auxina impulsa los eventos nucleares al modular el reclutamiento de

represores transcripcionales de AUXINA/INDOLE-3-ACIDO ACÉTICO

(AUX/IAA) en su mayoría de corta duración por las ubiquitina ligasas
multiméricas SKP1/CUL1/F-Box (SCF) tipo E3. SCF TIR1/AFB

E3 controlan las redes moleculares activadas por auxinas al actuar en el

sitio de detección de auxinas

(TIR1)/ (AFB1-5) se ensamblan en un complejo SCF TIR1/AFBs y reclutan el

grado central de proteínas AUX/IAA multifuncionales. en respuesta a
fluctuaciones en los niveles de auxina intracelular 

Dada la expansión de los genes TIR1/AFBs y AUX/IAA en Arabidopsis, con

seis y 29 miembros, respectivamente, es probable que se detecte
diferencialmente una amplia gama de concentraciones de auxina a través
del ensamblaje combinatorio de los complejos de co-receptor SCF TIR1/AFB-
AUX/IAA

Las estructuras primarias de la mayoría de AUX/IAA comparten cuatro

regiones de conservación de secuencias 17que incluye un dominio N-
terminal (DI) para el reclutamiento de co-represores transcripcionales, un
grado central flanqueado por motivos de velocidad 18 y el dominio PB1
similar a la ubiquitina C-terminal que media las interacciones
homotípicas y heterotípicas.

Los AUX/IAA probablemente también experimentan

isomerización 21 catalizada por ciclofilina estimulada por auxina, lo que
facilita el reconocimiento por parte de SCF TIR1/AFB. Se registra un aumento
de la concentración de auxina nuclear mediante la formación de un
complejo correceptor ternario TIR1/AFB:auxina:AUX/IAA (revisado en la
referencia 19 ). Una vez reclutados, se predice que los AUX/IAA se
etiquetarán con cadenas poliméricas de ubiquitina (Ub) que los llevarán a
la destrucción por el proteasoma 26S

Se ha propuesto que la proteólisis AUX/IAA mediada por SCF TIR1/AFB y la

diversidad combinatoria de las interacciones TIR1/AFB-AUX/IAA
desencadenadas por auxinas construyen una red intrincada que controla
programas genéticos complejos.

La comprensión de la dinámica global del ensamblaje del co-receptor de

auxina y su impacto inmediato en la ubiquitilación y degradación de
AUX/IAA no se comprende completamente. Además, aunque la mayoría
de los estudios se han centrado en los eventos posteriores de la detección
de auxinas, carecemos de una explicación detallada de la coexistencia de
la plétora de complejos correceptores.

buscamos comprender la retención evolutiva de los genes AUX/IAA e

identificar las características principales que conducen a
SCF TIR1.discriminación y procesamiento.

nos propusimos establecer un sistema ajustable para evaluar el

ensamblaje SCF TIR1 -AUX/IAA y la ubiquitilación específica de AUX/IAA
desencadenada por auxina.

analizamos la variación de secuencia interespecífica e intraespecífica en

un par hermano seleccionado de Arabidopsis AUX/IAA
canónicos, IAA6 e IAA19 , y caracterizamos bioquímicamente los
correceptores de auxina SCF TIR1 -IAA6 y SCF TIR1 -IAA19.

También definimos su afinidad por la auxina, la cinética de SCF TIR1-

ensamblaje objetivo para estos dos co-receptores, y reportan distintos
patrones de ubiquitilación de los represores IAA6 e IAA19. 

presentamos un modelo de cómo las proteínas relacionadas, que están

funcionalmente especializadas para detectar concentraciones específicas
de moléculas pequeñas, podrían interpretar esas señales en la estabilidad
diferencial de los reguladores transcripcionales, regulando la expresión
génica y las respuestas de desarrollo.

IAA6 e IAA19 difieren en los patrones de expresión y selección

AUX/IAA existen como pares hermanos, u ohnólogos, con una gran
similitud de secuencia, que se han retenido en una proporción
inusualmente alta de casos después de eventos de duplicación del
genoma completo y, por lo tanto, han estado divergiendo durante el
mismo período de tiempo.

