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Recibido: 11 diciembre 2020 |Aceptado: 13 de agosto de 2021

DOI: 10.1002/prp2.863

REVISIÓN INVITADA

Estrategias para aplicar las 3R en pruebas preclínicas

Susana B. Gorzalczany |Ángeles G. Rodríguez Basso

Universidad de Buenos Aires, Facultad de

Farmacia y Bioquímica, Departamento de Abstracto
Farmacología, Buenos Aires, Argentina
La experimentación con animales ha sido fundamental en la investigación biológica y biomédica.

Correspondencia Para garantizar la máxima calidad, eficacia y/o seguridad de los productos destinados al uso en
Susana B. Gorzalczany, Facultad de
humanos es necesario el ensayo in vivo; sin embargo, desde hace más de 60 años, se han
Farmacia y Bioquímica, Cátedra de
Farmacología, Universidad de Buenos desarrollado métodos alternativos en respuesta a la necesidad de reducir el número de
Aires, Junín 956, C1113AAD Buenos
animales utilizados en la experimentación, para garantizar su bienestar; recurriendo a modelos
Aires, Argentina.
Correo electrónico: sgorza@ffyb.uba.ar animales sólo cuando sea estrictamente necesario. Las tres R (Reemplazo, Reducción y

Refinamiento), buscan asegurar el uso racional y respetuoso de los animales de laboratorio y

mantener una adecuada proyección en términos de consideraciones bioéticas. Este artículo

describe diferentes enfoques para aplicar las 3R en la experimentación preclínica con fines de

investigación o regulatorios.

PALABRAS CLAVE

enfoques no clínicos, de reducción, de refinamiento, de reemplazo y de prueba

1|INTRODUCCIÓN Sin embargo, no fue sino hasta 1947 que la Federación de Universidades

para el Bienestar Animal (UFAW) publicó el primer manual tituladoEl cuidado y

La experimentación con animales de laboratorio ha contribuido al manejo de animales de laboratorioayudar a las instituciones en el cuidado y uso
desarrollo de áreas científicas y normativas con un impacto positivo de animales de laboratorio. Posteriormente, en 1954, la UFAW designó a W.

en la salud humana. Russel para incorporar métodos humanos en la investigación biológica.1

Aunque la experimentación con animales se remonta al siglo IV a. C., La primera presentación formal del concepto de 3R (Reemplazo,
las primeras pautas formales de ética para el manejo de animales para Reducción y Refinamiento) fue en el Simposio de la UFAW en 1957.3,4
experimentación fueron escritas en 1831 por el psicólogo británico Dos años después, W. Russell y R. Burch publicaronLos principios de la

Marshall Hall. Este autor estableció dos principios fundamentales. técnica experimental humanitaria. Este libro definió tres principios. Uno de los
Primero, que los experimentos deben realizarse con un objetivo claro y principios se denominaReemplazo, y se define como "sustitución de animales

definido; y en segundo lugar, que los experimentos deben hacerse con el superiores vivos conscientes de material insensible".Reduccióncomo “reducción

menor sufrimiento animal posible.1Además, en 1876 se logró un hito en la en el número de animales utilizados para obtener información de una

historia de las pruebas con animales cuando se promulgó la Ley de determinada cantidad y precisión” y la tercera R significaRefinamientocomo

crueldad hacia los animales en la Cámara de los Comunes del Reino “cualquier disminución en la incidencia o severidad de los procedimientos

Unido. Esta Ley se conoció como el primer reglamento que se publicó en inhumanos aplicados a esos animales, que todavía tienen que ser utilizados”.5

relación con el uso de animales en la investigación científica.2

Abreviaturas:ADMET, absorción, distribución, metabolismo, excreción y toxicidad; IA, inteligencia artificial; AOP: vía de resultado adverso; FDCA, Ley Federal de Alimentos, Medicamentos y Cosméticos; INVITTOX,
Técnicas In Vitro en Toxicología; ISO, Organización Internacional de Normalización; MIE, evento iniciador molecular; OCDE, Organización para la Cooperación y el Desarrollo Económicos; QSAR, relación cuantitativa
estructura-actividad; STAIR, mesa redonda de la industria académica de terapia de accidentes cerebrovasculares; UFAW, Federación de Universidades para el Bienestar Animal.

Este es un artículo de acceso abierto bajo los términos de la licencia Creative Commons Attribution-NonCommercial-NoDerivs, que permite el uso y la distribución en cualquier
medio, siempre que se cite correctamente el trabajo original, el uso no sea comercial y no se realicen modificaciones ni adaptaciones. .
© 2021 Los autores.Investigación y perspectivas de farmacologíapublicado por la Sociedad Farmacológica Británica y la Sociedad Estadounidense de Farmacología y
Terapéutica Experimental y John Wiley & Sons Ltd.

Perspectiva Pharmacol Res.2021;9:e00863. wileyonlinelibrary.com/journal/prp2 1 de 9 |

