INSTITUTO POLITÉCNICO NACIONAL

UNIDAD PROFESIONAL INTERDISCIPLINARIA DE INGENIERÍA

CAMPUS GUANAJUATO

INGENIERÍA EN BIOTECNOLOGÍA

LABORATORIO DE TÉCNICAS MICROBIOLÓGICAS

REPORTE DE PRÁCTICA #6º: AISLAMIENTO E IDENTIFICACIÓN DE MOHOS Y

LEVADURAS

EQUIPO 1

2BM1

INTEGRANTES
● AVILA SANDOVAL MARIPAZ
● CADENAS GUTIÉRREZ CAROL
● CIFUENTES ENRIQUEZ ISABELA
● FIGUEROA SALAZAR ANDREA YANETH
● GALVÁN MORENO ORLANDO

DOCENTES:
● AGUILAR MÉNDEZ MARIO JOSUÉ
● AZA GONZÁLEZ CÉSAR

FECHA DE ENTREGA:6 DE JUNIO DE 2022.

SILAO DE LA VICTORIA
OBJETIVOS
● Analizar e identificar las características bioquímicas y morfológicas
(coloniales y celulares) de los hongos presentes en distintas muestras, y su
crecimiento en diferentes medios de cultivo.

INTRODUCCIÓN
Dentro del amplio mundo de los microorganismos se encuentran los que
normalmente habitan en alimentos en descomposición, es decir, los hongos, los
cuales constituyen un gran grupo de organismos, como lo son los mohos, las setas
y las levaduras.

Algunos hongos forman estructuras reproductivas macroscópicas denominadas

cuerpos fructíferos (por ejemplo, las setas), en las que se producen millones de
esporas y desde las cuales se pueden dispersar por el viento, el agua o los
animales. A diferencia de los hongos que desarrollan micelio; estos hongos son
llamados levadura. (Madigan, 2015).

Las setas pertenecen a la división de hongos conocida como basidiomicetos, de las

cuales algunas son comestibles y otras son extremadamente venenosas. Los
basidiomicetos durante su fase sexual reproductiva dada las condiciones favorables
forman cuerpos fructíferos, que constituyen la parte comestible que llamamos setas.

Por otro lado, las levaduras casi siempre son esféricas, ovales o cilíndricas y la
división celular es por gemación. Además, las células de las levaduras son más
grandes que las células de las bacterias y estas pueden distinguirse
microscópicamente de los procariotas debido a su mayor tamaño y a las estructuras
intracelulares presentes como lo son las vacuolas citoplasmáticas o el núcleo. La
mayoría de las levaduras son anaerobias facultativas. Las levaduras se desarrollan
en hábitats donde hay azúcares disponibles como en frutas y la corteza de los
árboles.

Los hongos son organismos eucariotes incapaces de realizar la fotosíntesis,

además, pueden ser unicelulares, como por ejemplo, las levaduras del pan y la
cerveza (Saccharomyces cerevisiae), o pluricelulares (forman cuerpos
filamentosos), como los champiñones. Según su tipo de hábitat pueden ser
saprófitos, que se alimentan de sustancias en descomposición; parásitos, que se
alimentan de los líquidos internos de otros seres vivos; o bien simbiontes, que se
asocian a otros organismos con beneficios mutuos. (Sánchez, 2017).

Cabe mencionar que, los hongos forman un entramado de filamentos llamados

hifas, las cuales están formadas por paredes celulares tubulares que rodean la
membrana citoplasmática y están compuestas por quitina (polímero de
N-acetilglucosamina), al conjunto y las distintas ramificaciones de las hifas se
denominan micelio o thallus, además a partir de las hifas se forman esporas
asexuales.

Los hongos filamentosos (mohos) al crecer forman matas de filamentos

entrelazados, y se pueden observar sobre las frutas podridas o el pan enmohecido.
Además, los mohos son pluricelulares; las células son alargadas que forman
filamentos (hifas) que se entrecruzan.

Los hongos filamentosos al crecer en un medio de cultivo sólido, una parte del
micelio se introduce en el medio para absorber nutrientes (micelio vegetativo),
mientras que el micelio aéreo se proyecta hacia el exterior, provocando matas de
apariencia tenaz, algodonosa o pulverulenta las cuales son características que
poseen, fácilmente diferenciables de las colonias de las levaduras. (Prats, 2005).
RESULTADOS

Se inocularon cajas petri de Agar almidón, y pasado su tiempo de incubación (72

horas), se reservaron en el refrigerador para su identificación morfológica.