Los cambios funcionales por neofuncionalización o subfuncionalización o

selección para equilibrar la dosis en complejos proteicos contribuyen a la
retención de dichos genes duplicados
levan un motivo de grado y comparten una alta identidad de secuencia
(61,4 %)

mutaciones de grado dominante, iaa6/shy1e iaa19/msg2, y el intercambio

de dominios represores N-terminal (DI) de IAA6 e IAA19 indican que
IAA6 e IAA19 tienen funciones distintas y compartidas en la señalización
de auxina 

FIG1A Como la expresión de los genes IAA6 e IAA19 podría reflejar

funciones específicas a nivel molecular, comparamos los datos
disponibles sobre los perfiles de expresión de ARNm en diferentes
tejidos, etapas de desarrollo y accesiones de Arabidopsis thaliana 

FIG1A IAA19exhibió una expresión significativamente más alta

que IAA6 , lo que indica que, aunque sus regiones promotoras
relativamente conservadas, los dos genes están regulados de manera
diferencial. Como la expresión de IAA19 es significativamente mayor que
la de IAA6 , es probable que IAA19 sea el gen que conservó la función
original.

FIG-1B preguntamos si la divergencia de secuencias entre los dos genes

difiere al comparar las secuencias ortólogas
de Brassicacae  IAA6 e IAA19 para cada gen por separado. ambas
secuencias completas parecían bastante conservadas entre las
cuatro Brassicaceae probadas (general d N / d S  IAA6 = 0.132; d N /
d S  IAA19 = 0.087), los análisis de ventana deslizante revelaron regiones
de mayor divergencia de secuencia en IAA6 . Estos abarcan la región
corriente arriba del grado central y un pico llamativo (dN / dS >100) en el
dominio PB1 

Dado que las secuencias ortólogas de IAA6 e IAA19 carecían de indeles en

la gran mayoría de las comparaciones, estos picos deben estar impulsados
por sustituciones de aminoácidos.

aunque la comparación de IAA6 con IAA19 no reveló evidencia directa de

selección positiva, IAA6 , pero no  IAA19 altamente expresado , incluye
regiones con una amplia variación de secuencia entre Brassicaceaes cuando
las secuencias de genes se analizaron por separado

Los receptores TIR1-IAA6 y TIR1-IAA19 discriminan los niveles de auxina

abordar las diferencias funcionales en el nivel de proteína, luego

preguntamos si IAA6 e IAA19 varían en su potencial para interactuar con
TIR1 y AFB en respuesta a la auxina en ensayos convencionales de dos
híbridos de levadura (Y2H). IAA6 e IAA19 interactuaron de manera
dependiente de auxina con TIR1, AFB1 y AFB2 

Matriz de interacción Y2H para TIR1, AFB1, AFB2 con IAA6, IAA19 y sus
supuestas versiones mutantes dominantes: IAA6 C78R/supresor de hy2 (shy1-1) , IAA6 P76S ,
IAA19 P76S/massugu (msg2 -1), portando mutaciones en el degron (derecha). Los diploides de
levadura que contenían LexA DBD-TIR1/AFB y AD-AUX/IAA se detectaron en un
medio selectivo con concentraciones crecientes de IAA, y la expresión del
indicador de β-galactosidasa indica interacciones TIR1/AFB1/2-AUX/IAA
inducidas por IAA. EV, vector vacío.

bajas concentraciones micromolares de auxinas naturales IAA, 4-cloro-

IAA y, en menor medida, la auxina sintética 1-naftaleno acético (1-NAA)
desencadenaron asociaciones TIR1/AFB1/AFB2-IAA6/19 
En general, IAA19 interactuó más fuertemente con TIR1/AFB que con
IAA6, lo que demuestra que IAA6 e IAA19 difieren en la fuerza de las
interacciones TIR1/AFB-AUX/IAA dependientes de auxina. Nuestra
hipótesis es que estas diferencias podrían surgir de los aminoácidos
únicos en sus regiones flanqueantes de degron lo que puede afectar la
capacidad de AUX/IAA para ensamblarse en complejos de correceptor de
auxina.

……..
FIG 1 d,e
luego evaluamos sus propiedades de unión a auxina mediante ensayos de
unión de saturación utilizando concentraciones crecientes de IAA
radiomarcado

TIR1-IAA19 se une a IAA con una K  d de ∼ 15,6 nM en comparación con

una K  d ∼ 72,0 nM de TIR1-IAA6, lo que indica que el correceptor TIR1-
IAA19 tiene una afinidad comparativamente mayor por IAA que TIR1-
IAA6.

