UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE CHIRIQUÍ

FACULTAD DE CIENCIAS NATURALES Y EXACTAS

ESCUELA DE QUÍMICA
BIOLOGÍA 110

LABORATORIO N°2

 Noriel López 4-804-1957

 Mario Pimentel 4-786-610

MANEJO Y USO DEL MICROSCOPIO

I. INTRODUCCION

El microscopio es un instrumento diseñado para examinar objetos que no pueden verse a simple
vista. Sin su ayuda, el ojo humano no podría distinguir objetos menores a 0.1 mm. El microscopio
compuesto está constituido por la combinación de dos sistemas de lentes convergentes y
divergentes: uno próximo al ojo del observador, por lo cual se llama ocular, y otro próximo al objeto,
denominado objetivo. También está constituido por partes mecánicas (tornillos y soporte), partes
ópticas (objetivos) y partes de iluminación (lámpara, diafragma, condensador). La utilización del
microscopio implica una preparación especial de la muestra que vamos a observar, porque la luz
tiene que pasar a través de ella para que nuestros ojos la puedan observar.

Los objetivos principales de este experimento son: conocer el uso y cuidados del microscopio;
identificar, nombrar y señalar las funciones de las diferentes partes del microscopio; aprender a
preparar y enfocar una placa húmeda.

II. MÉTODO

Se inició conociendo las partes del microscopio y las funciones que desempeñan, posteriormente,
tomamos una muestra de agua estancada y la colocamos en el portaobjetos con un gotero, luego se
le colocó el cubreobjetos, colocamos nuestra muestra sobre la platina, observamos con los objetivos:
4X, 10X Y 40X las características que presentaba nuestra muestra de agua estancada. Se ajustó los
tornillos de enfoque para apreciar con mayor claridad la imagen observada. Por otro lado, se inició
con el recorte la letra e de 3 milímetros de diámetro en un papel periódico, luego sobre una lámina
de portaobjetos a la cual previamente se le había colocado una gota de agua, se ubicó el recorte
hasta que este estuviera totalmente empapado, posteriormente se cubrió con un cubreobjetos,
colocándola primero al lado de la gota de agua y luego dejándola caer sobre el montaje. Colocamos
la preparación elegida sobre la platina, se observó con el objetivo de menor aumento (4x), moviendo
el carro mecánico en varias direcciones. Hicimos nuestros dibujos y anotamos los resultados. En la
segunda parte de la experiencia de laboratorio, cortamos 1 cm cuadrado de una tira de papel
milimetrado, lo colocamos en el portaobjetos y lo situamos sobre la platina del microscopio, entonces
observamos el papel milimetrado con los objetivos: 4X, 10X y 40X, procurando que al observar con
el objetivo de menor aumento quedara una línea verde en borde izquierdo del campo óptico;
dibujamos y anotamos lo que observamos. Posteriormente, se inició la tercera parte de laboratorio
determinando el poder de resolución del microscopio, utilizamos la preparación de la letra e,
enfocamos con bajo poder y luego con alto poder, de acuerdo a las observaciones en ambos
poderes de aumento, dibujamos y anotamos lo que observamos. Por otro lado, observamos la
profundidad de campo, cuando se colocó una gota en portaobjetos y en ella cruzada dos hebras de
hilos de colores contrastantes de color rojo y negro. Luego de haber colocado el cubreobjetos sobre
las hebras de hilo, enfocamos el área donde se cruzan los hilos. Dibujamos nuestras observaciones
y anotamos nuestros resultados. Anteriormente, en las muestras de la letra e, la hebra de hilo
observada y el agua estancada, calculamos el número de veces en que aumentaron los objetos
observados, tomando en cuenta que la ampliación es igual al producto del aumento del lente ocular
por el objetivo.

III. RESULTADOS

Cuadro #1. Observación del agua estancada, vista a través del microscopio.

Objeto Poder de Fotografía Análisis y conclusiones

observado resolución

Se observa un Closterium,
es un tipo de alga
4X perteneciente a la familia
Closteriaceae.

