Rev. 3 Procedimiento de Extracción de Ácidos Nucleicos Manual y Automatizada Hoja: 6 de 73

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Laboratorio Interno Rev. 3
Procedimiento de extracción de ácidos

Hoja: 6 de 73
nucleicos manual y automatizada
PNO-BMEXT-001. Procedimiento de extracción de ácidos nucleicos manual y

automatizada.
CONTROL DE EMISIÓN
Elaboró Revisó Autorizó
Nombre Biol. Karla Reyes Covarrubias Biol. Exp. José Adán Serafín Castillo QBP. Julieta Ramírez Vela
Cargo Analista Jefe de Biol. Molecular Responsable Sanitario
Firma
Fecha Marzo, 2022 Marzo, 2022 Marzo, 2022


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Propósito
Describir la metodología para la extracción de Ácidos Nucleicos por un método manual o
automatizada para el diagnóstico cualitativo de Influenza A/B, SARS-CoV-2, VPH,
Zika, Dengue y chikungunya
Alcance
Aplica sobre muestras que tengan procedencia de suero, plasma, fluidos corporales,
cultivos celulares y tomas de tractos respiratorios.
A nivel interno el procedimiento es aplicable a analistas del área de extracción.
A nivel externo el procedimiento no aplica
Políticas de operación, normas y lineamientos
Es responsabilidad del analista seguir los lineamientos descritos en este documento.
● Es responsabilidad del jefe de área o responsable sanitario verificar que se cuente

con el equipo y material adecuado para llevar a cabo los procesos descritos en
este documento.
CONTROL DE EMISIÓN
Firma

● Es responsabilidad del jefe de área o responsable sanitario verificar y vigilar que
se aplique de manera adecuada lo descrito en este documento al momento de
llevar a cabo el proceso de extracción de ácidos nucleicos.
● Es responsabilidad del jefe de área o responsable sanitario verificar que el uso y
almacenamiento de los kits de extracción por columna del área de Extracción sea
adecuado

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Descripción del procedimiento
Secuencia de etapas Actividad Responsable

1.1 Llenar el formato “Hoja de trabajo
1. Elaboración de hoja de trabajo
Aislamiento de RNA” Analista
de extracción de RNA
Pendiente el codigo
2.1 Encender la lámpara UV de la cabina de
bioseguridad II durante 15 min.
2.2 Apagar la luz UV y encender el flujo
2. Esterilización de inicio laminar, subir la ventanilla al nivel Analista
correspondiente y esperar 15 min.
2.3 Encender la luz y la corriente eléctrica.
GDM-MA-05
3.1 Colocar el EPP
3. Colocación de EPP Analista
GDM-MA-02 (1. EPP)
CONTROL DE EMISIÓN
Firma

4.1 Ingresar a la cabina de trabajo las
muestras con sus respectivos folios
4. Preparación de muestras rotulados en la tapa. Analista
4.2 Agitar cada muestra por vórtex durante
3 segundos.

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5. Evaluación de numero de 5.1 Evalúar el número de muestras para Analista

muestras saber el equipo a utilizar para realizar la
amplificación.
6. Lisis 6.1 Colocarr en un microtubo de 1.5ml, Analista

CONTROL DE EMISIÓN
Firma

560µl de Buffer VNE preparado más
140µl de la muestra, agita con ayuda
de un vortex y deja reposar a
temperatura ambiente por 10 minutos.
6.2 Agregar 560µl de etanol grado biología
molecular y agita con ayuda del vortex.
6.3 Colocar en un microtubo de 1.5ml, una
columna con filtro.
6.3 Transferir 700 µl de la mezcla a la
columna y centrifugar a 8,000g por 1
minuto. Posteriormente, desechar el
sobrenadante y repetir el
procedimiento de nuevo.
6.4 Transferir la columna a un nuevo tubo
colector.
7. Lavados 6.1 Agrega 500µl de “Buffer wash 1” Analista

6.2 Centrifuga por un minuto a 6,000g por
un minuto y decanta el sobrenadante.
6.3 Agrega 600µl de “Buffer wash 2”

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CONTROL DE EMISIÓN
Firma

6.4 Centrifuga por un minuto a 6,000g y
decanta el sobrenadante.
Agrega nuevamente 600µl de “Buffer
wash 2” y centrifuga por 3 minutos a
20,000g por un minuto.
8. Elucion 8.1 Adicionar 50µl de agua libre de

nucleasas e incubar a temperatura
ambiente durante 1 minuto
8.2 Centrifuga a 6,000g durante 1 minuto
8.3 Retirar los microtubos estériles de 1.5

ml de la campana e ingresar por ventanilla
al cuarto de Pre-PCR.
8.4Los tubos obtenidos del proceso de

extracción se pueden conservar en
refrigeración (máximo una hora), tiempo
para preparar la siguiente área de proceso
9. Esterilización Final 9.1 Cerrar y retirar la bolsa de RPBI de la Analista

cabina y desechar en material de
RPBI.
● GDM-MA-04
9.2 Limpiar la mesa de trabajo con gasas
y etanol al 70%.
Procedimiento de extracción de ácidos Hoja: 6 de 73
CONTROL DE EMISIÓN
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9.3 Limpiar con gasas y etanol al 70% los

materiales usados en el proceso de
extracción de la cabina.
9.4 Limpiar con gasas y etanol al 70% la
superficie interna de la cabina.
10. Desecho y resguardo de 10.1 Analista
RPBI
11. Preparación de la placa 5.1 Ingresar la placa precargada de Analista