https://doi.org/10.1002/prp2.863
2 de 9 | GORZALCZANYYRODRÍGUEZ BASSO
En 1978, David Smyth propuso el término “alternativo” para denominar aquellos
procedimientos que pueden reemplazar completamente a los animales utilizados para
realizar los experimentos, aquellos que reducen el número de animales requeridos o
aquellos que disminuyen el dolor o la angustia que sufren los animales, lo que
impulsó a los investigadores para justificar el uso de animales para la
experimentación.6,7
Aunque inicialmente la experimentación con animales se había
desarrollado para la investigación biomédica para estudiar procesos fisiológicos
y enfermedades, más tarde estos procedimientos comenzaron a emplearse en
la evaluación de la eficacia y la seguridad. En este sentido, aunque Paracelso
fue el primer alquimista en realizar estudios de toxicidad, este tipo de estudios
no cobraron relevancia hasta 1927 cuando Trevan publicó el LD50prueba para la
estandarización biológica de drogas potentes y potencialmente peligrosas.
Posteriormente, durante la década de los 30, los eventos adversos causados
por la presencia de dietilenglicol en el elixir de sulfanilamida para tratar
infecciones estreptocócicas y la presencia de parafenilendiamina en un tinte de
párpados y cejas indujeron cambios normativos significativos. En este sentido,
la Ley Federal de Alimentos, Medicamentos y Cosméticos (FDCA) introdujo un
cambio significativo en lo que respecta a la protección del consumidor en
Estados Unidos. Según la FDCA, una evaluación de seguridad para la
comercialización se convirtió en un requisito no solo para medicamentos y
cosméticos, sino también para otro tipo de productos como aditivos
alimentarios, productos de limpieza para el hogar y productos químicos
industriales, destacando que los sistemas de control efectivos son esenciales
para proteger la salud de los consumidores.8,9
Es importante señalar que no solo los productos deben ser seguros para su
uso, sino que también se debe contar con información toxicológica para poder
actuar adecuadamente en caso de exposición accidental.
Para garantizar la seguridad del producto, se deben tener en cuenta algunas particularidades, como la naturaleza del
producto, su uso previsto y su composición química. Por ejemplo, ¿es aceptable aplicar la misma estrategia para analizar la
seguridad de fármacos o plaguicidas? La respuesta es ciertamente no, principalmente debido a una preocupación ética. Por estas
razones, en los últimos años ha habido un aumento de nuevas estrategias que reducen o no involucran el uso de animales de
laboratorio para evaluar la eficacia y/o seguridad de productos destinados al uso humano. Aunque el escenario es complejo, es
necesario tener conocimiento científico y normativo para el uso seguro de ciertos productos, evitando así efectos nocivos graves
como fue el caso del mal uso de desinfectantes humidificadores en Corea. Este desinfectante contenía polihexametileno
guanidina (PHMG), que ha sido ampliamente utilizado en productos industriales y de consumo como biocidas y su uso se
extendió como desinfectante de humidificadores en Corea. Pero, no se consideró que los humidificadores pudieran generar no
solo niebla (micrómetros de tamaño) sino también partículas más pequeñas (nanómetros de tamaño), convirtiéndose la
inhalación en una vía de exposición relevante ya que podría penetrar profundamente en las vías respiratorias. En este sentido, la
toxicidad por inhalación debe ser obligatoria para analizar, pero el producto se vendió sin ningún dato relacionado con esta
información e indujo una enfermedad pulmonar fatal, lo que demuestra que un compuesto puede volverse tóxico cuando se
cambia la exposición. no se consideró que los humidificadores pudieran generar no solo niebla (micrómetros de tamaño) sino
también partículas más pequeñas (nanómetros de tamaño), convirtiéndose la inhalación en una vía de exposición relevante ya
que podría penetrar profundamente en las vías respiratorias. En este sentido, la toxicidad por inhalación debe ser obligatoria
para analizar, pero el producto se vendió sin ningún dato relacionado con esta información e indujo una enfermedad pulmonar
fatal, lo que demuestra que un compuesto puede volverse tóxico cuando se cambia la exposición. no se consideró que los
humidificadores pudieran generar no solo niebla (micrómetros de tamaño) sino también partículas más pequeñas (nanómetros
de tamaño), convirtiéndose la inhalación en una vía de exposición relevante ya que podría penetrar profundamente en las vías
respiratorias. En este sentido, la toxicidad por inhalación debe ser obligatoria para analizar, pero el producto se vendió sin ningún
dato relacionado con esta información e indujo una enfermedad pulmonar fatal, lo que demuestra que un compuesto puede
volverse tóxico cuando se cambia la exposición.10,11
Teniendo en cuenta que las estrategias para analizar la eficacia y/
o seguridad de diferentes productos como fármacos,
cosméticos, dispositivos médicos y productos químicos, entre otros, pueden
variar de un producto a otro, ha aumentado la necesidad de enfoques y
métodos para evaluar dichos productos y mejorar la previsibilidad. La presión
de la opinión pública sobre gobiernos y empresas, y también sobre el área
científica, para reducir el uso de animales es un motor importante en los
esfuerzos por utilizar métodos alternativos, aunque los factores económicos
también juegan un papel importante en el área.
Basado en la idea principal presentada en OECD 405,12esta revisión discute
las diferentes estrategias que cumplen con los principios de las 3R. Estas
estrategias pueden ser aplicadas secuencialmente y adaptadas a diferentes
escenarios en estudios preclínicos tanto en investigación básica como en el
área regulatoria, reduciendo al mínimo posible la experimentación animal.
2|ENFOQUE B IBL IOGR ÁFICO
El primer enfoque incluye el análisis de la literatura actual para obtener
información sobre las características de un producto específico. Esto es
crucial para evitar la realización de experimentos innecesarios, que irían
en contra de los principios científicos y éticos.
En este enfoque, el primer paso es formular una pregunta de investigación
clara y concisa, identificando palabras clave y descriptores relacionados. El uso
de operadores booleanos puede ser útil para refinar la búsqueda. Los motores
de búsqueda basados en la web o las bases de datos electrónicas son cruciales
para identificar la literatura relevante. En este sentido, y en cuanto a los
recursos bibliográficos, no solo los archivos internacionales (https://
www.ncbi.nlm. nih.gov/pmc/, http://www.elsevier.com/online-tools/embase/,
etc. .) deben buscarse, pero también regionales (https://lilacs.bvsalud.org/ es/,
http://www.scielo.org.za/) porque ciertas áreas de estudio pueden ser solo
relevantes localmente. Los bibliotecarios juegan un papel central en esta fase.13
Para identificar el atributo esencial de la bibliografía encontrada, es
necesario realizar una lectura, análisis y clasificación exhaustivos de la
literatura disponible. En este sentido, la lista de verificación CASP (Critical
Appraisal Skill Programme) para la investigación clínica y las
recomendaciones STAIR (Stroke Therapy Academic Industry Roundtable)
para aumentar el potencial traslacional de los modelos experimentales de
accidentes cerebrovasculares son recomendaciones útiles. Es
recomendable crear una lista adecuada de informes publicados para
realizar una lectura crítica del material seleccionado. Después de un
primer análisis, la búsqueda original puede ampliarse o reducirse, por
ejemplo, limitando la búsqueda a los últimos 10 años. Esta búsqueda se
puede realizar en otras bases de datos y/o refinar la selección eligiendo
los autores más relevantes en el campo de estudio.14
La información así obtenida proporciona un análisis cualitativo secundario.
Sin embargo, un análisis crítico de las evidencias es difícil de realizar cuando la
información se obtiene por este método, principalmente debido a la cantidad
de información disponible. Por ello, ciertas estrategias como la realización de
revisiones sistemáticas, que establecen criterios explícitos y reproducibles para
analizar estadísticamente el grueso de las fuentes primarias, permiten
ponderar la información y validar las conclusiones experimentales obtenidas. Si
bien el enfoque bibliográfico es una herramienta útil, la falta de metodologías
estandarizadas
GORZALCZANYYRODRÍGUEZ BASSO
descritos en las fuentes primarias, la diversidad de diseños
experimentales, la escasez de informes de resultados negativos, entre
otros, pueden llevar a una sobreestimación de las conclusiones obtenidas
en este tipo de metanálisis. Si se tienen en cuenta estos inconvenientes,
se hace evidente la necesidad de políticas de transparencia de las
publicaciones científicas.
Cabe destacar que si la investigación se lleva a cabo para cumplir con las
normas relacionadas con los procedimientos experimentales, los métodos
seleccionados deben estar estandarizados, validados y, si es posible, aceptados
por las autoridades reguladoras nacionales o internacionales, como las
Directrices de la OCDE, INVITTOX, farmacopeas, documentos ISO. .
Este enfoque bibliográfico es obligatorio para cualquier tipo de
investigación, y debe ser el primer paso a aplicar para conocer el contexto del
área de investigación en ese momento. Los estudios publicados en revistas de
acceso abierto, por ejemplo, promueven el flujo de conocimiento global y el
presupuesto disponible para la investigación no sería un factor limitante. Sin
embargo, es importante señalar que los grupos de investigación con menos
recursos económicos tienen mayores dificultades para publicar los resultados
de sus investigaciones en revistas de acceso abierto, lo que limita el
intercambio de experiencias.
Teniendo en cuenta el enfoque bibliográfico, es posible sustituir la
experimentación animal, en informes con fuerte evidencia, como meta-
análisis que brinden información adecuada para responder a la pregunta
de investigación o sea posible reducir o refinar, mejorando el diseño de
investigación.
3|ENFOQUE DE TAMIZAJE DE COMPUESTOS VI
RTUAL
En caso de que el enfoque anterior no brinde suficiente información para
resolver la pregunta de investigación a fin de realizar predicciones, se puede
utilizar el método de tamizaje virtual. Este enfoque requiere información sobre
las características fisicoquímicas de los compuestos. Aunque no es un escenario
común, bajo ciertas circunstancias, las propiedades fisicoquímicas por sí solas
podrían ser suficientes para determinar los posibles riesgos ambientales y/o de
salud, reduciendo el uso de la experimentación con animales. Un buen ejemplo
de esto se puede encontrar en las directrices 405 de la OCDE,12en el que las
propiedades fisicoquímicas y la reactividad química; por ejemplo, la capacidad
amortiguadora puede predecir el potencial de un compuesto químico para
inducir irritación ocular aguda o corrosión, ya que los valores de pH bajos o
altos (≤2,0 o ≥11,5) de las soluciones que contienen estos compuestos pueden
tener efectos locales graves. Sin embargo, también se debe analizar la reserva
ácida/alcalina, ya que ha demostrado tener una mejor correlación que la
medición del pH sola. Pero, si el resultado es inconsistente, se deben comenzar
a realizar más pruebas para evaluarlo.
Además, en el proceso de descubrimiento de fármacos, los atributos de un
compuesto podrían ser útiles para determinar su potencial como fármaco
candidato. Por ejemplo, para seleccionar un candidato principal, el logaritmo de
lanorteEl coeficiente de partición de octanol (log P) es un buen predictor de la
lipofilia y representa un factor fisicoquímico principal que influye en la
biodisponibilidad, la permeabilidad y, con frecuencia, la toxicidad de
|3 de 9
una estructura química. Teniendo en cuenta que los valores altos de
lipofilicidad pueden conducir al fracaso en el proceso de desarrollo de
fármacos, la eficiencia de la lipofilicidad se ha propuesto como una
medida de la bondad de la interacción entre un compuesto y su proteína
objetivo. Este parámetro representa la energía de unión de un compuesto
normalizado por el tamaño del compuesto y puede tomarse como la
lipofilicidad mínima aceptable por unidad de potencia in vitro. Pero
considerando que logP describe el coeficiente de reparto de moléculas sin
carga, logD se introdujo como un mejor descriptor de la lipofilia de
moléculas cargadas a un pH específico. Representa la relación entre la
concentración de equilibrio del compuesto no ionizado en la fase de
octanol y la concentración en la fase acuosa tamponada a diferentes pH.
Un interés particular es el logD7.4que representa el coeficiente de reparto
de un compuesto utilizando fase acuosa tamponada a pH 7,4, conocido
como pH fisiológico.15Además, se desarrolló un predictor para log D
utilizando descriptores de firmas moleculares y una máquina de vectores
de soporte, lo que permite la modificación interactiva de moléculas y
también es posible ver la estructura de predicción, destacando
estructuras químicas que aumentan o reducen el log D predicho.dieciséis
Esta información podría ser necesaria como primer paso para realizar el
cribado virtual de bibliotecas de compuestos para seleccionar candidatos
principales con propiedades fisicoquímicas adecuadas.17-19
La información previa podría requerir métodos bioinformáticos para
recopilar información de diferentes recursos para tratar de predecir el efecto in
vivo, por lo tanto, el propósito del enfoque de detección virtual es utilizar
métodos in silico rápidos y rentables para predecir, por ejemplo, la toxicidad
humana o la contaminación ambiental. . En este sentido, los estudios QSAR
(Relación Cuantitativa Estructura-Actividad) correlacionan la estructura química
con la actividad biológica de un compuesto, jugando un papel crucial en la
selección de los mejores compuestos para la síntesis o evaluación biológica. La
regla de oro de los estudios QSAR es que productos químicos similares tienen
propiedades físicas y toxicidad similares, siendo esta premisa muy adecuada
para predecir estas características. A este respecto, El Parlamento Europeo y el
Consejo de la Unión Europea han establecido que para el registro del perfil de
seguridad de los productos químicos, se requiere que los solicitantes de
registro demuestren que han considerado la aplicación de métodos alternativos
para probar la seguridad. Por lo tanto, los estudios QSAR representan una
buena opción para reemplazar las pruebas in vivo. En este sentido, el punto
final definido, el algoritmo inequívoco, el dominio definido de aplicabilidad, la
robustez, la predictibilidad y la curación de datos deben ser principios
obligatorios para obtener un resultado QSAR adecuado y confiable para
garantizar el éxito de este enfoque.20–22
Aunque la evaluación de riesgos actual se realiza en un solo producto
químico; a menudo se evalúan mezclas de compuestos. Teniendo en cuenta la
cantidad considerable de información disponible sobre la toxicidad de los
productos químicos y que el número de posibles combinaciones de compuestos
es enorme, la determinación del perfil de seguridad de una mezcla sigue siendo
un desafío.23Aunque el riesgo potencial de las mezclas de compuestos puede
determinarse experimentalmente, esta información puede derivarse de los
datos obtenidos de cada compuesto evaluado por separado y considerando su
contribución porcentual en la mezcla. Sin embargo, este método no tiene en
cuenta las posibles interacciones entre productos químicos, como los efectos
sinérgicos o antagónicos.
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El enfoque de vía de resultado adverso (AOP) podría superar este inconveniente. los modelos predictivos de IA podrían estar relacionados no solo con la calidad de los

