PROGRAMA DE CIENCIAS NATURALES Y EDUCACION AMBIENTAL-IDEAD

UNIVERSIDAD DEL TOLIMA

LABORATORIO DE MICROSCOPIA

Presentado por:
Lina Alexandra González Bastidas
Cod. 084602482021

Universidad del Tolima

Biología fundamental
Semestre I
Ibagué
2021
PROTOCOLOS DE LABORATORIO BIOLOGÍA CELULAR
2020
PROTOCOLOS DE LABORATORIO
BIOLOGÍA CELULAR

Fecha de elaboración
Tercera edición abril 2020
Contingencia COVID-19

AUTORES
PhD. Liliana Francis Turner
MSc. Jessica Paola Alcázar Arzuza
MSc. Lina María De Los Reyes
MSc. Lina Marcela Villa Villamil
MSc. Andrea Julieth Bayona Arciniegas
MSc. Guiselle Negover Briñez Vázquez
Biólogo. Astrid Milena Perdomo González
 MEDIDAS DE SEGURIDAD EN EL LABORATORIO Y EN CAMPO

1. Antes de realizar cada práctica lee cuidadosamente el protocolo para familiarizarte

con el trabajo a desarrollar. Al conocer el protocolo disminuyes la posibilidad de que
ocurran accidentes y además puedes aprovechar el tiempo de manera más eficaz.

2. En el laboratorio está prohibido comer, beber y fumar.

3. En el laboratorio y en campo debes llevar en todo momento el equipo de protección

personal necesario. Esto garantiza que cualquier accidente que pueda ocurrir, sea de
menor gravedad. De no acatar la regla no se permitirá acceso a la práctica.

4. Al lugar de trabajo sólo debes llevar aquellos materiales estrictamente necesarios

para la actividad que vas a desarrollar.

5. En el laboratorio comienza cada jornada limpiando tu área de trabajo. Repite este

procedimiento después de que hayas terminado, asegurándote que el material de
desecho sea depositado en el lugar que corresponde y lo reutilizable sea lavado y
desinfectado.

6. El material necesario para el desarrollo de la práctica será entregado solo mediante

el carné estudiantil.

7. La indisciplina dentro del laboratorio o en campo será sancionada con la anulación

de la práctica o expulsión parcial o total del alumno, según el caso lo requiera.

8. Sé muy cuidadoso con todo el material, y equipo que utilices para evitar accidentes
y deterioro del mismo en laboratorio y en campo.

9. Si trabajas con sustancias, nunca las inhales o uses la pipeta con la boca.

10. Si utilizas jeringas no las vuelvas a tapar, deséchalas tal cual en el recipiente
adecuado.

11. En caso de romper material de laboratorio o descomponer algún equipo por el mal
uso de éste, el responsable cubrirá el costo que se genere en un lapso no mayor a
30 días hábiles.

12. Para las salidas a campo el alumno deberá firmar un oficio donde se responsabiliza
de su persona, en caso de no obedecer las normas establecidas durante la práctica
cualquier accidente será su responsabilidad.

13. Tras la sesión de trabajo, lávate las manos antes de hacer cualquier otra actividad
para mantener unas buenas condiciones higiénicas.

14. En caso de accidente o lesión, avisa inmediatamente al profesor o responsable de la

práctica en laboratorio para que pueda realizarse una acción rápida y apropiada.
 Información importante a tener en cuenta en los laboratorios.

PROCEDIMIENTOS DE SEGURIDAD

a) Responsabilidades
Antes de la práctica: Antes de la práctica: Leer el Protocolo de
bioseguridad de medidas preventivas para evitar el contagio del
covid- 19 plan retorno de trabajo seguro laboratorio biologia celular
http://administrativos.ut.edu.co/images/Sistema_gestion_calidad/Gestion
_desarrollo_humano/P bioseguridad_covid/DH-PT43.pdf

Revisar los materiales, equipos y reactivos que tendrán que utilizarse en

la práctica de laboratorio.

Durante la práctica: portar la bata y equipo de protección (tapabocas, guantes,

gafas, cuando sea necesario) y traer el protocolo de laboratorio. Realizar las
actividades correspondientes a la práctica.

Manipular correctamente el microscopio. Realizar las actividades incluidas en la

práctica respetando los tiempos determinados para esto.