FIG 1F
Luego comparamos directamente la afinidad de auxina de los
correceptores TIR1-IAA6 y TIR1-IAA19 a través de ensayos de unión
competitiva, y determinamos los valores de IC  50 y Ki para cada uno de los
complejos usando concentraciones crecientes de IAA no marcado como
competidor 

En el equilibrio, el IAA no marcado persiguió [ 3H ]IAA consistentemente tres veces más eficientemente de
TIR1 -IAA6 ( Ki = 33.5±3.7 nM y Ki= 99, 3 ± 11, 9 nM,
TIR1-IAA19 que de 

respectivamente), reflejando la afinidad de los correceptores por IAA

determinada en experimentos de unión de saturación 

Por lo tanto, IAA6 confiere una afinidad de unión a auxina esencialmente

menor que IAA19 a los complejos de correceptor TIR1-AUX/IAA.
Seguimiento de la ubiquitilación AUX/IAA mediada por SCF TIR1 específica

especulamos que la fuerza de las asociaciones SCF TIR1 -IAA6 y SCF TIR1 -

IAA19 podría afectar la ubiquitilación AUX/IAA y, específicamente, que
la estabilidad de los complejos SCF TIR1 -AUX/IAA afecta el sitio de
ubiquitilación, la extensión de la cadena Ub, o la dinámica de la
conjugación Ub.

desarrollamos un ensayo de ubiquitilación in vitro (IVU) dependiente de TIR1

y libre de células . Una IVU típica consta de E1 ( At UBA1), E2
(principalmente At UBC8), expresado de forma recombinante y altamente
purificado, Hs Cul1- Mm de mamíferoRBX1 (ref. 38 ), Ub, At TIR1-ASK1
(ref. 9 ) y objetivos IAA6 o IAA19 etiquetados con GST

por lo tanto, el ensamblaje correcto de un complejo Hs Cul1- Mm RBX1-

ASK1-F-box TIR1 en nuestras IVU permite el reclutamiento y la activación
de un E2 cargado con Ub (E2 ∼ Ub) para la conjugación de Ub de AUX /
IAA in vitro.

Para confirmar los requisitos para la conjugación de Ub in vitro de IAA6 e

IAA19, preensamblamos complejos SCF TIR1 y realizamos IVU cuando
cualquiera de los componentes se eliminó de la reacción. Como se
esperaba, UBA1 (E1), UBC8 (E2) y SCF TIR1 (E3) se requerían sin
ambigüedades para la ubiquitilación de IAA6 e IAA19 

SCF TIR1 mostró una fuerte actividad ligasa E3 in vitro . SCF TIR1 es una ligasa

RING basada en culina y, dado que los RING-E3 no forman un tioéster
intermedio con Ub, la especificidad de enlace de la formación de la
cadena Ub probablemente sea conferida por E2. Por lo tanto, la topología
de las cadenas Ub ensambladas en un objetivo por el ANILLO-E3 puede
cambiar con la naturaleza del E2. Además, aunque la función E1 es
universal y ambos E1 de Arabidopsis (UBA1 y UBA2) muestran casi la
misma especificidad en la transferencia de Ub activado a una variedad de
E2 de Arabidopsis.
( a ) Ensayos IVU con GST-IAA6 o GST-IAA19 recombinante, E1 ( At UBA1), E2
( At UBC8), SCF TIR1 reconstituido ( At SKP1-TIR1, Hs Cul1 y Mm RBX1), At Ub e
IAA (auxina) . La ubiquitilación AUX/IAA depende de cada componente. Los
anticuerpos anti-GST, así como anti-Ub, reconocen las especies ubiquitiladas IAA6
e IAA19. Tiempo de reacción IVU 10 min