El AOP ofrece un marco para integrar e ilustrar la evaluación de peligros y/o riesgos datos de entrada, sino también con la precisión del modelo preclínico aplicado.34

de los productos químicos, proporcionando conocimiento para establecer una En este sentido, se informó una estrategia basada en un modelo computacional

relación a través de eventos clave (KE) entre un evento de iniciación molecular (MIE) y booleano para identificar el objetivo de la enfermedad guiada por IA,

un resultado adverso (AO) en una organización biológica.24Aunque los modelos in estudiando las reglas de los patrones de expresión génica al principio y durante

silico son una representación simplista de un sistema, pueden ser útiles si se aplican el curso de la enfermedad. Además, fue posible validar el mejor modelo animal

dentro de una construcción AOP. Las interacciones entre dos compuestos se pueden similar al humano, lo que facilitó el diseño de un modelo de organoide enfermo

predecir a partir de la estructura química y se pueden usar para desarrollar alertas derivado del paciente.35mostrando la posibilidad de establecer el objetivo

estructurales, que pueden representar el efecto probable del químico que induce MIE. farmacológico preciso, personalizar la elección de la mejor terapia para un

Por ejemplo, un resto electrofílico puede reaccionar con un nucleófilo biológico paciente concreto o incluso reducir o evitar el uso de modelos animales.

formando un enlace covalente con proteínas o ácidos nucleicos, y esta interacción La tecnología informática permite generar una gran cantidad de compuestos

puede conducir a efectos adversos aguas abajo. No obstante, estos efectos previstos químicamente relacionados; sin embargo, se necesita con urgencia el desarrollo y la

no necesariamente ocurrirán, o pueden manifestarse de manera diferente según la implementación de nuevos algoritmos de aprendizaje automático y métodos de

especie; por ejemplo, una mezcla de compuestos puede causar irritación respiratoria curación de datos capaces de manejar millones de compuestos.

