EL MICROSCOPIO

Un microscopio es un aparato o mecanismo que posibilita una mejor visibilidad de los elementos

u objetos de menor tamaño, obteniendo una imagen aumentada de los mismos. Este instrumento
se caracteriza por aumentar la imagen hasta el nivel de la retina para así poder captar mucho
mejor la información. La ciencia que se encarga de la investigación de esta serie de objetos
pequeños, empleando este instrumento tiene por nombre microscopía.
Etimológicamente hablando la palabra microscopio proviene del griego μικρός σκοπέω, que
quiere decir «dispositivo o aparato para observar pequeñas cosas, que no son visibles a
simple vista», vocablo formado por «micro» que significa «pequeño» y «scopio» alude a
«aparato para ver u observar».
En la Asignatura de Histología, Embriología y Genética es de suma utilidad para el estudio y
diferenciación de estructuras celulares y tejidos del cuerpo humano.

Tipos de Microscopios:
Microscopios según el sistema de iluminación
A un nivel básico podemos diferenciar los microscopios según el medio utilizado para iluminar
la muestra. El sistema más habitual es iluminar la muestra con luz visible, dando lugar al
microscopio óptico. Sin embargo, existen alternativas.
1) Microscopio óptico
En el microscopio óptico la muestra es iluminada mediante luz visible. Esto significa que existe
un foco de luz apuntando hacia la muestra. Esa misma luz es conducida a través del objetivo y
del ocular hasta llegar a formar la imagen en el ojo del observador. Este es el tipo de microscopio
más habitual pero su resolución está limitada por la difracción de la luz. El aumento máximo que
se puede obtener con este tipo de microscopio alcanza alrededor de 1500x.
2) Microscopio electrónico
En el microscopio electrónico la muestra no es iluminada con luz sino que se utilizan electrones.
Los electrones impactan contra la muestra dentro de una cámara de vacío. Existen diferentes
tipos de microscopio electrónico pero su principio de funcionamiento se basa siempre en
capturar los electrones dispersados u omitidos por la muestra y así poder reconstruir una imagen.
La ventaja principal de este tipo de microscopio es que puede obtenerse un nivel de aumento
muy superior al del resto de microscopios. Sin embargo, es necesario preparar la muestra y
colocarla en una cámara de vacío de modo que no es posible observar muestras biológicas vivas.
Los dos tipos de microscopio electrónicos principales son el microscopio electrónico de
barrido y el microscopio electrónico de transmisión.
3) Microscopio de luz ultravioleta
Los microscopios de luz ultravioleta iluminan la muestra, como el nombre indica, con luz
ultravioleta. Este tipo de luz tiene una longitud de onda más corta que la luz visible utilizada en
los microscopios ópticos. La ventaja principal de utilizar esta técnica es que puede alcanzarse
una resolución mejor que con luz visible. Además, el contraste obtenido en la muestra es distinto
que en los microscopios ópticos. De este modo, con el microscopio de luz ultravioleta pueden
observar muestras que aparecen transparentes si son observadas con luz visible.
4) Microscopio de luz polarizada
También conocido como microscopio petrográfico. Este microscopio es en realidad un tipo de
microscopio óptico al que se la han añadido dos polarizadores. Esto significa que la onda de luz
utilizada para observar la muestra tiene una dirección de oscilación concreta. Este tipo de
microscopio es muy útil para observar estructuras cristalinas de rocas y minerales.
5) Microscopio de fluorescencia
Los microscopios de fluorescencia son aquellos que utilizan las propiedades de fluorescencia
para generar una imagen de la muestra. Este microscopio permite observar sustancias que
emiten luz propia cuando son iluminadas con una longitud de onda determinada. Para ello la
muestra es habitualmente iluminada con una lámpara xenón o con una lámpara de vapor de
mercurio. Estos microscopios incorporan además filtros de luz para aislar la luz correspondiente
a la muestra.
Microscopios según el número de lentes
En el caso concreto del microcopio óptico puede hacerse una distinción según el número de
lentes de su sistema óptico.
1) Microscopio simple
Este tipo de microscopio dispone de una única lente y es más habitualmente conocido como lupa.
Aún así, con un microscopio simple pueden conseguirse grandes aumentos. Hay que destacar
que durante el siglo XVII, Antonie van Leeuwenhoek utilizó este tipo de microscopios para
conseguir el mayor aumento alcanzado hasta el momento. A día de hoy, uno de los conceptos
basados en la misma idea es el Foldscope.
2) Microscopio compuesto
Este tipo de microscopio es aquél que dispone de por lo menos dos lentes. Este es el caso más
habitual en todos los microscopios modernos. Normalmente los microscopios disponen de
distintas lentes tanto en el objetivo como en el ocular para corregir las aberraciones ópticas y
alcanzar una imagen con buena calidad. La invención del microscopio está asociada con
la invención del microscopio compuesto. Este apareció en los Países Bajos a finales del siglo
XVI.
Microscopios según la transmisión de la luz
Existen dos tipos básicos de microscopio óptico según el camino seguido por la luz hasta llegar
el objetivo: microscopios de luz transmitida y los microscopios de luz reflejada.
1) Microscopio de luz transmitida
En este tipo de microscopio la luz atraviesa la muestra. Para esta clase de microscopios es
necesario preparar la muestra cortándola en láminas muy finas. La muestra se ilumina desde
debajo la platina. La preparación de la muestra hace que esta sea semitransparente y parte de la
luz pueda atravesarla y llegar al objetivo para ser observada posteriormente a través del ocular.
En general este es el sistema de iluminación más utilizado entre los microscopios ópticos.
2) Microscopio de luz reflejada
En este caso la luz ilumina la muestra y parte de esta es reflejada y dirigida al objetivo. De este
modo es necesario iluminar la muestra desde la parte superior de la platina. Este tipo de
microscopía es utilizada para examinar materiales opacos como pueden ser estructuras metálicas,
materiales cerámicos, etc. Existen microscopios ópticos que permiten los dos tipos de
iluminación de modo que es posible observar tanto muestras semitransparentes como opacas.
Los microscopios estereoscópicos (permiten observar la muestra en tres dimensiones) son
siempre de luz reflejada.
Microscopios según el número de oculares
Los microscopios también pueden ser clasificados según el número de oculares. En base a este
criterio puede distinguirse entre microscopios monoculares, bioculares o trioculares.
1) Microscopio monocular