Luego evaluamos cómo tres E2 de diferentes subclades de la familia Ub

E2 de 37 miembros en Arabidopsis  44 , a saber, UBC1, UBC4 y UBC8,
catalizan la conjugación de Ub a IAA6 e IAA19  UBC1, 4 y 8 forman un
enlace de tioéster entre E2 y Ub, lo que indica que estos E2 pueden
cargarse con ubiquitina in vitro Mientras que UBC1 y UBC8
desencadenaron una poliubiquitilación comparable de IAA6 e IAA19,
solo se pudieron detectar conjugados de ubiquitina de bajo peso
molecular al usar UBC4 como E2 en IVU ( Fig. 2b y Fig. 10
complementaria ). Esto muestra E2-SCF TIR1selectividad y discriminación
para la ubiquitilación de objetivos mediada por auxina. Estas
observaciones también sugieren que la ubiquitilación AUX/IAA rastreada
en el sistema IVU es la consecuencia de la unión de polímeros Ub con
diferentes topologías. Por lo tanto, incorporamos en nuestros ensayos
variantes de Ub que llevan residuos de lisina sustituidos individualmente
(mutantes de K a R), que se han utilizado ampliamente para caracterizar
la especificidad del enlace E2-E3
( b ) UBC8 y UBC1 Las enzimas conjugadoras de Ub (E2s) provocan la conjugación
poli-Ub de IAA6 e IAA19 después de 10 min in vitro. UBC8 promueve varios
enlaces Ub como se ve por la reducción de especies ubiquitiladas IAA6 e IAA19
utilizando uno de los donantes Ub específicos de cadena, Lys-29, Lys-48 o Lys-63

Descubrimos que la restricción de la concatenación de ubiquitina conduce

a un patrón de conjugación alternativo, y hay una pérdida aparente de
formación de cadenas de ubiquitina en comparación con las reacciones
que contienen ubiquitina de tipo salvaje ( Fig. 2b ).
Esto implica que los conjugados de ubiquitina en IAA6 e IAA19, en
dependencia de UBC8, son el producto de diferentes tipos de enlaces que
conducen a topologías alternativas, muy probablemente varios eventos
de poli-mono-ubiquitilación y/o multi-poliubiquitilación. Las
combinaciones E2-E3 determinan la formación de cadenas específicas al
colocar la Ub aceptora en una orientación definida para favorecer el
enlace de la Ub donadora sobre la lisina 25 seleccionada 

La ubiquitilación AUX/IAA refleja la afinidad del receptor de auxina

A continuación, determinamos cómo la auxina influye en la

ubiquitilación de IAA6 e IAA19. Primero, monitoreamos la ubiquitilación
dependiente de auxina de AUX/IAA a lo largo del tiempo usando
ubiquitina marcada con fluoresceína y anticuerpos secundarios
fluorescentes para una detección precisa y no enzimática de conjugados
de ubiquitina en una sola imagen. Detectamos una conjugación de Ub
constante y rápida (<10 min) con IAA6 e IAA19 en presencia de auxina
(750 nM IAA) 

ubiquitilación de AUX/IAA en ausencia de IAA, que probablemente sea

el resultado de interacciones basales entre SCF TIR1 y
AUX/IAA 7 ,8 , 9 , 11 , 47 , 48 , 49 . Las reacciones de IVU en presencia de ∼ 10 ×
y ∼ 50 × [IAA] más altas que la afinidad de auxina observada de los
complejos de correceptor TIR1-IAA6 y TIR1-IAA19, respectivamente (  Fig.
1e ), no proporcionaron evidencia de diferencias significativas en el estado
de ubiquitilación de IAA19 sobre IAA6 (representado en el panel inferior
de la Fig. 2c y la Fig. 8b-d complementaria ).

 La IVU rápida de IAA6 e IAA19 depende de la auxina y del tiempo. Las

reacciones IVU en el transcurso del tiempo se realizaron usando ubiquitina
marcada con isotiocianato de fluoresceína con o sin IAA 750 nM. La ubiquitilación
se controló mediante la señal fluorescente de ubiquitina (verde, arriba) y
anticuerpos secundarios conjugados con Alexa Fluor 647 para la detección de
GST:AUX/IAA (magenta, centro). (*) El asterisco representa Cullin1 ubiquitilado
como se informó anteriormente 79. El software ImageQuant TL se utilizó para la
cuantificación y generación de imágenes fusionadas (abajo). Las proporciones para
la ubiquitilación dependiente de la auxina y del objetivo se calcularon a partir de
tres IVU independientes ( n = 3; consulte la Fig. 8b-d complementaria para las
réplicas) y las mediciones individuales se representan en los diagramas de puntos
de dispersión correspondientes con una línea en la mediana. Un ANOVA de dos
vías ( P > 0.05) no mostró diferencias significativas para la señal Ub relativa entre
IAA6 e IAA19 en un punto de tiempo específico (izquierda), o para la relación
IAA19/IAA6 con o sin IAA 750 nM.

