TECNICA

HISTOLOGICA
Aux. Susana Valeria Choque Mamani
“
Se denomina tecnica histologica al conjunto de
procedimientos aplicados a un material
biologico(animal o vegetal)con la finalidad de
prepararlo y conferirle las condiciones optimas para
poder observar examinar y analizar sus componentes
morfologicosa travez de un microscopio.

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TECNICA HISTOLOGICA

◈ Medios en los cuales la célula vive

◈ Circunstancias normales
◈ Relación estructural
◈ Rebanadas finísimas de ellos
◈ Instantáneas captar a un tejido en un momento particular
◈ Finos y evitar superposición de estructuras
◈ La preparación teñida y montada se denomina “corte”
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TIPOS DE PREPARACION
◈ Preparacion de cortes histologicos para el
microscopio de luz
◈ Preparacion de cortes histologicos para el
microscopio electronico
◈ Preparacion de cortes por congelacion

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PREPARACION PARA MICROSCOPIO DE LUZ
TECNICA DE LA PARAFINA
1. Obtención de la muestra
2. Fijación
3. Deshidratación
4. Aclaramiento
5. Inclusión
6. Corte
7. Tinción y montaje 5
 TECNICA DE LA PARAFINA
1. OBTENCION DE LA MUESTRA.-
Extracción del fragmento de tejido
Debe medir entre 1 cm x 1cm
Biopsia: Muestra de un tejido vivo
Necropsia: Muestra de tejido muerto
Autopsia: Muestra después de la muerte del Px

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 TECNICA DE LA PARAFINA
2.- FIJACION.-
Evita la degeneración post mortem
Formol o Formaldehido al 4 %
Fijador de bouin (acido pícrico, formalina, y ac. acético)

4%

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 TECNICA DE LA PARAFINA
3. DESHIDRATACION
Proceso por el cual se quitan los hidratos (agua)
Uso de alcoholes concentrados en grados de 80%, 96% y 100%
Mas fuerte el grado de alcohol mas rápida la deshidratación
Uso de etanol
3 baños de etanol a distintos grados de 3-10min cada uno

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 TECNICA DE LA PARAFINA
4. ACLARAMIENTO
Se lava la muestra que esta sucia de alcohol
Sustitución por xilol o xileno al 100%
El xilol es afín a la parafina
También se puede usar cloroformo, benceno, aceite de cedro y toluol
2 baños de xilol al 100% 3-10 min cada uno

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 TECNICA DE LA PARAFINA
5. INCLUSION
Inclusión de la parafina a la muestra
Parafina: Cera en estado liquido a 50 ºC que solidifica con el aire o
centrifugado

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 TECNICA DE LA PARAFINA
6. CORTE
Se realiza cortes con el micrótomo, (instrumento que corta en grosor de
micras)
Después de que la parafina sea secada por centrifugación
Corte ordinario: 5 a 8 um de espesor
Corte fino: 1 a 2 um de espesor (resina epoxica)

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 TECNICA DE LA PARAFINA
7. TINCION Y MONTAJE
TINCION:
Se coloca la muestra en el porta objetos y se la somete a tinción, ej.:
Hematoxilina y eosina
Enjuagar con alcoholes de manera decreciente: 100%, 90% y 80%;
luego 2 con xilol al 100%, finalmente en agua destilada

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 TECNICA DE LA PARAFINA
MONTAJE:
Tomamos el cubreobjetos
Hacemos un Angulo contra el portaobjetos
Bajamos gradualmente y tapamos la muestra
Y tenemos una placa lista para observarse al microscopio!!

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PREPARACION PARA MICROSCOPIO ELECTRONICO
1. Obtención de la muestra
2. Fijación
3. Inclusión
4. Corte
5. Tinción y montaje

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PREPARACION PARA MICROSCOPIO ELECTRONICO
1. Obtención de la muestra:
Muestra debe medir 1mm de ancho x 1mm de largo
2. Fijación
Se fija con acido osmico o glutarardehido
3. Inclusión
Uso de resinas epóxicas, Epon, araldito, espur

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PREPARACION PARA MICROSCOPIO ELECTRONICO
4. Corte
Uso del ultra micrótomo
5. Tinción y montaje
Se tiñe la muestra con sales metales .Ej.: Acetato de uranio,
hidróxido de plomo, eosina de sodio, etc.

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PREPARACION POR CONGELACION
1. Fijación.- con un fijador físico (congelación) o químico
(nitrógeno liquido)
2. Corte.- Uso del criostato, genera entre 6 a 10um de
espesor
3. Tinción y montaje.- lo mismo que en la parafina

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GRACIAS
¿Alguna duda?