Microscopio monocular
Este tipo de microscopio dispone de un solo ocular a través del cual se puede observar la
muestra. Es el tipo más sencillo y es ideal para aficionados a la microscopía o para alguien que
se introduce en este campo. Su desventaja principal es que puede resultar un poco incómodo si
tiene que utilizarse durante largos periodos de tiempo. Por este motivo los microscopios
monoculares no son en general utilizados en ámbitos profesionales.
2) Microscopio biocular
Los microscopios bioculares disponen, como indica su nombre, de dos oculares. Esto permite
observar la muestra simultáneamente con los dos ojos resultando en una mayor comodidad para
el usuario. Este es el tipo de microscopio más utilizado en los laboratorios de investigación. La
distancia entre los dos oculares puede regularse para adaptarse a las necesidades del usuario. No
hay que confundir el microscopio binocular con el microscopio estereoscópico. El microscopio
estereoscópico siempre es binocular. Sin embargo, no todo microscopio binocular es
estereoscópico.
3) Microscopio triocular
El microscopio triocular está equipado con dos oculares para observar la muestra además de un
tercer ocular para conectar una cámara. En el caso de conectar una cámara digital esta puede
conectarse a un ordenador para ver la imágenes de la muestra en tiempo real. Con este
microscopio es posible observar la muestra y al mismo tiempo tomar fotografías o videos con la
cámara.
Microscopios según la configuración de los elementos

Microscopio invertido (Fuente: Zeiss Microscopy)

