Funciones del bioanalista bacteriólogo

UNIVERSIDAD DE ORIENTE – NÚCLEO DE BOLIVAR
Escuela de Cs. De la salud “DR. FRANCISCO BATTISTINI CASALTA”.

Bachiller: ANNA RAMOS.
BACTERIOLOGIA
TEMA NÚMERO 1: FUNCIONES DEL BIOANALISTA

BACTERIOLOGO.
BACTERIOLOGÍA: Es rama de la microbiología. Y estudia la relación

con los seres humanos, animales, plantas (medio ambiente).
- En la Bacteriología nos encargamos del estudio de las bacterias y su
relación con el ser humano.
Bacterias Seres humanos (animales)
 Relaciones benéficas: Flora normal/Activación del sistema

inmunitario.
 Relaciones Patológicas: Causas de infección.
Nos interesa cuáles son las bacterias causantes de enfermedades y
como migran desde su reservorio hasta el huésped para producir la
enfermedad /Hábitat Bacteriano.
Fases de Diagnóstico:
 Fase Pre- Analítica del diagnóstico de Laboratorio:

¿Qué comprende? Como todo proceso de laboratorio, ésta fase tiene una
parte analítica y una pre-analítica.
Epidemiología: Es una disciplina científica que estudia la distribución,
frecuencia y factores determinantes, las predicciones y el control de
factores relacionados con la salud y con distintas enfermedades existentes
en poblaciones humanas definidas.
¿Qué elementos estudia la epidemiología?
- Vivienda - Ubicación -Edad/Nombre
- Estilo de Vida - Educación - Sexo
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- Cultura/Raza - Herencia - Trabajo

- Promiscuidad - Vicios - Alimentación.
El diagnóstico de laboratorio, debería tomar todos estos aspectos en
consideración.
 Análisis epidemiológico
 Análisis clínico
 Toma de muestra /Transporte.
“TODO SE RELACIONA”
 Fase Analítica:
Corresponde al análisis como tal de las muestras biológicas que
ingresan al laboratorio, para determinar bacterias.
 Fase Post-Analítica:
Comprende el análisis de las muestras y las siembras. Hay tres tipos de
bacterias que pueden crecernos en una muestra:
- Bacterias Patógenas (causantes de la infección propiamente)
- Bacterias de la flora normal del paciente, o propia, que cayeron en la
muestra porque no se realizó bien la sepsia y antisepsia.
- Por colonización, por ejemplo, un paciente hospitalizado, puede
adquirir bacterias del hospital, se adhieren al paciente, y salen
reflejadas en el cultivo (Si hay un daño epitelial o tisular, estas
bacterias pueden penetrar al organismo y causar infección).
HAY QUE ANALIZAR LOS RESULTADOS.
 Pre- Analítica:
1) Diagnóstico Epidemiológico: Alimentación, tipo de vivienda, sector,
carro.
2) Diagnóstico clínico: El médico reporta una serie de sintomatologías
como; fiebre, dolor de cabeza, vómitos, y que deben analizarse para
orientar el estudio a las bacterias causantes de posibles síntomas,
aunque el espectro bacteriano siga elevado.
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“Una misma cepa bacteriana puede ser causante de muchos tipos de

infección, y el mismo tipo de infección, puede ser causado por distintas
cepas bacterianas.”
 Fase Analítica:
1) Diagnóstico de laboratorio. Escoger el tipo de medio de cultivo
en donde va a sembrarse la muestra tomando en cuenta las
exigencias bacterianas. Debemos ser eficaces y eficientes.
Ahorrar tiempo y dinero.
Para diagnóstico epidemiológico se debe tomar en cuenta:
1) Estilo de vida: Promiscuidad, drogas, estrés, riesgo laboral.
2) Medio ambiente: Físico, cultural, social, educacional, laboral.
3) Biología Humana: Herencia, vejez, edad, malformaciones
congénitas.
Diagnóstico clínico: Es el estudio de signos y síntomas clínicos que la
enfermedad produce en el paciente, hasta ser confirmado por el
diagnóstico de laboratorio.
Diagnóstico de Laboratorio:
1) Diagnóstico DIRECTO:
Observar al microorganismo. Bien sea por tinciones, o que inoculemos
la muestra en el medio de cultivo adecuado, y se pueda observar entonces,
un patrón de colonias y sus descripciones.
Generalmente, es estudio directo viene dado por:
- Estudio al Fresco (Lamina y laminilla y muestra biológica)
- Coloraciones fijas o húmedas (La tinción de gran no dice género o
especie)
- Técnicas de aglutinación.
ESTE DIAGNÓSTICO ES PRESUNTIVO.
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El GRAM nos orienta para, en casos urgentes, notificar al médico,

en base a la clínica del paciente y lo que se observa en el GRAM, la posible
presencia de una determinada bacteria, y que de esta manera, proceda a
iniciar un tratamiento empírico (mientras pasan 48h y se tiene el
diagnóstico definitivo, junto con el antibiótico de preferencia para
contrarrestar la infección), u orientar nuestro proceder en la escogencia de
las demás técnicas de diagnóstico de laboratorio.
En caso de esputo para identificación de neumonía, permite la
evaluación de la muestra en base a lo que se observa, el número de células
epiteliales, de polimorfonucleares, etc.
Nota interesante: Si nos llega una muestra de LCR se puede tomar
una lámina portaobjeto, una gota de LCR y se le agrega una gota de
ANTISUERO B (para detección de infección por Streptococcus del grupo B,
al cual pertenece S. agalactiae).
Las técnicas de aglutinación pueden dar resultados cruzados por

reacciones cruzadas, porque los microorganismos comparten caracteres e
información genética entre ellos, y comparten mecanismos de resistencia y
supervivencia.
¿Cuándo el diagnostico directo puede ser definitivo?

SÓLO en casos especiales como estos:
- Secreción uretral en un caballero, y en el GRAM se observan
muchos polimorfonucleares, y una enorme cantidad de cocos
GRAM negativos. Diagnóstico: Gonorrea.
- En caso de una muestra de orina, si se observan entre 5 a 10
bacterias por campo, el paciente tiene una infección urinaria,
definitivamente, y se puede mencionar que la infección viene dada
por bacilos GRAM negativos, cocos GRAM positivos, etc..
En el caso de la mujer, y la secreción útero - cervical, no se puede
llegara a un diagnostico definitivo por coloraciones debido a que hay
bacterias colonizadoras y de la flora normal en la vagina que pudieron ser
arrastradas a la muestra y no ser causantes de infección vaginal. Hay una
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bacteria muy similar a la Neisseria gonorreae que se ve reflejada en el

GRAM, y sin embargo, no es causante de gonorrea, y es Acinetobacter
baumani. Entonces, en una mujer no se puede diagnostica gonorrea, hasta
que no se realice el cultivo de la muestra endocervical.
- En caso de Tuberculosis, también aplica el que el diagnostico
directo por tinción de GRAM sea definitivo. Quiere decir; si se
realiza la tinción de Ziehl Neelsen y se consiguen bacilos ácido
resistentes (BAAR), teñidos de rojo (Mycobacterium tuberculosis), el
diagnóstico es definitivo.
- En caso de una secreción vaginal, si se observan a través de un

GRAM, células epiteliales, no se observan polimorfonucleares, y se
observan bacilos GRAM positivos y GRAM negativos, unos cortos
y otros largos, junto con la clínica (secreción vaginal oscura y olor
característico) se puede diagnosticar vaginosis bacteriana (PERO
NO SE PUEDE MENCIONAR EL NOMBRE DE LA BACTERIA
PORQUE SE DESCONOCE).
 El Bioanalista tiene el deber de reportarle al médico:

1) Si observa células epiteliales y en qué cantidad (abundante,
moderada y escasa)
2) Si observa polimorfonucleares, y qué cantidad.
3) Y la morfología bacteriana en la técnica de GRAM y la tinción
(positiva o negativa).
Debe reportarse en ese orden.
- Leucograma fecal, debe reportarse las cantidades en las que se
observan los polimorfonucleares, mononucleares, etc.
¿Qué son colonias bacterianas?