reactivos de extracción a la cabina y
voltearla suavemente de arriba-abajo
para mezclar los componentes, deja
reposar 3 minutos antes de usar.
5.2 Agregar 15µl de la proteinasa K a toda
la columna 1 y 7
5.3 Agregar 200µl de muestra en el pocillo
correspondiente de la columna 1 y 7
de tal manera que sea consecutivo
Extracción automática 6.1 Colocar los protectores de varilla Analista

incluidos en el kit a las varillas
magnéticas del equipo de extracción.
6.2 Colocar la placa con muestra y
proteínasa K en la posición
correspondiente en el equipo.
CONTROL DE EMISIÓN
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6.3 Cerrar la ventanilla y oprimir el botón

de Run ubicado en la parte superior
izquierda de la pantalla del equipo.
6.4 Seleccionar el catálogo ZYBIO-B-200,
correspondiente al kit.
6.5 Oprimir Start y el proceso comenzará
en automático.
*El tiempo estimado de la extracción es de
9 min.
Recuperación de ADN 7.1 Abrir la ventanilla del equipo al Analista
terminar la extracción, retirar los
protectores de la varilla magnética y
desechar en RPBI.
● GDM-MA-04
7.2 Retirar la placa del equipo empleado y

resguardar la placa en la cabina.
7.3 Recuperar el ácido nucleico obtenido
en los pocillos de las columnas 6 y 12
y colocar en los respectivos
microtubos estériles de 1.5 ml
previamente rotulados.
CONTROL DE EMISIÓN
Firma


Hoja: 6 de 73
7.4 Retirar los microtubos estériles de 1.5

ml de la cabina y pasarlos por ventanilla al
cuarto de Pre-PCR. Los tubos se pueden
conservar en refrigeración (máximo 24
horas), tiempo para preparar la siguiente
área de proceso.
14. Esterilización final 14.1 Repite el proceso del punto 9 Analista
15. Desecho y resguardo de RPBI 15.1 Repite el proceso del punto numero Analista
10
CONTROL DE EMISIÓN
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Hoja: 6 de 73
Pre analítico Analista
CONTROL DE EMISIÓN
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Procedimiento de extracción de ácidos Hoja: 6 de 73

CONTROL DE EMISIÓN
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Documentos de referencia
Documentos Código
GB labprep Viral DNA/RNA mini Kit user manual No aplica
Nucleic Acid Extraction Kit(Magnetic Bead Method) No aplica
Manual de equipos Pendiente
Procedimiento de equipo de protección personal Pendiente
Manual de métodos analíticos Pendiente
Manual de Procedimientos para el manejo de RPBI Pendiente
Registros.
Tiempo de Responsable de Código de registro o

Registros
conservación conservación identificación única
Hoja de trabajo Aislamiento de Ácidos Responsable
3 años Pendiente
Nucleicos sanitario
Bitácora de uso de equipos Cabina de Responsable
3 años Pendiente
bioseguridad sanitario
Responsable
Bitácora de uso de equipos Centrifuga 3 años Pendiente
sanitario
Bitácora de uso de equipos Robot de Responsable
3 años Pendiente
extracción sanitario
CONTROL DE EMISIÓN
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Glosario.
EPP: Equipo de protección personal.
FOLIO: Número de identificación interno para las muestras que consiste en seis dígitos,
siendo los primeros dos correspondientes al mes de toma de muestra, los siguientes
dos al día y los últimos dos al número de muestra recibida.
MUESTRA: Porción extraída de exudado nasofaríngeo y orofaríngeo incubada en medio

viral.
PCR: Reacción en cadena de polimerasa (del inglés Polymerase Chain Reaction)
RPBI: Residuo Peligroso Biológico Infeccioso
µl: Símbolo de la unidad de volumen microlitro.
Buffer VNE: Buffer de lisis.
Buffer wash 1: Buffer de lavado.
Buffer wash 2: Buffer de lavado
Cambios en esta versión
Número de Revisión Fecha de actualización Descripción del cambio

2 Marzo 2022 Observaciones COFEPRIS
3 Agosto 2022 Unificación de procedimientos
CONTROL DE EMISIÓN
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Hoja: 6 de 73
Anexos.
Formato de hoja de extraccion
Bitacoras de equipos
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Procedimiento de extracción de ácidos

A nivel interno el procedimiento es aplicable a analistas del área de extracción.

A nivel externo el procedimiento no aplica

Políticas de operación, normas y lineamientos

Es responsabilidad del analista seguir los lineamientos descritos en este documento.

● Es responsabilidad del jefe de área o responsable sanitario verificar que se cuente

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5. Evaluación de numero de 5.1 Evalúar el número de muestras para Analista

6. Lisis 6.1 Colocarr en un microtubo de 1.5ml, Analista

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8. Elucion 8.1 Adicionar 50µl de agua libre de

8.2 Centrifuga a 6,000g durante 1 minuto

8.3 Retirar los microtubos estériles de 1.5

8.4Los tubos obtenidos del proceso de

9. Esterilización Final 9.1 Cerrar y retirar la bolsa de RPBI de la Analista

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9.3 Limpiar con gasas y etanol al 70% los

11. Preparación de la placa 5.1 Ingresar la placa precargada de Analista

Extracción automática 6.1 Colocar los protectores de varilla Analista

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6.3 Cerrar la ventanilla y oprimir el botón

7.2 Retirar la placa del equipo empleado y

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