Aránzazu Gil Toribio

PRACTICA 2: USO DE MICROPIPETAS

OBJETIVO: Aprender a usar las micropipetas para su uso en laboratorios.

MATERIALES:

- Micropipetas para medir diferentes medidas.

a) 0,1 µl – 2,5µl (blanco)
b) 10 µ l– 100 µl (amarillo)
c) 100 µl – 1000 µl (azul)
- Puntas para micropipetas (azul, amarillo, blanco)
- Tubos de ensayo
- Tubos de eppendorf
- Agua destilada

FUNDAMENTO TEÓRICO:

Las micropipetas son instrumentos de laboratorio que empleamos para succionar y transferir
pequeños volúmenes de líquidos y nos permite su manejo en las distintas áreas analíticas.
Podemos manejar volúmenes fijos o variables.

A la hora de manejar una micropipeta hay que tener en cuenta que hay que escoger una que
se adecue al volumen que queremos succionar, al igual que las puntas de pipeta, dependiendo
del volumen que escojamos se usará un tamaño de punta u otro, hablamos de puntas de
pipetas desechables.

Las micropipetas nunca se deben utilizar en líquidos que estén emitiendo vapores, la
temperatura de los líquidos deberá estar entre 15 y 40° C.

PROCEDIMIENTO:

 Escogemos la micrpipeta adecuada al volumen que queramos medir y la colocamos su

correspondiente punta.
 Presionar la pipeta sobre sobre la punta escogida en la propia gradilla.
 Seleccionar el volumen a pipetear.
 Llenado de la pipeta:
- Colocar el pulgar sobre el mando o émbolo de pipeteado.
- (Cuando el émbolo se presiona se sentirá un punto de resistencia *PRIMER TOPE*. Si
se continúa presionando se encuentra un punto donde el émbolo ya no se mueve
hacia abajo *SEGUNDO TOPE*.
- Oprimir el émbolo hasta el primer tope y colocar la punta dentro del líquido con el
émbolo presionado hasta una profundidad de 2-3 mm (para volúmenes de 10 a 100
microlitros)
 Se recomienda tomar y dispensar el líquido 2 – 3 veces antes de aspirar el volumen
definitivo (favorece la formación de un film de líquido en la punta) mejora la precisión
del pipeteo, especialmente de líquidos volátiles o con densidad altas.
 Se debe mantener siempre la pipeta verticalmente.
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 De manera lenta y controlada se disminuye la presión del émbolo para permitir que se
desplace hacia arriba *no soltar el émbolo abruptamente * (el líquido podría salpicar
dentro de la punta produciendo volúmenes inexactos y generando contaminación)
 Una vez el émbolo se haya desplazado hasta arriba mantenga la micropipeta en el
líquido durante un segundo (evita que se aspire aire en la parte final)
 Expulsión de la muestra:
- Llevar la micropipeta a envase en el que añadiremos el líquido.
- Apoyar la punta en la pared del recipiente sin evitar la salida de la muestra.
- Oprimir el émbolo hasta el primer tope y luego hasta el segundo tope. (hacer este
procedimiento a una velocidad moderada, muy rápido, gotas en punta)
- A mayot viscosidad mayor lentitud en la expulsión de la meustra.

 Expulsamos la punta presionando el botón de extracción de puntas.

RESULTADOS/ VALORACIÓN

¿Qué dificultades me han surgido?

El olvido de los pasos confundiendo unos con otras. Además en el pipeteo utilizando la pera,
me resulto difícil el manejo y la precisión.
¿Cómo ha sido el desarrollo de la práctica?
Primero hemos conocido los materiales que íbamos a usar, micropipeta, puntas, tubo de
ensayo con agua destilada en las gradillas y el tubo eppendorf. A continuación, hemos
colocado la punta en la pipeta a presión desde la caja de puntas, una vez colocada dirigimos la
micropipeta al tubo de ensayo para realizar la succión del agua, presionando el primer tome e
introduciendo la micropipeta en el líquido, soltamos el embolo despacio hasta que el agua se
desplaza hacia arriba y dirigimos la succion hacia el tubo de eppendorf donde la vaciaremos
aprentado el primer tope y luego el segundo para asegurarnos de que no queda nada de agua.
Por ultimo retiramos la punta utilizado el botón de extracción de puntas.

CUESTIONES
1.¿Por qué crees que no se pipetearán líquidos que estén emitiendo vapores o se encuentren a
temperaturas elevadas?
Porque puede causarnos daños físicos, como quemaduras u intoxicación.

2.¿Puedo introducir una misma punta de micropipeta en diferentes reactivos? ¿Por qué?
No, ya que iniciaremos una contaminación cruzada, mezclando varios reactivos.

3.¿Por qué no puedo pipetear líquidos que ataquen el polipropileno?

Por qué las puntas están hechas de ese material y seria corrosivo para ellas.

4.¿Con qué objetivo presionamos el émbolo hasta el primer tope? ¿ Y hasta el segundo? ¿ Para
qué empleamos el botón eyector?
El primer tope lo usamos para la succión de la mezcla. El segundo tope para vaciar y el botón
eyector para expulsar la punta de pipeta.
Aránzazu Gil Toribio

5.¿Por qué es importante no soltar el émbolo de forma abrupta sino irlo soltando lentamente?
Porque así evitaremos las salpicaduras y la salida del líquido.
6.¿Por qué es importante dejar la punta de la pipeta en el líquido durante un segundo una vez
extraído el líquido y antes de sacar la pipeta?
Porque si lo sacamos rápido podríamos arriesgarnos a la entrada de aire en la punta.