En la figura 1a se observa que el crecimiento del Aspergillus un hongo filamentoso,

de aspecto aterciopelado, granulosa con superficie plana de color blanca en los
contornos y verde en el centro. No se observó un crecimiento del Penicillum pero si
de Saccharomyce cerevisiae aunque muy pequeñas se observan colonias
redondas, de superficies lisa, de color blanco.

En la figura 1b se observan el crecimiento de las muestras por estría simple, del

lado izquierdo en la muestra de Jitomate bola se observa un hongo filamentoso,de
aspecto aterciopelado, granulosa con superficie plana de color blanca en los
contornos y en el centro; mientras que del lado derecho la muestra de Jitomate
cherry se observa el crecimiento de un hongo algodonoso con superficie
algodonosa-aterciopelada con un centro verde obscuro y bordes grises.

Figura 1a.Caja petri con cultivos de Aspergill- Figura 1b. Caja petri con cultivos de Jitomate
us, Penicillum y Saccharomyce cerevisiae., y jitomate cherry, después de 72hrs de después
72hrs de incubación.Agar almidón incubación.Agar almidón

En la figura 1c, sólo se observa el crecimiento por punción del Aspergillus y

Saccharomyce cerevisiae. El Aspergillus un hongo algodonoso-rizoide de superficie
plana, con centro de color amarillo y borde ciliado color grisaceo.Mientras que en la
figura 1d se observa del lado izquierdo el jitomate bola y cherry tienen el crecimiento
de un hongo cremoso y superficie convexa de color blanco-amarillo y centro
amarillo.
Figura 1c. Caja petri con cultivos de Aspergill- Figura 1d. Caja petri con cultivos de Jitomate
us, Penicillum y Saccharomyce cerevisiae., y jitomate cherry, después de 72 hrs de después
72 hrs de incubación. Agar PDA. incubación con lugol. Agar PDA.

En la figura 1e ,se observa el crecimiento por estría cruzada de colonias de

Saccharomyce cerevisiae color blanco-amarillento; de forma convexa y aspecto
cremoso, liso y brillante. No presenta pigmentos.

Figura 1e. Cultivo de Saccharomyces

cerevisiae. Agar PDA.

SESIÓN 2

Se observaron los hongos cultivados en los microcultivos,sin teñir jitomate cherry

(Figura 2a) y un jitomate bola (Figura 2b), es posible apreciar en el jitomate cherry
(Figura 2a) hifas septadas así como algunas esporas y conidioforos ramificados. Por
otro lado en el jitomate bola (Figura 2b), se aprecian de igual forma hifas septadas.
Posteriormente se añadió una gota de azul de lactofenol para teñir las estructuras
de los hongos y apreciar mejor las hifas septadas del jitomate cherry.
Figura 2a. Jitomate cherry bajo microscopio Figura 2b. Jitomate bola bajo microscopio
Objetivo 20x. Objetivo 20x.

Figura 2c. Jitomate cherry bajo microscopio

Tinción azul de metileno. Objetivo 20x.

Prueba de hidrólisis de almidón

Después de añadir lugol, hasta cubrir la superficie de la caja petri con los hongos
Aspergillius, Penicillium y la levadura Saccharomyce sp., solo se pudo observar un
halo alrededor del crecimiento fúngico de Aspergillius (Figura 3a), pasó lo mismo
con nuestras muestras, solo en el cultivo de jitomate bola se observó un halo
alrededor (Figura 3b) .
Figura 3a. Caja petri con cultivos de Aspergill- Figura 3b. Caja petri con cultivos de Jitomate
us, Penicillum y Saccharomyce cerevisiae., y jitomate cherry, después de 72hrs de después
72hrs de incubación con lugol.Agar almidón incubación con lugol.Agar almidón

Observación de Saccharomyces cerevisiae

Se realizó un frotis con azul de metileno para poder observar las levaduras antes de
teñirla (Figura 4a) y teñida (Figura 4b).