Masa de desarrollo bacteriano, macroscópico visible, que crece
cuando se les inocula en medios de cultivo adecuados, con una atmósfera
favorable, e incubación de 12 a 24 horas, con características morfológicas
similares y características comunes.
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Con el diagnostico directo va a apreciarse:

1) Cómo se comporta frente a otras bacterias del medio.
2) Cómo es.
3) Cómo crece en el medio de cultivo.
4) Si produce alguna sustancia que permita diferenciarla.
5) Como se comporta ante las pruebas bioquímicas.
6) Cómo se comporta ante los antimicrobianos, o antibiograma.
Antibiograma: Permite conocer aspectos de susceptibilidad
antimicrobiana, y los mecanismos de resistencia.
Pruebas de Susceptibilidad: Si los discos se colocan de forma específica

para formar sinergia, puede que nos muestre un mecanismo de resistencia
oculta. Hay que reportar la susceptibilidad y si hay o no un mecanismo de
resistencia.
2) Diagnóstico INDIRECTO: Evalúa indirectamente si la bacteria está
o no presente a través de alguna partícula de la misma, a través de
aglutinación e incluso precipitación si es un antígeno soluble
(carbohidratos C, O P, flagelos, capsula).
El diagnóstico indirecto, generalmente no ofrece un diagnóstico
definitivo. El diagnóstico definitivo lo va a ofrecer el CULTIVO (Género y
especie). ¿Por qué? La bacteria puede ocasionar reacciones cruzadas con
otra especie.
Puede hacerse a través de:
- Serología: Determinar la presencia de patógenos en el organismo,
por detección directa de sus antígenos.
- Detección y cuantificación de los anticuerpos que el organismo
produce contra un patógeno. Esto se puede realizar con: Una
muestra como tal, y a partir de la sangre del paciente. Ejemplo:
Anticuerpos Anti-treponémicos.
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FUNCIONES DEL BIOANALISTA BACTERIÓLOGO.

1) Diagnóstico asistencial
2) Docencia
3) Investigación
4) Coordina esfuerzos con las especialidades implicadas en el
diagnóstico, tratamiento, prevención y control de infecciones.
FASE PRE-ANALÍTICA:
- Planificar, dirigir, y gestionar, las actividades del laboratorio de
Bacteriología.
- Pertenecer a las comisiones de infección en hospitales.
FASE ANALÍTICA:
- Implicarse en labores de diagnóstico, prevención, control y
tratamiento de infecciones.
FASE POST-ANALÍTICA
- Responsabilizarse por los informes de los resultados (ética).
- Efectuar labores de consultoría y asesoría de problemas de origen
infeccioso.
FUNCIONES DEL BIOANALISTA:
1) Participar en el control y prevención de infecciones hospitalarias y

comunitarias.
2) Proponer políticas e implicarse en el uso racional de los antibióticos.
3) Colaborar con los sistemas de vigilancia epidemiológica y de salud
pública.
4) Emitir opiniones de experto.
BASES DE LA RELACIÓN:
- Respeto
- Complementariedad
- Cooperación
- Transparencia.
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TEMA NÚMERO 2: TOMA DE MUESTRAS
La toma de muestra es fundamental debido a que nos permite

obtener un buen diagnóstico. Es vital tomar en cuenta:
1) Calidad de la muestra
2) Cantidad de la muestra
3) Que provenga del sitio del proceso infeccioso.
Cuando se da el caso de hospitalización prolongada por un proceso
infeccioso, y no se logra determinar el punto de partida (sepsis), se deben
tomar varias muestras, para de esta manera, hallar el punto de entrada del
proceso infeccioso (la bacteria que se halle en el hemocultivo, y en “x” otra
muestra, será la causante del proceso infeccioso).
Los medicamentos tienen acción específica en diferentes áreas del
cuerpo, y se debe tomar en cuenta su toxicidad, aún cuando se hable de
CIM. El diagnóstico acertado depende, en primera instancia de la muestra
recolectada.
UTENSILIOS DE RECOLECCIÓN:
 Culturette: Es un dispositivo, que en su parte inferior posee una

gelatina, un medio de cultivo
inerte (sólo permite que la
bacteria permanezca viva, pero
impide su multiplicación, o
autolisis).
Una vez que se recolecta una
muestra por medio de un hisopo, es
necesario que el hisopo entre en contacto (se profundice) con el medio de
cultivo para que este tenga funcionalidad.
En algunas oportunidades el culturete posee una ampolla con un
medio de trasporte líquido, el cual debe presionarse (romperla), para
obtener el medio de cultivo hacia el exterior.
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 Medio Stuart Modificado

(Cary – Blair):
 Simultáneamente que se toma
la muestra, también debe
recolectarse muestra para
agregar a un tubo que
contenga únicamente SSF, esto
con la finalidad de realizar el
GRAM.
*En otra oportunidad, sustituyendo el tubo con SSF se le entrega al
paciente una lamina porta objeto, para que le médico con un hisopo,
recolecte una porción de la muestra y la agregue a la lámina porta objeto
para realizar el GRAM.*
 Cajitas de recolección para muestras de esputo: Cajita sellada.

Precaución al abrirla para evitar contaminación
 Bisturí: Para levantamiento de costras.
 Jeringas: Para recolección de muestras por punción (algunas son
tomadas por el médico). En el caso de estudio de bacterias
anaerobias, es necesario el estudio de muestras recolectadas por
punción.
 Muestra de orina: Su recolector de orina normal, estéril, o para
recolección de esputo. (también se usa el recolector de orina PARA
BACTERIAS PRODUCTORAS DE NEUMONÍA TÍPICA,
Streptococcus pneumoniae).
La muestra de orina debe refrigerarse una vez recolectada, ya que el

frio es un bacteriostático, impide el veloz crecimiento bacteriano, y
disminuye su lisis. Refrigerada, no congelada.
 Frascos HEMOCULTIVO:
- Amarillo: Bacterias AEROBIAS.
- Verde: Bacterias MICROAEROFILAS.
- Rojo: Bacterias ANAEROBIAS.
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 Tubo para trasporte de LCR: Posee una punta cónica, para que en
caso de patologías en el líquido, el sedimento quede definido en el
interior del tubo.
EL LÍQUIDO CEFALORAQUÍDEO, Y LA SANGRE PARA

HEMOCULTIVO NO SE REFRIGERA, NI SE ESPERA PARA SU
PROCESAMIENTO. SE PROCESAN INMEDIATAMENTE.
LA MUESTRA DE HECES, PARA REALIZAR CULTIVO, NO
SE REFRIGERA, NI SE ESPRA PARA SU PROCESAMIENTO. En
otros casos como estudio de hongos, etc., sí se puede refrigerar, pero para
cultivo, se necesita su inmediato procesamiento.
1) Infecciones del tracto respiratorio superior:

Senos paranasales, absorben rápidamente microorganismos que pueden
filtrarse a su seno esponjoso, y de allí, son traspasados a las meninges.
Conjuntivitis, en su mayoría causadas por virus, por lo tanto, la
Gentamicina, que venden comercialmente en gotas, no funciona para estos
casos. Se crea una flora bacteriana resistente. La mayoría de las infecciones
a nivel ocular, son causadas por virus.
A) Muestra de secreción ocular: En éste caso tomar una muestra del
pus que rodea el ojo infectado no es de utilidad, ya que contiene
bacterias de la flora normal, y colonizadoras que están presentes del
medio ambiente.
¿Qué debe hacerse? 1) Limpiar el ojo con algodón y solución fisiológica
estéril, dos veces, para asegurarnos de eliminar todos los residuos de
secreción purulenta.
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Nota: A pesar de que el alcohol y el agua oxigenada, son agentes

antisépticos, pueden ser contaminados con bacterias que adquieran
resistencia a ellos, por lo tanto, la sustancia a utilizar debe ser utilizada en
caída libre sobre el algodón o gasa que vaya a utilizarse.
Luego, 2) Con un hisopo se obtiene:
- La muestra para el cultivo,
- y otra porción que irá colocada en el tubo con solución fisiológica
para hacer las coloraciones.
Se hace presión sobre el ángulo distal del ojo, y se obtiene la muestra
colocando el hisopo en el ángulo nasal del ojo, sobre la glándula lagrimal.
Todo debe ser estéril al momento de la toma de muestra, excepto el
algodón que debe estar limpio.
B) Tracoma Ocular: La bacteria que produce el tracoma ocular es de
vida intracelular (Chlamydia trachomatis), por lo tanto, debe rasparse
la lesión, para extraer células comprometidas. Este procedimiento es
realizado por el médico.
C) Exudado Faríngeo: La faringitis es una enfermedad causada

mayormente por virus (90%).
Es importante al momento de tomar la muestra tomar en cuenta:
- Que el paciente no haya consumido antibióticos, mínimo, 4 días
previos a la toma de muestra.
- DEBE SER TOMADA EN AYUNA Y SIN CEPILLARSE LOS
DIENTES.
1) Explorar la zona por medio de una paleta (no tiene que estar
estéril).
2) Aplastar la lengua con la paleta cuando se vaya a tomar la muestra,
para evitar el movimiento de la misma, y que las bacterias de la
misma contaminen la muestra.
3) No tocar la úvula para evitar el reflejo de arcada.
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4) El paciente debe abrir bien la boca, y se debe presionar bien la

lengua.
5) Se debe introducir rápidamente el hisopo y tomar la muestra.
Luego de tomar la muestra, se introduce en el medio de trasporte
que posea el laboratorio, preferiblemente “Stuart modificado”.
En caso de muestra de exudado faríngeo, no se necesita un tubo con
SSF porque NO SE HACE GRAM. ¿Por qué? En la boca, garganta y
faringe tenemos un sin número de bacterias, las cuales no son de nuestro
interés y todas saldrían reflejadas por medio de la coloración.
Hay una sola excepción bajo la cual se justifica el uso de una
coloración de exudado faríngeo y es en caso de sospecha de DIFTERIA. Y
en este caso se realiza la tinción de AZUL DE METILENO O AZUL DE
LOEFFLER. Otras excepciones:
 FARINGITIS ESTREPTOCÓCICA: Dentro de las bacterias, la

única bacteria causante de faringitis es Streptococcus pyogenes, en
pacientes inmunocompetentes.
 MENINGITIS: En caso de brotes de meningitis, la Neisseria
meningitidis se vuelve una colonizadora de la garganta de los
portadores. Por lo tanto, puede hallarse en faringe de los pacientes
portadores, pero no es causante de faringitis, aunque haya
inflamación de garganta. En caso de que éste sea el caso, en la boleta
se debe notificar la investigación de portador de N. meningitidis.
 DIFTERIA: Corynebacterium diphteriae.
D) Absceso periodontal: Causada por bacterias anaerobias

mayormente. CUANDO ES EL CASO DE INFECCIÓN POR
BACTERIAS ANAEROBIAS, LA MUESTRA ES TOMADA POR
PUNCIÓN DIRECTA SOBRE EL ABSCESO, y va a ser tomada
por el médico u odontólogo.
Ya que este tipo de muestra no tiene medio de trasporte, debe ser
procesada de inmediato.
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Cualquier absceso en cualquier parte del cuerpo, debe tomarse la

muestra por punción y ser procesada inmediatamente.
E) Sinusitis: La muestra debe ser tomada por punción de los senos
paranasales, y debe ser tomada por el médico. Es causada
mayormente por bacterias anaerobias, pero también puede ser
causada por bacterias aerobias, por ejemplo, Streptococcus pneumoniae.
En este caso también se toma una muestra de exudado nasal, para su
determinación.
Investigación de portadores de Staphylococcus aureus.
La piel es la principal barrera (posee S. aureus como colonizadora),

sin embargo, si la lesionamos, nos auto inoculamos las bacterias, en este
caso, S. Aureus. Es allí en donde parten los abscesos o forúnculos en
diversas partes del cuerpo (axilas, ingle, etc.).
Hay dos casos en los que se realiza una muestra de exudado nasal para
determinación de portador de S. aureus:
1) Manipuladores de alimentos.
2) Personas con presencia de abscesos repetitivos.
Una buena sugerencia para estas personas, es bañarse con jabón
líquido, para que la bacteria no quede adhería al jabón.
F) Otitis: Muestra Ótica, y se obtiene a través de secreción ótica.

 Debe limpiarse la secreción purulenta externa con Solución
fisiológica y algodón, desde adentro hacia afuera.
 Se introduce el hisopo hasta donde sea posible (que el mismo
paciente lo haga) y se toma la muestra. (2 Hisopos para 2 muestras)
1) Muestra hisopada para el cultivo.
2) Muestra hisopada para coloración de GRAM.
 En caso de Otitis Media: Se le entrega al paciente el culturete o
medio de trasporte, y el tubo con solución fisiológica para que
sea el médico el que tome la muestra.
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G) Diagnóstico de Neumonía Típica:
Tipos de muestra:
- Esputo,
- Sangre,
- Lavado broncoalveolar,
- Punción transtraqueal (la única muestra que el Bioanalista puede
recolectar es la de sangre). Es esputo es la única muestra que puede
ser recolectada por el paciente.
 Requisitos que debe cumplir el paciente, para toma de muestra
para investigación de bacterias productoras de Neumonía típica:
1) El paciente no debe estar consumiendo antibióticos (mínimo 4 días
previos, o más).
2) Debe haberse realizado una correcta higiene bucal (cepillado, hilo
dental, enjuague bucal), para disminuir la carga bacteriana, y que las
bacterias de la boca no lleguen en gran cantidad a la muestra de
esputo (reducir la carga bacteriana).
Las muestras de ESPUTO NO SON LLEVADAS EN MEDIOS DE
TRASPORTE, y deben ser procesadas inmediatamente, siendo evaluadas
primero.
 Parámetros de evaluación de muestra de ESPUTO con tinción

de GRAM:
1) En el GRAM deben verse reflejados aprox. 40% de células
polimorfonucleares.
2) Deben verse reflejados, también, 10% aprox. de células epiteliales, y
la presencia bacteriana.
Sólo bajo estos parámetros, una muestra de esputo es útil para cultivo y
evaluación.
Debe ser procesada de inmediato, debido a la autolisis bacteriana.
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Diagnóstico de Neumonía:
- No se trasporta en ningún medio.
- Se realizar a través de hemocultivo (se procesa de inmediato)
- Se incuba al recibirla, en estufa.
 Broncoscopía en Lavado Broncoalveolar:

- Broncoscopio flexible de fibra óptica.
- Se realiza luego de inspeccionar la vía respiratoria.
- Posee un cepillito o esponja para obtención de muestra.
 Aspiración Transtraqueal (EN CASO DE DIFTERIA):
- Se realiza por medio de punción, y la muestra debe ser trasportada
en la jeringa hasta el laboratorio. La jeringa es su medio de
transporte.
Esta muestra se procesa de inmediato, una vez obtenida. No se necesita
evaluación previa.
La antisepsia se realiza con Alcohol al 70% o solución yodada, y se procede
a insertar la aguja y extraer la muestra.
“La única utilidad que tiene el GRAM de esputo es saber si la muestra es viable o
no para cultivo. Lo que se observe a través de esta coloración, no se reporta.”
H) Esputo para TUBERCULOSIS:

En la antigüedad se creía que el esputo para muestra de tuberculosis
debía ser verde, y abundante, para tener un significativo valor clínico para
el diagnóstico. Ahora se sabe que no es necesario que la muestra de esputo
ser purulenta verdosa, ya que, cuando hay una elevada carga bacilífera,
incluso la espuma del esputo es significativa. El bacilo a detectar tiene una
coloración específica para ella, y es la de Ziehl Neelsen para BAAR (El
bacilo se tiñe de color rojo gracias al colorante Fucsina Fenicada).
- El recolector no es de importancia,
- y no importa si el paciente se realizó o no una buena higiene bucal,
debido a que la carga bacteriana no se verá reflejada en la coloración
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de Ziehl Neelsen porque todas las bacterias decoloradas se tiñe con

azul de metileno, y se diferencia perfectamente de los bacilos teñidos
de rojo de la Mycobacterium tuberculosis.
- Las láminas donde se realizará la coloración deben estar limpias y
sin ralladura.
- Si se desea realizar un cultivo, debe realizarse la técnica de
CONTAMINACIÓN POTÁSICA que elimina todas las bacterias,
menos la M. Tuberculosis, que es la que interesa evaluar en este caso.
I) Meningitis:
Tipos de muestras:
- Sangre (Hemocultivo).
- LCR (Se extrae por punción entre L3 Y L4, luego de realizada la
antisepsia).
Se toman 3 tubos de ensayo:
1) Laboratorio General para estudios citoquímicos: cuántas células
tiene, cuántas células polimorfonucleares y mono nucleares posee,
cuántas células epiteliales, cuántos glóbulos rojos y la calidad de los
mismos.
2) Anatomía patológica: Cáncer, u otra enfermedad.
3) Laboratorio de Microbiología (último tubo a recolectar) debe tener
un color más claro y estar más limpio el líquido. La cantidad que se
envía debe aprovecharse porque es la que puede extraerse.
Mínimo debe enviarse dos muestras de sangre para hemocultivo.
El mismo tipo de cepa que crezca en cultivo de líquido
cefalorraquídeo, es la que debe crecer en ambas muestras de sangre.
En caso de que en el cultivo de LCR crezcan dos cepas bacterianas,
y en ambas muestras de sangre crezca una, la bacteria determinante es la
que se obtuvo en ambas muestras de sangre. Si ocurre en el caso contrario,
en LCR crece una sola cepa y en sangre dos tipos, la significativa será la
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que crezca en LCR, debido a que en el momento de extracción de la

muestra se pudo presentar errores por contaminación.
La extracción de todas las muestras debe ser perfecta para evitar
contaminaciones que provoquen errores en los resultados de los análisis.
TOMA DE MUESTRAS SEGUNDA CLASE:
J) Piel y tejidos blandos:
1) Para realizar la asepsia y antisepsia se deben emplear almohadillas

impregnadas de alcohol al 70% o solución jabonosa, las cuales van a
ser empleadas en la zona de infección, limpiando desde la zona
central hacia las zonas distales, para arrastrar mecánicamente a las
bacterias de la zona.
2) Una vez limpiada con solución jabonosa o alcohol, se deben quitar
los residuos de estos químicos, con otra almohadilla impregnada en
solución fisiológica.
Se le pregunta al paciente si es alérgico o no al Yodo, para saber si
utilizar o no solución yodada como antiséptico.
¿Por qué? Estos químicos son bactericidas, y si no se eliminan los
residuos con solución fisiológica, al momento de la toma de muestras, van
a ser arrastrados hacia la muestra, la van a contaminar, y van a lisar a las
bacterias disminuyendo la carga bacteriana de la muestra.
3) Si hay presencia de costra en la lesión, esta deberá levantarse y con
un hisopo, presionar directamente el área central de la lesión.
4) En caso de celulitis, debe pincharse, previamente limpiando el área,
primero con alcohol o solución jabonosa, y luego con solución
fisiológica para remover el pus o secreción externa (para descartar a
las bacterias que estén como colonizadoras ambientales).
5) La muestra debe ser introducida en el culturete y trasportada al
laboratorio para su cultivo.
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K) Muestras de Orina:
 En caso de mujeres:
1) Lavarse las manos con agua y jabón previamente.

2) Lavar genitales con agua y jabón.
3) No secarse con toalla (contiene bacterias). NO DEBE SECARSE.
4) Sentarse en posición cómoda.
5) Separar los labios mayores y menores.
6) Descartar el primer chorro.
7) Recolectar el chorro medio.
8) Descartar el último chorro.
¿Por qué debe descartarse el primer y el último chorro?
- El primer chorro contiene residuos de jabón y arrastra las bacterias
de la flora que hayan quedado residualmente.
- El último chorro contiene residuos de fluido vaginal que puede
contener alguna bacteria u hongo que contamine la muestra.
La muestra debe refrigerarse (en la parte inferior de la nevera) una
vez tomada, antes de ser enviada al laboratorio, si el individuo va a
demorarse antes de llegar. En caso de trasportar la muestra a largas
distancias, deberá instruirse al paciente que debe crear una cavita (envase
plástico con hielo), para asegurar su trasporte correctamente refrigerado y
conservar la frescura de la muestra.
El frío es un agente bacteriostático, el cual inhibe la autolisis, o la
multiplicación bacteriana en la muestra. A las 24 horas de haberla
sembrado (Agar Mc. Conckey es suficiente para ver el crecimiento
bacteriano. En caso de Bacterias anaerobias con requerimientos
específicos como sangre, se deben sembrar en medios de cultivo que
contengan sangre), debemos ver el crecimiento bacteriano en el cultivo.
Criterios de KASS (ver anexos)
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 En caso de hombres:
1) Lavar manos con agua y con jabón.

