Revista CENIC.

Ciencias Biológicas
ISSN: 0253-5688
editorial.cenic@cnic.edu.cu
Centro Nacional de Investigaciones Científicas
Cuba

Borroto Blanco, Janetsy; Blanco Jerez, María A.; Rivas Paneca, Maribel; Hernández de la Torre,
Martha; Concepción Laffite, Oscar; Trujillo Sánchez, Reinaldo
Meroterpenos (Antraquinonas) en diferentes partes de la Planta de Morinda Royoc L
Revista CENIC. Ciencias Biológicas, vol. 36, 2005
Centro Nacional de Investigaciones Científicas
Ciudad de La Habana, Cuba

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Revista CENIC Ciencias Biológicas, Vol. 36, No. Especial, 2005

Meroterpenos (Antraquinonas) en diferentes partes

de la Planta de Morinda Royoc L
Janetsy Borroto Blanco, María A. Blanco Jerez, Maribel Rivas Paneca, Martha
Hernández de la Torre, Oscar Concepción Laffite*, Reinaldo Trujillo Sánchez.
Laboratorio de Ingeniería Metabólica, Laboratorio de Células y Tejidos*, Centro de Bioplantas, carr. a Morón km
9. CP59460. Ciego de Ávila, Cuba. Email: jborroto@bioplantas.cu

RESUMEN: Las antraquinonas son productos del metabolismo secundario con gran importancia en la industria
farmaceútica. En el presente trabajo se determina la posible presencia de estos compuestos en diferentes
partes de la Morinda royoc L. El análisis cualitativo (Reacción de Bortranger) mostró una fuerte coloración roja
en las raíces (médula y corteza) indicativo de la presencia de antraquinonas y en mucha menor intensidad en
las hojas (coloración rosada muy tenue). En el análisis cuantitativo, las raíces (médula y corteza) mostraron los
mayores valores, seguidos por las hojas, y prácticamente nula la presencia en el resto de los órganos
estudiados. El procedimiento de purificación utilizado para el estudio más detallado de las raíces mostró la
presencia de antraquinonas en las fracciones más polares (3-6). De todos los resultados obtenidos quedó
demostrada la presencia de compuestos isoprenoides relacionados con las antraquinonas en las raíces de la
Morinda royoc L. Llegar a establecer su composición y estructura requiere de estudios más especializados
como HPLC-UV/DAP, RMN y Espectroscopia de Masa.

ABSTRACT: Anthaquinones are produced due to secondary metabolism and they are of a great importante in
the pharmaceutical industry. The possible presence of anthraquinones in some parts of Morinda royoc L was
detemined. The qualitative analysis (Bortranger´s showed a strong red coloration in the roots (core and bar)
indicating the presence of anthraquinones. On the leaves, a pink weak color was observed. The quantitative
analysis showed roots (core and bark( with the highest anthraquinone contents followed by the leaves and
almost not detected in the rest of the studied organs. The purification procedure used also revealed the
presence of anthraquinones in the polar fractions (f3-f6). As a result, the presence of isoprenoid compounds
related to anthraquinones in the roots of Morinda royoc L. was demonstrated. To establish the structure and
composition of these anthraquinones it is necessary to carry out especialized studies like HPLC-UV/DAP, NMR
and Mass Spectroscopy.

Palabras claves: antraquinonas, Morinda royoc L, raíces

Key word: anthraquinones, Morinda royoc L, roots

INTRODUCCIÓN
Las plantas constituyen una fuente importante para el aislamiento de productos naturales como drogas, tintes,
saborizantes y fragancias1 Varios de estos químicos son metabolitos secundarios que no son necesarios para el
crecimiento de las plantas y se acumulan en tejidos especializados. La biosíntesis de terpenoides de las plantas
resulta en la formación de un amplio rango de compuestos fisiológicamente importantes y biológicamente
activos Algunos de ellos son universales, por ejemplo esteroles y otros se encuentran solamente en un limitado
número de especies, por ejemplo aceites esenciales. El isopentenil difosfato (IPP) y el dimetil alil disfofato
(DMAPP) son intermediarios centrales isoméricos en este proceso, cuya isomerización se cataliza por la enzima
IPP isomerasa (E.C. 5.3.3.2). El DMAPP es un agente alquilante y se usa para la formación de terpenoides
superiores, ejemplo esteroles, por elongación de la cadena con IPP o se usa para la formación de
meroterpenoides tales como las citoquininas y antraquinonas2.