Figura 4a. Frotis de Saccharomyces Figura 4b.Frotis de Saccharomyces cerevisiae

cerevisiae bajo el microscopio sin teñir. bajo el microscopio. Tinción de metileno.
Objetivo 40x. Objetivo 40x.
DISCUSIÓN

Al realizar la observación de morfología se puede evidenciar una masa de células

filamentosas y las esporas que le dan a las colonias ese aspecto polvoriento. En las
muestras de levadura, se observa crecimiento de colonias aisladas. Las hifas
habitualmente crecen juntas sobre una superficie y forman masas compactas,
macroscópicamente visibles, denominadas colectivamente micelio. A partir del tapiz
miceliar, algunas hifas pueden formar ramas que se extienden hacia arriba sobre la
superficie, y en el extremo de estas hifas aéreas se forman las esporas
denominadas conidios. Los conidios dan al micelio un aspecto polvoriento y sirven
para la dispersión del hongo a nuevos hábitats. En contraste con los hongos que
desarrollan micelio, algunos otros crecen como organismos unicelulares; estos
hongos se denominan levaduras (Madigan, 2015).

En la siembra de Penicillium, no hubo crecimiento. El resultado se puede deber a

que la muestra que se tomó ya no contaba con los requerimientos nutricionales para
seguir viva y reproduciéndose. Los factores críticos que se controlan en este
proceso son la temperatura, CO2, pH, humedad; así mismo influyen en el desarrollo
de la incubación el vigor de la cepa, adaptación de la cepa, cantidad del inóculo y
sustrato utilizado (Tortora, 2018).

Para el microcultivo, se tomó una muestra de células fúngicas provenientes de un

jitomate cherry y un jitomate bola. En la observación bajo microscopio, se pueden
apreciar hifas septadas y esporas. En su mayoría, los hongos son multicelulares y
forman un entramado de filamentos denominados hifas, a partir de las cuales se
forman esporas asexuales. Las hifas están formadas por paredes celulares
tubulares que rodean la membrana citoplasmática. Las hifas fúngicas a menudo
están septadas, es decir, con paredes que dividen cada hifa en células separadas
(Madigan, 2015).

En la prueba de hidrólisis de almidón, solo se obtuvieron dos resultados positivos;

se pudo observar un halo alrededor del crecimiento fúngico de Aspergillius, y
también en la muestra tomada del jitomate bola. Se puede deducir que estas
especies utilizan almidón como su fuente de alimento. El almidón es utilizado como
fuente de carbono por una gran variedad de microorganismos. Estos se degradan
empleando distintas enzimas que en su conjunto se denominan amilasas. Este
grupo de enzimas comprende a a-amilasa, alglucosidasa, glucoamilasa, pullulanasa
e isoamilasa (Terebiznik,1998).
La cepa identificada como Aspergillus demostró mayor capacidad hidrolitica de
almidón, confirmado de forma cualitativa mediante la ausencia de reacción ante la
adición de revelador lugol (Buendia, 2003).

La aparición de un halo claro alrededor de una muestra, indica la degradación del

almidón presente en la cepa, ésta prueba se fundamenta en que el lugol con el
almidón forman un complejo color café-púrpura que desaparece cuando el almidón
ha sido degradado. (MacFaddin, 2000).

En el frotis de Saccharomyces cerevisiae, se puede observar bajo el microscopio

que es una levadura, ya que se observan células grandes e individuales, con formas
que van desde esféricas hasta ovaladas. Las células de Saccharomyces y de otros
ascomicetos unicelulares son normalmente esféricas, ovales o cilíndricas y su
división celular se produce por gemación. Las células de levadura son mucho más
grandes que las células bacterianas y pueden distinguirse microscópicamente de los
procariotas gracias a su mayor tamaño y a la presencia obvia de estructuras
intracelulares como el núcleo o vacuolas citoplasmáticas (Madigan, 2015).

La levadura Saccharomyces cerevisiae, como se pudo observar bajo el microscopio,

es una especie unicelular. Pertenece a un grupo de hongos llamados ascomicetos.
reciben su nombre de la producción de ascas, células en las que dos núcleos
haploides de diferente tipo sexual se fusionan, formando un núcleo diploide que
sufre meiosis para formar ascósporas haploides. Además de producir ascósporas,
los ascomicetos se reproducen asexualmente (Madigan, 2015).
CONCLUSIÓN
● El medio de cultivo selectivo PDA (agar de patata glucosado) favoreció el
crecimiento de las muestras fúngicas, además permitió la formación de
pigmentos característicos en Aspergillus.
● En las muestras tomadas del jitomate cherry y tomate bola, tienen hifas
septadas.
● Tanto Aspergillus, como la muestra tomada del jitomate bola, presentan la
enzima a-amilasa.
● Se observó la forma unicelular de Saccharomyces cerevisiae.
CUESTIONARIO
1. Describa cuales son las estructuras características de un hongo filamentoso
microscópico.

