TITULACIÓN DE AMINOÁCIDOS

Objetivos
✓ Determinar los pKa´s del aminoácido (aa) problema.
✓ Determinar de qué aminoácido se trata.
✓ Comprobar por medio de la reacción de Sörensen que los aminoácidos
se comportan como iones dipolares.

Antecedentes académicos
✓ Propiedades de ácidos y bases.
✓ Curvas de titulación.
✓ Preparación de soluciones valoradas.
✓ Clasificación de los aminoácidos.
✓ Propiedades fisicoquímicas de los aminoácidos.
 Introducción
Los aminoácidos son compuestos orgánicos que conforman la unidad
fundamental de las proteínas; poseen dos grupos funcionales característicos:
un grupo amino –NH2 y un grupo carboxílico –COOH.
En general, todos los aminoácidos de un hidrolizado de proteína son del tipo
alfa, que corresponden a la siguiente fórmula general:

Donde R representa el esqueleto carbonado característico del aminoácido en

cuestión y que es el que le distingue de los demás.
Un aminoácido simple (con grupo R polar), a pH neutro, es una molécula
eléctricamente neutra. Esta neutralidad no se debe a que no tenga cargas
sino a que su grupo carboxilo está cargado negativamente y el grupo amino
positivamente, confiriendo al aminoácido una carga global nula.
Existen dos propiedades de los aminoácidos que indican que su
comportamiento no es el que presenta un ácido carboxílico y una amina
como compuestos orgánicos, una de ellas es la solubilidad que presentan
(con algunas excepciones) en agua y la otra son los puntos de fusión altos,
característicos de sustancias de tipo inorgánico.
Estas dos propiedades indican que los grupos de los aminoácidos se
encuentran cargados, que son compuestos polares y además que en solución
su estructura es de zwitterión o ion dipolar. Así por ejemplo la glicina
presenta en solución la siguiente estructura: +NH3-CH2-COO-.
Lo que significa en este caso y de acuerdo con la definición de Brönsted, el
grupo amino actúa como ácido ya que puede ceder un protón y el grupo
carboxilo actúa como base ya que puede aceptar un protón.
Cada grupo amino o carboxilo de un aminoácido presentará un pKa (Tabla 1)
que puede determinarse por la ecuación de Henderson-Hasselbach:
pH = pKa + log [A-] / [HA]
de donde si: [A-] = [HA] tenemos que: log [A-] / [HA] = log 1 = 0 ; entonces:
pH = pKa
Lo que significa que el pKa de un ácido o una base es el pH en el cuál se
encuentra titulado a la mitad (Fig. 1).

Fig. 1. Curva de titulación de glicina.

 Tabla 1. Valores de pK de los  aminoácidos más comunes
alfa-aminoácido pK1 alfa-COOH pK2 alfa-NH3+ pKR Cadena lateral
Alanina 2.35 9.87
Arginina 1.82 8.99 12.48 (guanidino)
Asparagina 2.1 8.84
Ácido aspártico 1.99 9.9 3.90 (beta-COOH)
Cisteína 1.92 10.78 8.33 (sulfhidrilo)
Ácido glutámico 2.1 9.47 4.07 (gamma-COOH)
Glutamina 2.17 9.13
Glicina 2.35 9.78
Histidina 1.8 9.33 6.04 (imidazol)
Isoleucina 2.32 9.76
Leucina 2.33 9.74
Lisina 2.16 9.18 10.79 (epsilón-NH3+)
Metionina 2.13 9.28
Fenilalanina 2.16 9.18
Prolina 2.95 10.65
Serina 2.19 9.21
Treonina 2.09 9.1
Triptófano 2.43 9.44
Tirosina 2.2 9.11 10.13 (fenol)
Valina 2.29 9.74
 Material y Equipo
• Gotero
• Bureta de vidrio con llave de teflón de 25 mL
• Parrilla de agitación y calentamiento
• Soporte universal
• Pinza para bureta
• Vasos de precipitados de 100 mL
• Potenciómetro

Reactivos
- Glicina 0.1N
- Hidróxido de sódio, (NaOH) 0.1 N valorado
- Ácido Clorhídrico, (HCl) solución concentrada
- Formol neutro
- Aminoácido básico 0.1 N
- Aminoácido ácido 0.1 N
 Método
1. Se repartirán a los alumnos las soluciones de los aminoácidos: glicina, el
aminoácido básico y el ácido; etiquetados arbitrariamente como aa1, aa2 y
aa3; de manera que cada equipo trabaje con un aminoácido sin saber de cual
se trata.

2. Llevar la muestra de aminoácido a pH

1.5 mediante la adición de HCl
concentrado (Fig. 2).

Fig. 2. Adición de HCl.

3. Titular la muestra de 20 mL de
aminoácido con una solución
valorada de NaOH 0.1 N hasta
llegar a pH 13, tomando lecturas
de pH después de cada adición
de 1 o 2 mL (Fig. 3).

Fig. 3. Titulación de la solución de aminoácido.

 4. Repetir la titulación con otros 20 mL de aminoácido (previamente
llevado a pH 1.5 con HCl) adicionando a cada muestra 10 mL de formol
neutro. Registrar el pH de la misma forma que en la primera titulación.

Resultados
- Con los datos obtenidos durante las titulaciones, graficar:
o pH contra meq (miliequivalentes) gastados de NaOH.
o pH contra meq gastados de NaOH en la titulación del aa en
presencia de formol.
- Determinar los pKa's de su aa problema.
- Señalar las diferencias observadas en las curvas de titulación del aa en
presencia de formol.
- Realizar todo lo anterior con las otras muestras de aminoácidos
trabajadas por los otros equipos.

Cuestionario
1. ¿Cuáles son los aminoácidos básicos? Escriba su estructura a pH ácido.
2. ¿Cuáles son los aminoácidos ácidos? Escriba su estructura a pH ácido.
3. ¿Qué es el pKa? ¿Cómo se obtiene?
4. En la gráfica de titulación de un aminoácido, con NaOH y HCl señale
dónde se localiza el pKa de cada grupo.
5. ¿Cómo determina el punto isoeléctrico de un aminoácido neutro, de uno
ácido y de uno básico?
6. ¿Cómo aplicaría la ecuación de Henderson-Hasselbach para preparar una
solución amortiguadora de pH 4?
7. ¿Cómo esperaría los resultados de la titulación de un aminoácido en
presencia de formol? ¿Por qué?

Referencias
1. Aguilar-Santelises L, García-del Valle A, Corona-Ortega MT, Rangel-
Corona R, Cruz-Millán M. Antología del laboratorio de Bioquímica
Celular y de los Tejidos I (complemento). México: FES Zaragoza, UNAM;
2008.
2. Blanco D., Garrido A., Teijón J. et al. Fundamentos de Bioquímica
estructural. México: Alfaomega; 2005.
3. Fornaguera J, Gómez G. Bioquímica: la ciencia de la vida. Costa Rica:
EUNED; 2004.
4. Giraldo G, Loango N, Mejía C. Laboratorio de Bioquímica: una visión
práctica. Colombia: Universidad de Quindio; 2010.
5. Murray RK, Granner DK, Mayes PA, Rodwell VW. Harper: Bioquímica
ilustrada. 28a ed. México DF: McGraw-Hill Interamericana; 2010.
6. Quesada S. Manual de experimentos de laboratorio para Bioquímica.
Costa Rica: EUNED; 2007.