en peces y sensibilización cutánea en humanos, reflejando así que los AOP deben ser Para aplicar el cribado virtual, se necesita una infraestructura informática

considerados como herramientas maleables que deben ser refinadas constantemente de alto rendimiento para probar una gran cantidad de objetivos farmacológicos

mediante la introducción de nuevos datos. Por lo tanto, la capacidad de las alertas y compuestos químicos, lo que requiere un trabajo cooperativo entre
estructurales asociadas con el evento iniciador molecular para inducir una toxicidad investigadores tanto del mundo académico como de la industria. En este

en una especie específica y también los efectos epigenéticos para la salud a largo sentido, el desarrollo interdisciplinario que emplea instalaciones y

plazo son materia de estudio y desarrollo continuo con esta estrategia.25 conocimientos informáticos compartidos a través de plataformas informáticas

basadas en la nube ha demostrado ser más rentable.36

Dichas plataformas se están desarrollando para ayudar a los investigadores

Sin embargo, la información tecnológica a través de la detección de alto con varios tipos de aplicaciones para prepararlos y guiarlos en el proceso de

rendimiento y la química combinatoria juega un papel crucial no solo en la descubrimiento y desarrollo de fármacos, brindando servicios remotos que

evaluación de riesgos, sino también en los estudios de eficacia que evalúan la pueden usarse en la nube u ofreciendo integración con un flujo de trabajo

capacidad de las nuevas estructuras para producir efectos beneficiosos. autoimplementado. Algunos ejemplos de esto son 3decision.discngine.com, un

Se sabe que el proceso de desarrollo de fármacos lleva mucho tiempo y foro de colaboración para que los investigadores intercambien datos sobre

requiere la recopilación de una gran cantidad de información relacionada con la interacciones ligando-receptor, 3d-qsar.com, una plataforma basada en la web

fisiopatología de la enfermedad, la identificación del objetivo y su validación, el que permite la generación y validación de modelos 3D-QSAR, y

descubrimiento de plomo y su optimización, estudios preclínicos y ensayos www. .playmolecule.com /BindScope, una herramienta de predicción de unión

clínicos. En este largo proceso, cualquier efecto indeseable podría justificar el basada en estructuras, entre otras.36

rechazo del fármaco candidato, por lo que las tecnologías informáticas, como la

química combinatoria y el cribado de alto rendimiento, pueden ofrecer

estrategias eficaces para acelerar el proceso. 4|ENFOQUE IN VITRO

En el proceso de desarrollo de fármacos se deben evaluar parámetros
como la absorción, distribución, metabolismo, excreción y toxicidad Si las estrategias anteriores no son suficientes para brindar información adecuada

(ADMET), ya que determinan el efecto potencial del compuesto en estudio. para responder a la pregunta de investigación, se podría utilizar un enfoque in vitro

En este sentido, el modelado molecular permite predecir las propiedades para estudiar la eficacia y la seguridad de los compuestos. Estos métodos emplean

de ADMET mediante la aplicación de diferentes enfoques, como el líneas celulares inmortalizadas, que han sido inducidas a proliferar durante largos

modelado de farmacóforos, el acoplamiento molecular, las simulaciones períodos de tiempo. Estas poblaciones de células son genéticamente idénticas y

dinámicas y el cálculo de la mecánica cuántica.26–30 bastante bien caracterizadas, lo que garantiza la reproducibilidad de los resultados.

Aunque este enfoque puede acelerar el proceso de descubrimiento al Sin embargo, podrían expresar patrones genéticos únicos que no están presentes en

disminuir el número de candidatos para probar experimentalmente y mejorar las células primarias. Por lo tanto, para compensar estos inconvenientes, las

la racionalidad de cada elección, el conocimiento actual indica que este enfoque características de las células cultivadas deben evaluarse periódicamente para

no puede reemplazar los ensayos in vitro ni in vivo. No obstante, utilizando asegurar la confiabilidad de los resultados.37

inteligencia artificial (IA) es posible diseñar nuevos fármacos en poco tiempo, En este enfoque, se pueden utilizar cultivos celulares bidimensionales o

casi 12 meses, DSP-1181, un fármaco para tratar el trastorno obsesivo- tridimensionales (2D o 3D). En cultivos 2D, las células se cultivan como

compulsivo, DSP-0038, un agonista 5-HT1A de doble diana y 5- El antagonista monocapas, mientras que en cultivos 3D, las interacciones célula-célula y célula-

de HT2A para tratar la psicosis de la enfermedad de Alzheimer o EXS21546 matriz extracelular se incluyen en la respuesta final, lo que imita mejor la

como antagonista de adenosina para la inmunoterapia contra el cáncer son complejidad del microambiente in vivo.38En este sentido, las células tumorales

ejemplos de ello.31–33Si bien la inteligencia artificial para la predicción de efectos hepáticas que crecen en cultivos 3D han mostrado un perfil de expresión génica

adversos y la eficacia han generado expectativas optimistas, el desafío de y una respuesta al tratamiento similares, en comparación con los modelos in