La especie Morinda royoc L. del genero Morinda perteneciente a la familia Rubiácea es una planta silvestre de
manigua costera que está distribuida en toda Cuba, además esta reportada en las Bahamas, Florida, Jamaica,
Santo Domingo, América Central, hasta Venezuela, Curazao y Araba. En Cuba se reportan además las
especies M. citrifolia L. y M. moamensis3.
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La Morinda royoc L se utiliza en la elaboración de bebidas refrescantes, digestivas y cuadros ictéricos. Se

emplea como uno de los ingredientes del Prú oriental, para bebidas depurativas y como afrodisíaco. La raíz se
usa contra la impotencia en la mujer4. Actualmente en Cuba la raíz de esta planta se utiliza para elaborar un
extracto alcohólico con el cual se produce un suplemento nutricional conocido en farmacia como PV-25.

Las antraquinonas son un importante grupo de compuestos secundarios encontrados en bacterias, hongos,
líquenes y plantas superiores6,7. Se encuentran en un gran número familias de plantas, que incluye las
Rubiaceae, Rhamnavceae, Poligonaceae y Leguminosaceae. El extracto de antraquinonas de las raíces de M.
elliptica se emplea como antibacterial, antifúngico y antileucémico8. La M. citrifolia se ha utilizado como
antibacterial, analgésico, anticongestivo, hipotenso, como sedante, como insecticidas9, 10,11. M. lucida se emplea
como antifúngico, antiprotozoo, antimalarial y hipoglicaémicas12,13. Actividades antitumorales y antileucémica en
M. parvifolia14, 15. En la industria farmacéutica las antraquinonas (AQ glicósidos) se utilizan en la producción de
¨Pyralvex¨ para el tratamiento de gingivitis, estomatitis, úlceras bucal, inflamación de la mucosa y condiciones
periodontal. Otro miembro del grupo de las antraquinonas ¨senna¨ se utiliza en la preparación de laxantes
(¨Senokot¨) para el estreñimiento o para la desocupación del intestino antes de un procedimiento de radiología
abdominal16, 17.

A pesar que no hay reportes de la producción de antraquinonas en Morinda royoc L, se supone que el mayor
metabolito presente en esta especie sean las antraquinonas teniendo en cuenta que es uno de los metabolitos
más importante en la familia Rubiacea.

Por tanto el objetivo del trabajo es determinar la posible presencia de estos compuestos en las distintas partes
de plantas adultas de Morinda royoc L.

