PRÁCTICA N° 03

RECONOCIMIENTO DE MACROMOLÉCULAS I: CARBOHIDRATOS

Dr. CDC.BB. Luis G. García Izquierdo
I.- INTRODUCCIÓN:
Una macromolécula es una molécula de gran tamaño creada comúnmente a través de la polimerización de subunidades más pequeñas
(monómeros).
Por lo general, se componen de miles, o más, de átomos. Pueden ser tanto orgánicas como inorgánicas y las más comunes en biología
son:(ácidos nucleicos, proteínas, carbohidratos y lípidos).
El término macromolécula se refería originalmente a las moléculas que pesaban más de 10.000 dalton de masa atómica.
Las macromoléculas forman largas cadenas que se unen entre sí por fuerzas de Van der Waals, puentes de hidrógeno o interacciones
hidrofóbicas y por enlaces covalentes.
Los glúcidos, carbohidratos, hidratos de carbono o sacáridos son biomoléculas compuestas principalmente de carbono, hidrógeno y
oxígeno, aunque algunos de ellos también contienen otros bioelementos tales como nitrógeno, azufre y fósforo.
Las principales funciones de los glúcidos en los seres vivos son el proporcionar energía inmediata (no en vano son la principal fuente
de energía, a través de un proceso de oxidación, en la mayoría de las células no fotosintéticas), así como una función estructural.
Los carbohidratos, hidratos de carbono o sacáridos, son moléculas orgánicas que almacenan energía en los seres vivos.
Son las biomoléculas más abundantes e incluyen: azúcares, almidones y celulosa, entre otros compuestos que se encuentran en los
organismos vivos.
Los organismos que realizan la fotosíntesis (plantas, algas y algunas bacterias) son los principales productores de carbohidratos en la
naturaleza.
La estructura de estos sacáridos puede ser lineal o ramificada, simple o compuesta y además pueden asociarse con biomoléculas de
otra clase.
 En la presente práctica, se realizarán algunos reconocimientos de la presencia de carbohidratos que se encuentran presentes en
los seres vivos.
II.- MATERIAL Y METODOS:
POR EL LABORATORIO: POR EL ALUMNO:
- Microscopio compuesto. - 20 ml. de extracto de cebolla.
- 12 tubos de ensayo por mesa. - 05 grs. de frijol fresco o seco.
- 03 beaker de 250ml. por mesa. - 50 grs. de azúcar.
- 01 pipeta de 5 ml. por mesa. - 20 ml. de orina (paciente diabético).
- Lugol, bicarbonato. - 01 frasco de alcohol.
- Reactivo Benedict. - 10 hojas verdes de espinaca.
- Suspensión de almidón al 10%. - 01 plumón de tinta indeleble.
- Glucosa al 20%. - 10 grs. de almidón.
- Sacarosa al 20%. - 01 gasa estéril.
- Ácido clorhídrico al 10% - Equipo mínimo (individual).
- Equipo de baño María.
- Cocina eléctrica .
Materiales de laboratorio de Biología
PROCEDIMIENTO:
2.1 RECONOCIMIENTO DE SUSTANCIAS REDUCTORAS

FUNDAMENTO: Los azúcares tienen acción reductora en medios alcalinos. La glucosa cuando es sometida a la acción de los
álcalis, p.e. Benedict formas sales enólicas y estas se oxidan fácilmente por el oxígeno atmosférico y por otros agentes oxidantes
como: plata, mercurio, bismuto, cobre, etc. El reactivo de Benedict contiene cobre de color amarillo y el último compuesto que se
forma es el óxido cuproso, que por acción del calor forman un compuesto de color rojo ladrillo.

A) PRUEBA CUALITATIVA DE BENEDICT:

- Numere 5 tubos de ensayo.
- Coloque:
* En el tubo 1: 03 ml. de extracto de cebolla.
* En el tubo 2: 03 ml. de glucosa al 20%.
* En el tubo 3: 03 ml. de sacarosa al 20%.
* En el tubo 4: 03 ml. de orina.
* En el tubo 5: 03 ml. de agua.
- Agregue 2 ml. de reactivo de Benedict a cada tubo.
- Homogenice el preparado y coloque los tubos en baño de agua hirviendo durante 5 minutos.
- Deje enfriar a temperatura ambiente.
- Realice las lecturas según el siguiente cuadro:

COLOR RESULTADO
Azul (-) Negativo.
Azul verdoso ( Hs ) Huellas.
Verde (+) Aprox. 0.5% de sustancia reductora.
Pardo verdoso ( ++ ) Aprox. 1.0% de sustancia reductora.
Amarillo ( +++ ) Aprox. 1.5% de sustancia reductora.
Rojo ladrillo ( ++++ ) Aprox. 2.0% de sustancia reductora.

