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UNIVERSIDAD INDUSTRIAL DE SANTANDER

Facultad de Salud
Escuela de Microbiologa y Bioanlisis
Laboratorio de Bioqumica I
Semestre II-2017

Prctica N2. Carbohidratos.


Isabel Cristina lvarez Blanco - 2151557
Andrs Felipe Camargo Jaimes - 2151715
Andrs Eduardo Navas Medina - 2162030
Grupo de Laboratorio: J1
Fecha de la elaboracin de la prctica: 2017-08-29.
Fecha de presentacin del informe: 2017-09-05.

Objetivos
1. Identificar mediante la Prueba de Benedict la presencia de azcares reductores en las
seis muestras trabajadas en el laboratorio.
2. Determinar mediante el uso de Lugol la existencia del almidn en la muestra dada.
3. Comprobar la hidrlisis del almidn haciendo uso del reactivo de Benedict para las
molculas de Glucosa que quedan libres por el rompimiento de los enlaces
glicosdicos.

Resultados

Azcar Resultado Almidn 1% Resultado


Color Morado
Glucosa Precipitado Color 6 gotas intenso
Ladrillo Color Morado
1 gota tenue
Lactosa Precipitado Color Sin Almidn Color Amarillo
Ladrillo
Tabla N 2 Prueba de Yodo Para Almidn
Sacarosa Sin precipitado a Temperatura Antes del bao mara.

Maltosa Precipitado Color Almidn 1% Resultado


Ladrillo
6 gotas Color Amarillo
Fructosa Precipitado Color
Ladrillo 1 gota Color Amarillo

Sin Almidn Color Amarillo


Xilosa Precipitado Color
Ladrillo Tabla N3 Prueba de Yodo Para Almidn
despus de 10 minutos en bao mara.
Tabla N 1 Prueba de Benedict.
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Laboratorio de Bioqumica I
Semestre II-2017

