filamentosos se caracterizan porque la célula base es tubular, llamada “hifa”, el
conjunto de éstas forman el micelio. Algunas hifas se especializan y se transforman en
elementos reproductores, las “conidias”. Las características morfológicas de hifas y conidias
dan el nombre del hongo.
Los dermatofitos son los hongos filamentosos que tienen predilección por la queratina (piel,
pelo y uña). Tres géneros patógenos son de interés: Trichophyton, Microsporum y
Epidermophyton, agentes causales de tiña corpis, capitis, cruris, pedis y onicomicosis.
2. Materiales (Demostrativo)
3. Procedimiento
Toma de muestra: En lesiones de piel se obtiene por raspado de los bordes de la lesión. En
cuero cabelludo se retiran los pelos de la zona afectada. Las uñas son previamente
humedecidas con alcohol, luego son recortadas y como raspar el lecho ungueal.
4. Resultados.
62
URP
Facultad de Medicina
Microbiología
TRICHOPHYTON rubrum:
Colonias algodonosas de color blanco
con pigmento rojo en el reverso del tubo.
Hifas septadas con microconidias
Piriformes, sésiles.
TRICHOPHYTON mentagrophytes:
Colonias pulverulentas granulosas
yesosas, blanquecinas con pigmento
amarillo pardusco en el reverso.
Hifas septadas con abundantes
microconidias esféricas en racimos
TRICHOPHYTON tonsurans:
Colonias membranosas crateriformes,
acartonadas.
Hifas septadas en raqueta, microconidias
piriformes y clamidosporas.
MICROSPORUM canis:
Colonia blanquecina con pigmento
amarillo naranja en el reverso.
Hifas septadas con macroconidias
elípticas o fusiformes, con tabiques
transversales y excrecencias en la
superficie.
63
URP
Facultad de Medicina
Microbiología
MICROSPORUM gypseum:
Colonia algodonosa o finamente
pulverulenta de color blanco cremoso.
Hifas septadas con macroconidias de
superficie lisa con tabiques transversales.
EPIDERMOPHYTON floccosum:
Colonias aterciopeladas o finamente
pulverulentas, con pliegues en el centro,
de color amarillo azufre.
Hifas septadas con macroconidias grandes
con el extremo distal romo y ancho,
tabicadas transversalmente.
64
URP
Facultad de Medicina
Microbiología
CUESTIONARIO:
DESARROLLO
65
URP
Facultad de Medicina
Microbiología
LABORATORIO 25
HONGOS DIMÓRFICOS
1. Introducción
2.Materiales (Demostrativo)
3. Procedimiento y Resultados
1 Observar las características de las colonias de cada una de las tres especies de
hongos dimórficos presentados.
2 Observar al microscopio, con objetivo de 40X, las preparaciones en fresco
presentadas.
3 Observar con objetivo de inmersión las preparaciones histológicas presentadas
Paracoccidioides brasiliensis
66
URP
Facultad de Medicina
Microbiología
Histoplasma capsulatum
Sporotrix schenkii :
67
URP
Facultad de Medicina
Microbiología
LABORATORIO 26
Instrucciones:
• Link:
https://www.youtube.com/watch?v=FmB8kWQjzxI
68
URP
Facultad de Medicina
Microbiología
1.- Definición: Los alumnos desarrollarán un proyecto de investigación. Los temas a investigar se
indican a continuación y, están en relación a un diagnóstico microbiológico en muestras definidas.
Para ello, el alumno utilizará los conocimientos ya adquiridos sobre: planteamiento del problema,
objetivos, metodología, resultados y comentario comparativo con bibliografía nacional y/o extranjera.
2.- Participación: En las primeras semanas del curso, cada Profesor de Prácticas distribuirá, al azar,
los temas a investigar. Los protocolos serán desarrollados, por afinidad, cada dos (02) alumnos.
3.- Los materiales necesarios para el desarrollo del protocolo serán proporcionados por el
Laboratorio del curso de Microbiología. La metodología a emplear se describe en ésta Guía.
5. Resultados: Los alumnos harán una presentación audio visual de su investigación. Las fechas de
las presentaciones están definidas en el silabo. Cada grupo tendrá 30 minutos para exponer su
trabajo y entregará a su vez un informe escrito sobre el mismo.
