Código FDE 048

GUÍA DE TRABAJO
Versión 03
INGENIERIA BIOMEDICA
Fecha 2009-06-09

1. IDENTIFICACIÓN

Asignatura BIOLOGIA CELULAR Y MOLECULAR Guía No. 1

Área Nivel II Microscopía
Básicas de la Tecnología o de la
Ingeniería

Código BCO22 Pensum 3

Correquisito(s) Prerrequisito(s)
Créditos TPS TIS TPT TIT
TRABAJO INDEPENDIENTE TRABAJO PRESENCIAL
Trabajo Trabajo Trabajo Trabajo X
Teórico Práctico Teórico Práctico

2. IDENTIFICACIÓN

INDICADOR DE
COMPETENCIAS CONTENIDO TEMÁTICO
LOGRO
-Identificar los componentes del
microscopio compuesto y sus El microscopio compuesto Realiza montajes
funciones. apropiados para realizar
- Aprender a realizar una La célula procariota observaciones al
preparación para realizar microscopio.
observaciones al microscopio. La célula eucariota animal y
- Manipular correctamente el vegetal. Manipula el microscopio
microscopio compuesto para de manera adecuada para
realizar las observaciones. realizar las
- Realizar observaciones de observaciones
células Procariotes y eucariotes.
-Reconocer diferencias Realiza dibujos
morfológicas entre células indicando diferencias de
animales y vegetales sus observaciones.

El MICROSCOPIO
El microscopio es el elemento más importante para el estudio de la morfología celular. El tipo de
microscopio más utilizado es el microscopio óptico, que utiliza la luz visible para crear una imagen
aumentada del objeto. El microscopio óptico simple posee una lente convexa doble con una
distancia focal corta. Estas lentes pueden aumentar un objeto hasta 15 veces. Por lo general se
utilizan microscopios compuestos, que disponen de varias lentes con las que se consiguen aumentos
mayores. Algunos microscopios ópticos pueden aumentar un objeto por encima de las 2.000 veces,
lo que resulta de gran utilidad considerando, que una célula animal típica mide entre 10 y 20 µm de
diámetro.
 Código FDE 048
GUÍA DE TRABAJO
Versión 03
INGENIERIA BIOMEDICA
Fecha 2009-06-09

El microscopio compuesto puede dividirse en:

I. Sistema mecánico; conformado por:

a) El pie o base de sustentación.
b) El brazo o columna.
c) La platina; que consiste en una plataforma horizontal con un orificio central por donde pasa la
luz. Es aquí donde se ubica la preparación en un carro móvil que permite desplazarla.
d) El tubo; es un cilindro metálico que lleva en el extremo próximo al observador el ocular y el
revólver en el extremo opuesto.
e) El revólver es una pieza giratoria que posee diferentes lentes objetivos, cada uno de ellos posee
un aumento distinto.
f) Los tornillos de focalización; el enfoque se realiza modificado la distancia entre la preparación y
el objetivo. El ajuste se realiza con dos tornillos; el macrométrico que se usa para los ajustes
gruesos y el micrométrico para el ajuste fino o de precisión. Este último tiene una escala graduada,
en donde cada marca representa un avance de dos micrones.

II. Sistema óptico está compuesto por:

a) La fuente luminosa que se ubica bajo el condensador.
b) El condensador consiste en un sistema de lentes que concentra la luz en la preparación. Posee un
tornillo de control que permite mover este dispositivo.
c) El diafragma o iris; se localiza en el condensador y permite regular la cantidad de luz que sale de
este.
d) Lentes oculares; se encuentran en la parte superior del tubo, por lo general tienen un aumento de
8X, 12X ó 16X.
e) Lentes objetivos; se encuentran montadas en el revólver que permite su intercambio durante la
observación. Los diferentes lentes están marcados con su aumento y la apertura numérica. El
objetivo menor tiene un aumento de 4X, los otros generalmente son 10X, 40X y 100X.

Microscopios especiales
Varias propiedades ópticas pueden utilizarse en combinación con un microscopio.
Nos referiremos al microscopio de campo oscuro, contraste de fases, fluorescencia y al microscopio
electrónico.

Microscopio de campo oscuro

Se basa en la propiedad que tienen los objetos muy pequeños del orden de la longitud de onda de la
luz (o el borde de algunos objetos microscópicos) de dispersar la luz. Si iluminamos oblicuamente
el objeto en tal forma que el rayo de luz no entre al objetivo, se observará un campo oscuro. Las
membranas biológicas, macromoléculas como las proteínas desvían la luz que los ilumina,
permitiendo de este modo que la luz entre al objetivo y sea vista por el observador.