Después de la práctica: Diligenciar el protocolo, establecer los resultados y las

conclusiones.

b) Cuadro de disposición de desechos.

Desechos o residuos: Disposición
Vidrios y elementos cortopunzantes Guardián
Materiales no biológico-infecciosos Depósito para basura común (bolsa verde)
Líquidos no biológico-infeccioso Drenaje común
Muestras biológico-infeccioso Depósito para biológico-peligroso (bolsa roja)

Nota: Este libro de protocolos de laboratorio de Biología celular se ha preparado especialmente para la
contingencia de la etapa especial por el COVID-19, donde las actividades se desarrollarán de forma virtual e
interactiva.
PROTOCOLO DELABORATORIO 5

Laboratorio No. 5
Microscopía.

Imagen tomada de: https://s-media-cache-

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PROTOCOLO DELABORATORIO 5

I. Introducción

El ser humano se ha caracterizado por el intenso interés por descubrir el mundo que lo
rodea, de mediar la búsqueda de implementos y herramientas que le ayuden a conocer y
comprender el lugar en el que se encuentra y las relaciones que existe entre la naturaleza y
el, indagando, formulando hipótesis, desarrollando tácticas y/o métodos para finalmente
obtener información concluyente respecto al objetivo inicial de su exploración. Para llevar a
cabo tal comprensión fue desarrollando herramientas que mediaron la posibilidad de
entender aquello que ante los ojos no es posible ver, y hacer distinción con aquello que es
fácil de caracterizar a simple vista.
Desarrollo del microscopio
Se presume que la fecha tangible para la aparición histórica del microscopio fue en 1590
con los holandeses Hans Janssen y su hijo Zacharias Janssen quienes al parecer inventaron
un microscopio compuesto. Sin embargo, no existen referencias que respalden esta
afirmación. A continuación, en 1609 Galileo Galilei (1564-1642), desarrolla un microscopio
compuesto de una lente cóncava y otra convexa pero solo hasta 1628 publica su obra a la
par que William Harvey (1578-1647) muestra a la sociedad su observación de lo que el
llamaría capilares sanguíneos al microscopio. Anillado a esta descripción, en 1665, Hooke
ubica al interior de un corte fino de corcho cavidades profundas a las que llamó Células
(Audesirk, Audesirk y Byers, 2013, Cooper y Hausman, 2011, Sánchez y Oliva, 2015).
A mediados del siglo XVII el holandés, Anthony van Leeuwenhoek (1632-1723), describió
por primera vez protozoos, bacterias, espermatozoides y glóbulos rojos con microscopios
de fabricación propia pero solo durante el siglo XVIII el microscopio tuvo diversos adelantos
mecánicos que aumentaron su estabilidad y su facilidad de uso, aunque no se desarrollaron
por el momento mejoras ópticas. Posteriormente, en el siglo XIX, al descubrirse que la
dispersión y la refracción se podían modificar con combinaciones adecuadas de dos o más
medios ópticos, se lanzan al mercado objetivos acromáticos excelentes. Sin embargo, las
mejoras más importantes de la óptica surgieron en 1877, cuando el alemán Ernst Abbe
(1840-1905) publicó su teoría del microscopio y, por encargo del también alemán Carl Zeiss
(1816-1888), mejoró la microscopía de inmersión sustituyendo el agua por aceite de cedro,
lo que permite obtener aumentos de 2000. A principios de los años 1930 se había alcanzado
el límite teórico para los microscopios ópticos, no consiguiendo estos aumentos superiores
a 500X o 1000X. Sin embargo, existía un deseo científico de observar los detalles de
estructuras celulares (núcleo, mitocondria, etc.), aunque actualmente, esta premisa es más
tangible que en ese tiempo (Guillen, Antonio, 2006, Sánchez y Oliva, 2015)

En la actualidad existen microscopios que exacerban la imaginación de los ingenieros de la

época en la que el primer microscopio fue visualizado y creado, sin embargo, todos los
aportes realizados por las mentes de tiempos pasados, sirvió de base fundamental para el
PROTOCOLO DELABORATORIO 5

desarrollo y continuo perfeccionamiento de los equipos de laboratorio que se crean por estos
días.