69
URP
Facultad de Medicina
Microbiología
PROTOCOLO 1
Introducción
En la mucosa nasal se ubican numerosas bacterias y virus saprofitos. También es la puerta
de entrada de bacterias y virus patógenos, donde muchos de ellos colonizan el área y condicionan
al huésped a ser un portador sano de dicho patógeno. Es el caso de la especie Staphylococcus
aureus. El presente estudio permitirá conocer la población de estudiantes que son portadores sanos
de ésta bacteria patógena-
Materiales
Procedimiento
• Se tomará a varios alumnos muestra de exudado nasal, para lo cual el profesor hará la
demostración respectiva.
• Frotar (siembra) el hisopo en un tercio de la superficie de los medios de cultivo, luego
con ayuda del asa de platino concluir la siembra por agotamiento.
• Rotular e incubar a 37ºC durante 48 horas.
Interpretación
Conclusiones
Los alumnos a los que se les ha aislado colonias manitol y coagulasa positivas, son
portadores sanos de Staphylococcus aureus.
Estos alumnos deberán tomar medidas personales higiénicas y preventivas, necesarias
cuando se relacionen con personas debilitadas, en tratamiento inmuno supresor o estén
hospitalizadas en cuidados intensivos, con la finalidad de evitar contagiarlos.
Registro:
70
URP
Facultad de Medicina
Microbiología
PROTOCOLO 2
Introducción:
En la mucosa faríngea habitan, normalmente, numerosas bacterias (aerobias y anaerobias),
así como virus; incluso hay bacterias presentes que pertenecen a géneros patógenos, pero sin
factores de virulencia, como la cápsula. El cuadro clínico “faringitis” es una patología muy frecuente,
y en la mayoría de casos el agente causal es un virus. El estudio microbiológico del exudado faríngeo
se justifica plenamente cuando se sospecha en la presencia de Streptococcus beta hemolítico del
grupo A (pyógenes), por su agresividad de virulencia y la capacidad, de algunos serotipos, de
ocasionar la enfermedad post estreptocócica denominada “Fiebre reumática”.
Materiales
• Hispo de algodón de 6 pulgadas, estéril (1)
• Tubo con 15 ml con agar nutritivo licuado (50ºC) (1)
• Tubo con 5 ml de caldo nutritivo estéril (1)
• Tubo con 1.0 ml de sangre estéril (1)
• Placa de petri estéril (1)
• Guantes descartables
• Mascarilla
• Bocal con desinfectante
Procedimiento
• Se tomará a un alumno muestra de exudado faríngeo, para lo cual deberá abrir la boca
y pronunciar la letra “A”, para exponer la zona faringo-amigdaliana.
• Con la ayuda del hisopo frotar la zona expuesta y luego depositar el hispo en el tubo
con 5 ml de caldo nutritivo, rotarlo enérgicamente (muestra). Incubarlo a 37°C durante
30 minutos.
• Retirar del baño maría el tubo con agar licuado, añadirle una “asada” de la muestra,
taparlo y rotarlo entre las manos.
• Inmediatamente añadir 1.0 ml de sangre al tubo con agar licuado y muestra. Taparlo.
Rotarlo enérgicamente entre las manos, hasta la homogenización.
• En condiciones adecuadas (junto al mechero, sin hablar ni toser, etc.), destapar la
placa de petri vacía estéril y verter en ella el agar licuado con sangre y muestra. Tapar
y esperar que se solidifique.
• Rotular e Incubar a 37ºC durante 48 horas.
Interpretación
Observar el desarrollo de colonias dentro de agar.
• Con ayuda del microscopio estereoscópico, buscar colonias aisladas, describirlas y
apreciar el comportamiento con la sangre, si hay hemólisis total (beta) o parcial (alfa).
• Las colonias beta hemolíticas deben resembrarse en caldo nutritivo, incubar a 37°C
por 24 horas y luego subcultivarlas en agar sangre, depositar una disco con
bacitracina, incubar a 37°C por 24 horas. Los S. pyógenes son sensibles a la
bacitracina.
