Equipo #3
20/11/2018
Beltrán Rábago Luis Hernán
Guerrero Guzmán Adrian
Hernández Martínez Edher Daniel
López Vargas Julia Edith.
Valdivia Vázquez Jovana Ameyalli
Práctica # 5 ​“Purificación y cuantificación de ADN; Electroforesis”
I​ntroducción.
En biología molecular, una gran
cantidad de técnicas que se realizan
comúnmente requieren el uso de la
electroforesis, por lo que supone una
parte importante del procedimiento
sistemático del análisis (separación,
purificación, preparación) de los
ácidos nucleicos y las proteínas. La
mayoría de las biomoléculas poseen
una carga eléctrica cuya magnitud
depende del pH del medio en el que
se encuentran; como consecuencia,
pueden desplazarse cuando se ven
sometidas a un campo eléctrico hacia
el polo de carga opuesta al de la
molécula. A diferencia de las
proteínas, que pueden tener una carga
positiva o negativa, los ácidos
nucleicos sólo poseen carga negativa,
debido a su esqueleto de fosfatos. Por
lo tanto, en una electroforesis, los
ácidos nucleicos migrarán hacia el
polo positivo; es decir, el ánodo. En el
caso de las proteínas se realiza
pretratamiento con detergentes, como
el dodecilsulfato de sodio (SDS), que
les confiere carga negativa; con ello se
homogenizan las proteínas de la
muestra y todas migrarán hacia el polo
positivo, y sólo se separarán por
tamaño.
El principio de la electroforesis
consiste en la migración proporcional
de las moléculas a través de un gel u
otro tipo de matriz porosa, según su
peso molecular o tamaño; movimiento
generado por el campo eléctrico.
Los elementos para realizar una
electroforesis son:
Camara de electroforesis, peine para
pocillos, transluminador, fuente de
poder, un buffer de corrimiento,
marcador de peso molecular, buffer de
carga y gel.(5)
Algunos de los usos de la
electroforesis para ácidos nucleicos en
geles de agarosa son determinar los
tamaños moleculares de los ácidos
nucleicos, analizar los fragmentos
cortados con enzimas de restricción
(mapa de restricción), comparar los
tamaños de distintos tipos de DNA,
aislar y recuperar fragmentos de DNA
purificados para clonaciones
moleculares, y analizar productos de
PCR, entre otros.​ (5)
Objetivo.
Observar, por medio de la
electroforesis en gel de agarosa, el
ADN obtenido en las sesiones
pasadas.
Materiales.
2 cubetas para electroforesis con gel
de agarosa/ 4 peines/ 2 fuentes de
energía/ ADN de parte A (Bacillus
Subtilis)/ ADN de parte B
(plátano)/Buffer de carga “TAE”/ 1
micropipeta 10-100 uL/ 2 puntas
blancas
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Práctica # 5 ​“Purificación y cuantificación de ADN; Electroforesis”

Metodología. Resultados.
Preparación de celdas para Dentro de los pocillos se colocaron 2μl
electroforesis. de buffer de carga y 3μl de la solución
de ADN.
Imagen 1

“ Se muestra el movimiento de las

muestras después de 40 min. bajo un
voltaje de 80V.”
Por cada equipo se repartieron 5
pozos, en los cuales se colocaron 3
Lectura de las muestras muestras de ​Bacillus Subtilis y 2 de
plátano.

Discusión.
En esta práctica se hizo una
electroforesis, para nuestra muestra
bacteriana, y el ADN de plátano,
obtenido en prácticas anteriores, y así
poder determinar el contenido de
ADN, en cada uno es por ello que con
ayuda de un gel “de agarosa” que le
fue añadido un tapón de TAE, y luego
se puso en una cubeta de cuarzo y ahí
en los pocillos que se formaban, le
pusimos nuestras muestras, en este
caso fueron 3 de muestra bacteriana,
y 2 de ADN de plátano, y lo que se
pudo observar es que en la muestra
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Beltrán Rábago Luis Hernán
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Práctica # 5 ​“Purificación y cuantificación de ADN; Electroforesis”

bacteriana, se podía mirar más el para llenar la celda de electroforesis,

contenido que en la otra, esto fue ya que de lo contrario la corriente no
debido a que el ADN “platano” pudo podría fluir de manera adecuada,
haber tenido algunos residuos de resultando en un experimento
etanol, o en algún caso no se colocó ineficiente.
como debe de ser la muestra. Gracias
a ello, logramos visualizar la Bibliografía.
separación de los ácidos nucleicos
“moléculas” de acuerdo a la función de 1. Dill, K. A. & Shortle, D.,
su carga, y en este caso fue muy estado de desnaturalización
eficaz debido a la alta carga de de proteínas. Annu. Rev.
nuestro ADN y proteína utilizados. Bioquímica. 60, 795 (1991).
Esto sucede debido a que las 2. LEHNINGER, A., NELSON, D.,
moléculas de negativa migran hacia el COX, M., Principios de
electrodo positivo, y las cargas de las Bioquímica, 4º Edición, Ed.
moléculas positivas hacia el electrodo Omega, Barcelona, 2015, pp.
negativo. Aunado a ello, si se logró 190,
observar lo deseado. 3. Lemus, Venezolana, M. J. y
Cortez Suárez, L. A. (2015)
Conclusiones. Bioquímica general:
La electroforesis es una técnica muy fundamentos y análisis de
útil para identificar el tamaño de las laboratorio. Machala, Ecuador
cadenas de ADN en una muestra : Universidad Técnica de
determinada. Dependiendo de la Machala.
distancia recorrida en la matriz por la 4. Watson, J. D., Baker, T., Bell,
muestra, se puede hacer una S., Gann, A., Levine, M.
estimación del número de pares de Biología Molecular del Gen,
bases que conforman a la cadena, y 7° edición., Editorial médica
se puede hacer comparaciones con panamericana S.A de C.V.
muestras de distintos organismos, 5. Montes, A. M., Sandoval
como en el caso de la práctica donde Rodríguez, A. S., &
podemos diferenciar a la cadena del Armendáriz Borunda, J. S.
plátano de la de la bacteria ​Bacillus (2013). Biología molecular.
Subtilis.​ Fundamentos y aplicaciones
También es muy importante en las ciencias de la salud.
tener ciertos cuidados al preparar la Mexico: McGRAW-HILL
matriz, como utilizar el mismo buffer INTERAMERICANA
para polimerizar la matriz de agarosa y EDITORES, S.A. de C. V.