Tiempo Resultado Para poder detectar la formacin del


precipitado rojo ladrillo inicialmente en la
15 min Color Morado prueba se adicionaron 2.5mL de reactivo
Tenue de Benedict, 6 gotas del azcar y se
colocaron los tubos por 5 minutos al
30 min Color Morado bao mara. Pero pasados los 5 minutos
Tenue no se observ el precipitado color rojo
ladrillo sino un precipitado color verde en
45 min Color Amarillo los azcares cuya prueba debera ser
positiva segn la literatura, por lo que se
Tabla N4 Tiempo de Hidrlisis del dedujo basndonos en la manera de
Almidn. interpretar la prueba que haba poca
concentracin de azcar en esas 6
gotas, as que aadimos otras 6 gotas
Prueba Benedict Resultado
ms de cada azcar y dejamos otros 5
2mLSolucin minutos en bao mara; en este caso si
Hidrolizada + se observ el precipitado color rojo
1.5mL de NaOH + Precipitado color ladrillo en los azcares Glucosa,
2.5 mL de rojo ladrillo Lactosa, Fructosa, Manosa y Xilosa, los
Reactivo de cuales son considerados azcares
Benedict reductores porque tienen un grupo
carbonilo libre (aldehdo o cetona).
Tabla N 5 Prueba de Benedict para la
solucin hidrolizada de almidn.
En el caso de la Sacarosa la prueba dio
negativa, estando acorde a lo reportado
Discusin de Resultados en la literatura pues este disacrido tiene
enlaces glicosdicos entre sus carbonos
La Prueba de Benedict se basa en una anmeros y por lo tanto no puede
reaccin de xido reduccin, en la que convertirse en una forma de cadena
un azcar reductor se oxida para abierta con un grupo aldehdo.
convertirse en D-gluconato y su ene-diol
rompindose luego en dos fragmentos Para la deteccin de almidn con lugol
altamente reductores que reaccionan con se tuvieron que hacer unos cambios en
el ion Cobre (Cu+2) y lo reducen a dos la metodologa puesto que no se estaba
molculas de Cu+1, las cuales observando la reaccin debido a que con
posteriormente van a reaccionar con los 5mL de agua quedaba muy diluido el
iones OH- presentes en la solucin y almidn el cual estaba a una
formar el xido cuproso. concentracin de 1%, por lo que se
colocaron nicamente 3mL de agua en
El xido cuproso solo se podr detectar cada tubo, 2 gotas de lugol y luego 6
con la aparicin de un precipitado color gotas, 1 gota y 0 gotas de almidn en los
rojo ladrillo y para que este se forme es 3 tubos respectivamente.
necesario que la reaccin ocurra en un
pH alcalino el cual es proporcionado por Posteriormente a estos cambios se
el carbonato de sodio presente en el observ que a temperatura ambiente se
reactivo de Benedict. obtuvo un cambio de color amarillo a
morado en las soluciones con almidn y
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un color amarillo en la solucin que no
tena almidn. Esto se dio gracias a la hidrolizada, 2 mL de NaOH para
estructura del almidn ya que este est neutralizar el cido y 2.5mL de reactivo
constituido por dos polmeros, la amilosa de Benedict y en este caso si obtuvimos
y la amilopeptina las cuales estn a su el precipitado color rojo ladrillo despus
vez formadas por cadenas lineales de de los 8 minutos de calentamiento, pues
glucosa que estn unidas por enlaces el pH ya estaba alcalino, y el reactivo de
glicosidicos -1,4 en ambos Benedict pudo reaccionar con la Glucosa
constituyentes, y -6 en el caso de la libre en la solucin hidrolizada de
amilopeptina, estos enlaces le dan una almidn y generar el precipitado.
estructura helicoidal muy estrecha que
presenta unos espacios vacos los Conclusiones
cuales son ocupados por el yodo (I2) En todas las pruebas se pudo comprobar
formando un compuesto de inclusin que la presencia de azcares a pesar de
altera las propiedades fsicas del algunos errores en la metodologa por lo
polisacrido, especialmente la absorcin que al realizar futuros ensayos para
lumnica. Esta unin del yodo (I2) a la carbohidratos hay que tener en cuenta
cadena es reversible por lo que al que la concentracin de las muestras y la
calentarse el color desaparece, y al de los reactivos juegan un papel
enfriarse reaparece el color morado, tal fundamental en los resultados.
cual como sucedi en los dos tubos que
contenan almidn. Una prueba de Benedict positiva nos
confirma que hubo realmente un
En el ensayo de hidrlisis del almidn lo rompimiento de los enlaces glicosidicos
que se quera era comprobar que este del almidn dejando libre molculas e
polisacrido al reaccionar con HCl glucosa en la solucin hidrolizada.
concentrado se hidrolizaba en muchas
molculas de azcares sencillos en este Bibliografa
caso glucosa.
1. McKee, Trudy; McKee, James R.
Siguiendo la metodologa propuesta Bioqumica base molecular de la
tuvimos una falla experimental al inicio vida. Mc Graw Hill; 3ra Edicin; 2003;
puesto que el almidn se estaba p 200-233.
hidrolizando rpidamente (45 min) por la
alta concentracin del cido clorhdrico, 2. Snchez, S., Uribe, S., Flores, L.
factor que tambin influy al intentar Manual de prcticas bioqumica
realizar la confirmacin de la hidrlisis segunda edicin. McGraw Hill; 2008;
con el reactivo de Benedict puesto que si p 23-28.
adicionbamos 0.5 mL de la solucin
hidrolizada, 1mL de NaOH y 2.5mL de 3. Cano, H., Mendez, S., Cruz, J.
reactivo de Benedict no se observaba el Manual prcticas de laboratorio de
precipitado color rojo ladrillo, dado que el Bioqumica.2013.
pH se mantena cido y para que el
reactivo de Benedict pudiese actuar era 4. Nelson, D.L., Cox, M. M. Lehninger
necesario un pH alcalino el cual no se
Principios de Bioqumica. Ediciones
lograba con esas condiciones.
Omega. Captulo 3. 2006.
Para ello tuvimos que modificar la
metodologa a 2mL de la solucin