Hola a todos, el día de hoy explicaremos el artículo de martin y singe una nueva forma de

cromatograma empleando dos fases líquidas.

Este artículo fue dividido en dos secciones, la primera que es la teoría sobre la cromatografía y
la segunda, que es la parte práctica, en donde se aplicó dicha teoría para la
microdeterminación de moaminoacidos superiores en proteinas

el grupo esta conformado por:

Bueno, para entender esta primera parte se nos hizo pertinente recordar las principales
características de la cromatografía de partición y de adsorción.

la cromatografía de partición se basa en el coeficiente de partición y su característica

fundamental es que la fase estacionaria es el agua retenida sobre diferentes tipos de soporte
(silicagel, celulosa, etc) y las fases móviles son un líquido inmiscible en agua (pero saturado en
agua), entonces la separación se basa en la distribución selectiva de los solutos en las fases,
según las constantes de distribución particulares.

En pocas palabras se basa en la diferente polaridad de los solutos

La cromatografía de adsorción es útil para muestras solubles en solventes poco polares. la fase
estacionaria es el adsorbente, superficie altamente polar y la fase móvil (o eluyente), obliga a
las sustancias a migrar y esto produce una competencia entre la tendencia del soluto a
quedarse retenido en la fase fija o correr con el eluyente.
Como tal el objetivo del artículo es presentar una teoría aproximada de las separaciones
cromatográficas y describir una aplicación del nuevo cromatograma a la microdeterminación de
los monoaminoácidos superiores en hidrolizados de proteínas. Este método utilizado es basado en
la partición de los acetaminoácidos entre las fases de cloroformo y agua.

Además se emuestra que la eficiencia del contacto entre las fases (platos teóricos por unidad de
longitud de columna) es mucho mayor en el cromatograma creado que en las columnas ordinarias de
destilación o extracción.

TEORÍA

Se observó que el cromatograma es muy similar en su modo de funcionamiento a las columnas

fraccionadoras de destilación y extracción. Por lo que se quiso elaborar la teoría del cromatograma
utilizando los conceptos desarrollados para la destilación. En donde se busca dar una idea de la
concentración de soluto en cualquier momento y lugar en la columna, y de la forma en que la
resolución depende de la longitud de la columna.

Teniendo en cuenta que la columna de destilación de tipo continuo o empacado se puede dividir en
varias capas, cada una de estas equivale a un plato teórico, la altura de tal capa se llamará HETP o
'altura equivalente a una placa teórica'. Se toma que el HETPes una constante a lo largo de una
columna dada. Y Para que las ecuaciones sean manejables, se deben hacer ciertas suposiciones como.
que la difusión de soluto de una 'placa' a otra debe ser insignificante, y que en el equilibrio la relación
de distribución de un soluto entre las dos fases debe ser .independiente tanto del valor absoluto de su
concen-tration como de la presencia de otro solutos

Se considera un cromatograma de muchas 'placas': en donde Q r es cantidad total de soluto en la

placa r.

V el HETP*(AREA DE LA SECCION TRANSVERSAL DE LA FASE MOVIL+ COEF

PARTICIÍN* EL AREA DE LA SECCION TRANSVERSAL DE LA FASE ESTACIONARIA)

UPSILON v: volumen del disolvente utilizado en el desarrollo del cromatograma

En esta table se considera el caso en el que la unidad de masa de un solo soluto se coloca en la
primera placa y luego le sigue el disolvente puro.la tabla muestra la cantidad de soluto en cada
plato después de haber pasado volúmenes infinitesimales sucesivos de fase móvil.

Y La cantidad de soluto en cada plato ba estar determinado por este termino de expansión
binomial, cuando han pasado n volúmenes suscesivos de solvente

Pero si n es muy grande, se convierte en esta expresión

Y por la aproximación de Stirling se obtiene esta expresión para r mayor a 10

Descripción que le hacen al cromatograma

1. Se eliminó el hierro y otras impurezas de la silica con HCl concentrado y se extrajo

con alcohol tibio a 97%.
2. Luego se preparó el gel para el cromatograma añadiendo 70 % p/p de una solución
saturada de naranja de metilo en agua y se obtiene un polvo rosa seco. Una cantidad de
este material se sispendió utilizando 35 ml. de cloroformo saturado con agua y que
contiene 1 % v/v de alcohol butílico. En este punto, el color del gel cambia de rosa a
amarillo.
3. La suspensión se viertió en un tubo de cromatograma de 1 cm de diámetro * 30 cm de
longitud el cual tenía papel filtro en la parte iferior.
4. El gel se compactó a medida que el cloroformo salía por el fondo del tubo.
5. El disolvente que salió por el fondo de la columna estaba casi libre de indicador,
estando el naranja de metilo firmemente retenido en la fase acuosa
6. Las sustancias para el análisis se disuelvieron en un poco de cloroformoy alcohol
butílico, y esta solución se agregó cuidadosamente a la parte superior de la
columna dejándola correr desde una pipeta por el costado del tubo de
cromatograma.
7. Cuando esta adición y cualquier lavado drenaron el gel, el cromatograma se
desarrolló agregando solvente nuevo en la parte superior de la columna.
8. La posición de los ácidos es revelada por el indicador, que cambia de
amarillo a naranja a rosa.
9. Se observó que el movimiento de los acetaminoácidos estudiados se ve fuertemente
afectado por los constituyentes menores de la mezcla de disolventes. Si el cromatograma
se ejecuta con cloroformo puro, los ácidos se mueven muy lentamente y muestran poca
separación
10. Entonces La separación y recuperación de los acetaminoácidos depende de la naturaleza
y cantidad del alcohol añadido al cloroformo. Por ello se prefirió utilizar cloroformo con
1% de alcohol butílico en donde los acetaminoacidos se mueven mas fácilmente.