PRÁCTICA 4: MANEJO DE LA CABINA DE FLUJO LAMINAR.

TÉCNICA
ASÉPTICA
FUNDAMENTO

En biología molecular todas las manipulaciones deben ser llevadas a cabo de tal modo que se
impida la contaminación en el área de trabajo. Los procedimientos utilizados para conseguirlo
se conocen con el nombre de «Técnica aséptica».

La «Técnica aséptica» tiene un doble objetivo: evitar que el trabajador se contamine con
microorganismos procedentes de las muestras o cultivos y evitar la contaminación de las
muestras o cultivos con microorganismos procedentes del ambiente o del propio trabajador.
Para conseguirlo, se trabaja en cabinas de flujo laminar, que emplean un ventilador para forzar
el paso de aire a través de un filtro HEPA y proporciona a la zona de trabajo aire limpio y libre
de partículas de tamaño superior a 0,2 µm.

OBJETIVOS

Aprender el manejo y la limpieza de una cabina de flujo laminar para trabajar de forma
apropiada y de forma estéril.

MATERIAL Y REACTIVOS

 Guantes
 Alcohol 70º
 Gasa estéril
 Gradilla para tubos Eppendorf y 2 tubos
 Micropipeta y 2 puntas de 100 a 1000 µl
 2 soluciones
 Vaso de precipitados (contenedor de puntas)
 Rotulador
PROCEDIMIENTO

1.- Encender la luz UV 15 minutos antes del encendido de la cabina. Tras este tiempo apagar la
lámpara.

2. Desinfectar con una gasa estéril empapada en alcohol de 70° la cabina, desde las áreas de
menor a mayor contaminación.

3.- Encender la cabina de flujo laminar y la luz durante 15 minutos antes de empezar a
trabajar.

4.-Preparar el material que vamos a usar. Colocarnos los guantes y rociarles con alcohol de 70°.

5.- Pulverizar con alcohol de 70° todo el material que se vaya a introducir en la cabina de flujo
laminar e introducirlo en la misma.

6.-Rociar de nuevo los guantes con alcohol de 70°, sentarse frente a la cabina e introducir las
manos en la cabina. Ya no podremos sacarlas.

7.-Organizar el material dentro de la cabina: o Alejar el material del borde exterior 10-15 cm y
de la rejilla protectora del filtro HEPA o Colocar el material limpio o preparado a la izquierda o
Colocar los residuos a la derecha o Realizar las operaciones en el centro de la cabina, área de
trabajo (15 cm hacia dentro de la misma).

8.- Una vez colocado todo, es recomendable esperar 5 minutos para que el flujo laminar retire
la posible contaminación transportada del exterior.

9.- Comenzar a trabajar:

En una gradilla situaremos los 2 tubos Eppendorf, marcándolos con las letras A y B, para
posteriormente ir llenándolos con las medidas correspondientes:

Tubos
Solución A B
1 (azul) 200 μl 520 μl
2 (amarilla) 350 μl 400 μl

- Destapar ligeramente el frasco con la solución 1

- Abrir el rack de puntas de pipetas e insertar la punta a la pipeta

- Introducir la punta de pipeta en la solución de forma recta y sin tocar las paredes del frasco.
Aspirar el volumen.

- Trasvasar el líquido al Eppendorf y cerrar el tubo para evitar contaminación

- Desechar las puntas de pipetas en el contenedor correspondiente.

- Repetir la operación con la otra solución

10. Finalizado el trabajo, retirar el material de la cabina, desinfectar con etanol 70°.
Trabajar teniendo en cuenta:

o Evitar pasar por encima de los tubos que estemos preparando.

o Abrir los tubos solo cuando vayamos a usarlos.

o Minimizar los movimientos dentro y fuera de la cabina (levantarse hasta terminar, no sacar
las manos de la cabina...).

o Evitar trabajar con los codos apoyados en la superficie de la cabina.

o Si el material se rompe en la cabina se retirará con cuidado evitando que queden restos y sin
movimientos bruscos.

o Evitar la proyección de líquidos sobre el filtro HEPA, cuando se abran ampollas como cuando
se ajuste el volumen de jeringas.

o Evitar pasar por encima de los tubos que estemos preparando. o Abrir los tubos solo cuando
vayamos a usarlos. o Minimizar los movimientos dentro y fuera de la cabina (levantarse hasta
terminar, no sacar las manos de la cabina...).

o Evitar trabajar con los codos apoyados en la superficie de la cabina.

o Si el material se rompe en la cabina se retirará con cuidado evitando que queden restos y sin
movimientos bruscos.

o Evitar la proyección de líquidos sobre el filtro HEPA, cuando se abran ampollas como cuando
se ajuste el volumen de jeringas.
RESULTADOS Y CONCLUSIONES

Volúmenes finales:

- Tubo A: 550 µl

- Tubo B: 920 µl

Eliminación de residuos:

Las puntas de micropipeta las desechamos en el vaso de precipitados hasta su eliminación. Al

finalizar desechamos las puntas y los tubos Eppendorf en el contenedor de residuos biológicos.
Los guantes al contenedor de plásticos y la gasa con alcohol al contenedor normal. El vaso de
precipitados y los matraces con las soluciones se limpian (al no ser tóxicos ni nada parecido se
pueden desechar por el desagüe), se secan y se guardan en las vitrinas correspondientes.

CUESTIONES

1.- El aire de la cabina de flujo laminar vertical ¿Desde dónde hacía dónde se dirige?

El aire que entra por la apertura frontal va hacia la parte superior de la cabina (por la parte de
atrás). De ahí pasa por dos filtros HEPA. Parte del aire pasa por el filtro HEPA principal y sale
hacia abajo, generando un flujo laminar estable libre de partículas y microorganismos. El resto
pasa por el filtro HEPA de exclusión y se elimina al exterior.

2.- ¿Por qué se recomienda dejar el material limpio que se va a usar a la izquierda y el que se
ha usado o el de desecho a derecha?
Para llevar un control de los procedimientos ya realizados y lo que falta por hacer y seguir una
dirección en los procesos. En el centro se deja lo que vamos a utilizar en toda la actividad. En
nuestro caso las soluciones estaban a la izquierda, la gradilla con los tubos Eppendorf y las
puntas no usadas en el centro, y a la derecha teníamos el vaso de precipitados para desechar
momentáneamente las puntas ya usadas.