2) Lavar correctamente el pene, retrayendo incluso el prepucio.
3) No debe secarse.
4) Descartar el primer chorro (que puede tener residuos de jabón).
5) Recolectar el chorro medio.
6) Descartar el último chorro debido a que puede contener secreción
prostática, la cual es bactericida, y al caer en la muestra, eliminaría a
las bacterias de la muestra.
 Infecciones Urinarias en NIÑOS:

Muestra ideal: Punción suprapúbica (Debe trasladarse inmediatamente o
refrigerarse).
En caso de una muestra de orina obtenida por punción suprapúbica,
el crecimiento de una colonia bacteriana en el cultivo, es significativo,
debido a que la muestra es extraída directamente de la vejiga, la cual en
condiciones fisiológicas es estéril, en 24 y 48 horas de análisis.
En éste caso, debe especificarse en la hoja de solicitud, que la
muestra de orina fue obtenida por punción suprapúbica.
En otros casos, se utiliza la bolsa de recolección de orina para
niños. El inconveniente con la bolsa, es que al colocarla entre las piernas,
se calienta, y el calor forma una incubadora natural, por lo cual, cuando cae
la orina, inicia el proceso de incubación, crecimiento y reproducción
bacteriana.
Otro procedimiento es la Muestra al Acecho: La niña o niño es
lavado con agua y jabón, y no se seca. Algún persona del salud lo sujeta
con la piernas separadas y haciendo presión vesical presionando el
abdomen.
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 En caso de un paciente con sonda:

1) La bolsa en donde cae la orina a partir de la sonda, NO SE
UTILIZA COMO MUESTRA.
2) Se utiliza la manguera de la sonda.
3) Se limpia la zona de salida de la sonda con solución yodada, y se
eliminan los restos de la misma con solución fisiológica.
4) Con una jeringa se pinza la sonda en posición diagonal-vertical en
ángulo, para no traspasar la sonda o romperla, y se extrae la orina.
5) Debe especificarse en la boleta que la muestra fue extraída a través
de una sonda.
Debemos saber que la orina es tomada por tres técnicas que deben
especificarse:
a) Técnica de chorro medio.
b) Bolsa de recolección.
c) Punción suprapúbica.
d) Extracción a través de sonda.
L) Infecciones de transmisión sexual:

En hombres:
La gonorrea presenta únicamente en horas de la mañana, una
secreción purulenta, amarillenta. La muestra se obtiene mediante la
técnica de gota matinal (mañanera).
En caso de Uretritis, se introduce el asa bacteriológica a través del meato
urinario, la muestra se denomina secreción uretral.
¿Por qué razón se introduce el asa bacteriológica?
Hay diferentes bacterias que causan enfermedades de transmisión
sexual.
En caso de N. gonorrhoeae la muestra de gota marginal, que puede

ser tomada por el paciente, en una cajita para muestra de orina y llevada
de inmediato al laboratorio, es suficiente.
pág. 20
Pero hay otra bacteria que es de vida intracelular obligada

(Chlamydia trachomatis) y que es causante de uretritis, y para obtenerla, se
deben extraer células afectadas por la misma, por lo cual se debe raspar.
 Paciente con Gonorrrea: Secreción purulenta (amarillo-verdosa)

sólo a primera hora de la mañana.
 Paciente con Clamidiosis: Secreción trasparente, como clara de
huevo permanentemente durante el día.
En mujeres:
Las muestras:
- Secreción vaginal (fondo de la vagina)
- Secreción endometrial (fondo del útero/Papanicolaou).
(Ambas tomadas por el médico)
Hay diferentes microorganismos causantes de infecciones genitales
femeninas:
 En caso de Gardnerella vaginalis la lesión va a ser del fondo del saco

vaginal (una de las implicadas en vaginosis bacteriana), la muestra a
ser de secreción vaginal proveniente del fondo del saco vaginal.
 En caso de N. gonorrhoeae, o en caso de clamidiosis, la lesión se va a
encontrar en el fondo del saco uterino (endometrio), y la muestra
será de secreción endometrial.
En estos casos, el médico va a introducir un hisopo mediante el
espéculo (estéril), a través del tracto vaginal hasta llegar al endometrio y
va a girar para adherir las bacterias provenientes de la lesión.
En caso de Gonorrea, el hisopo será suficiente para el cultivo (se
impregna de la secreción), sin embargo, en caso de sospecha de
Clamidiosis, deberá utilizarse un cepillito para escamar la lesión debido a
que la bacteria causal es vida intracelular obligada.
pág. 21
Requisitos:
Una semana previa a la toma de la muestra (mínimo) la paciente no
deberá:
1) Consumir antibióticos.
2) Realizarse lavados vaginales.
3) Introducirse óvulos.
Entonces, en resumen, la muestra puede ser:
a) Endocervical.
b) Exocervical.
M) Sífilis:
 Sífilis primaria: Presencia de un chancro de inoculación de la

bacteria (donde ésta tuvo contacto o ingreso al sistema).
Chancro: Lesión dura e indolora que se presenta en el lugar de entrada de
la infección. (Desaparece entre 3 a seis semanas, e inicia la etapa de sífilis
secundaria).
Cuando el chancro está presente en la boca, no se toman muestra
para el cultivo. ¿Por qué? En la boca hay bacterias que confunden el
diagnóstico de la Treponema pallidum. Es decir, sólo se tomarán muestras
para cultivo cuando el chancro esté fuera de la boca.
¿Cómo se toma la muestra?
a) Se realiza la asepsia y antisepsia de la zona con alcohol.
b) Se aplasta la lesión (hacer presión) hasta que se desprenda la capa
que recubre el chancro.
c) Esa capa se adhiere a la lámina porta objeto realizando un FROTIS
POR APOSICIÓN TISULAR.
d) y se observa al microscopio (preferiblemente de campo oscuro),
para la observación del T. pallidum.
pág. 22
e) Este procedimiento se realiza inmediatamente obtenida la muestra.

Frotis por aposición tisular: Se toma una biopsia por punch de 3-4 mm
de diámetro. Se descarta la porción superior y se diseca un fragmento de 1
mm el cual se va a colocar entre 2 láminas portaobjetos frotándose
suavemente dejando secar ese material al aire ambiente. Luego se tiñe con
coloración de Giemsa.
 Sífilis secundaria: A partir de la desaparición del chancro (lo cual

implica que la bacteria ingresó al torrente sanguíneo), el paciente
inicia con una serie de síntomas como febrícula y erupción o
sarpullido generalizado.
En este caso se toma una muestra de sangre para detección de
anticuerpos anti-treponémicos a través del VDRL (prueba inespecífica).
N) Líquido Sinovial:
En caso de pacientes con inflamaciones a nivel de las articulaciones. La
muestra (por punción) es recolectada por el médico. La muestra es enviada
al laboratorio en la jeringa de extracción de la muestra. En casos, se
encuentra N. gonorrhoeae a nivel del tejido articular. También bacterias
como estafilococos, estreptococos, etc.
NOTA: Cuando una muestra es enviada en jeringa, debe ser procesada
de inmediato, porque no hay un medio de trasporte que mantenga la
bacteria viva.
O) Diarrea:
En caso de DIARREA, el medio de trasporte estándar a utilizar es

CARY–BLAIR. Agar Cary - Blair: Está contenido en un tubo de ensayo.
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Cary Blair Medio De Transporte.
Medio recomendado para la recolección, transporte y conservación de muestras aptas para estudios microbiológicos.
Es especialmente útil para la búsqueda de Vibrio spp. a partir de muestras fecales y rectales.
Fundamento
El primer medio utilizado para el transporte de muestras para estudios microbiológicos fue el medio de Stuart. En 1964 Cary y Blair
describieron un nuevo medio para el transporte de muestras fecales. Tenía un bajo contenido de nutrientes, un bajo potencial de
oxido reducción y un alto pH. En los estudios de Cary y cols., Salmonella y Shigella fueron recuperadas luego de 45 días de
inoculación. Otros autores han demostrado la eficacia de ese medio de transporte para estudios microbiológicos en gastroenteritis.
El medio de transporte Cary-Blair, es semisólido debido a la baja concentración de agar. Tiene un mínimo aporte de nutrientes que
permite la recuperación de los microorganismos sin que haya replicación. El tioglicolato de sodio se incluye para proveer un bajo
potencial redox; y el pH relativamente alto minimiza la destrucción bacteriana por acidificación.
Fórmula (en gramos por litro) Instrucciones

