DISTROFIA MIOTÓNICA DE

STEINERT
Carmen Alonso García
Mary Anel Cuervo Medina
Brenda Denisse Olivares Piñón
Ma. Fernanda De los Ríos
Ana Paula Rodríguez del Moral

Síntesis de biofábricas Grupo 543

 INTRODUCCIÓN
El objetivo de este trabajo es generar un modelo in silico e in vitro del DM1 y
brindar una propuesta sobre la transfección de células de músculo, en este
caso miocitos de músculo estriado esquelético de ratón a partir de la cepa
DH5α de E. coli.

El proceso está compuesto por dos partes:

In Vitro: PCR, Digestión y In Silico: Se generó el plásmido

electroforesis PJET
 Dry Lab
DISEÑO
EXPERIMENTAL

Wet Lab
 Diseño In Silico
Plásmido control pQBi + DMPK v. 6

Paciente Sano

Verifica la secuencia

Enzima de restricción BamHI

Variante 6 de homo sapiens

DM1 protein kinase mRNA

Resistencia a:
Ampicilina
Kanamicina
 Diseño In Silico
Plásmido con repetidos pQBideltaGFP + DT960

960 Bases de repetidos

Variante de pQBi sin GFP

Enzimas de restricción:
BamHI
HindIII

Resistencia a Ampicilina
 Diseño In Silico

Plásmido salvavidas” pJET + amplicón DMPK

Plásmido de clonación

Capacidad de almacenaje

Une extremos romo

Resistencia a Ampicilina
Resultados
RESULTADOS

Los resultados de la electroforesis permitieron

Fig 1. Digestión de los plásmidos
con BamHI
ver las diferencias entre las muestras (sana y
con bases repetidas), ya que las bandas que
se presentan al correr el gel varían de acuerdo
al tamaño de los cortes, presentando el patrón
de digestión de los plásmidos, determinando
si la persona cuenta o no con los repetidos.

La escalera utilizada para correr la

electroforesis no fue la adecuada ya que no
muestra el marcador de pesos exacto.

Fig 2.PCR de colonia

PROPUESTA
Propuesta MARÍA

Material:
Dos plásmidos: pQBi+DT960 y pQBi+DMPK
Un modelo de E.coli cepa DH5α
Líneas celulares del músculo - miocito estriado
esquelético del ratón
Promotor - CMV (citomegalovirus)Análisis:

Electrofóresis - verificar la correcta transfección de E.

coli

Procedimiento:
Electroporación - Introducción

Estudio:
Patogénesis
Toxicología
CONCLUSIONES

Factores que comprometieron los resultados:

-Contaminaciónde cultivos
-Etapa de digestión del plásmido
Metodología inicial modificada
No se logró determinar si las muestras in vitro fueron
exitosas
Pruebas in silico efectuadas correctamente
 REFERENCIAS
[1] Matloka, M. et al. (2018) ‘Cells of Matter—In Vitro Models for Myotonic Dystrophy’, Frontiers in Neurology, 9.
doi:10.3389/fneur.2018.00361.

[2] Nigro, G., Papa, A.A. and Politano, L. (2012) ‘The heart and cardiac pacing in Steinert disease’, Acta myologica :
myopathies and cardiomyopathies : official journal of the Mediterranean Society of Myology, 31(2), pp. 110–116.

[3] Overend, G., Légaré, C., Mathieu, J., Bouchard, L., Gagnon, C. and Monckton, D.G. (2019). Allele length of the DMPK
CTG repeat is a predictor of progressive myotonic dystrophy type 1 phenotypes. Human Molecular Genetics, [online]
28(13), pp.2245–2254. doi:10.1093/hmg/ddz055.

[4] Rybicki, E.P. and Tanzer, F.L. (2015). Sistema de expresión que incorpora una secuencia promotora de la cápsida
como potenciador de un promotor de citomegalovirus. [online] Available at:
https://patents.google.com/patent/ES2465165T3/es

[5] Sepúlveda Saavedra, J., Domínguez, A.S. (2014) ‘Tejido Muscular’ Texto atlas de histología: biología celular y
tisular. México D.F.: McGraw-Hill Interamericana.

[6] Suominen, T. et al. (2011) ‘Population frequency of myotonic dystrophy: higher than expected frequency of
myotonic dystrophy type 2 (DM2) mutation in Finland’, European journal of human genetics : EJHG. 2011/03/02 edn,
19(7), pp. 776–782. doi:10.1038/ejhg.2011.23.