Agua
estancada

Se observa el alga verde

10X Closterium con un poco más
de detalle, con forma
semilunar.

Se observa el alga verde

Closterium, con mayor
 40X detalle, es de huso
alargado con una perfecta
simetría bilateral. El fondo
se ve más claro (amarillo
claro) por el aumento de la
resolución a 40X.

Cuadro #2. Posición de la imagen de la letra e, observadas en diferentes orientaciones a través del
microscopio.

Orientación de la imagen Orientación observada a través del

microscopio
normal invertida
arriba abajo
abajo arriba
derecha izquierda
izquierda derecha

Cuadro #3. Diámetro del papel milimetrado a través de los objetivos: 4X, 10X y 40X

Objetivos Diámetro (mm) Diámetro ( μm) Imagen observada

4X 4.5 mm 4500 μm

10X 1.8 mm 1800 μm

 40X 0.5 mm 500 μm

Determinación del tamaño de los objetos microscópicos.

D.O.M= diámetro del campo microscópico con el objetivo de mayor aumento.

d.o.m.
D.O.M = donde:
R

D.O.M= diámetro del campo microscópico con el objetivo de mayor aumento.

d.o.m= diámetro del campo microscópico con el objetivo de menor aumento.

R (razón)= valor del objetivo de mayor aumento / valor del objetivo de menor aumento

d.o.m= 4500 μm

40 X
R (razón)=
4X

R (razón)= 10

4500 μm
D.O.M =
10

D.O.M = 450 μm

Cuadro #4. Observación del papel milimetrado a través de los objetivos: 4X, 10X y 40X.

Objetivo Líneas horizontales del Líneas verticales del Tamaño de las

papel milimetrado papel milimetrado marcas
(divisiones)
 4X 3 4 grandes
10X 2 1 medianas
40X - 1 mas pequeñas

Cuadro #5. Observación de la letra e, vista a través del microscopio..

Objeto Poder de Fotografía Análisis y conclusiones

observado resolución

4X
Se observa la letra e
completa, al revés y con la
tinta no uniforme.

La letra
e

Se empieza a observar
fibras de madera y la tinta
de la letra tiene espacios
10X blancos.

Se observan marcas de la
40X tinta, la letra incompleta y
pequeñas estillas de
madera.
Cuadro #6. Observación de las dos hebras de hilos contrastantes (rojo y negro), vista a través del
microscopio.

Objeto Poder de Fotografía Análisis y conclusiones

observado resolución

Trabajamos con dos hebras

4X de hilo: negro y rojo. Los
colores empiezan a cambiar,
el negro cambia a color
chocolate puro y el rojo
cambia a rojo vino.

Hebras de
hilos
Se observan 2 hebras de
hilo: la negra y la rojo vino y
se observan las microfibras
que componen cada hebra.
10X

Solo se observa una hebra,

la de color rojo y se ve
claramente y separadas las
40X microfibras que componen
la hebra de color rojo.

Cuadro #7. Aumento observado para cada objeto observado en la práctica de laboratorio.

Objetivo Aumento del lente ocular Poder de aumento

4X 10 40 veces mas
10X 10 100 veces mas
40X 10 400 veces mas

Poder de Resolución
La resolución de un objetivo depende de la longitud de onda de la luz y de la apertura numérica del
objetivo. La relación que existe entre estos parámetros es la siguiente:

Poder de resolución= Longitud de onda / 2 x Apertura numérica

Poder de resolución para el objetivo 4X:

Poder de resolución= 700 nm/ 2 x (0.10)

Poder de resolución= 3500

Poder de resolución para el objetivo 10X:

Poder de resolución= 700 nm/ 2 x (0.25)

Poder de resolución= 1400

Poder de resolución para el objetivo 40X:

Poder de resolución= 700 nm/ 2 x (0.65)