Microscopio Óptico
Es el microscopio más utilizado. Utiliza la luz del rango visible para crear una imagen
aumentada del objeto. El microscopio óptico más simple es la lente convexa doble con una
distancia focal corta y que puede aumentar un objeto hasta 15 veces. En la actualidad, se
usan microscopios compuestos que disponen de varias lentes con las que se consiguen con
las que se consiguen aumentos mayores, incluso de hasta 2000 veces (Cooper y Hausman,
2011).
Poderes del microscopio
El microscopio óptico tiene cuatro (4) poderes de resolución, que conceptualmente se
refieren a distintas capacidades que tiene esta herramienta para mejorar la visualización de
la preparación (preparados inorgánicos u orgánicos).
Poder de Aumento: Permite magnificar la imagen. El poder de aumento de cada objetivo
se indica por el número grabado en la manga de la lente: el objetivo 10X aumenta 10 veces
–el objetivo 40X, 40 veces; el objetivo 100X se encuentra generalmente marcado con anillo
blanco en su lente objetivo para indicar que se debe utilizar con aceite de inmersión (Guillen,
Antonio, 2006).

Aumento total= Aumento del objetivo x Aumento ocular

Poder de resolución: Se refiere a la capacidad de un sistema óptico de presentar dos

puntos próximos separados, o la distancia mínima en que se logran visualizar estos dos
puntos. Dentro del poder de resolución se deben tener en cuenta otras dos características
físicas: la Longitud de onda (λ) que se define como la distancia que recorre una onda
electromagnética (Son aquellas ondas que no necesitan un medio material para propagarse,
por ejemplo, la luz visible y las ondas de radio, televisión y telefonía) en un tiempo igual a
un período y de la Apertura Numérica (A.N.) que se refiere a la capacidad que tiene una fibra
de vidrio por aceptar cierta cantidad de luz.
La A.N de un lente es directamente proporcional a su poder de resolución y está influenciado
por la refracción de la luz. La luz se refracta cuando viaja en ángulo hacia una sustancia con
una densidad óptica diferente. Cambia de dirección porque cambia de velocidad. Por
ejemplo, cuando pasa del aire al agua. Entonces la refracción tiene que ver con dos cosas:
la velocidad y el ángulo de incidencia. Cuanto más abierto sea el ángulo mayor el cambio
de dirección y la refracción, pero si la luz entra en una sustancia con un índice refractivo
 mayor, irá más lento, como del aire al vidrio. Si el índice es menor irá más rápido, como del
agua al aire. La lentitud implica mayor refracción (Cooper y Hausman, 2011).
El poder de resolución es entonces: λ / (2xN.A)
Donde λ: Longitud de onda (usar 520 nm, como el valor para despejar la formula)NA: Apertura
numérica.

Poder de definición: Permite formar imágenes claras con contornos definidos.

Poder de profundidad: Posibilita la observación de varios planos de la misma
preparación sin variar la posición del enfoque.

II. Competencias de la práctica

Con el desarrollo de este protocolo se espera que el estudiante:

1. Conozca el fundamento del microscopio óptico, sus partes ópticas y mecánicas y la

función de cada una de ellas.
2. Se acerque al mundo microscópico a través del uso de un microscopio interactivo.

III. Metodología

Materiales clase remota:

Dispositivo electrónico

Materiales clase presencial:

Microscopio óptico binocular
Muestras (Letra de papel periódico, escamas de mariposa, cristal de azúcar o sulfato)
Láminas portaobjetos y laminillas cubreobjetos
Agua destilada
Cuentagotas
PROTOCOLO DELABORATORIO 5

Actividad 1. Reconocimiento de las partes del microscopio

Observar el vídeo sobre el microscopio y sus partes en el siguiente enlace:
https://www.youtube.com/watch?v=MiWz5RXYhfg&ab_channel=GrupodeInvestigaci%C3%B3
nME-CZH.

Identifique las partes del microscopio sus funciones y sistema al que pertenece
Este cuadro es una guía para extraer la información del video.
Partes del microscopio Nombre y sistema al que Función
óptico pertenece

*OCULARES
Serie de lentes que permite la
- SISTEMA OPTICO observación de la muestra.