- Esquematice e interprete los resultados.

2.2 RECONOCIMIENTO DE UN POLISACÁRIDO (ALMIDÓN ) MEDIANTE LA REACCIÓN CON EL LUGOL:
FUNDAMENTO: La coloración producida por el Lugol se debe a que el yodo se introduce entre las espiras de la molécula de
almidón. No es por tanto una verdadera reacción química, sino que se forma un compuesto de inclusión que modifica las propiedades
físicas de esta molécula, apareciendo la coloración azul violeta, al reaccionar con la amilosa. La fijación del yodo en la superficie de
la molécula del almidón solo tiene lugar en frío.

- En un tubo de ensayo coloque 03 ml. de suspensión de almidón.

- Añadir 02 gotas de Lugol.
- Si la disolución del tubo de ensayo se torna de color azul-violeta, la reacción es positiva.
- Caliente el tubo de ensayo en un mechero y dejar enfriar, repita la acción nuevamente y luego esquematice sus observaciones en
los resultados ( ver fig. 01 ).

2.3 HIDRÓLISIS DE LA SACAROSA (AZUCAR NO REDUCTOR )

FUNDAMENTO: La sacarosa es un azúcar no reductor debido a que la reacción es negativa tanto con Fehling como con
Benedict, esto se debe porque no presenta grupos hemiacetálicos libres. Pero en presencia del del ácido clorhídrico (HCl) y
calentando, la sacarosa se hidroliza descomponiéndose en dos monosacáridos que la conforman: glucosa y fructuosa.
 - Coloque en un tubo de ensayo 01 ml. De sacarosa al 20% .
- Agregue 10 gotas de ácido clorhídrico al 10%.
- Caliente con la ayuda de un mechero, durante 02 minutos.
- Deje enfriar.
- Añadir 05 gotas de bicarbonato y realice la prueba de Benedict.
- Observa el resultado, si la reacción es positiva, si la reacción es positiva hemos conseguido romper el enlace α-glucosídico de la
sacarosa; dejando libre a la glucosa y la fructuosa.
- Coloree el proceso en resultados.

2.4 RECONOCIMIENTO DE CARBOHIDRATOS DE RESERVA EN CÉLULAS VEGETALES:

A) Gránulos de almidón en semillas de frijol:
- Realice raspados del cotiledón de frijol.
- Coloque la muestra en un porta objetos.
- Agregue una gota de agua sobre la muestra, luego moje la punta del gotero en Lugol y lo coloca en la gota de agua que está
sobre la muestra.
 - Observe a mediano y a mayor aumento.
- Esquematice sus resultados.

B) Reconocimiento de Glucosa en hojas de espinaca:

- Coloque 10 hojas de espinaca en un mortero y tritúrelos.
- Coloque lo triturado en un beaker y agregar agua hasta cubrir ligeramente el triturado y agite hasta obtener una muestra
uniforme.
- Filtrar en otro beaker, con la ayuda de una gasa, luego tome de la muestra filtrada 03 ml. y colóquelo en un tubo de ensayo.
- Agregue al tubo, 02 ml. de reactivo de Benedict y agite fuertemente, durante un minuto.
- Coloque el tubo en baño de agua hirviendo durante 5 minutos.
- Deje enfriar a temperatura ambiente.
- Realice Las lecturas según el siguiente cuadro.
 % DE GLUCOSA POSITIVIDAD INTENSIDAD DEL
COLOR

25 + Verde, precipitado verde o

amarillo

50 ++ Amarillo a verde,
precipitado amarillo

75 +++ Amarillo anaranjado,

Precipitado amarillo a
naranja

100 ++++ Rojo, precipitado rojo

ladrillo
Negativa: Color azul claro (puede formarse un precipitado amarillo)
Trazas: Color verde azulado
- Esquematice e interprete sus resultados
III. RESULTADOS:
A) PRUEBA CUALITATIVA DE BENEDICT:

Cuadro 1. Reconocimiento de sustancias reductoras. Prueba de Benedict

N° TUBO MUESTRA COLOR INTERPRETACIÓN
( ++ ) Aprox. 1.0% de sustancia
1 03 ml. de extracto de cebolla. Pardo verdoso reductora.

2 Amarillo +++ ) Aprox. 1.5% de sustancia

03 ml. de glucosa al 20% reductora.
( ++++ ) Aprox. 2.0% de sustancia
3 03 ml. de sacarosa al 20% Rojo ladrillo reductora.