Poder de resolución= 538.46

IV. DISCUSIÓN

En el cuadro n°1 de los resultados obtenidos, se aprecia la muestra de una gota de agua estancada,
observada a nivel microscópico en 3 poderes de resolución distintos, desde menor aumento (4x, 10x)
hasta mayor aumento (40x). Si bien es cierto, existen notables diferencias en estas 3 resoluciones;
por ejemplo en el de 4x, se pudo observar con mayor visibilidad y en un campo más amplio, un tipo
de microflora, conocido como closterium (alga verde), desde luego, se realizaron los ajustes
necesarios con el tornillo macrométrico y micrométrico para perfeccionar la nitidez de la imagen. En
el caso del poder de resolución con el objetivo 10x, se aumentó la imagen 10 veces, es decir, se
aumentó el poder de resolución para observar mejores detalles específicos en la imagen amplificada.
Por último, la imagen se amplificó 40 veces más con el objetivo 40x, lo cual permitió observar más
detenidamente, ciertos detalles que no se lograron apreciar con los 2 poderes de resolución
anteriores. Se puede decir que con el objetivo de mayor aumento se necesita menor iluminación
mientras que con un objetivo de menor aumento se necesita mayor iluminación, y esto se puede
deducir, ya que si no tiene la iluminación necesaria en la imagen de menor aumento, no se podrían
observar los detalles correspondientes, incluso no se apreciaría lo que quisiéramos observar; así
mismo sucede con la de mayor aumento, porque si se tuviera una mayor iluminación, bloquearía
completamente la visibilidad que el ser humano puede alcanzar y por nada se observarían los
detalles específicos. Cuando se acercó la muestra, el tornillo macrométrico, se movió en sentido
inverso o contrario. Por otra parte, al momento en que se movió el carro mecánico, la imagen de la
muestra se movió en diferentes direcciones. Por ejemplo, al mover a la derecha, se observó en los
oculares que el sentido de la muestra observada se movió hacia la izquierda, y viceversa. Lo mismo
sucedió cuando se movió hacia arriba y hacia abajo, el sentido cambió en cada una, es decir, al
mover hacia arriba, en el ocular se observa que se mueve hacia abajo y viceversa.

En el cuadro n°2 se aprecia la posición de la imagen de la letra e, observadas en diferentes

orientaciones a través del microscopio. Por ejemplo, cuando se ubicó la letra e en el portaobjeto, al
momento de observar dicha imagen con los oculares, hubo diferencia en su posición, ya que como
se dijo, en el portaobjeto, la posición fue normal, mientras que en la observación microscópica su
posición era invertida o al revés. Con base a esto, en la guía de laboratorio se preguntó si la imagen
observada era real o virtual, así que se determinó que era virtual y no real, ya que la imagen se
observó como si se reflejara en un espejo, puesto que los lentes convergentes del microscopio,
proyecta la luz invertida.

En el caso del cuadro n°3 y n°4 se recortó un cuadrito de hoja milimetrada, es decir 10 mm x 10 mm,
y se colocó en el portaobjeto, para posteriormente realizar las observaciones en 3 tipos de
resoluciones, que fueron las anteriormente mencionadas. Si bien es cierto, dicho cuadrito de la hoja
milimetrada al momento de enfocarlo en el microscopio, debía quedar con una línea verde en el
borde izquierdo del campo óptico, de inmediato, se contó cuantas líneas verticales se observaron; es
decir, en milímetros (mm) y luego se transformó a micras. Esto representaba el diámetro del campo
microscópico, dependiendo del objetivo utilizado. Por ejemplo, con el objetivo de 4x, se contó 4.5
mm, con el de 10x 1.8 mm y con el de 40x, 0.5 mm, representando cada uno de ellos el diámetro de
ese campo óptico. Para determinar el diámetro del campo microscópico del objetivo de mayor
aumento, se usó la fórmula descrita en esta sección de resultados, y para el diámetro del campo
microscópico con el objetivo de menor aumento, la misma, lo único que varió fue el n° de líneas
contadas en las imágenes microscópicas de cada objetivo. Otras medidas utilizadas en la
microscopía son el nanómetro (nm) y el angstrom (Å), sin lugar a duda, el diámetro del campo óptico,
disminuyó con el objetivo de 40x, con el de 10x se observó mayor área, y nuevamente con el de 40x,
se apreció mayor detalle.