desarrollar sistemas robustos y vivo. Modelar la organización espacial, agregando diferentes tipos de celdas
GORZALCZANYYRODRÍGUEZ BASSO
y facilitar la interacción entre la célula y su microentorno, se puede
obtener utilizando diferentes estrategias, como cocultivos 3D incrustados
en un Matrigel, métodos esferoides, sistemas de microfluidos o
bioimpresión 3D. Sin embargo, los cultivos 3D tienen algunas desventajas,
los esferoides 3D son difíciles de estandarizar y los organoides
homogéneos 3D son difíciles de obtener en grandes cantidades y también
la bioimpresión 3D requiere consumibles y equipos costosos.39Aunque los
cultivos 3D representan un avance significativo en comparación con los
cultivos 2D, no se comportan completamente como sistemas objetivo de
nivel superior, que tienen una organización anatómica y fisiológica más
compleja. La validación de estos métodos representa un gran desafío ya
que debe demostrar su confiabilidad y relevancia para el propósito dado,
identificando los mecanismos que causan aguas abajo y encontrando
datos de referencia apropiados para la prueba en estudio.40A pesar de
eso, esta estrategia podría ser útil para probar la toxicidad potencial de
los xenobióticos en humanos y otras especies, como lo demuestra el uso
de esferoides 3D HepaRG para predecir la genotoxicidad in vivo.41
5|ENFOQUE EX VIVO
Las técnicas ex vivo e in vitro son similares, ya que ambos tipos de
experimentos se realizan fuera del animal, pero el primero utiliza células
obtenidas directamente del organismo vivo.
En los experimentos ex vivo, se pueden utilizar células aisladas, órganos
completos o fracciones de los mismos siempre que se mantenga la viabilidad. En
modelos ex vivo, los tejidos mantienen su arquitectura, replicando así las condiciones
in vivo. Los modelos ex vivo se pueden utilizar para analizar el efecto farmacológico
potencial de nuevos compuestos, por ejemplo, los probados en vasos umbilicales
humanos aislados o anillos aórticos animales en los que se puede determinar el efecto
de los fármacos sobre la actividad contráctil del músculo liso, la angiogénesis o la
señalización de la matriz extracelular. probado Los explantes de piel humana
obtenidos en cirugía también se pueden usar para estudiar el efecto de los
compuestos en la cicatrización de heridas, enfermedades inflamatorias crónicas o
infecciones virales, fúngicas o bacterianas.42–45
Los experimentos ex vivo también son adecuados para evaluar los posibles
efectos adversos y la toxicidad del compuesto en condiciones normales o
patológicas. Debe tenerse en cuenta que los patrones de expresión de
proteínas como los de las enzimas del metabolismo pueden variar de una
especie a otra; en este sentido, los resultados obtenidos ex vivo podrían ser
más representativos de las condiciones in vivo, como explantes de piel ex vivo
de cirugía plástica humana electiva como estrategia para comprender el
mecanismo involucrado en varios trastornos cutáneos humanos,46o para
probar la seguridad y eficacia de los productos cosméticos, en lugar de usar
conejos o modelos de ratones modificados genéticamente.47,48
En este sentido, los estudios de electrofisiología se pueden realizar
utilizando células individuales, como cardiomiocitos desagregados, o
preparaciones multicelulares, como las obtenidas a partir de músculo papilar o
corazón intacto aislado de animales de laboratorio y, en ocasiones, de
humanos. En este sentido, el intervalo QT (tiempo desde el comienzo del
complejo QRS hasta el final de la onda T) en el electrocardiograma es una
medida de la duración de la despolarización y repolarización ventricular.
|5 de 9
eventos. La interacción de un compuesto en estudio con un canal de potasio
controlado por voltaje específico relacionado con el miembro 2 de la subfamilia
H del gen relacionado con el éter humano (hERG, KCNH2) puede inducir una
corriente de potasio rectificadora retardada cardiaca rápida anormal que
conduce a una insuficiencia cardiaca mortal. En las primeras etapas de
investigación de un nuevo compuesto, el efecto proarrítmico puede
determinarse mediante una evaluación no clínica de la capacidad del fármaco
para producir una repolarización ventricular retardada. La última estrategia
permite a los investigadores descartar el compuesto para realizar más estudios
o establecer un cronograma estricto de farmacovigilancia para prevenir efectos
adversos después de que el medicamento sea aprobado para uso clínico.49
Tanto las estrategias in vitro como las ex vivo pueden colaborar para reducir la experimentación con animales. En este
sentido, diferentes sociedades internacionales tratan de influir en la opinión pública, tomando medidas legislativas y buscando la
colaboración gubernamental para disminuir la experimentación in vivo. Se describió que la experimentación con animales puede
producir información engañosa, requiere mucho tiempo y también es éticamente controvertida, además, algunas instituciones
afirman que los métodos in vitro y ex vivo se pueden realizar a un costo mucho menor que los in vivo (https://www .hsi.org/news-
media/time_and_cost/). Estos cambios han llevado a un gran número de empresas a ofrecer métodos alternativos en la cartera de
organizaciones de investigación por contrato (CRO), lo que representa una industria importante que participa en procesos de
validación nacionales e internacionales. Las empresas de investigación de mercado monitorean las tecnologías relevantes para
analizar el perfil de seguridad de un compuesto para cumplir con las regulaciones nacionales o internacionales. En este sentido,
el crecimiento estimado por MarketsandMarkets™ mostró que las principales tasas de crecimiento anual compuestas (CAGR)
pertenecen a órgano en chip (36,6 %) y cultivo celular 3D (23,6 %) y la CAGR menor pertenece a toxicología in vitro (6,6 %) y
modelo de hígado humano (3,6%). Lamentablemente, acceder a esta información es costoso y, en ocasiones, el análisis crítico e
imparcial del mercado que realiza la academia no se tiene en cuenta en dicha toma de decisiones. el crecimiento estimado por
MarketsandMarkets™ mostró que las principales tasas de crecimiento anual compuestas (CAGR) pertenecen al órgano en chip
(36,6 %) y al cultivo celular 3D (23,6 %) y la CAGR menor pertenece a la toxicología in vitro (6,6 %) y al modelo de hígado humano
(3,6%). Lamentablemente, acceder a esta información es costoso y, en ocasiones, el análisis crítico e imparcial del mercado que
realiza la academia no se tiene en cuenta en dicha toma de decisiones. el crecimiento estimado por MarketsandMarkets™ mostró
que las principales tasas de crecimiento anual compuestas (CAGR) pertenecen al órgano en chip (36,6 %) y al cultivo celular 3D
(23,6 %) y la CAGR menor pertenece a la toxicología in vitro (6,6 %) y al modelo de hígado humano (3,6%). Lamentablemente,
acceder a esta información es costoso y, en ocasiones, el análisis crítico e imparcial del mercado que realiza la academia no se
tiene en cuenta en dicha toma de decisiones.50
6|ENFOQUE IN VIVO
Finalmente, después de haber realizado los pasos anteriores, pero la
información obtenida no tiene la validez adecuada para ser
considerada relevante, puede ser necesario realizar una prueba in
vivo. Teniendo en cuenta la abrumadora necesidad de evaluar la
eficacia y seguridad de nuevos productos, se podría suponer que, en