4 03 ml. de orina Azul verdoso ( Hs ) Huellas.

5 03 ml. de agua Azul ( - ) Negativo.
 2 4 2
1 4
3 5 3 5
+ Reactivo de
..........
Benedict ........... .......... 02 ml.
02 ml.
------------ ----------- .------------ 02 ml. -------- ---------
---------
03 ml. 03 ml. 03 ml. .......... 03 ml. 03 ml.
------------ 03 ml. ..........
------------ 02 ml.
--------- 02 ml.
--------
03 ml. 03 ml. Extracto Glucosa 03 ml. Orina 03 ml, Extracto
Glucosa Orina
de cebolla de cebolla
Sacarosa Agua Sacarosa Agua

4 1
2
3 5
Resultados

Glucosa Extracto
Orina
de cebolla
Sacarosa Agua
2.2. RECONOCIMIENTO DE UN POLISACÁRIDO ( ALMIDÓN) MEDIANTE LA REACCIÓN CON LUGOL:

Añadir 02 gotas
de Lugol

------- -------
2 gts
-----
03ml

Suspensión de Reacción
almidón positiva

Almidón
+ Lugol

---- ---- ----

Agua fría
Volvemos a calentar, se repite el proceso
2.3. HIDRÓLISIS DE LA SACAROSA (AZUCAR NO REDUCTOR)

----
05gts
----- ---- ----
10gts 10gts 10gts

---- ---- ---- ----

01ml 01ml 01ml 01ml

Sacarosa Agregar Enfriar y añadir

HCl bicarbonato

---- ----- ----

05gts
---- 10gts
10gts
---- ----
-
01ml

Muestra + Reacción
Benedict positiva
2.4 RECONOCIMIENTO DE CARBOHIDRATOS DE RESERVA EN CÉLULAS VEGETALES:

A) Gránulos de almidón en semillas de frijol:

Esquematice sus observaciones

* Observación: gránulos de almidón

* Muestra o
material biológico: raspado de cotiledon de frijol

* Coloración: lugol

*N° de aumentos: 100x

* Especie: frijol:Phaseolus vulgaris

B) Reconocimiento de glucosa en hojas de espinaca.

Muestra + Reacción
Muestra
Benedict

........
------- 02ml ........
--------
03ml 03ml
------ ------- R
IV. DISCUSIÓN:
4.1.- Compare la clasificación de los carbohidratos por el número de carbonos y por el número de azúcares.
Los carbohidratos se pueden dividir en tres grupos: monosacáridos, ejemplo, glucosa, fructosa, galactosa; disacáridos, ejemplo, sacarosa (azúcar de mesa),
lactosa, maltosa; polisacáridos, ejemplo, almidón, glicógeno (almidón animal), celulosa.

4.2.- ¿Cuáles son las principales rutas metabólicas de los carbohidratos?. Explique la función biológica de cada ruta.
1. Rutas catabólicas. Son rutas en las cuales los nutrientes orgánicos se degradan oxidativamente en productos finales simples con el
propósito de obtener energía química y poder reductor para ser transformados en otras formas de energía útil para la célula. La
energía química normalmente se convierte en un equivalente biológico durante la síntesis del ATP, y el poder reductor en la síntesis
del NADPH. Por ejemplo, la glucólisis y la beta-oxidación. En conjunto, estas rutas constituyen al catabolismo.
2​. Rutas anabólicas. Son rutas que convierten moléculas precursoras de bajo peso molecular, tales como dióxido de carbono, acetato o
piruvato, en moléculas progresivamente más grandes y complejas como proteínas, polisacáridos, lípidos de membrana y ácidos nucleicos.
Tales rutas invariablemente requieren el consumo de energía (ATP) y poder reductor (NADPH). Se denominan colectivamente como
anabolismo. Por ejemplo, el ciclo de Calvin y la biosíntesis de ácidos grasos.
3. Rutas anfibólicas. Son rutas mixtas, tanto catabólicas como anabólicas. Por ejemplo, el ciclo de Krebs cumple un papel crucial en el
catabolismo de carbohidratos, ácidos grasos y aminoácidos, pero también proporciona precursores para muchas rutas biosintéticas a través
de reacciones que cumplieron el mismo propósito en antepasados ​anaeróbicos. Diez de los veinte aminoácidos proteínicos provienen del
2-oxoglutarato y el oxaloacetato. A partir del aspartato y el glutamato se forman otros aminoácidos proteínicos, así como los nucleótidos de
pirimidina, diversos alcaloides y los tetrapirroles que constituyen las clorofilas.
 4.3.- ¿Qué importancia tiene la presencia de glucosa en la sangre?. Comente algunos casos patológicos en el hombre.