MATERIALES Y MÉTODOS.
Material vegetal: se utilizaron plantas adultas de Morinda royoc L. del área experimental de aclimatización en el
Centro de Bioplantas.
Análisis cualitativo: para el análisis cualitativo de antraquinonas, se tomaron 0,2 g de las diferentes partes de
la planta, se adicionaron 5 mL de cloroformo, se agitaron y dejaron en reposo por 15 minutos. La solución se
decantó y se le añadió 1 mL de NaOH al 5% (Reacción de Borntraeger). Una coloración roja en la fase acuosa
indica presencia de antraquinonas. Se leyó el espectro de absorción en el UV-visible a la fase acuosa (NaOH
5%).
Análisis cuantitativo: para el análisis cuantitativo se partió de las diferentes partes de la planta (hojas, ramas,
inflorescencia, y raíces) se utilizó el procedimiento de extracción descrito por Han et al.18. y la cuantificación se
determinó a 434 nm para el coeficiente de extinción molar de 55 000 de la alizarina de acuerdo a Schulte et
al19. Teniendo en cuenta los resultados obtenidos para la raíz y por ser el órgano que acumula la mayor
presencia de antraquinonas, se procedió a analizar los extractos por otra técnica experimental informada en la
literatura para la Morinda elliptica20. Extracción: para la extracción de las raíces se tomaron 20 g y se les añadió
200 mL de diclorometano (DCM) y se colocó a la oscuridad en un cuarto de temperatura por 96 h. El solvente
se removió a presión reducida dejando unos cristales de color amarillo- naranja.
Análisis cromatográfico (Purificación): el extracto crudo se redisolvió en éter de petróleo de 65-90° y se
aplicó a una columna (2 cm x 10 cm) empacada con silica gel lavada en ácido (previamente agitada con 4% de
ácido oxálico durante 30 min, filtrada y se secada a 90°). La columna se eluyó por pasos con éter de petróleo,
DCM y DCM enriquecido con cantidades creciente en porcentajes de metanol (MeOH) (1, 2, 5 y 10 %). Para
cada paso se recogieron cinco fracciones de 2 mL cada una.
Cromatografía en capa fina (TLC): la cromatografía en placa fina se llevó a cabo en silicagel 60 (Merck). Las
fracciones obtenidas en la cromatografía en columna se rotoevaporaron a sequedad y el residuo se redisolvió
en MeOH. El remanente insoluble se disolvió en DCM. La fase móvil consistió de una mezcla
cloroformo:metanol 99:1)
Revelado: se realizó con NaOH 10 % (una coloración roja indica presencia de antraquinonas). Se calculó el Rf
para todos los compuestos separados en las distintas fracciones.
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RESULTADOS Y DISCUSION
Análisis cualitativo
Los resultados del análisis cualitativo de la raíz (corteza y médula) y de las hojas de la planta de Morinda royoc
L. se muestran en la Fig.1. Como se puede observar en la corteza y la médula, en presencia de NaOH 10%, se
hizo muy evidente la presencia de antraquinonas (coloración roja intensa), mientras que en las hojas esta
tonalidad fue bien baja.

Fig. 1. Reacción de Borntraeger para la detección de antraquinonas. De

izquierda a derecha: corteza, médula y hojas.
En la Fig. 2 se muestra el espectro de absorción en el UV-visible de la fracción acuosa procedente del ensayo
cualitativo con dilución 1:20, para la corteza, médula y hojas.

Ensayo Cualitativo de Antraquinonas

0,4

0,3
Absorbancia

0,2

0,1

0
200 240 280 320 360 400 440 480 520 560 600 640 680
Longitud de onda (nm)

M édula Corteza Hojas

Fig 2. Espectro de absorción UV-visible de la fracción acuosa (NaOH 5%)

indicativa de la presencia de antraquinonas en las diferentes partes de la planta
de Morinda royoc L.
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Se observa igual comportamiento para la médula y la corteza, con tres máximos de absorción. Para la corteza a
240, 300 y entre 460-480 nm, la médula sólo difiere de estos valores en el primer máximo que se encuentra a
260 nm. En las hojas se detectó un máximo a 340, pero de muy baja intensidad.

Interesante información estructural sobre las posiciones de los grupos hidroxilos se puede deducir a partir de las
características de las bandas de UV de las antraquinonas. Nor Hadiani, et al.,20 informaron longitudes de ondas
máximas a 262, 288 y 434 nm para el 1,3,8- trihidroxi-6-metilantraquinona (emodin), mientras que Hosoe et al.21
señalan longitudes de ondas a 284, 309 y 378 para el 1,3,7-trihidroxi-6 metilantraquinona (demetilmacrosporin).

Ramos et al.2 aislaron diferentes antraquinonas de cultivo de suspensiones celulares de Cinchona robusta que
absorben a diferentes longitudes de onda: robustaquinonas A (λmáx a 465 nm), B (λmáx a 412 nm), C (λmáx a
408nm), D (λmáx a 412 nm), E (λmáx a 465 nm), F (λmáx a 487 nm), G (λmáx a 465 nm), H (λmáx a 412 nm),
Copareolatina-6 metil eter (λmáx a 430 nm) y 1,3, 8 trihydroxy-2-methoxy-antraquinona (λmáx a 430 nm).