Microscopio de contraste de fases

En este caso la luz es retardada en ciertas zonas del condensador y acelerada para compensar en las
zonas correspondientes del objetivo, la luz se desvía más o menos de acuerdo a la refracción. La luz
retardada por el condensador en estas condiciones no pasa por la parte aceleradora del objetivo y el
retardo. El resultado es que la luz proveniente de la zona límite entre dos fases llega al observador
con diferentes grados de retardo, produciendo zonas oscuras donde hay cambio de fases.
 Código FDE 048
GUÍA DE TRABAJO
Versión 03
INGENIERIA BIOMEDICA
Fecha 2009-06-09

Microscopio de Fluorescencia
Un objetivo fluorescente es aquel que al recibir la luz de onda corta, la absorbe y emite luz de onda
más larga. La mayoría de los especímenes biológicos no son fluorescentes pero puede añadirse a la
preparación un marcador fluorescente. El microscopio de fluorescencia requiere dos filtros: uno que
deje pasar la luz de onda corta, pero no la de onda larga, para iluminar el objeto o el marcador, y el
otro que bloquea el paso de la luz de onda corta, usada para iluminar y deja pasar la luz de onda
larga, emitida por el objeto.

Microscopio Electrónico
Este instrumento, permite aumentos cercanos a 1.000.000 X (mil veces el aumento del microscopio
de luz), logrando visualizar átomos y moléculas. Su introducción en la década de los 50 abrió el
campo de la Citología clásica a la Biología Celular actual.
El principio de este instrumento es simple, puesto que la óptica usada es la misma que la del
microscopio de luz (o compuesto). El microscopio electrónico de transmisión consta de una
columna donde está el cañón de electrones, condensadores, objetivo, lentes intermedias, ocular –
proyector y el portaobjeto. Como los electrones no son visibles al ojo humano incluyen una pantalla
de observación y un sistema fotográfico
A diferencia del anterior, el microscopio electrónico de barrido no posee lentes, salvo
condensadores. Estos producen un haz muy fino de electrones que choca en la superficie de la
muestra y se desprenden nubes de electrones secundarios. Estos, son reconocidos por un detector
que asociado a un sistema generador de imágenes nos da una imagen de la superficie de la muestra.

Instrucciones básicas
Antes de observar cualquier preparación debe tener presente que el microscopio es un instrumento
delicado. Debido a esto debe utilizarse tomando en cuenta algunas instrucciones básicas:
a) Coloque el microscopio en una posición cómoda sobre una superficie plana. Tómelo siempre del
brazo o columna. Si desea cambiar la posición del instrumento levántelo y NO lo arrastre por el
mesón
b) Es conveniente chequear la limpieza de los diferentes lentes antes de comenzar la observación
c) Encienda la lámpara, baje el condensador y abra el diafragma completamente.

Realización de la observación
a) Aleje el objetivo de la platina y coloque la lente de aumento menor.
b) Seleccione la preparación que desea observar, revísela para asegurarse que esta se encuentra
limpia.
c) Abra la pinza del carro, coloque la preparación con el cubreobjeto hacia arriba y cierre el carro.
d) Ajuste la posición del carro de modo que la región a observar quede justo en el orificio de la
platina.
e) Usando el macrométrico acerque la lente a la preparación. Cuando logre un foco aproximado
utilice el micrométrico (gírelo lentamente) para el ajuste de precisión.
f) Si desea cambiar el aumento, gire el revólver y seleccione el nuevo objetivo a utilizar.
Debiera bastar un pequeño ajuste del micrométrico para llegar a foco, si fuera necesario reajuste la
iluminación usando el condensador. Si requiere usar el lente de inmersión NUNCA lo use como
objetivo seco, puede rayarlo.
 Código FDE 048
GUÍA DE TRABAJO
Versión 03
INGENIERIA BIOMEDICA
Fecha 2009-06-09

LA CÉLULA
Todos los seres vivos están constituidos por células, en algunos casos una sola célula conforma un
organismo completo (unicelulares), en otros varias células se han organizado para constituir un
organismo (pluricelulares). Lo anterior ha llevado a la especialización celular para la realización de
variadas funciones, producto de lo cual, es posible observar una amplia diversidad celular en un
solo organismo. Existen múltiples formas y tamaños celulares, como también, diferentes niveles de
organización: i) los procariotas no presentan compartimentos intracelulares. ii) los eucariotas, en
cambio presentan una mayor complejidad, poseen compartimentalizaciones y han desarrollado una
multiplicidad de estructuras membranosas adaptadas para realizar funciones específicas
denominadas organelos. El material genético se encuentra en un compartimento denominado
núcleo.
El estudio de la estructura y funciones celulares ha experimentado tres períodos fundamentales. El
primer periodo se inicia a comienzos del siglo XVII y se caracteriza por el descubrimiento de un
mundo detectable por lupas o lentes. Las primeras observaciones fueron de glóbulos rojos
sanguíneos por Fierre Borel en 1656. En 1665, Robert Hooke introdujo el término célula para
describir la estructura del corcho y en 1674, Antón van Leeuwenhoek observó organismos
unicelulares vivos. Al paso de los años, los lentes se perfeccionaron y transformaron en
microscopios ópticos. El segundo período, comienza a fines del siglo XIX y se caracteriza por la
tentativa de interpretar las estructuras celulares con respecto a su función. El tercer período en
cambio, acentúa el conocimiento de la función de lo componentes celulares a nivel molecular.
Todas las células comparten dos características esenciales: la primera es la presencia de una
membrana externa que separa el protoplasma de la célula del medio externo, la segunda
característica es el material genético que regula las actividades celulares y transmite las
características a la descendencia.
Célula eucariota animal:

Imagen de  http://www.aldeaeducativa.com/aldea/Fotos.ASP?which=/IMAGES/celula.gif

El NÚCLEO es el elemento más prominente, rodeado de una envoltura nuclear, es el depósito de la
cromatina (ADN y proteínas); que puede encontrarse condensada en cromosomas.
 Código FDE 048
GUÍA DE TRABAJO
Versión 03
INGENIERIA BIOMEDICA
Fecha 2009-06-09

El CITOPLASMA posee una complicada red de membranas que delimitan compartimentos:

organelas; la presencia de la membrana garantiza que las condiciones internas del compartimiento
puedan diferir de las del citoplasma. Las organelas están suspendidas en el citosol, (literalmente
significa "solución celular") solución acuosa de sales, azúcares, aminoácidos, ác. grasos y nucleótidos.
Para formar y organizar el citoplasma y las organelas existe una red de fibras proteicas que constituyen
el citoesqueleto
Las principales organelas son:
El tamaño de la célula está en relación con su función. La mayor parte de las células eucariotas  sólo
son visibles con el microscopio, estando  su diámetro comprendido  entre 10 y 100 micrones. Por lo
general el tamaño resulta constante para cada tipo celular e independiente del tamaño del
organismo, es decir una célula del riñón de un caballo es del mismo orden que la de un ratón. La
diferencia en el tamaño del órgano se debe al número de células y no al tamaño de las mismas.
Sistema métrico decimal y relación de tamaños.

3. RECURSOS REQUERIDOS

Microscopio
Placa cubreobjetos
Placa portaobjetos
Palillo de dientes
Cultivo de microorganismos
Hojas de Tradescantia/ Elodea
Tejido de epitelio bucal
Agua
Azul de metileno
Cuchilla de afeitar

4. PROCEDIMIENTO
 Código FDE 048
GUÍA DE TRABAJO
Versión 03
INGENIERIA BIOMEDICA
Fecha 2009-06-09

1.- En el esquema señale las diferentes partes del microscopio.

2.- Realice una preparación de Células de la epidermis de una hoja: se realiza un corte en el lado del
envés de una hoja de Tradescantia, se ubica en el portaobjetos, se cubre con una gota de agua,
cubrir con el cubreobjetos. La observación de la estructura del tejido, se realiza en los aumentos 4X,
10X y 40X. o si se va a trabajar con Elodea no es necesario hacer cortes.
3. observe un montaje de células procariotas a partir de placas previamente teñidas con Gram, y
células eucariotas, específicamente células sanguíneas previamente coloreadas con tinción de
Wright.
4. Realizar un raspado delicado de la cara interna de la mejilla con el palillo de dientes, después de
enjuagarse muy bien la boca y colocar la muestra resultante sobre un portaobjetos, cubrir con el
cubreobjetos y observar, después agregar una gota de colorante azul de metileno
.

5. PARÁMETROS PARA ELABORACIÓN DEL INFORME

Entregue el esquema del microscopio con las partes, y con los dibujos de las observaciones
realizadas en 40X. y responda las preguntas consignadas en este.
6. BIBLIOGRAFÍA

1. Alberts, B. Bray, D. et. al. Introducción a la biología celular. 2ª ed. Editorial Médica
Panamericana, Madrid. 2006.
2. Karp G. Biología Celular y Molecular. McGraw-Hill/Interamericana, México. 2006.
3. Cooper y Hausman. La Célula. 5ª ed. Editorial Marbán, Madrid. 2005
4. Lodish, H. et. al. Biología Celular y Molecular. 5ª ed. Panamericana, Buenos Aires,
Argentina. 2005.
5. Gartner, L. P., Hiatt, J. L. Atlas color de Histología. 3ª ed. Editorial Médica Panamericana.
2003.
6. Alberts, B. et. al. Biología Molecular de la célula. 4ª ed. Editorial Omega, Barcelona. 2002.

www.profesormd.com
http://www.welchallyn.com/medical/products/pdfdownload/
http://www.welchallyn.com/medical/
www.gruposaludgtz.org/proyecto/mspas-gtz
www.pubmeb.gov

Elaborado por: SANDRA SULAY ARANGO VARELA

Versión:
Fecha: 03/2012
Aprobado por: ALFONSO RESTREPO JURADO