*CABEZAL

-SISTEMA MECANICO Permite obtener mejores tomas

del objetivo

*REVOLVER
Con este podemos mover los
- SISTEMA MECANICO lentes que están anclados. que
son los objetivos

*OBJETIVOS
Es el encargado de colectar la
- SISTEMA OPTICO luz proveniente del espécimen
y proyectar una imagen nítida,
real, invertida y aumentada
hacia el cuerpo del
microscopio.
*BRAZO
Presta soporte a los sistemas
- SISTEMA MECANICO ópticos y de iluminación.
así mismo permite el
desplazamiento de la muestra.
PROTOCOLO DELABORATORIO 5

Partes del microscopio Nombre y sistema al que Función

óptico pertenece

*PLATINA

presta soporte para las

- SISTEMA MECANICO muestras

Condensador: su función es
*CONDESADOR+DIAFRAGMA concentrar la luz que proviene
del foco para iluminar la
muestra de forma uniforme y
-SISTEMA OPTICO con las condiciones
adecuadas.
Diafragma: regula la
intensidad y el tamaño del
cono de luz que llega a la
muestra
*TORNILLO El Macrométrico, permite
MACROMETRICO + EL desplazamientos amplios para
TORNILLO MICROMETRICO un enfoque inicial y el
micrométrico, desplazamientos
muy cortos, para el enfoque
-SISTEMA MECANICO más preciso.
y el Micrométrico mueven la
platina o el tubo hacia arriba y
hacia abajo
*BASE Da estabilidad al microscopio.
y es la parte más pesada del
- SISTEMA MECANICO microscopio.
PROTOCOLO DELABORATORIO 5

Actividad 2.-Enfoque en el microscopio óptico (Clase presencial). En el laboratorio

presencial normalmente los microscopios se encuentran ubicados en un estante y cada
microscopio tiene su carpeta de uso, debido a la situación de emergencia sanitaria encontraran
el microscopio con su carpeta ubicados en su área de trabajo. En está ocasión se inicia a partir
del paso 2. Antes de empezar con el ejercicio de enfoque, ver el siguiente video instructivo
https://www.youtube.com/watch?v=AUo1KFp9vK8&ab_channel=GrupodeInvestigaci%C3%B3
nME-CZH, realizar el montaje de las muestras en el portaobjeto y seguir los pasos descritos a
continuación.
Protocolo de uso correcto del microscopio:
1. Solicitar el equipo, diligenciar la carpeta y sostener el equipo adecuadamente.
2. Revisar las condiciones del equipo entregado (platina abajo y objetivo de menor
aumento).
3. Enchufar/encender el microscopio.
4. Colocar en primera instancia el objetivo de menor aumento (4X), para lograr un enfoque
correcto.
5. Verificar que el condensador se encuentra abajo, utilizando el tornillo correspondiente.
6. Diafragma con apertura media, mover la pestaña que sobresale en el condensador hasta
la mitad.
7. Graduar la intensidad de luz, movilizar el tornillo o la palanca para aumentar la intensidad
del foco.
8. Colocar el preparado sobre la platina, con el cubreobjetos hacia arriba y sujetándola con
las pinzas/guías.
9. Ubique la muestra en el haz de luz del agujero de la platina con ayuda de los tornillos de
ajuste longitudinal y transversal.
10. Enfocar el preparado mirando a través del ocular, regule la distancia inter ocular y
lentamente mueva el tornillo macrométrico.
11. Para lograr el enfoque, mover lentamente el tornillo macrométrico hasta observar la
muestra, mejore el enfoque con ayuda del tornillo micrométrico, la muestra debe estar
nítidamente enfocada y centrada, para centrar la muestra movilizar la lámina con los
tornillos de ajuste transversal y longitudinal. Gracias a que la mayoría de los microscopios
son parafocales, es decir, una vez logrado el primer enfoque, se puede pasar al objetivo
de aumento inmediatamente superior y la imagen queda en un foco aproximado, sólo se
debe realizar un ajuste.
12. Cambie al objetivo de 10X. Si realizo el enfoque de manera correcta con el objetivo
anterior, la imagen se debe enfocar girando única y lentamente el tornillo
MICROMÉTRICO.
13. Rote al objetivo de 40X y hacer lo mismo que en el paso anterior. NUNCA se debe utilizar
el tornillo macrométrico con los objetivos de mayor aumento, pues al estar éste muy cerca
del preparado, se corre el riesgo de partirlo. Los movimientos de los objetivos son
secuenciales de menor a mayor y de mayor a menor, NUNCA pasar de 4x a 100x o de
100x a 4x.
PROTOCOLO DELABORATORIO 5

14. Al lograr el enfoque con el objetivo de mayor aumento debe realizar la observación
moviendo constantemente el tornillo micrométrico para variar los planos de enfoque. De
igual manera, abra o cierre el diafragma para regular la intensidad de la luz y mejorar el
contraste.
15. Una vez finalizada la observación, baje la platina y coloque nuevamente el objetivo de
menor aumento.
16. Retire la muestra.
17. Limpie el lente objetivo de 100X, si uso medio de inmersión.
18. Apague la lámpara.