Para saber la estructura de un hongo filamentoso basta con fijarse en las hifas, las
hifas se dividen en lo siguiente:

● Hifas septadas, o sea septos regulares a corta distancia.

● Hifas no septadas, largos intervalos
● Hifas demateáceas, pigmentadas (negras)
● Hifas cenocíticas, son hialinas.

(F. Gómez)

2. Describa las características morfológicas, bioquímicas y reproductivas de dos

hongos con alta probabilidad de encontrarse en las muestras que utilizó.

Penicillium.

Reproducción: Este hongo se reproduce de manera asexual y sexual, sin embargo

la sexual no ha sido tan estudiada como la asexual, esta puede ser por
fragmentación de las hifas o por esporas. (Gómez, 2019).

Morfología: Sus colonias son de crecimiento rápido, toman un color blanquecino y

con el paso del tiempo adquieren un color azul, azul verdoso, gris o tonos rosados,
puede tener diferentes texturas, puede ser plana, filamentosa o aterciopelada, esto
será dependiente de la especie; microscópicamente, tiene hifas hialinas septadas.
(INSST, "Penicillium spp.".)

Bioquímica: Degradan la materia orgánica.

Aspergillus.

Reproducción: Sexual con formación de acosporas y asexual con formación de

conidios.

Morfología: Dependiendo la especie es su tasa de crecimiento, color de la colonia,

textura, entre otros, puede ser blanco amarillento, marrón, etc; microscópicamente
se encuentra formado por hifas hialinas septadas. (INSST, "Aspergillus spp. -
Agentes Biológicos - Hongo - Portal INSST - INSST".)

Bioquímica: Productor de micotoxinas.

3. ¿Cuáles son las implicaciones económicas y ambientales de los hongos

fitopatógenos y saprófitos? Ejemplifique.
En los ecosistemas agrícolas, los patógenos de las plantas actúan en el suelo y en
la rizósfera. Los hongos fitopatógenos además de que manchan, desfiguran o
causan la podredumbre de un número de frutos, a su vez también reducen su valor
en el mercado. Tal es el caso de los hongos, como Botrytis cinérea, Colletotrichum
gloeosporioides y Penicillum spp, los cuales afectan a cultivos de alta importancia
económica y, anualmente, conducen a la aplicación de miles de toneladas de
agroquímicos en todo el mundo, ante la necesidad de establecer un sistema de
control.

Los hongos del suelo (hongos saprófitos) juegan un papel clave en los procesos de
descomposición que mineralizan y reciclan nutrientes de las plantas. En el suelo, los
hongos interactúan con una comunidad microbiana la cual incluye: bacterias,
actinomicetos (actinobacterias) y pequeños invertebrados. Cabe mencionar que, los
hongos son una parte importante de la cadena alimenticia en el suelo,
principalmente para la mesofauna que habita en el suelo. (Moreira, 2012).

La estrategia de vida de los organismos saprófitos carentes de movimiento les

obliga a producir enormes cantidades de propágulos (esporas) que garanticen su
presencia en el ambiente, con tal de que siempre exista una espora lista para
colonizar cualquier resto de materia orgánica.Entre los hongos en general y los
zigomicetos en particular existe una notable diversidad enzimática apta de
descomponer casi cualquier tipo de material orgánico. A su vez, esto tiene un
elevado interés económico pues permite seleccionar razas productoras de
determinados enzimas que pueden aprovecharse industrialmente en procesos de
fermentación y producción de compuestos orgánicos. (Blackwell, 2012).

4. ¿Qué es el dimorfismo celular en hongos? Ejemplifique.

El dimorfismo es un mecanismo de algunos hongos como una respuesta a cambios

del entorno, para alternar entre un crecimiento unicelular (levadura) y otro
multicelular (filamentoso) (Berroca,2012).

Por ejemplo Candida albicans es un hongo dimórfico, se desarrolla de forma distinta

en función de la temperatura de crecimiento, como levadura se desarrolla a 37ºC en
el huésped y como hongo de aspecto filamentoso a 25ºC en la naturaleza.