Tioglicolato de sodio 1.5 Suspender 12,6 g del polvo en 991 ml de agua
Fosfato disódico 1.1 destilada. Reposar 5 minutos y mezclar hasta
Cloruro de sodio 5.0 uniformar. Calentar agitando frecuentemente y
hervir 1 minuto hasta disolver. Enfriar a 50°C y
agregar 9 ml de una sol. de CaCl2 al 1% preparada
Agar 5.0 recientemente. Ajustar el pH si es necesario.
Distribuir y esterilizar 15 minutos a vapor fluente.
pH final: 8.4 ± 0.2
Siembra
1-Utilizando un hisopo estéril, recolectar la muestra según la metodología apropiada para ensayos microbiológicos.
2-Colocar el hisopo en el tercio superior del medio de cultivo. Si una parte de la varilla sobresale, cortarla e inmediatamente tapar el
tubo. Enviar lo más pronto posible al laboratorio para su procesamiento, dentro de las 4-6 horas de recolectada la muestra.
Incubación
Mantener a temperatura ambiente durante su envío al laboratorio.
Resultados
Los tubos con medio de transporte se subcultivan en medios sólidos apropiados según la muestra y el microorganismo que se quiera
aislar. Luego de la incubación, debe haber escasa o nula reducción de la viabilidad de los microorganismos.
Características del medio: Medio preparado: ámbar claro. Puede presentar escasa opalescencia.
Muestras:
- Hisopado rectal
- Caja de recolección (diarrea)
Hay bacterias como la Shigella que tienen una dosis infectante baja,
y que al tomar una muestra de hisopado rectal, no se ve reflejada en el
cultivo. Por lo tanto, entre la muestras para cultivo de diarrea, la
recolección de las heces es más efectiva, porque en ella pueden apreciarse
las características de la muestra.
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Cuando se hace el hisopado rectal, se inserta el hisopo 9cm en la

ampolla rectal y se mantiene allí durante un minuto. Luego, se extrae y se
trasporta en el medio de cultivo.
LAS MUESTRAS DE HECES NO SE REFRIGERAN (Shigella y

otras bacterias mueren con el frio). La única muestra que se refrigera es la
de orina.
¿Por qué es importante evaluar la muestra de heces?
Porque permite analizar qué microorganismo está causando la infección.
 Si la muestra es acuosa: El microorganismo posee un mecanismo

toxigénico.
 Si es una muestra que contiene sangre o moco: El microorganismo
utiliza un mecanismo invasivo.
Además del análisis macroscópico de la muestra, se puede realizar
Leucograma fecal o leucocitos fecales (técnica de coloración en frotis,
con colorante azul de metileno/40X).
- Cuantifica el porcentaje de polimorfonucleares y de mononucleares
presentes en la muestra.
Si hay mayor cantidad de mononucleares, nos encontramos ante un
proceso viral, o un proceso infeccioso causado por Salmonella typhi (única
bacteria que produce un incremento de mononucleares).
Si el número de polimorfonucleares excede el 70%, la bacteria
causante de la infección (diarrea) utiliza un mecanismo invasivo.
La muestra de heces debe estar completamente libre de orina, ya que
esta acidifica la muestra y causa la muerte bacteriana.
En caso de diarrea en pañal, cuando en niño defeca, debe tomarse el
pañal de inmediato y procesar la muestra rápidamente, debido a que hay
bacterias lábiles que no resisten la acidificación del medio causada por la
orina.
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P) Impétigo:
Se realiza la asepsia y antisepsia.
Se levanta la costra con un bisturí.
Se frota con un hisopo sobre la lesión.
Se obtienen dos muestras: a)Culturete para cultivo; tubo con solución
fisiológica para realizar el GRAM.
Q) Celulitis:
La muestra se toma por punción (el médico).
Es trasladada en la jeringa
Se procesa inmediatamente.
R) Septicemia:
Paciente con varios días de hospitalización (sin dar con el

diagnóstico de la causa de la fiebre y sintomatologías presentes).
Se toman muestras de TODAS las partes del cuerpo (LCR, orina,
heces, tejidos, etc.), y se mandan al laboratorio.
Junto con estas muestras, se debe extraer una muestra de sangre
para hemocultivo.
La bacteria que crezca en el hemocultivo, es la causante de infección.
¿Por qué se toman muestras de todas las áreas del cuerpo, sin con el
hemocultivo determinamos la bacteria?
Un paciente séptico, es un paciente que presenta una infección

generalizada. Se necesita saber el punto de origen de la infección. Los
antibióticos tienen diferentes estructuras químicas y reaccionan distinto en
diferentes tejidos y órganos, algunos poseen mayor especificidad a un área
específica.
pág. 26
Se necesita también contribuir a la no formación de resistencia

bacteriana.
Ciclo circadiano: A las mismas horas, todos los días, tenemos
concentraciones de X sustancia en cierto grado, todos los días.
La enfermera, en caso de un paciente con septicemia, cada cierto
tiempo deberá tomar la temperatura del paciente, y su tensión. Al hacer
esto, estará obteniendo los datos para que pueda realizarse la CURVA
FEBRIL.
Con esa información podemos conocer en qué momento de todos los
días, el paciente presenta fiebre y en qué grados. Conocemos el
comportamiento de estado febril del paciente durante todo el día.
¿Cuál es el interés en la curva febril?
Cuando la infección es causada por bacterias comunes (hay

excepciones a la regla), las muestras deben recolectarse antes de que el
paciente presente fiebre.
Explicación.
- Se toma una muestra de sangre cuando el paciente tiene una
temperatura de 38 oC.
- Luego de la siguiente media hora se toma nuevamente una muestra
de sangre.
En el hemocultivo se toman series de muestras.
Las muestras se toman cuando las temperaturas oscilan entre los 38 –
38,5 oC, NO se toman cuando la fiebre esté en grados de 39, 40 y 41 oC.
Importante tomar en cuenta:
a. Realizar correctamente la asepsia y antisepsia (De región central
hacia área distal/no se debe tocar el área una vez realizada la asepsia
y antisepsia). No deben arrastrarse bacterias de la flora normal a la
muestra.
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b. La cantidad de muestra que se va a tomar, debe representar el 10%

del contenido del medio de hemocultivo (Si el medio de cultivo
contiene 30cc de caldo de cultivo deben tomarse 3cc de muestra).
c. La muestra debe ser tomada de brazos que no tengan vías tomadas
u ocupadas con la administración de ningún fármaco o sustancia.
d. Se debe rotular la muestra con el nombre del paciente y la hora en
que fue tomada la muestra.
e. Se pueden tomar varias muestras para incubar.
f. La muestra, al llegar al laboratorio debe incubarse en estufa a 37 oC,
y deberá permanecer allí mínimo 8 días.
g. A las 24 horas de obtenida la muestra, debe observarse turbidez, con
algunas excepciones de bacterias que tienen una baja carga
infectante.
h. A observar la turbidez, se obtiene un poco de esa muestra (con una
jeringa) y se hace una tinción de GRAM.
i. Se toma otra porción para cultivar.
j. Aún cuando no se observe turbidez, debe realizarse el cultivo. Esto
puede deberse a que la bacteria causante de la infección, tiene una
carga infectante baja.
k. Cuando no hay signos de turbidez, igual debe tomarse una porción
para el cultivo, realizando un REPIQUE A CIEGAS.
l. Si en el frotis y el cultivo no hay crecimiento, se espera hasta los 5
días, se saca la muestra de la estufa, y se vuelve a sembrar y a
realizar un frotis.
m. A los siete días se repite el proceso.
n. Se debe tener cuidado de no contaminar las muestras.
o. Se puede cerciorarse de que no hay contaminación de la muestra,
debido a que se obtienen 2 MUESTRAS PARA HEMOCULTIVO.
Lo que crece en un medio debe crecer en el otro. Si crecen dos
microorganismos distintos, la muestra está dañada o contaminada,
ya que proviene de un sitio estéril, y el único agente infeccioso que
debe encontrarse es el causante de la sepsis.
En toda muestra que provenga de un sitio estéril debe crecer un solo tipo
bacteriano.
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En todas las muestras recolectadas debe crecer la misma bacteria que

crezca en el hemocultivo.
- Se debe tener contacto con el laboratorio central para informarnos
de los resultados de las pruebas que se realizaron en caso de
muestra de LCR/Meningitis (glucosa, pH, conteo celular y
apariencia de las mismas.
- En caso de endocarditis: Muestra – Sangre.
- En caso de Infección urinaria, también puede tomarse una muestra
de sangre para hemocultivo.
Se utilizan dos medios de cultivo:

1. Medio de cultivo
2. Medio de trasporte o recolección.
La cantidad del contenido del caldo de cultivo incluido en un frasco de
Hemocultivo, debe estar identificado (Muestra: 10% del contenido del caldo).
En estudios de bacterias anaerobias en piel y tejidos blandos, es

necesario que las muestras sean tomadas por punción. En este caso, el hisopo
o algodón queda impregnado de los ácidos grasos propios de la piel, y estos
son capaces de matar a las bacterias anaerobias. Por esto, la muestra debe ser
tomada por punción.
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ESTREPTOCOCOS
Los estreptococos son bacterias esféricas gran

positivas que de manera característica forman pares
o cadenas (estrepto) durante su multiplicación.
Forman parte de la microflora normal de seres
humanos, están relacionados a infecciones. Elaboran
sustancias y enzimas extracelulares.
SON CATALASA NEGATIVOS.
Los criterios de clasificación de los estreptococos son:
1) Morfología de las colonias y reacciones hemolíticas en agar sangre
(Fenotípicas).
2) Especificidad serológica de sustancia específica de grupo de pared
celular y otros antígenos de la pared celular o capsulares. Reacción
inmunitaria que provocan (Antigenicidad). Los estreptococos B-
hemolíticos contienen un carbohidrato llamado “Carbohidrato C”.
(Este fue uno de los criterios que empleó Rebecca Lancefield para
clasificar a los estreptococos/de acuerdo al tipo de carb. C).
3) SIGNOS Y SÍNTOMAS QUE PROVOCA LA INFECCIÓN
(CLÍNICA), PROVOCADA POR ESTREPTOCOCOS.
4) Reacciones bioquímicas y resistencia a factores físicos, químicos y
antimicrobianos.
5) Características ecológicas (hábitat).
Una de las formas más importantes de clasificación bacteriana es la Clínica.

Según el tipo de infección, el conocimiento de la bacteria causante.
“Epidemiológicamente hablando, está establecido qué bacterias son causantes de
infección en tejidos específicos (cuáles en piel, en vías urinarias, en garganta, en oído,
etc.)”
“Cuando una muestra llega al laboratorio, por ejemplo, por neumonía, y se le realiza
un gram y se determina que hay bacterias esféricas en forma de cocos que se alinean
en cadena y forman un halo verdoso, se analizan cuáles son las bacterias causantes de
pág. 30
neumonía y en base a esto se realizan las pruebas pertinentes. De esta forma se está
realizando la mayor ayuda analítica al procedimiento. Así se determina el medio de
cultivo a escoger, y se marca la continuidad del análisis.”
Especies del Género Streptococcus:
- pyogenes
- agalactiae
- pneumoniae
- grupo viridans
- grupo D
Características:
a. Cocos gran positivos, no son totalmente esféricos sino que tienen una
forma lanceolada, u ovalada, se encuentran siempre en parejas
(diplococos), los cuales en colonias forman cadenas (estreptococos).
b. Son anaerobios facultativos pero crecen mejor en microaerofilia.
c. Son catalasa negativos (no tienen enzima catalasa que transforma el
peróxido de hidrogeno en O2 y H2O)
d. Son inmóviles (motilidad negativa). Sus extremos son puntiformes.
e. Los estreptococos SÓLO CRECEN EN PRESENCIA DE SANGRE
(esto los diferencia de los enterococos, los cuales pueden crecer en
sangre o sin sangre).
CATALASA NEGATIVOS.
INMOVILES. (Motilidad negativa)
EXIGENTES PARA CRECER (anaerobiosis - microaerofilia)
SÓLO CRECEN EN PRESENCIA DE SANGRE.
pág. 31
De acuerdo a la presencia del carbohidrato C, se clasifican en:

BETA HEMOLÍTICOS: Degradan totalmente los eritrocitos con
aclaramiento o halo completamente transparente alrededor de la colonia de
crecimiento bacteriano.
ALFA HEMOLITICOS: Lisan de forma incompleta a los eritrocitos, y
reducen la hemoglobina, formando un pigmento verdoso alrededor de las
colonias.
GAMMA HEMOLÍTICOS: No lisan eritrocitos, o degradan hemoglobina.
No hemolisan.
Streptococcus Beta Hemolíticos:

- pyogenes
- agalactiae
- grupo D
- Género Enterococos
De acuerdo al Tipo de Carbohidrato C, presente en la pared celular de

estos estreptococos β hemoliticos, se les incluyo a cada uno en un
Grupo.
Grupo A: Compuesto de ramnosa N-acetilglucosamina. Streptococcus pyogenes.
Grupo B: Polisacarido de ramnosa-glucosamina. Streptococcus agalactiae.

Grupo C: Es la ramnosa-N-acetilgalactosamina.
Grupo D: Acido teicóico de glicerol, que contiene D-alanina y glucosa.
Grupo F: glucopiranosil-N-acetilgalactosamina.
pág. 32
¿Quiénes tienen carbohidrato C?

- Los estreptococos Beta hemolíticos.
Los estreptococos alfa hemolíticos no tiene Carbohidrato C.
Streptococcus Alfa Hemolíticos:

- pneumoniae
- viridans
- grupo D
- Género Enterococos
Streptococcus Gamma Hemolíticos:

- Streptococcus Grupo D
- Género Enterococos.
Los ENTEROCOCOS entran dentro del grupo de los alfa, beta y gamma
hemolíticos. Anteriormente eran clasificados como una especie de
Estreptococos. HOY SE SABE QUE SON UN GÉNERO APARTE.
pág. 33
BETA HEMOLÍTICOS:
GRUPO A:
Streptococcus pyogenes:
Beta hemolítico, posee carbohidrato C del grupo A.
Ejemplo: Se toma una muestra de una celulitis, se realiza el gram y se
observan cocos gram positivos en parejas, en forma de cadena.
En algunos casos, puede confundirse con el género Staphylococcus debido a
que en algunos casos (introduciéndolos en un caldo de cultivo, para
posteriormente realizar un gram) estos, puede apreciarse aisladamente o en
cadenas, y no en racimos de uvas, como es su característica. (Los
estafilococos se aprecian en racimos a partir de una muestra, por ejemplo, de
pus espeso).
Características:
- Encapsulado sólo en infecciones (como mecanismo de defensa ante