Nor Hadiani et al.,20 aislaron 10 antraquinonas conocidas y una nueva (2-formil-hidroxiantraquinona de Morinda
elliptica. Esta antraquinona nueva presentó máximos de absorción a 229, 278, 331, 407.

Los valores de absorbancia encontrados para la corteza y la médula pudieran corresponder a algunos de estos
compuestos ya informados en la literatura, lo que quedaría por elucidar.

Análisis cuantitativo
En el análisis cuantitativo de las distintas partes de la planta (Fig. 3), se aprecia que la médula y corteza difieren
significativamente del resto de las partes, incluso entre ellas.
Antraquinonas (µg/g de M F)

a
4
3,5
3 b
2,5 c
2
1,5
1 d
0,5 d
0
a
as

za
s

as

ul
e
oj

te
rd

ci

ed
H

r
ve

en

Co

M
sc
as

re
m

flo
Ra

In

Fig. 3. Análisis cuantitativo de antraquinonas a 434 nm en solución acuosa

de etanol al 80%, referido al coeficiente de extinción molar de la alizarina
Se observa del análisis cuantitativo que la médula y la corteza presentan los mayores valores y difieren
significativamente del resto de las partes de la planta analizada, incluso entre ellas misma. Estos resultados
están en correspondencia con el análisis cualitativo para la médula y corteza, no así para las hojas donde no se
detectó prácticamente la presencia de antraquinonas. El nivel de concentración encontrado pudiera estar
asociado a otros metabolitos que absorben a esta longitud de onda de 434 nm o antraquinonas libres cuyo
ensayo cualitativo no fue realizado.

Zenk et al.22 informan para el caso del cultivo de células de Morinda citrifolia L que el 90% de la absorción a 434
nm corresponde a cuatro antraquinonas glicosiladas, mientras que solamente el 10% de la absorción se debe a
antraquinonas agliconas (libres).
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Los espectros de absorción en la fase acuosa de etanol al 80% se muestran en la Fig. 4.

2
1,8
1,6

Absorbancia 1,4
1,2
1
0,8
0,6
0,4
0,2
0
200 240 280 320 360 400 440 480 520 560 600 640 680

Hojas Ramas verdes Inflorescencias Corteza Medula

Fig. 4. Espectro de absorción UV-visible de las distintas partes de la planta

Morinda royoc L en etanol 80%.
Los espectros de absorción muestran valores altos para la médula y la corteza. La médula presenta tres
máximos de absorción bien definidos a 240, 320 y 400 nm, mientras que la corteza a 260 y 560 nm. El resto de
las partes de la planta no presentaron máximos definidos y sus valores están muy por debajo de la médula y la
corteza.

Teniendo en cuenta estos resultados se procedió hacer un análisis químico más detallado de la raíz.
Extracción con Diclorometano (DCM)
Los resultados de la extracción con DCM de las raíces después de 90 h y eliminación del solvente orgánico a
presión reducida, muestran en el balón un sólido amarillo – naranja (100 mg) (Fig. 5).

Fig. 5. Residuo obtenido después de la extracción de raíces de Morinda royoc L con

DCM.
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Nor Hadini et al.20 informaron para extractos de raíces de Morinda elliptica, con igual procedimiento, la
presencia de cristales amarillo- naranja que por recristalización con cloroformo rindió 80,2 mg de una nueva
antraquinona. Otras 10 antraquinonas ya informadas en la literatura bajo estas condiciones experimentales se
corroboraron.

La presencia de cristales amarillo – naranja en la Morinda royoc L, pueden ser indicativo de la presencia de
estas antraquinonas en los extractos de raíces analizados.