Un tipo especial de microscopios digitales son los microscopios USB. Estos microscopios

consisten únicamente en una lente de gran aumento y una cámara digital. El aumento que se
alcanza es limitado en comparación con un microscopio óptico convencional. Aún así, son
instrumentos muy versátiles y
Los microscopios convencionales tienen una configuración vertical. Esto significa que el foco de
luz se encuentra en la parte inferior de la estructura. A continuación, hay la platina donde se
coloca la muestra y finalmente el cabezal con los objetivos y el ocular en la parte superior. Esta
es la configuración más habitual pero no la única.
Existen también los microscopios invertidos. Esto microscopios tienen una configuración
totalmente opuesta a la del microscopio vertical. La muestra es iluminada desde la parte superior
y los elementos ópticos se encuentran debajo la platina. Con este tipo de microscopio es posible
observar muestras colocadas en el fondo de un recipiente. Esto es muy útil para mantenerlas
hidratadas y poder así observar muestras vivas y procesos biológicos que duran días.
Microscopios digitales
Los microscopios digitales son aquellos que capturan una imagen digital de la muestra. Esto se
consigue conectando una cámara digital en lugar del ocular. Existen microscopios digitales con
distintas configuraciones. Habitualmente deben conectarse al ordenador para poder transmitir las
imágenes y a continuación visualizarlas. También es cierto que existen microscopios digitales
con una pantalla incorporada. Estos permiten ver la muestra en la pantalla y almacenar imágenes
que pueden transmitirse a continuación a un ordenador mediante conexión USB o tarjeta SD.
útiles para observar objetos cotidianos. Los microscopios USB se conectan al ordenador
mediante conexión USB y permiten guardar imágenes de la muestra.

Microscopio estereoscópico
El microscopio estereoscópico es un tipo de microscopio que permite observar la muestra de
forma tridimensional. Estos microscopios están equipados siempre con dos oculares. La imagen
de la muestra que llega a cada ocular es ligeramente distinta de modo que cuando se combinan se
consigue el efecto 3D. Este efecto no podría conseguirse si la muestra se observara con un solo
ocular.
El aumento que se consigue con el microscopio estereoscópico es inferior al que se consigue con
un microscopio óptico convencional. Sin embargo, los microscopios convencionales solo
permiten una observación bidimensional de la muestra. Los microscopios estereoscópicos son
muy utilizados en aplicaciones donde debe manipularse la muestra mientras se observa. Por
ejemplo para el montaje de circuitos o relojes.
Otros tipos de microscopios
Además de los microscopios anteriormente presentados existen multitud de técnicas de
microscopía adicionales optimizadas para tipos de muestra específicas. Algunos de los que vale
la pena mencionar son:
1) Microscopio confocal
Este es un tipo de microscopio de fluorescencia. En lugar de iluminar la muestra de forma global
se ilumina punto a punto de forma sucesiva y se reconstruye la imagen al final del proceso. Este
proceso de escaneado de la muestra es similar al que se produce en los microscopios electrónicos
de barrido. Este tipo de microscopio fue inventado por Marvin Minsky en 1957.
2) Microscopio de campo oscuro
Esta técnica de microscopía consiste en iluminar la muestra oblicuamente. De este modo los
rayos de luz que llegan al objetivo no provienen directamente del foco de luz sino que han sido
dispersados primero por la muestra. Esta técnica permite ver muestras que de otro modo no
serían visibles debido a su transparencia. También tiene la ventaja que no requiere teñir la
muestra para aumentar su contraste y poder observarla.
 Muestra
observada en un microscopio de campo oscuro
3) Microscopio de contraste de fases
La luz viaja a distintas velocidades dependiendo del medio de propagación. Esta propiedad es
utilizada en el microscopio de contraste de fases ya que la luz atraviesa la muestra con distintas
velocidades en distintas secciones. Este efecto es amplificado para generar la imagen de la
muestra. Mediante esta técnica no hace falta utilizar tintes y, por lo tanto, pueden observarse
células vivas. El microscopio de contraste de fases fue inventado por Frits Zernike en 1932 y
recibió por ello el premio Nobel de física en 1953.
Longitud de onda
La longitud de onda es unos de los parámetros que se utiliza para definir físicamente una onda.
Este parámetro puede definirse para toda onda periódica, es decir, para el tipo de onda que se
repite con exactamente la misma forma cada un intervalo de tiempo determinado.

En una onda periódica la longitud de onda es la distancia física entre dos puntos a partir de los
cuales la onda se repite.
Esta definición puede verse claramente en la siguiente onda sinusoidal. En este caso la longitud
de onda es la distancia entre dos crestas, entre dos valles o entre dos de los puntos en los que la
onda tiene un valor igual a cero.
 Longitud de onda
Dado que longitud de onda es una medida espacial, debe medirse en unidades de longitud.
Siguiendo el Sistema Internacional de Unidades puede medirse en metros o también en
cualquiera de sus múltiplos o submúltiplos (kilómetros, milímetros, nanómetros, etc.).
Habitualmente la longitud de onda se representa mediante la letra griega lambda (λ).
Este parámetro puede definirse para cualquier tipo de onda periódica, incluyendo ondas de
sonido, ondas de agua u ondas electromagnéticas.