La glucosa es la principal fuente de energía para el cuerpo humano. La glucosa entra en el organismo con los alimentos. Con la digestión, a
lo largo del tubo digestivo, se pone en marcha una cadena de trasformaciones químicas que convierte los alimentos en nutrientes y estos en
elementos más pequeños.

Si padeces una diabetes, ya sabes que es importante controlar las concentraciones de azúcar en sangre (o las concentraciones de glucosa
en sangre). Tienes que mantener estables esas concentraciones. El hecho de tener una concentración excesiva de azúcar en sangre puede
hacer que te encuentres fatal, y si la tienes a menudo, puede ser muy malo para tu salud.

4.4.- ¿Cuáles son los valores normales de la glucosa en la orina del hombre y qué factores pueden alterarlo?

Rango normal de glucosa en la orina: 0 a 0.8 mmol/l (0 a 15 mg/dL). Los ejemplos anteriores son mediciones comunes para los resultados
de estos exámenes. Los rangos de los valores normales pueden variar ligeramente entre diferentes laboratorios. Algunos utilizan diferentes
mediciones o analizan muestras distintas

Si hay una demasiada glucosa en la sangre, la glucosa sobrante se elimina a través de la orina. La prueba de glucosa en la orina se puede
usar para determinar si los niveles de glucosa en la sangre están demasiado altos. Este podría ser un signo de diabetes.
V. CONCLUSIONES:
x .La estructura y estabilidad de las proteínas Omp1 y LacY, en solución, se
encuentra condicionada por la concentración de surfactante presente en la
misma, de acuerdo con las observaciones de AFM.
x.Los liposomas formados, con las composiciones lipídicas: POPC, DMPC:POPC
(1:1, mol:mol), POPE:POPG (3:1, mol:mol) y extracto lipídico de E. coli, fueron
estables tras la incorporación de proteínas de membrana, permitiendo obtener
tanto proteoliposomas como láminas lípido-proteicas.
x. Los liposomas formados con POPE:POPG (3:1, mol:mol) fueron los que
presentaron una menor solubilidad frente a la acción de los surfactantes.
x. La utilización de surfactantes no iónicos (OG y DDM), en la reconstitución de
liposomas o proteoliposomas, produce un cierto aumento de la rigidez de la
bicapa lipídica, según indican los resultados de anisotropía de la fluorescencia.
x. La incorporación de Cyt c, MLT, Omp1 y LacY a la bicapa lipídica produce, en
los casos estudiados, variaciones positivas del valor del potencial electrostático
de superficie.
x. Los valores de '\ demuestran que la incorporación de las proteínas estudiadas
se produce tanto por interacción electrostática, como por su balance
hidrofília/lipofília.
x. Se observa una rigidificación de la bicapa lipídica al incorporar la LacY, debida
a la reorganización de los lípidos, para conferir estabilidad a la proteína.
x. La incorporación de la LacY puede inducir la segregación lateral de fosfolípidos,
al formarse regiones enriquecidas en las mismas.
x. La cristalización bidimensional de proteínas de membrana es un proceso similar
a la formación de proteoliposomas, aunque requiere de una mayor proporción de
proteína y una extracción más lenta del surfactante. La cristalización 2D,
conduce a una mayor rigidificación del entorno lipídico, según indican los
resultados obtenidos de anisotropía de la fluorescencia.
x. La proteína LacY, en forma de dímero, fue cristalizada en 2D, obteniéndose los
parámetros de celda: a = 13,15 nm, b = 16,74 nm, J = 116º.
VI. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS:
. Edward P Claus, Varro E Tyler (1968) Farmacognosia Quinta Edición, Editorial Ateneo – Argentina

2. Fernando Montesinos y Mary Jara (1997): Guía Farmacéutica. Quinta Edición Lima –Perú.

3. International Ljpid Information Bureau (1998):Lípidos Sanguíneos y Enfermedad coronaría, Editorial Médica Waverly Hispanios. Argentina.

4. Jean Carpenter (1994): Los Alimentos Medicina Milagrosa. Editorial norma.

5. Ministerio de Salud, Instituto Nacional de Salud y Centro Nacional de Alimentos y nutrición (1993 y 1996): Tablas Peruanos de Composición de
Alimentos, Sexta y Sétima Edición Perú.

6. Olga Moreira, Luis Cabrera, Angeles Carbajal y Carmen Cuadros (1999): Tabla de Composición de Alimentos. Ediciones Pirámide,
Madrid-España.

7. Remington Farmacia (1987): Tomo 1 y 2 diecisiete Edición. Editorial Médica Panamericana.v