RECOMENDACIONES
NUNCA dañar, rayar, dejar caer las lentes u otros componentes ópticos.
NUNCA limpiar con la bata los lentes.
NUNCA llevar muestras desbordadas o portaobjetos húmedos o goteantes a la platina.
NUNCA forzar los controles de foco.
NUNCA tocar las superficies ópticas.
NUNCA mover los tornillos plateados de ensamble
NUNCA enrollar los cables, transportarlos de forma incorrecta.

2.1. Enfoque en el simulador del microscopio óptico (clase remota). Copie y pegue el
siguiente enlace: https://courses.ecampus.oregonstate.edu/bi206/virtual_scope/build.html en su
navegador, accederá a un microscopio interactivo que permite cambiarlos parámetros de las
partes estudiadas en la actividad anterior.
Para una mejor visualización y manipulación cargar el simulador en una nueva pestaña
haciendo clic sobre la flecha.
PROTOCOLO DELABORATORIO 5

Una vez ampliado el simulador se observa el microscopio con el menú como se muestra en la
siguiente imagen.

Los pasos para enfocar la muestra (estoma) a través del simulador se describen a continuación:
1. Situarse sobre la pestaña foco, encender la lámpara.
PROTOCOLO DELABORATORIO 5

2. En la pestaña objetivo elegir el objetivo 5X.

3. En la pestaña brillo, subir el brillo casi al máximo (desplazando el botón rojo).
4. En la pestaña diafragma ajustar la cantidad de luz cerrando el diafragma, desplazando
el cursor rojo hacia la izquierda (visualice en el microscopio el movimiento de la palanca
del diafragma), se debe ver la muestra iluminada diferenciando sus bordes y estructuras
internas.
5. En la pestaña ajuste grueso movilizar la platina hacia arriba desplazando el cursor rojo
hacia la derecha hasta que la imagen se observe nítida, este equivale al movimiento del
tornillo macrométrico (visualice en el microscopio el movimiento del tornillo y la platina).
6. En la pestaña ajuste fino movilizar el cursor hacia la izquierda o derecha para mejorar la
nitidez de la imagen, este equivale al movimiento del tornillo micrométrico (en este paso
el desplazamiento de la platina es imperceptible).
7. En el eje X y Y desplace la muestra hasta que el círculo verde quede en el centro del
campo óptico, este corresponde al desplazamiento de la lámina a la derecha-izquierda o
adelante-atrás (transversal y longitudinal). Si ha seguido los pasos correctamente ya
tiene la muestra enfocada en menor aumento.
8. Ahora cambie al objetivo de 10X y siga los pasos anteriormente descritos con algunos
cambios, debe abrir el diafragma para que pase más luz a través del objetivo, movilizar
la platina con el ajuste grueso y fino hasta lograr una imagen clara, se debe observar el
contorno de las células y la regla del microscopio. Movilice la muestra para ubicar el
estoma en el centro del campo óptico.
9. Seguidamente rote al objetivo de 40X (mayor aumento), ajuste la luz con el diafragma,
enfoque la imagen solamente con el ajuste fino (en el objetivo de 40X o 100X, no se debe
emplear el ajuste grueso debido a la cercanía de la lámina con el lente objetivo)
10. Por último, enfoque a 100X (para este objetivo se requiere el aceite de inmersión, no
mostrado).

Después de lograr enfocar la muestra de forma virtual, realice un dibujo donde se evidencie la
muestra observada a 10X y 100X, adicionalmente adjunte un pantallazo de lo observado en el
microscopio interactivo.
PROTOCOLO DELABORATORIO 5

10X
PROTOCOLO DELABORATORIO 5

40X
PROTOCOLO DELABORATORIO 5

100X