En el cuadro n°5, se observó la letra e a través del microscopio para determinar el poder de
resolución, y a diferencia del cuadro n°2, en este último se apreciaron las características de la
imagen. Utilizando la preparación con la letra e, se enfocó con bajo poder de resolución en este caso
4x y 10 x, observando no mucha distancia entre los puntos negros que formaban dicha letra e, por
otra parte, con el objetivo que posee mayor poder de resolución, en este caso 40x, se apreció cierta
distancia entre la cantidad de puntos y la distancia entre ellos, ya que el objetivo de 40x amplifica la
imagen 40 veces, por ende, se observaron detalles específicos en la letra e.

En el caso del cuadro n°6, que consistía en la profundidad de campo, se tomaron 2 hebras de hilo de
colores contrastantes y se colocaron en el portaobjeto, cruzando ambas hebras. Primeramente se
ubicó la de color rojo, y por encima de esta, la de color negro. Desde luego, se enfocó el área donde
se cruzaron los hilos, y se anotaron los resultados posteriores. Las hebras de hilo, se debían enfocar
con el objetivo de 4x. Sin lugar a duda, ambas hebras de hilo no se pudieron enfocar con nitidez,
sino solo una de ellas que en este caso fue la hebra de color rojo, tomando en cuenta 3 dimensiones
en la imagen formada, las cuales eran largo (x), ancho (y) y profundidad (z). El objetivo que dio la
mayor profundidad de campo, fue el de 4x, ya como lo habíamos estudiado anteriormente, pues este
es el de menor poder de resolución de la imagen mostrada. Y por último, el objetivo 10x, fue aquel
que ofreció el mejor detalle sin interferir la profundidad de campo, por ende se puede decir, que para
un mejor estudio de una de las hebras de hilo, se tiene que utilizar el objetivo de 4x o 10 x ya que
mediante estos, se podrán identificar ciertas microfibras del mismo, hecho que no se puede realizar
con el objetivo de 40x.

En cuanto al poder de resolución, al aplicar esta fórmula se pudo deducir que mediante un objetivo
de alta apertura numérica se pudo apreciar más detalles que un objetivo de baja apertura numérica.
En nuestro caso, el objetivo de mayor poder de resolución fue el de 40X.

V. CONCLUSIONES

 Los microscopios son instrumentos que permiten tanto la observación del aspecto y forma de las
células y tejidos como la cuantificación de variables observadas, tales como dimensiones,
diámetros, longitudes cantidades, etc.

 La resolución depende de la longitud de onda de la fuente luminosa, el espesor del espécimen, la

calidad de fijación y la intensidad de la coloración.

 El poder de resolución del ojo humano es de 0.2 mm, es decir, que para ver dos objetos
separados, estos deben estar como mínimo a esa distancia.

 Cada lente hace converger los rayos luminosos que la atraviesan. Una de ellas, llamada objetivo,
se sitúa cerca del objeto que se quiere estudiar.

VI. CUESTIONARIO

1. ¿Qué otros tipos de microscopios se utilizan en la investigación biológica?

R= Microscopio confocal: Este es un tipo de microscopio de fluorescencia. En lugar de iluminar la

muestra de forma global se ilumina punto a punto de forma sucesiva y se reconstruye la imagen al
final del proceso.

Microscopio de campo oscuro: Esta técnica permite ver muestras que de otro modo no serían
visibles debido a su transparencia. También tiene la ventaja que no requiere teñir la muestra para
aumentar su contraste y poder observarla.

Microscopio de contraste de fases: La luz viaja a distintas velocidades dependiendo del medio de
propagación. Esta propiedad es utilizada en el microscopio de contraste de fases ya que la luz
atraviesa la muestra con distintas velocidades en distintas secciones. Este efecto es amplificado para
generar la imagen de la muestra.
 2. ¿Qué son objetivos de inmersión?

R= Son los objetivos construidos de tal forma que han de utilizarse interponiendo entre su lente
frontal y la preparación, un líquido.