los últimos años, se ha utilizado una gran cantidad de animales para
realizar los experimentos; sin embargo, el número de animales de
laboratorio empleados en todo el mundo ha permanecido
indeterminado. Si bien las instituciones de algunos países como
Canadá o países pertenecientes a la Unión Europea deben reportar
métricas relacionadas con la investigación, enseñanza y pruebas
realizadas con animales, en otros países esta información solo se
informa parcialmente a agencias gubernamentales como Estados
Unidos de América,51,52Pero, en base al análisis estadístico de datos
de 37 países pertenecientes a la Unión Europea y
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Recurso Tipos de estrategias experimentales
Bibliográfico
Experimental Caso
Estudios publicados
estudios estudios
Proyección virtual
Características fisicoquímicas
Evidencia débil Unión cósmica QSAR
Célula, tejido, órgano in vitroestudios
animales de laboratorio
usando un modelo de predicción basado en las tasas de publicación de
142 países, Taylor y Alvarez (2015)53estimó que en 2015 se utilizaron 192,1
millones de animales en todo el mundo. Teniendo en cuenta estas cifras,
sería recomendable aplicar un enfoque in vivo solo en los casos en los que
los enfoques anteriores no hayan abordado el tema en estudio o cuando
los experimentos realizados en animales demostrar producir un
conocimiento significativo basado en el análisis daño-beneficio. Las
regulaciones locales y/o internacionales también pueden exigir la
realización de experimentos in vivo. La planificación, el desarrollo y la
elaboración de informes adecuados son los puntos clave para lograr el
principio de las 3R cuando se utilizan estrategias in vivo.54,55
En cuanto a la planificación y el desarrollo, existen diferentes
herramientas para ayudar a los científicos. El Asistente de diseño
experimental (EDA) ofrece una representación visual paso a paso del
experimento que se va a realizar, incluidos comentarios y consejos
específicos en cada paso en relación con los objetivos del proyecto
(https://eda.nc3rs.org.uk/). PREPARE (Planificación de la Investigación y
Procedimientos Experimentales en Animales: Recomendaciones para la
Excelencia) es una guía de buenas prácticas en experimentación animal
56,57y ARRIVE (Animal Research: Reporting of In Vivo Experiments) es una
guía para mejorar el rigor y la transparencia del informe científico.58,59
Estas recomendaciones ayudan a diseñar experimentos in vivo con
procedimientos de validación internos y externos adecuados, realizando un diseño de
estudio y un modelo animal correctos, lo que en última instancia asegurará un valor
traslacional de los experimentos con animales a los humanos.
Diferentes sitios web, como https://norecopa.no/more-resources/
culture-ofcare, ofrecen conocimientos, estrategias y herramientas útiles
para mejorar el bienestar animal y la calidad científica, pero también en
relación con métodos alternativos https:/ /norecopa.no/alter natives.
Finalmente, existe un gran interés por evaluar el riesgo y peligrosidad de
diferentes productos para la salud humana, por lo que podría ser útil
desarrollar sistemas de ensayo que permitan predecir, a corto o mediano plazo,
el potencial tóxico o cancerígeno a largo plazo de un compuesto. . Las
tecnologías ómicas brindan a los científicos la capacidad de sondear la varianza
biológica con alta sensibilidad en sistemas simples (cultivo celular, órgano
aislado, etc.) pero también en sistemas más complejos (modelos in vivo).
Paso
FIGURA 1Guía esquemática basada en las
3R para el diseño de investigaciones
Cualitativo Metanálisis
Primero
revisión sistemática
Fuerte evidencia
AOT
Ex-vivoestudios
En vivoestudios
Último
En este sentido, esta estrategia, puede detectar cambios específicos de tejido
con sensibilidad creciente, analizando miles de genes, proteínas o metabolitos
para detectar cambios inducidos por un tratamiento en los niveles de expresión
transcripcional o traduccional en animales de laboratorio. Por lo tanto, las
tecnologías ómicas como la toxicogenómica, la toxicoproteómica y la
toximetabolómica podrían predecir puntos finales específicos de toxicidad
después de una exposición in vivo a corto plazo debido al hecho de que estos
métodos pueden detectar incluso los cambios más pequeños a nivel molecular
que aún preceden a los puntos finales morfológicos y clínicos.49,60Esta
estrategia puede reducir los estudios de seguridad crónica en animales, como
pruebas de toxicidad crónica o estudios de carcinogenicidad, con experimentos
animales a corto plazo evaluados por tecnologías ómicas. Por lo tanto, es
posible mejorar la estimación de la seguridad química, reemplazando,
reduciendo o al menos refinando la experimentación con animales.61
Si bien esta estrategia fue descrita como una comprensión científica
superior con mayor eficiencia, la validación insuficiente, la
complejidad de su interpretación y la falta de estandarización se ha
descrito como la principal debilidad.62,63
7|CONCLUSIÓN
El gasto mundial en investigación y desarrollo (I+D) ha alcanzado un
récord de casi US$ 1,7 billones, pero solo 10 países representan el 80% del
gasto total. EEUU, Japón, Alemania, Corea, entre otros están gastando
relativamente más en términos de su PIB. Como parte de los Objetivos de
Desarrollo Sostenible de la UNESCO, los países se comprometieron a
aumentar sustancialmente el gasto público y privado en I+D, así como el
número de investigadores para 2030 (http://uis.unesco.org/apps/
visualisations/research-and- gasto en desarrollo/).
Las mejoras en la investigación biomédica relacionadas con la
aplicación de las 3R pueden diferir entre países y diferentes áreas de
investigación, pero se necesita un intercambio más estructural y efectivo
de desarrollo de métodos, así como más inversión, especialmente en
algunos países y áreas, para promover la acceso real a estrategias que se
adhieren a los principios éticos de las 3R.64Además, dado que el cribado
virtual y los métodos in vitro forman parte de un nuevo enfoque
GORZALCZANYYRODRÍGUEZ BASSO
numerosas organizaciones independientes promueven las metodologías (NAM)
para reemplazar las pruebas con animales, especialmente en el contexto de la
evaluación de riesgos y peligros químicos, se deben realizar más esfuerzos a
nivel mundial para determinar su idoneidad para una posible aplicación
regulatoria.sesenta y cinco
En este contexto, este manuscrito trata de resaltar diferentes estrategias para
permitir a los investigadores encontrar la mejor manera de responder a su indagación
de investigación, cumpliendo con los requisitos éticos para una experimentación
responsable, incluso cuando su presupuesto no es el más alto (Figura 1).
DIVULGACIÓN
Los autores declaran no tener ningún conflicto de intereses. No se generaron ni
analizaron conjuntos de datos durante el presente estudio.
RECONOCIMIENTO
Agradecemos a todos los autores cuyas publicaciones podrían incluirse en
nuestro análisis. Este trabajo fue apoyado por Becas de la Universidad de
Buenos Aires, UBACYT 20020170100437BA.
DECLARACIÓN DE ÉTICA
No aplica.
AUTOR CONTR I BU CIÓN
SG conceptualizó la idea, revisó la literatura y escribió la versión final.
ARB revisó críticamente el borrador inicial y contribuyó a revisar el
manuscrito. Todos los autores leyeron y aprobaron la versión final