Registro
71
URP
Facultad de Medicina
Microbiología
PROTOCOLO 3
Introducción:
La orina normalmente es estéril, al ser evacuada de la vejiga, pasa por la uretra y genitales
externos, donde se contamina con bacterias saprofitas habitantes de la zona. Por esa razón, para
realizar un cultivo de orina, se debe lavar los genitales externos de manera prolija y el número de
bacterias cultivadas debe ser superior a 100,000 por mL de orina. Cuando el número de bacterias es
inferior a 10,000 por mL, se debe considerar como bacterias contaminantes de toma de muestra. Y
cuando la cifra encontrada está en el rango intermedio, la interpretación debe considerar factores
clínicos (fiebre, disuria, piuria, etc.), de otra manera el estudio debe repetirse.
Materiales
Procedimiento
• Toma de la muestra: La muestra debe ser obtenida previa higiene genital. Debe ser
procesada en las dos primeras horas de emitida, de no ser posible conservarla a 5 °C
hasta por 48 horas.
• Siembra: Tomar una asada de la orina y sembrarla, haciendo estrías, en la superficie de
los medios de cultivo.
• Observación microscópica: hacer un frotis de la orina y colorearla con Gram.
Interpretación
Registro
72
URP
Facultad de Medicina
Microbiología
PROTOCOLO 4
AGUA POTABLE
1 --- 1 7 3 1 --- 43
1 1 --- 7 3 1 1 75
1 1 1 11 3 1 2 120
1 2 --- 11 3 2 --- 93
2 0 1 14 3 2 2 210
2 1 1 20 3 3 1 460
2 2 0 21 3 3 2 1,100
2 2 1 28
73
URP
Facultad de Medicina
Microbiología
PROTOCOLO 5
Introducción:
Materiales
Procedimiento
Interpretación
Registro
74
URP
Facultad de Medicina
Microbiología
PROTOCOLO 6
Materiales
Procedimiento
A. Muestra de piel
• Humedecer el hisopo en el suero fisiológico
• Frotar la superficie de la piel (palma de manos) que se ha elegido, en forma enérgica
• Seguidamente inocular en la superficie del agar sangre, por dispersión y
agotamiento.
• Incubar la placa petri a 37°C durante 48 horas
B. Muestra de aire luego de tos
• Exponer una placa con agar sangre frente al aire que se expele luego de un acceso
de tos.
• Realizar el procedimiento a dos distancias: 50 cm y 2 metros
Interpretación
Registro
75
URP
Facultad de Medicina
Microbiología
SEMINARIO 1
Temario:
CONCEPTOS:
1. Bactericida
2. Bacteriostático
3. Resistencia cruzada
76
URP
Facultad de Medicina
Microbiología
SEMINARIO 2
VACUNAS
Temario:
2. Clasificación,
77
URP
Facultad de Medicina
Microbiología
SEMINARIO 3
Temario:
6. Definición de SIDA.
78
URP
Facultad de Medicina
Microbiología
11. Borrelia burgdorferi Eritema migratorio y xompromiso articular Transmitido por garrapatas
79
URP
Facultad de Medicina
Microbiología
Enlatado.
21. Clostridium difficile Diarrea asociada al uso de antibióticos, Coloniza tracto intestinal
Septicemia. o postquirúrgicos.
32. Francisella tularensis Tularemia ulcero glandular, neumonía Picadura de garrapata. Contac-
to con conejos Infectados.