Cromatografía en columna silica gel activada

En la Fig. 6 aparece el perfil cromatográfico obtenido al disolver en metanol los cristales amarillo-naranja de las
raíces de Morinda royoc L (extractos crudos). Las primeras cinco fracciones se colectaron después de pasar 10
mL de éter de petróleo (65-90°) y las siguientes fracciones (5-30) se eluyeron con diferentes gradientes de DCM
y DCM -Metanol (1, 2, 5 y 10%).

Éter CH2CL2/ CH2CL2/ CH2CL2/ CH2CL2/

CH2CL2 MeOH 1% MeOH2% MeOH5% MeOH 10%
% %
3

2
Abs 430 nm

0
0 5 10 15 20 25 30
Núme ro de f ra ccione s

Fig. 6. Perfil cromatográfico de la purificación en columnas de sílica gel activada en

ácido oxálico de extractos crudos de raíces de Morinda royoc L La columna se eluyó
en etapas con diferentes gradientes de polaridad de los solventes

Como se puede observar se obtuvieron máximos bien definidos de las fracciones de la 3 a la 5, lo cual indica un
carácter más polar de los compuestos separados, ya que estas fases corresponden al DCM enriquecido con
porcentajes crecientes de metanol de 1, 2 y 5%.

Si comparamos estos resultados en la Morinda royoc L con los obtenidos en raíces (por el mismo
procedimiento) de Morinda citrifolia L (datos no mostrados), estos compuestos son mas polares, ya que en la M.
citrifolia L el principal componente se encontró entre las fracciones 2 y 3 (DCM y DCM-MeOH 1%). La
intensidad de los picos es superior, prácticamente el doble, lo que indica una mayor concentración de los
compuestos en la Morinda royoc L
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Cromatografía en capa fina (TLC)

Los resultados de la cromatografía en capa fina donde aparecen los Rf de los compuestos detectados y los
colores se muestran en la tabla 1.

Tabla 1. Cromatografía en placa fina (TLC) de las raíces de Morinda royoc L, para cada una de las fracciones
analizadas en la cromatografía en columna, donde se expresa el valor del Rf (color de la mancha en la placa),
antes del revelado.

Rf Fracción I Fracción II Fracción III Fracción IV Fracción V Fracción VI

Rf1 - 0.03 (carmelita) - -
Raíz Rf2 - 0.05 (violeta claro) 0.07 (violeta) 0.07 (naranja) -
Rf3 0.10 (violeta)
Rf4 0.20 (naranja)
Rf5 - 0.34 (violeta 0.27 (violeta) 0.27 (malva) -
oscuro)
Rf6 0.41
(carmelita)
Rf7 0.51 (amarillo)
Rf8 - 0.61(naranja) 0.5 (violeta) 0.54 (naranja) 0.54 (amarillo)
Rf9 - 0.68 (violeta claro) 0.6 (naranja) 0.61 (amarillo- 0.58 (malva
naranaja) oscuro)
Rf10 - 0.71 (naranja) 0.71 (naranja) 0.71 (naranja) -
Rf11 - 0.8 (amarillo) 0.84 (naranja) 0.88 (amarillo) -
Rf12 0.95 (naranja
oscuro)

Se denota un gran número de compuestos en las fracciones 3, 4 y 5 en correspondencia con los máximos de
absorbancia obtenidos en el perfil cromatográfico, lo cual se aprecia en la Fig. 7 a, b donde se muestran los
resultados de la cromatografía sin revelar para las cuatro fracciones (a) y la revelada (7 b) con NaOH 10%. Es
evidente la concentración de estos compuestos en los extractos y el gran número presente de ellas.

f3 f4 f5 f6
sin revelar

Fig. 7. Cromatografía en placa fina de las fracciones 3, 4, 5 y 6 del extracto de raíces

aplicado en columna de Silica.

De todos los resultados obtenidos quedó demostrada la presencia de compuestos isoprenoides relacionados
con las antraquinonas en las raíces de la Morinda royoc L. pero llegar a establecer su composición y estructura
requiere de estudios más especializados como HPLC-UV/DAP, RMN y Espectroscopia de Masa.
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