Longitud de onda y frecuencia

La longitud de onda y su frecuencia se relacionan fácilmente a partir de la velocidad a la que
viaja la onda.
La frecuencia (f) es simplemente una medida del número de ciclos o repeticiones de la onda por
unidad de tiempo. Por ejemplo, si una onda se repite diez veces por segundo significa que tiene
una frecuencia de diez ciclos por segundo. Esto puede expresarse como una frecuencia de 10
hercios o 10 Hz.

Si conocemos la velocidad de transmisión de la onda (v) y su frecuencia (f), podemos calcular la

longitud de onda (λ) a partir de la siguiente relación:

Por ejemplo, las ondas electromagnéticas viajan en el vacío a la velocidad de la luz, es decir, a
299 792 458 m/s. Si sabemos que una onda electromagnética tiene una frecuencia de 20000 Hz,
su longitud de onda en el vacío puede calcularse como:
Esta expresión es importante porque establece una relación inversamente proporcional entre la
frecuencia y la longitud de onda. Es decir, a mayores frecuencias menor longitud de onda y
viceversa.
Espectro electromagnético según la longitud de onda
El espectro electromagnético es una distribución en función del rango de frecuencias de las
ondas o radiación electromagnética.
Este espectro se ha dividido convencionalmente en bandas o segmentos definidos a partir de
unos límites de frecuencia o longitud de onda. Esta división es interesante porque nos permite
diferenciar entre distintos tipos de onda.
La siguiente tabla presenta una clasificación de estas bandas de radiación electromagnética en
función de su longitud de onda.
Banda Longitud de onda inferior Longitud de onda superior

Rayos gamma – 10 pm

Rayos X 10 pm 10 nm

Rayos ultravioleta 10 nm 380 nm

Luz visible 380 nm 780 nm

Luz infrarroja 780 nm 1 mm

Microondas 1 mm 1 m

Ondas radio 1 m 100 000 km

De forma equivalente, la siguiente tabla muestra la misma clasificación pero en función de

la frecuencia. 
Banda Frecuencia inferior Frecuencia superior

Rayos gamma – 30 EHz

Rayos X 30 EHz 30 PHz

Rayos ultravioleta 30 PHz 789 THz

Luz visible 789 THz 384 THz

Luz infrarroja 384 THz 300 GHz

Microondas 300 GHHz 300 MHz

Ondas radio 300 MHz 3 Hz

La longitud de onda en el microscopio
La longitud de onda de las ondas electromagnéticas es una propiedad importante en el campo de
la microscopía porque está directamente relacionada con la resolución de las observaciones.
En una observación con microscopio, la resolución se define como la mínima distancia que
separa dos puntos que pueden identificarse como cuerpos o elementos distintos.

Esta mínima distancia puede calcularse a partir de la longitud de onda de las ondas utilizadas

para la observación y de la apertura numérica del objetivo. Aunque existen diferentes fórmulas
para expresar esta relación, un expresión muy utilizada en este campo es la siguiente:

En un microscopio óptico la longitud de onda es la longitud de onda de la luz visible. Un valor

medio de este valor puede asumirse igual a 580 nanómetros. Esto significa que si utilizamos un
objetivo con una apertura numérica de, por ejemplo, 0.75 podremos llegar a distinguir detalles
separados por una distancia de 386.67 nanómetros.

Como puede deducirse a partir de esta expresión, una opción para llegar a mejorar la resolución
y distinguir distancias todavía menores es iluminar la muestra con una longitud de onda menor.
Este hecho motivó la invención de la microscopía por luz ultravioleta. La luz ultravioleta está
contenida en un rango de entre 10 y 380 nanómetros. Si, por ejemplo, la muestra se ilumina con
una longitud de onda de 220 nanómetros, en el anterior caso se alcanzaría una resolución
de 146.67 nm.