36. Legionella pneumophila Neumonía. Proceso tipo gripal Ancianos, inmuno deprimidos
37. Lepstospira interrogans Enfermedad de Weil: fiebre e ictericia Exposición a orina de roe-
dores, perros
80
URP
Facultad de Medicina
Microbiología
42. Mycobacterium leprae Lepra tuberculoide o lepromatosa Contacto íntimo con enfermo
81
URP
Facultad de Medicina
Microbiología
59. Streptococcus beta hemolítico Infecciones cutáneas, partes blandas Poblaciones diversas
--------------------------------------------------------------
82
URP
Facultad de Medicina
Microbiología
1ª SEMANA
1. Contribución de Luis Pasteur a la Microbiología
2. Contribución de Robert Koch a la Microbiología
3. Contribución de Alejandro Fleming a la Microbiología
4. Contribución de Howard Ricketts a la Microbiología
5. Contribución de Jaques Monod a la Microbiología
2ª SEMANA
1. Fundamento de coloración Gram
2. Señale seis (06) bacteria grampositivas
3. Señale seis (06) bacterias gramnegativas
4. Significado médico de que la bacteria infectante forme espora
5. Señale tres (03) bacterias de importancia médica que tengan movilidad polar
3ª SEMANA
1. Señale dos (02) bacterias que tengan vida intracelular obligada y por que?
2. Señale un microorganismos termófilo de gran utilidad en diagnóstico médico
3. Señale dos (2) bacterias que vivan en medios hipertónicos en cloruro de sodio, y pueden ser
patógenas para el ser humano-
4. Señale tres (3) bacterias productoras de pigmento y patógenas para el hombre.
5. Señale la bacteria productora de ácido láctico, necesario para la vida humana
4ª SEMANA
1. Mencione los diversos niveles de la bacteria donde actúan los antibióticos.
2. Utilidad del conocimiento del MIC
3. ¿Qué prefiere administrarle usted a un paciente, un Bactericida o un Bacteriostático?
4. ¿Qué significa cuando a una bacteria se le denomina cepa SARM?
5. ¿Qué significa cuando a una bacteria se le denomina cepa BLEE?
5ª SEMANA
1. Mencione las toxinas y enzimas que genera el Staphylococcus aureus
2. ¿Cuál de las propiedades del S. aureus es utilizada para el aislamiento in vitro?
3. ¿Qué características debe tener el Streptococcus para producir escarlatina?
4. ¿Cuál es el riesgo futuro mediato de padecer una infección por Streptococcus pyógenes?
5. Señale las propiedades patogénicas del Enterococcus sp
7ª SEMANA
1. Señale los agentes bacterianos causantes de gastroenteritis alimentaria
2. Fiebre tifoidea: prevalencia en los últimos 10 años en Lima
3. Disentería bacilar: patogenia, significado epidemiológico
4. Shock endotóxico: esquema de presentación
5. Escherichia coli enterohemolítico: Síndrome urémico hemolítico
83
URP
Facultad de Medicina
Microbiología
10ª SEMANA
1. Rol patógeno del Campylobacter jejuni. Incidencia
2. Helicobacter pylori: diagnóstico bacteriológico
3. El cólera en el Perú
4. Mecanismo de acción de la toxina colérica
5. Comportamiento medio ambiental de los vibrio
12ª SEMANA
1. Bacteriemia, Septicemia: Conceptos. Agentes causales.
2. Señale las bacterias que son capaces de producir endotoxina y exotoxina a la vez
3. Bartonelosis en el Departamento de Lima
4. Diagnóstico inmunológico de infección por Bartonella bacilliformis
5. Diagnóstico inmunológico de infección por Brucella sp
13ª SEMANA
1. Señale las enfermedades bacterianas y virales de transmisión sexual
2. Incidencia y prevalencia de infección por Chlamydia trachomatis en el Perú
3. Explique por qué la reacción de VDRL no específica para diagnóstico?
4. Señale la enfermedad de transmisión sexual bacteriana que dispone de vacuna.
5. Señale la prevalencia de las ETS en el Perú
14ª SEMANA
1. Señale las condiciones necesarias para el aislamiento “in vitro” del M. tuberculosis
2. Explique la utilidad de la determinación de la enzima “Adenosina de aminasa” (ADA) en el
diagnóstico de infección por M. tuberculosis
3. Investigue sobre el “interferón gamma” en infección tuberculosa . Importancia médica
4. Los Mycobacterium atípicos: Concepto. Importancia médica
5. Elabore una explicación bacteriológica de la resistencia a los antibióticos del M. tuberculosis. .
15ª SEMANA
1. Papiloma virus humano: Definición. Patogenia. Epidemiología. Diagnóstico
2. Virus del Ëbola: Definición. Patogenia. Diagnóstico
3. Virus de la Rabia: Incidencia de rabia humana en el Perú
4. Virus relacionados con cáncer. Mecanismo patogénico
5. Priones: Definición. Patogenia. Diagnóstico
16ª SEMANA
1. Candidiasis en inmuno deprimidos
2. Criptococcosis en inmuno deprimidos
3. Prevalencia de dermatomicosis en el Perú
4. Blastomicosis en el Perú. Diagnóstico inmunológico
5. Histoplasmosis en el Perú. Diagnóstico inmunológico
_________
84