Curiosamente, cuando evaluamos más a fondo la ubiquitilación de

AUX/IAA con concentraciones nanomolares crecientes de IAA,
detectamos un aumento en las especies de alto peso molecular en IAA19
en comparación con IAA6 ( Fig. 2d). Si bien se produjo un aumento
constante en la conjugación de Ub de IAA6 a 0,1–2 μM [IAA] después de
10 minutos, la conjugación de Ub de IAA19 ya se disparó en la
concentración de IAA más baja ( Fig. 2d y Fig. 8e, f complementaria ). Esto
sugiere una mayor eficiencia de la maquinaria de ubiquitilación que actúa
sobre IAA19 a bajas concentraciones de auxina. En conjunto, estos
experimentos son los primeros en demostrar la reconstitución del
ensamblaje SCF TIR1 y la ubiquitilación AUX/IAA.
La selección del sitio Ub AUX/IAA depende de la flexibilidad local

buscamos determinar los residuos dentro de IAA6 e IAA19 que

funcionan como sitios de unión para Ub ( Fig. 3a, b ).

Procesamos muestras de IVU que contenían conjugados de ubiquitina

IAA6 e IAA19 para cromatografía líquida junto con espectrometría de
masas en tándem (LC-MS) e inspeccionamos espectros de MS/MS en
busca de picos con una diferencia de masa que representa LRGG
(producto de escisión errónea de tripsina de Ub C-terminal) y Residuos
modificados con di-Gly ( Fig. 3b

Encontramos ubiquitilación de Lys en IAA6 e IAA19 en regiones con

compacidad baja o intermedia y más péptidos modificados con Ub para
IAA19 que para IAA6 independientemente de la auxina presente en las
reacciones IVU. Los sitios ubiquitilados reproducibles en réplicas
independientes comprenden Lys3, Lys32, Lys33, Lys91 y Lys97 en IAA6
(27 % de Lys total); y Lys3, Lys25, Lys68, Lys87, Lys93, Lys100, Lys111 y
Lys141 en IAA19 (47% Lys total) 

Curiosamente, la ubiquitilación de Lys97 de IAA6 y Lys100 y Lys111 de

IAA19 podría servir como un mecanismo para desalojar a los socios de
interacción AUX/IAA al interferir con su interfaz de oligomerización 

Además, aunque estos son residuos altamente o completamente

conservados, no identificamos péptidos ubiquitilados Lys68 o Lys111 en
IAA6. Por lo tanto, no podemos descartar que nuestro análisis basado en
MS pueda verse afectado por la fidelidad de la ubiquitilación in vitro ., lo
que permite detectar solo un subconjunto de posibles sitios de
ubiquitilación

Sin embargo, la ubiquitilación de IAA6 e IAA19 podría depender más

bien de la adaptabilidad estructural alrededor de la superficie de
ubiquitilación, es decir, la flexibilidad local, lo que permite modificar una
selección de múltiples lisinas

de modo que la selección del sitio Ub AUX/IAA depende de un entorno

local específico

Por lo tanto, nuestros datos respaldan muy bien los hallazgos recientes
que muestran que los sitios Ub en los objetivos exhiben una sorprendente
propensión a ocurrir dentro de regiones intrínsecamente desordenadas en
un vecindario de secuencia determinante específico

 c ) Distribución de tipos de enlaces de ubiquitina identificados. Las reacciones de

IVU para IAA6 (verde) e IAA19 (azul) con o sin IAA se analizaron a través de LC-
MS, y se identificaron los péptidos de ubiquitina correspondientes a diferentes
tipos de enlace de ubiquitina 
Las combinaciones de cadenas de ubiquitina homólogas, heterólogas y
ramificadas en IAA6 e IAA19 posiblemente favorecen su degradación por
el proteasoma.

La afinidad del correceptor de auxina sintoniza la rotación de AUX/IAA

evaluamos cuantitativamente la degradación de IAA6 e IAA19 en varios

fondos mutantes TIR1/AFB y monitoreamos su respuesta a la auxina.