3. ¿Para qué se utiliza el aceite de inmersión (cedro) cuando usamos el objetivo de

inmersión?

R= El aceite de inmersión se utiliza para proteger la muestra y la lente del objetivo, cuando se coloca
la cantidad justa entre el cubreobjetos.

4. Señale 4 ventajas y desventajas del microscopio óptico y el microscopio electrónico.

R= Ventajas del microscopio óptico:

 Para el microscopio óptico, la preparación de muestras biológicas es más fácil.

 Es más fácil de calibrar.
 Utiliza reactivos no tóxicos
 Utiliza lentes para ampliar las imagenes de los objetos observados

Desventajas del microscopio óptico:

 El aumento obtenido con estos microscopios es reducido, debido a la longitud de onda

de la luz visible que impone limitaciones.
 No se pueden realizar investigaciones muy profundas debido a la baja resolución de los
lentes.
 Mayor frecuencia de contaminaciones.
 Desgaste de las vistas, puesto que estos utilizan oculares, y si es monocular, esto
puede traer cansancio en uno de los ojos, por esto se recomienda mantener ambos
abiertos.

Ventajas del microscopio electrónico:

 Mayor magnificación.
 Profundidad de campo mejorada.
 Control de magnificación más fino.
 Utiliza electrones en lugar de fotones o luz visible para formar imágenes de objetos
diminutos.

Desventajas del microscopio electrónico:

 El limitado diámetro de la apertura no permite que la información detallada alcance la

imagen, limitando de este modo la resolución.
  El contraste de amplitud (que radica en la naturaleza corpuscular de los electrones) se
debe al contraste de difracción, provocado por la pérdida de electrones del rayo. Es un
contraste dominante en especímenes gruesos. 

 Existen también distintas aberraciones producidas por las lentes: astigmática, esférica y
cromática.

 En el material biológico presenta dos problemas fundamentales: el entorno de vacío y la

transferencia de energía.

5. Mencione las características de una imagen real y una virtual.

R= La imagen real es aquella que se forma cuando, tras pasar por el sistema óptico, los rayos
de luz son convergentes. Esta imagen no la podemos percibir directamente con nuestro sentido de
la vista, pero puede registrarse colocando una pantalla en el lugar donde convergen los rayos.
La imagen virtual es aquella que se forma cuando, tras pasar por el sistema óptico, los rayos
divergen. Para nuestro sentido de la vista los rayos parecen venir desde un punto por el que no han
pasado realmente. La imagen se percibe en el lugar donde convergen las prolongaciones de
esos rayos divergentes. Es el caso de la imagen formada por un espejo plano. Las imágenes
virtuales no se pueden proyectar sobre una pantalla.

6. ¿Qué nombre recibe la parte del ojo que funciona como una lente? Explique

R= El cristalino es una estructura del ojo humano con forma de lente biconvexa que está situado tras
el iris y delante del humor vítreo. Su propósito principal consiste en permitir enfocar objetos situados
a diferentes distancias. 

VII. BIBLIOGRAFÍA

Bibliografía
Crovetto, G. (2013). Objetivo de inmersión Leitz. Obtenido de Objetivo de inmersión Leitz:
https://www.mundomicroscopio.com/tipos-de-microscopios/

Microscopio, M. (2005). Tipos de microscopios. Obtenido de Tipos de microscopios:

https://www.mundomicroscopio.com/tipos-de-microscopios/

Microscopio, M. (2007). El objetivo de un microscopio. Obtenido de El objetivo de un microscopio:

https://www.mundomicroscopio.com/objetivo/

Prezi. (27 de enero de 2015). Ventajas y desventajas del microscopio óptico y electrónico. Obtenido
de Ventajas y desventajas del microscopio óptico y electrónico:
https://prezi.com/i6nbom2cb6pd/ventajas-y-desventajas-del-microscopio-optico-y-el-elctronico/
Wikipedia. (2018). Cristalino. wikipedia la inciclopedia libre. Obtenido de Cristalino. wikipedia la
inciclopedia libre: https://es.wikipedia.org/wiki/Cristalino