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100 Métodos proteínicos

E. Diálisis

La diálisis se utiliza normalmente para cambiar la solución tampón de

una proteína, pero también puede emplearse como método para concentrar
soluciones proteicas si se lleva a cabo al vacío o en un entorno
higroscópico (por ejemplo, PEG, Sephadex). La solución proteica está
contenida dentro de una membrana cuyo tamaño de poro impide que la
proteína se escape y que permite el intercambio de solutos con aire a
presión reducida o con una solución circundante.
Excepto para volúmenes pequeños, este método basado en la
difusión requiere mucho tiempo, y la ultrafiltración suele ser preferible
para la concentración preparativa de proteínas y el intercambio de
tampones. Sin embargo, en algunos casos, el tiempo no es un problema.
factor limitante y puede preferirse la diálisis (teoría: McPhie, l97i)-.
Pierce ofrece ahora unidades de diálisis prefabricadas que no requieren
tiempo de preparación ni equipos especializados.

• Equipamiento

1. Vaso
2. Placa y barra agitadoras magnéticas
3. Tubo de diálisis

• Reactivos: Sephadex G-100 o G-200

• Preparación de humos de diálisis

Los tubos de diálisis contienen contaminantes químicos

procedentes del proceso de fabricación. Para eliminarlos, se
suele hervir el tubo durante al menos 30 minutos en
bicarbonato sódico (NaHCO,)/lmM EDTA i0 mM. Algunos
autores recomiendan
(véase Richmond et a1., 1985). Tras el paso de ebullición, los tubos deben
lavarse abundantemente en agua destilada y almacenarse a 4°C en EDTA
1 mM para evitar la contaminación microbiana. Prepare nuevos
tubos de diálisis cada seis meses (Schleif y Wensink, 1981).
Spectrum ofrece una línea de membranas de diálisis (Spectra/Por 7)
fabricadas con celulosa regenerada y pretratadas para eliminar los
contaminantes de metales pesados y sulfuros.
 2. Utilizando una pipeta o un embudo (Fig. 4.2), vierta la
solución proteica en el tubo de diálisis.
3. Haga un nudo doble en el otro extremo del tubo y coloque la
bolsa de diálisis cerrada en más de 10 volúmenes de tampón
de diálisis. El tampón debe agitarse suavemente con una barra
magnética para mejorar el intercambio de solutos. El
equilibrio se produce después de varias horas de diálisis,
y el tampón de diálisis puede tener que ser cambiado varias
veces hasta que ciertos componentes del tampón estén
suficientemente diluidos.

Figura 4.2. Llenado del tubo de diálisis con una solución proteica.

• Tampón de diálisis

A efectos de concentración de proteínas, la bolsa de diálisis

puede incubarse en un tampón que contenga 2Wo
poli(etilenglicol) (PEG 20.000) o 5% de etilenglicol. Sin embargo,
el uso de PEG puede ir acompañado de la lixiviación de
compuestos no deseados en el dializado que podría requerir un
paso de purificación adicional. Un método más rápido para
concentrar una solución proteica consiste en sumergir el saco de
diálisis en resina Sephadex G-100 o G-200 o en Aquacides de
Calbiochem a 4°C. Se puede conseguir una concentración cinco
veces mayor en 3 horas cambiando la resina que rodea el saco de
diálisis cada media hora (Schleif y Wensink. 1981a.
• Comentarios

i. Los clips de diálisisdisponibles en el mercado (Spectrum) son

muy populares como alternativa a la realización de nudos en
el tubo de diálisis.

2. Si se dializa contra un tampón con una concentración de sal o disolvente

orgánico inferior a la del dializado, hay que tener en cuenta que las
fuerzas osmóticas provocarán la entrada de agua en el saco de
diálisis. Deje espacio para los aumentos de volumen a fin de
evitar el riesgo de rotura de la membrana.

3. Los tubos de diálisis están disponibles en una gran variedad de

pesos moleculares, de 100 a 300.000 daltons (tspectrum
Medical Inoustries).

4. En Overall (1987) se describe una microtécnica sencilla para

dializar pequeños volúmenes (de 10 pl a 0,6 ml) en un tubo
Eppendorf.