Esta misma relación se aplica también en los microscopios electrónicos. Los microscopios

electrónicos iluminan la muestra con un haz de electrones en lugar de una onda
electromagnética. Estos electrones pueden ser acelerados a altas frecuencias y en consecuencia
sus longitudes de onda son muy cortas. Es por este motivo que la resolución de un microscopio
electrónico es extremadamente mejor que la de un microscopio óptico.
De todo esto debemos saber que los Microscopios trabajan con sistemas de lentes ópticos que
dependiendo de la longitud de onda se llaman de diferente manera.
El Poder de Resolución: Es la capacidad de un lente para permitir distinguir dos puntos
adyacentes como distintos y separados.
Apertura Numérica: Determina la eficacia del condensador y del objetivo.
El Aumento total de un microscopio; viene dado por el aumento individual del objetivo
multiplicado por el del ocular.

Partes del microscopio óptico

Como toda herramienta científica, los microscopios poseen varias partes que integran todo su
funcionamiento. Sus partes se pueden clasificar de acuerdo a las que pertenecen a su sistema
mecánico y las que pertenecen a su sistema óptico. Sin estas, es imposible que se lleve a cabo el
microscopio funcione correctamente.

Sistema óptico

El microscopio óptico es uno de los inventos que ha marcado un antes y un después en la historia
de la ciencia, especialmente materias medicinales y biológicas. Esencialmente se puede definir
como un instrumento que permite observar en un tamaño aumentado elementos que son
imperceptibles a simple vista y que, gracias a él, se fueron creando muchos otros microscopios,
mismo que poseen un sistema óptico y otro mecánico. El óptico incluye un conjunto de
elementos y lentes de manipulación de la luz que permiten generar una imagen más aumentada.

 Foco: se encarga de emitir los rayos de luz que van dirigidos a la muestra que se está
estudiando.
 Condensador: su función principal es concentrar cada uno de los rayos de luz sobre la
muestra que se va a observar.
 Diafragma: el condensador tiende a estar acoplado con el diafragma, mismo que se
encarga de regular la cantidad de luz incidente empleada en la muestra.
 Objetivo: esta parte fundamental de la herramienta se basa en un conjunto de lentes que
reciben la luz que proviene de la muestra, de esta manera, permite aumentar la imagen de
la muestra que se está observando.
 Estos se clasifican en Objetivos Secos (Lupa 5x, 10x, 40x) y objetivo de inmersión de
100x

 Ocular: se encarga de ampliar la imagen que proviene del objetivo, de hecho, es a través
de esta parte que se puede observar la muestra totalmente. Hay diferentes tipos:
Monocular, biocular, triocular.

Sistema Mecánico

Este sistema se basa en la proporción del soporte estructural de todos los elementos que han sido
mencionados con anterioridad en este mismo apartado. Acá ocurre exactamente lo mismo que
con el sistema óptico, si no se están todos, entonces no se puede cumplir el microscopio función
de manera correcta.

Se clasifica de la siguiente manera:

 Base: también conocido como pie, es el encargado de mantener el microscopio en una

posición estable.
 Brazo o Columna: Es una estructura principal de la herramienta, además, conecta la base
con el sistema óptico del mismo.
 Platina: es la pieza horizontal de la herramienta de ampliación de muestras y, allí, se
coloca la muestra que será observada.
 Carro: es el que permite mover la muestra de arriba hacia abajo y de derecha a izquierda.
 Tornillos Macrométrico: Es el que permite el enfoque de la muestra.
 Tornillo Micrométrico: Es el que le da la nitidez a la preparación.
 Revólver: Es donde se encuentran ubicados los objetivos, generalmente son de 4 y puede
girar para seleccionar el objetivo adecuado.
 Tubo: (monocular), se encarga de conectar los objetivos con el ocular.
 Cuidados del Microscopio

 Colocar una mano en la columna y la otra en la base para trasladarlo.

 Evitar inclinarlo.
 Encendidos y apagados correctos.
 Limpiar el lente en inmersión con una gasa o paño limpio después de usarlo.
 Evitar mover la mesa de trabajo cuando se está observando.
  Retirar las láminas de la platina después de ser observadas.

Realizado por: Dra. Brienis Molina

UNERG
Área de Ciencias de la Salud
Programa de Medicina
Dpto. Ciencias Morfológicas
U.C. Histología, Embriología y Genética