Generamos construcciones de sensores luminiscentes radiométricos IAA6

e IAA19 56 para la expresión transitoria en protoplastos de hojas
de Arabidopsis , y medimos la degradación dependiente de auxina como
una disminución en la luminiscencia de la luciérnaga en relación con la
renilla (relación FL/RL)

Los sensores IAA6 e IAA19 mostraron una degradación dependiente de

la concentración de auxina en el fondo genético de tipo salvaje,
respondiendo rápidamente a niveles bajos de IAA aplicado
exógenamente. Si bien las concentraciones de IAA entre 100 pM y 1 nM
desencadenaron la degradación de IAA19, se requirió IAA 10 nM para
una renovación comparable de IAA6

En los fondos mutantes dobles tir1-1 y tir1-1 afb2-3 o tir1-1 afb3-4 , se

redujo la degradación de IAA6 e IAA19, lo que requirió ∼ 10 veces más
IAA para alcanzar las tasas de degradación de tipo salvaje

Curiosamente, las diferencias que observamos entre IAA6 e IAA19

coinciden con las estimaciones de la velocidad relativa del recambio
inducido por auxinas para IAA6 e IAA19 en un enfoque
sintético 57 . Además, la incorporación del inhibidor del proteasoma
MG132 estabilizó IAA6 e IAA19

Por lo tanto, la degradación de los sensores IAA6 e IAA19 en nuestro

sistema de protoplastos depende del proteasoma de acuerdo con las
observaciones previas 58 , y los sensores que llevan mutaciones
dominantes en el grado mostraron una mayor estabilidad.

DISCUSION

Aquí, proponemos un modelo ( Fig. 5 ) en el que los ohnólogos IAA6 e

IAA19 han desarrollado una sensibilidad a las auxinas funcionalmente
especializada a través de la formación diferencial de correceptores de
auxinas, la detección de auxinas y la ubiquitilación. A pesar de la gran
similitud de la secuencia de aminoácidos, IAA19 se asocia más
fuertemente con TIR1/AFB que IAA6, forma un complejo ternario TIR1-
auxina-IAA19 de mayor afinidad y se ubiquitila con mayor procesividad
a concentraciones de auxina más bajas. Como la ubiquitilación es muy
dinámica, la formación y estabilidad del complejo SCF TIR1 , así como la
isomerización y desubiquitilación de AUX/IAA, también pueden afectar
el estado de conjugación de Ub de IAA6 e IAA19, marcando su dinámica
de procesamiento y degradación en un contexto celular.

Nuestros estudios sobre la dinámica de la formación y el resultado del co-

receptor TIR1-IAA6 y TIR1-IAA19 sugieren que una sutil divergencia de
la secuencia AUX/IAA impulsa la especialización funcional, dictando así
la conjugación AUX/IAA Ub y muy probablemente la degradación. Por lo
tanto, estos eventos finalmente inciden en las interacciones ARF y la
activación de genes dependientes de auxina. Es bastante notable que las
diferencias entre genes hermanos como IAA6 e IAA19 ya podrían dejar
rastros tanto en el nivel de expresión como en la divergencia de secuencia
de cada gen. Las regiones de mayor divergencia de secuencia
en IAA6 coinciden con los puntos críticos de ubiquitilación en IAA19 . Si
estas regiones en IAA6con selección relajada tienen una relevancia
funcional y proporcionan, por ejemplo, un panorama diferente para la
conjugación de ubiquitina que afecta la estabilidad de AUX/IAA, o son
simplemente un efecto de restos de deriva genética, hasta ahora
desconocidos.

Es probable que una mayor afinidad por la auxina confiera una mayor
estabilidad a la interacción SCF TIR1 -IAA19, lo que puede prolongar el
intervalo de tiempo en el que IAA19 está disponible para la ligasa E3 para
la conjugación con Ub. Las restricciones estructurales pueden impedir la
selección de residuos que limitan el área de acción de E3 25 , por lo que la
ubiquitilación IAA6 e IAA19 alternativa y diferencial podría depender de
cómo estén disponibles dichos residuos en las zonas de ubiquitilación
IAA6 e IAA19

Proponemos que aunque una sola cadena de poliubiquitina en un sitio

Ub podría ser suficiente para apuntar a IAA6 e IAA19 para la
degradación, la ubicación relativa de sitios de ubiquitilación adicionales
como Lys, particularmente en regiones flexibles, sirven como sitios de
respaldo para la ubiquitilación diferencial en respuesta a
auxina. Demostramos que la ubiquitilación de IAA6 e IAA19 mediada
por SCF TIR1 puede ocurrir a través de residuos de lisina en regiones
desordenadas flexibles, cada una de las cuales podría ser suficiente para
inducir la degradación rápida de IAA6 e IAA19 in vivo.