para su publicación.
DECLARACIÓN DE HABILIDAD DE DISPONIBILIDAD DE DATOS
El intercambio de datos no es aplicable a este artículo ya que no se crearon ni
analizaron nuevos datos en este estudio.
ID ORCO
Susana B. Gorzalczany https://orcid.org/0000-0002-4744-5969
REFERENCIAS
1. Hubrecht RC, Carter E. Las 3R y la técnica experimental humana:
implementación del cambio.animales. 2019;10:754. doi:10.3390/
ani9100754
2. Cheluvappa R, Scowen P, Eri R. Ética de la investigación con animales en la
remediación de enfermedades humanas, su enseñanza institucional; y
alternativas a la experimentación con animales.Perspectiva Pharmacol Res.
2017;5(4):e00332. doi:10.1002/prp2.332
3. Russell WMS. El aumento de la humanidad en la experimentación:
sustitución, reducción y refinamiento.Lab Anim Bur Recoger papeles.
1957;6:23-25.
4. Russell WMS. Las tres erres: pasado, presente y futuro.Anim Welf.
2005;14:279-286.
5. Russell WMS, Burch RL.Los principios de la técnica experimental
humanitaria. Methuen & Co Ltd; 1959, capítulo 4, línea 6-8.
6. Smyth D.Alternativa a los experimentos con animales. Prensa erudito; 1978:218.
7. Bolas M. Alternativa a los experimentos con animales: servir en el término
medio.AATEX. 2005;11(1):4-14. doi:10.11232/aatex.11.4
8. Borchers AT, Hagie F, Keen CL, Gershwin E. La historia y los desafíos
contemporáneos de la Administración de Alimentos y Medicamentos de
EE. UU.clin ther. 2007; 29:1-10. doi:10.1016/j.clinthera.2007.01.006
|7 de 9
9. PM de cera. Elixires, diluyentes y la aprobación de la Ley Federal de
Alimentos, Medicamentos y Cosméticos de 1938.Ann Intern Med.
1995;122(6):456-461. doi:10.7326/0003-4819-122-6-199503150-00009
10. Lee JH, Kim YH, Kwon JH. Uso indebido fatal de desinfectantes de humidificadores
en Corea: importancia de evaluar la evaluación de riesgos e implicaciones para
el manejo de productos químicos en productos de consumo.Medio Ambiente Sci
Technol. 2012;46(5):2498-2500. doi:10.1021/es300567j
11. Lemire R, Dumas O, Chanoine S, et al. Exposición doméstica a agentes
de limpieza irritantes y asma en mujeres.Entorno internacional.
2020;144:106017. doi:10.1016/j.envint.2020.106017
12. OCDE 405. Directrices de la OCDE para la prueba de productos químicos.
Corrosión/irritación ocular aguda. 2012.
13. Spencer AJ, Eldredge JD. Roles de los bibliotecarios en las revisiones sistemáticas:
una revisión de alcance.J Med Libr Assoc. 2018;106(1):46-56. doi:10.5195/
jmla.2018.82
14. Fisher M, Feuerstein G, Howells DW, et al.; Grupo ESCALERA. Actualización de las
recomendaciones preclínicas de la mesa redonda de la industria académica de terapia
de accidentes cerebrovasculares.Ataque. 2009;40(6):2244-2250. doi:10.1161/STROK
EAHA.108.541128
15. Wenlock MC, Potter T, Barton P, Austin RP. Un método para medir la
lipofilia de compuestos en mezclas de 10.Pantalla J Biomol.
2011;16(3):348-355.
16. Lapins M, Arvidsson S, Lampa S, et al. Un predictor de confianza para logD
utilizando regresión conforme y una máquina de vectores de soporte.J
Cheminform. 2018;10:17. doi:10.1186/s13321-018-0271-1
17. Kujawski J, Popielarska H, Myka A, Drabińska B, Bernard M. El parámetro
log P como descriptor molecular en el diseño de fármacos asistido por
computadora: una descripción general.CMST. 2012;18(2):81-88.
doi:10.12921/cmst.2012.18.02.81-88
18. Plante J, Werner S. JPlogP: un predictor de logP mejorado entrenado
con datos predichos.J Cheminform. 2018;10:61. doi:10.1186/s1332
1-018-0316-5
19. Leeson PD, Springthorpe B. La influencia de los conceptos similares a
medicamentos en la toma de decisiones en química médica.Nat Rev Drug
Discovery. 2007;6(11):881-890. doi:10.1038/nrd2445
20. Llanta KT. Predicción in silico de la toxicidad y sus aplicaciones para productos
químicos en el trabajo.Toxicol Medio Ambiente Salud Ciencia.
2020;12(3):191-202. doi:10.1007/s13530-020-00056-4
21. Thomas PC, Bicherel P, Bauer FJ. Cómo los enfoques in silico y QSAR
pueden aumentar la confianza en la evaluación de riesgos y peligros
ambientales.Integr Environ Assess Manag. 2019;15(1):40-50.
doi:10.1002/ieam.4108
22. Neves BJ, Braga RC, Melo-Filho CC, Moreira-Filho JT, Muratov EN, Andrade
CH. Detección virtual basada en QSAR: avances y aplicaciones en el
descubrimiento de fármacos.Farmacol frontal. 2018;9:1275. doi:10.3389/
ffhar.2018.01275
23. Bopp SK, Kienzler A, Richarz AN, et al. Evaluación regulatoria y gestión
de riesgos de mezclas químicas: desafíos y caminos a seguir.Crit Rev
Toxicol. 2019;49(2):174-189. doi:10.1080/10408 444.2019.1579169
24. Ankley GT, Bennett RS, Erickson RJ, et al. Vías de resultados adversos:
un marco conceptual para apoyar la investigación ecotoxicológica y
la evaluación de riesgos.Environ Toxicol Chem. 2010;29(3):730-741.
doi:10.1002/etc.34
25. Madden JC, Rogiers V, Vinken M. Aplicación de métodos in silico e in
vitro en el desarrollo de construcciones de vías de resultados
adversos en la vida silvestre.Philos Trans R Soc Lond B Biol Sci.
2014;369(1656):20130584. doi:10.1098/rstb.2013.0584
26. Aswathy L, Jisha RS, Masand VH, Gajbhiye JM, Shibi IG. Diseño de nuevos
inhibidores de agregación beta amiloide utilizando QSAR, modelado de
farmacóforos, acoplamiento molecular y predicción ADME.Silico
Pharmacol. 2018;6:12. doi:10.1007/s40203-018-0049-1
27. Macalino SJ, Gosu V, Hong S, Choi S. Papel del diseño de fármacos asistido por
computadora en el descubrimiento moderno de fármacos.Arch Pharm Res.
2015;38(9):1686- 1701. doi:10.1007/s12272-015-0640-5
8 de 9 |
28. Prabhu SV, Singh SK. Identificación de moduladores alostéricos duales negativos
potenciales de la familia mGluR del grupo I: una detección basada en la forma,
predicción de ADME, acoplamiento de ajuste inducido y enfoque de dinámica
molecular contra enfermedades neurodegenerativas.Curr Top Med Chem.
2019;19(29):2687-2707. doi:10.2174/15680266196661911051 12800
29. Silva-Júnior EF, Aquino TM, Araújo-Júnior JX. Cálculos mecánicos cuánticos
(QM) aplicados a la predicción de fármacos ADMET: una revisión.Metab
actual de drogas. 2017;18(6):511-526. doi:10.2174/138920021866617
0316094514
30. Wu F, Zhou Y, Li L, et al. Enfoques computacionales en estudios preclínicos
sobre descubrimiento y desarrollo de fármacos.Química frontal.
2020;8:726. doi:10.3389/fchem.2020.00726
31. Balfour H. DSP-0038. Primer fármaco para el Alzheimer diseñado por IA para
entrar en ensayos clínicos. 2021. Consultado el 5 de agosto de 2021. https://
www.europ eanpharmaceuticalreview.com/news/153839/first-ai-
designedalzheimers-drug-to-enter-clinical-trials/
32. Balfour H. DSP-1181: fármaco creado con IA entra en ensayos clínicos.
Revista Farmacéutica Europea. 2020. Consultado el 1 de diciembre
de 2020. https://www.europeanpharmaceuticalreview.com/news/
112044/dsp-1181-drug-created-using-ai-enters-clinical-trials/
33. Burki T. Un nuevo paradigma para el desarrollo de fármacos.Lanceta.
2020;2(5):E226-E227. doi:10.1016/S2589-7500(20)30088-1
34. Alves VM, Auerbach SS, Kleinstreuer N, et al. Entrada de datos curados - Salida de modelos
in silico confiables: el impacto de la calidad de los datos en la confiabilidad de los
modelos de inteligencia artificial como alternativas a las pruebas con animales.
Animación de laboratorio alternativo. 2021. En línea antes de la impresión.
doi:10.1177/02611 929211029635
35. Sahoo D, Swanson L, Sayed IM, et al. La inteligencia artificial guió el