En forma de levadura presenta un aspecto de células redondas u ovaladas, de 3-8 x

2-7 micras de tamaño, agrupadas en pequeños grupos, mientras que, en forma de
hongo filamentoso, las células se alargan y se diversifican tomando la apariencia de
filamentos, pseudohifas o pseudomicelio. En forma de levadura se comporta como
saprofita, y como hongo filamentoso se comporta como un parásito patógeno
produciendo síntomas en el huésped (INSST, 2021).

5. Investigue y argumente una secuencia de pruebas para el aislamiento e

identificación (claves dicotómicas) de un hongo saprófito.
Para el aislamiento de hongos saprófitos, Warcup desarrolló una técnica para
aislarlos de las hifas vegetativas presentes en el suelo mediante una cuidadosa
manipulación y placas de hifas observadas bajo un microscopio de disección de alta
potencia, sin embargo el método no ha tenido un uso generalizado debido a su
naturaleza minuciosa. El método de la placa de suelo, en el que se esparcen de 5 a
15 mg de suelo en placas de petri antes de enfriarse y añadir agar fundido, se ha
utilizado con éxito para el aislamiento de algunos hongos saprófitos del suelo
(Thorn, 1996).

Además, se utiliza un medio indicador selectivo que permite el aislamiento de

basidiomicetos. Los medios de aislamiento selectivo se basan principalmente en
inhibidores selectivos de organismos no objetivo y sustratos complejos o
cromogénicos catabolizados específicamente por los organismos objetivo (Thorn,
1996).

En años recientes, se han propuesto diferentes métodos de identificación de hongos

saprófitos. Se hace uso de características de los saprofitos para estas pruebas, ya
que estos manifiestan mayor resistencia al sulfato de cobre, y poseen una mayor
cantidad oxidasa. Además, los saprofitos también producen un factor hemolítico de
eritrocitos de ratón y ciertos tipos pueden crecer en ausencia de CO2.

El crecimiento de leptospiras patógenas es inhibido por la presencia de 10 ppm de

sulfato de cobre en el medio de cultivo, mientras que el crecimiento de los saprofitos
no es afectado. Por otro lado, también se identificó que los saprofitos descomponen
más rápido la yema de huevo (Johnson, 1964).

6. ¿Qué es una levadura y qué mecanismos se ven involucrados para persistir en

condiciones adversas?

La levadura o fermentación se refiere a un grupo diverso de hongos unicelulares,

generalmente microscópicos, que pueden iniciar el proceso de degradación de
diversas sustancias orgánicas, especialmente azúcares y carbohidratos, y obtener
otras sustancias específicas como subproductos.

Las levaduras vienen en muchas variedades y se encuentran en diferentes hábitats,

los cuales se reproducen sexualmente. En un ambiente nutricionalmente favorable,
son organismos simples y eficientes que producen una nueva camada en solo 90
minutos. La fermentación es el proceso que realiza este tipo de hongo para obtener
energía y generalmente se puede realizar de dos formas diferentes dependiendo de
los subproductos obtenidos: fermentación láctica o fermentación alcohólica. (Thorn,
1996).
REFERENCIAS

● Madigan Michael, Martinko John, Bender Kelly, Buckley Daniel, Stahl David.
“Brock. Biología de los microorganismos”. (Pearson, 2015), 1970.
● Sánchez María D. Ángeles, González Tania, Ayora Teresa, Evangelista
Zahaed, Pacheco Neith, “¿Qué son los microbios?”. Artículo electrónico.
(2017).

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● Prats Guillem. “Microbiología clínica”. Ed.Médica Panamericana. 1ª edición.

Buenos Aires. (2005).
● Juárez G., Sosa M., López A. “Hongos fitopatógenos de alta importancia
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● Moreira Fátima, Jeroen E. y Bignell David. “Hongos del suelo saprófitos y
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● Berroca, Alexander, Navarrete, José, & Oviedo, Claudia. “Efecto de diferentes
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● Thorn, Reddy, Harris, & Paul. 1996. “Isolation of Saprophytic Basidiomycetes
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● Tortora, Gerard J.., y Bryan Derrickson. INTRODUCCIÓN A LA
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● F. Gómez Daza. "Características generales de los hongos e infecciones
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