descubrimiento de una terapia protectora de barrera en la enfermedad
inflamatoria intestinal.comuna nacional. 2021;12(1):4246. doi:10.1038/
s41467-021-24470-5
36. Olğaç A, Türe A, Olğaç S, Möller S. Detección virtual de alto rendimiento
basada en la nube en el descubrimiento de fármacos novedosos. En:
Kołodziej J, González-Vélez H, eds.Modelado y simulación de alto
rendimiento para aplicaciones de Big Data. Apuntes de clase en
informática. Springer, Cham; 2019:11400. 10.1007/978-3-030-16272-6_9
37. Bowes J, Brown AJ, Hamon J, et al. Reducción del desgaste de medicamentos
relacionado con la seguridad: el uso de perfiles farmacológicos in vitro.Nat Rev
Drug Discovery. 2012;11(12):909-922. doi:10.1038/nrd3845
38. Pridgeon CS, Schlott C, Wong MW, et al. Modelos in vitro organotípicos
innovadores para la evaluación de la seguridad: alineación con los requisitos
reglamentarios y comprensión de los modelos del corazón, la piel y el hígado
como paradigmas.Arco Toxicol. 2018;92(2):557-569. doi:10.1007/s0020
4-018-2152-9
39. Kitaeva KV, Rutland CS, Rizvanov AA, Solovyeva VV. Sistemas de prueba in vitro
basados en cultivos celulares para la detección de fármacos contra el cáncer.
Frente Bioeng Biotechnol. 2020;8:322. doi:10.3389/fbioe.2020.00322
40. Griesinger C, Desprez B, Coecke S, Casey W, Zuang V. Validación de métodos
in vitro alternativos a las pruebas con animales: conceptos, desafíos,
procesos y herramientas.Adv Exp Med Biol. 2016;856:65-132.
doi:10.1007/978-3-319-33826-2_4
41. Mandon M, Huet S, Dubreil E, Fessard V, Le Hégarat L. Esferoides
tridimensionales HepaRG como modelo de hígado para estudiar la
genotoxicidad humana in vitro con el ensayo de electroforesis en gel de
una sola célula. Informes científicos. 2019;9(1):10548. doi:10.1038/
s41598-019-47114-7
42. Gorzalczany S, Moscatelli V, Ferraro G. Artemisia copa extracto acuoso
como vasorelajante e hipotensor.J Etnofarmaco. 2013;148(1):56-61.
doi:10.1016/j.jep.2013.03.061
43. Kapoor A, Chen CG, Iozzo RV. Un ensayo de anillo aórtico simplificado: un
método útil ex vivo para evaluar los parámetros bioquímicos y
funcionales de la angiogénesis.Matriz Biol Plus. 2020;6-7:100025.
doi:10.1016/j. mbplus.2020.100025
GORZALCZANYYRODRÍGUEZ BASSO
44. Xu W, Jong Hong S, Jia S, Zhao Y, Galiano RD, Mustoe TA. Aplicación de un modelo
de cultivo de piel ex vivo humano de espesor parcial en el estudio de
cicatrización de heridas cutáneas.Invertir en laboratorio. 2012;92(4):584-599.
doi:10.1038/labinvest.2011.184
45. Corzo-León DE, Munro CA, MacCallum DM. Un modelo de piel humana ex
vivo para estudiar infecciones fúngicas superficiales.Microbiol frontal.
2019;10:1172. doi:10.3389/fmicb.2019.01172
46. Eberlin S, da Silva MS, Facchini G, et al. El modelo de piel ex vivo como
herramienta alternativa para la evaluación de eficacia y seguridad de productos
tópicos.Animación de laboratorio alternativo. 2020;48(1):10-22.
doi:10.1177/02611 92920914193
47. Andrade TA, Aguiar AF, Guedes FA, et al. Modelo ex vivo de piel humana
(hOSEC) como alternativa al uso animal para pruebas cosméticas.
Procedia ing. 2015;110:67-73. doi:10.1016/j.proeng.2015.07.011
48. Avci P, Sadasivam M, Gupta A, et al. Modelos animales de enfermedades de la piel para el
descubrimiento de fármacos.Experto Opinar Drogas Descubrimiento.
2013;8(3):331-355. doi:10.1517/17460441.2013.761202
49. Tema ICH S7B CPMP/ICH/423/02.
50. Meigs L, Smirnova L, Rovida C, Leist M, Hartung T. Experimentación con
animales y sus alternativas: la ómica más importante es la economía.
ALTEX. 2018;3:275-305. doi:10.14573/altex.1807041
51. Carbone L. Estimación del uso de ratones y ratas en laboratorios estadounidenses por
extrapolación de especies reguladas por la Ley de Bienestar Animal.Representante
científico. 2021;11:493. doi:10.1038/s41598-020-79961-0
52. Rivera E, Hernandez R, Carissimi AS, Pekow C. Legislación de animales
de laboratorio en América Latina.ILAR J. 2016;57(3):293-300.
doi:10.1093/ilar/ilw017
53. Taylor K, Rego AL. Una estimación del número de animales utilizados con
fines científicos en todo el mundo en 2015.Animación de laboratorio
alternativo. 2019;47(5-6):196-213. doi:10.1177/0261192919899853
54. Bailoo JD, Reichlin TS, Würbel H. Refinamiento del diseño experimental
y conducta en la investigación con animales de laboratorio.ILAR J.
2014;55(3):383-391. doi:10.1093/ilar/ilu037
55. Würbel H. Más de 3R: la importancia de la validez científica para el análisis de daños y
beneficios de la investigación con animales.Animación de laboratorio. 2017;46(4):164-
166. doi:10.1038/laban.1220
56. Smith AJ, Clutton RE, Lilley E, Hansen KEA, Brattelid T. PREPARE: pautas para
planificar la investigación y las pruebas con animales.Animación de laboratorio.
2018;52(2):135-141. doi:10.1177/0023677217724823
57. Percie du Sert N, Bamsey I, Bate ST, et al. El asistente de diseño
experimental.PLoS Biol. 2017;15(9):e2003779. doi:10.1371/journ
al.pbio.2003779
58. Kilkenny C, Browne W, Cuthill IC, Emerson M, Altman DG; Grupo de Trabajo
de Directrices de Reporte de NC3Rs. Investigación con animales: informes
de experimentos in vivo: las pautas ARRIVE.Br J Pharmacol.
2010;160(7):1577-1579. doi:10.1111/j.1476-5381.2010.00872.x
59. du Sert NP, Hurst V, Ahluwalia A, et al. Las pautas de ARRIVE
2.0: directrices actualizadas para informar sobre investigaciones con animales.
PLoS Biol. 2020;18(7):e3000410. doi:10.1371/journal.pbio.3000410
60. Kroeger M. Cómo las tecnologías ómicas pueden contribuir a los principios de las
'3R' mediante la introducción de nuevas estrategias en las pruebas con
animales.Tendencias Biotecnología. 2006;24(8):343-346. doi:10.1016/j.tibte
ch.2006.06.003
61. Buesen R, Chorley BN, da Silva Lima B, et al. Aplicación de tecnologías
ómicas en la evaluación de riesgos químicos: informe de un taller de
ECETOC.Regul Toxicol Pharmacol. 2017;91(1):S3-S13. doi:10.1016/j.
yrtph.2017.09.002
62. Cheung C, Jones-McLean E, Yauk C, et al. Evaluación del uso de la
toxicogenómica en la evaluación de riesgos en Health Canada: un
documento exploratorio sobre las prácticas actuales de Health Canada
para el uso de la toxicogenómica en la evaluación de riesgos. Canadá.ca.
2019. Consultado el 11 de noviembre de 2020. https://www.canada.ca/en/
health-canada/services/publications/science-research-data/e Evaluation-
use-toxic ogenomics-risk-assessment.html
GORZALCZANYYRODRÍGUEZ BASSO |9 de 9

63. Dolor G, Hickey G, Mondou M, et al. Impulsores y obstáculos para la adopción de la evaluación de la seguridad.Regul Toxicol Pharmacol. 2020;112:104592.
toxicogenómica para la evaluación de riesgos químicos: conocimientos desde la doi:10.1016/j.yrtph.2020.104592
perspectiva de las ciencias sociales.Perspectiva de salud ambiental.
2020;128(10):1-10. doi:10.1289/EHP6500
64. Törnqvist E, Annas A, Granath B, Jalkesten E, Cotgreave I, Öberg
Cómo citar este artículo:Gorzalczany SB, Rodríguez Basso AG.
M. El enfoque estratégico en los principios de las 3R revela importantes
Estrategias para aplicar las 3R en pruebas preclínicas.Farmacol
reducciones en el uso de animales en las pruebas de toxicidad farmacéutica.
Más uno. 2014;9(7):e101638. doi:10.1371/journal.pone.0101638 Res Perspectiva. 2021;9:e00863.https://doi.org/10.1002/
65. Parroquia ST, Aschner M, Casey W, et al. Un marco de evaluación para prp2.863
metodologías de nuevo enfoque (NAM) para la salud humana