la fagocitosis.
- Beta hemolíticos.
- Desarrollo optimo en anaerobiosis (Se corta el agar para introducir
el inoculo sobre las líneas de siembra, y que se desarrolle en la parte o
interna del agar – quedan incluidos - y crecerá en anaerobiosis.)
- Crece mejor en microerofilia.
- Los estreptococos del grupo A, mueren al calentar a 60 grados
centígrados. Es una forma de diferenciar a estreptococos beta
hemolíticos. Se toma un poco de colonias sembradas 24 horas incluidas
en el agar (anaerobiosis) previas en agar que contenga sangre, se
inocula en un caldo soya y se lleva a calentamiento a 60 grados
centígrados por 30 minutos. Luego, se toma un poco de inoculo del
caldo de cultivo, y se siembra en un agar sangre. Si no hay crecimiento
bacteriano, la cepa corresponde con el comportamiento de
Estreptococos. Esto permite diferenciarlos de igual forma, de
Enterococos y Estreptococos Grupo D.
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- Sensibles a la bacitracina: No se realiza antibiograma con ella. Se

siembra una colonia en agar sangre, se le coloca el disco de bacitracina,
y si este, al trascurrir de 24 h se muestra sensible (sin crecimiento
bacteriano alrededor del disco), es definitivamente un estreptococo de
grupo A, beta hemolítico o Streptococcus pyogenes.
- Sensible a la penicilina.
Si se determina que el causante de la infección es Streptococcus
pyogenes, mediante sensibilidad a la bacitracina, no es necesario
realizar antibiograma, debido a que esta cepa bacteriana jamás ha
adquirido mecanismos de resistencia contra la penicilina, lo que lo hace
el tratamiento de elección para infecciones causadas por este especie.
No se usa la bacitracina como tratamiento de elección, sino la
penicilina.
Si el paciente es alérgico a la penicilina, se realiza un antibiograma
para determinar qué otros fármacos pueden sugerirse para el tratamiento
infeccioso (Generalmente cefalosporinas).
Tipo de infecciones que puede producir S. pyogenes:
Vías de entrada:
- Vía nasal.
- Piel.
Causa infecciones a nivel de garganta.
Es el único causante bacteriano de Faringitis.
La Faringitis es casi siempre resultado de un proceso viral. ¿Cómo se

diferencia clínicamente un proceso viral de un proceso bacteriano? El ciclo
febril es constante y en picos. Al administrar tratamiento supresor de
pirógenos, estos provocan el descenso de temperatura, el cual vuelve a
niveles muy elevados prontamente al disminuir el efecto del tratamiento
antipirético. En casos de virus, la fiebre es controlada y suele desaparecer
ante el uso de antipiréticos.
pág. 35
- Meningitis.
- Otitis.
- Sinusitis.
- Neumonía
- Endocarditis.
- Celulitis: Afección profunda de las capas de la piel, del tejido celular

subcutáneo específicamente. No tiene bordes definidos y es plano. En
la zona se presenta dolor y enrojecimiento, acompañado de
tumefacción y calor en la zona.
- Impétigo o pioderma (el cual puede producirlo también Staphylococcus

aureus). Vesículas superficiales que se rompen y de zonas erosionadas
cuya superficie desollada está cubierta de pus y posteriormente se
encostra. Se disemina por continuidad y es muy contagiosa, sobre todo
durante climas húmedos o calientes. Ocurre una infección más
generalizada en la piel eccematosa o herida en quemaduras, y puede
avanzar hasta celulitis. (S. aureus puede producir una infección que es
idéntica desde el punto de vista clínico, y a veces están presentes tanto
S. pyogenes, como S. aureus). ES MÁS FRECUENTE EN NIÑOS. ES
DE AUTOINOCULACIÓN POR LESIONES O RASPONES. En el
campo es conocido como Brasa.
- Erisipela: Inflamación en piel y tejido subcutáneo. Acompañado de

fiebre, edema, eritema, y tendencia a invasión a tejidos vecinos.
- Fascitis necrotizante (Gangrena estreptocócica) Es una infección de

los tejidos subcutáneos y la fascia. Hay necrosis considerable y de
diseminación muy rápida hacia tenidos subcutáneos.
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- Glomerulonefritis y fiebre reumática: Resultado de una infección por

S. pyogenes sin tratamiento antibiótico.
DESPUÉS DE UNA INFECCIÓN POR S. PYOGENES HAY UN

PERIODO DE LATENCIA DE 1-4 SEMANAS, LUEGO DE LAS
CUALES PUEDE PRESENTARSE GLOMERULONEFRITIS O
FIEBRE REUMÁTICA (si la enfermedad no es tratada con penicilina).
La nefritis usualmente va precedida de infecciones de la piel, mientras

que la fiebre reumática va precedida de una infección del sistema respiratorio.
Glomerulonefritis aguda: Se presenta en ocasiones, de una a cuatro semanas
después de una infección cutánea por S pyogenes (pioderma, impétigo). Es
posible que se inicie por complejos de acción antígeno-anticuerpo que se
depositan en la membrana basal glomerular. Los síntomas son: sangre y
proteínas en orina, edema, hipertensión arterial, retención de nitrógeno
ureico. Pocas veces es mortal.
Fiebre reumática: Los signos y síntomas característicos de esta enfermedad
comprenden la fiebre, poliartritis migratoria no purulenta, carditis de todas
las capas de corazón, formación de granulomas perivasculares pequeños o
cuerpos de Aschoff. Esta es la secuela más grave de infección causada por S.
pyogenes. Este tiene antígenos de la membrana celular que tiene reacción
cruzada con el tejido cardiaco humano. Los sueros de pacientes con F.R.
contienen anticuerpos contra estos antígenos (ASTO, para infecciones
respiratorias, y anti-DNAsa y anti-hialuronidasa para infecciones de la piel).
Exotoxinas pirógenas: Elaboradas por S. pyogenes.
Las hay de tres tipos: A, B y C.

Exotoxina pirógena tipo A: causante de choque tóxico estreptocócico y
escarlatina. Sólo un 10% de estas exotoxinas están presentes en cepas de
pyogenes que no presenten esta fiebre.
pág. 37
Fiebre Escarlatina: Está caracterizada por producir un enrojecimiento que va

a permanecer nivel de los pliegues y el tórax, y que va ceder
espontáneamente con una descamación generalizada de la piel y también va a
afectarse la lengua. Al comenzar las manifestaciones en la orofaringe,
comienza a producirse en la lengua una especie de costra blanca que a los
pocos días se cae, dejando a las papilas hipertrofiadas produciendo la “lengua
de frambuesa” característica de la fiebre escarlatina.
TIPOS DE INFECCIÓN:
Faringitis: Enrojecimiento a nivel de las amígdalas, en algunos casos lengua
de frambuesa por toxina pirogénica de tipo A.
- Aumenta el estado de portador. Se trasmite por medio de gotitas de
Plügge.
- Es frecuente en épocas de invierno, y en hacinamiento.
Fascitis necrotizante: Consecuencia de infecciones en garganta o piel por S.

pyogenes.
En 1871 Joseph Jones fue el primero en describir la enfermedad, y en 1918 se

determino que el agente causal es el S. pyogenes, y que el tratamiento es
sencillamente penicilina.
Factores de Virulencia:
- Proteína M: Aparece como proyecciones filiformes de la pared celular.
Cuando está presente esta proteína aumenta la virulencia de esta
bacteria, y si no hay anticuerpos específicos para la proteína M, puede
resistir la fagocitosis de lo polimorfonucleares. Esta proteína se utiliza
para inmunizaciones. El S. pyogenes sin esta proteína no son virulentos.
- Estreptolisina: El S. pyogenes del Grupo A de los Beta hemolíticos
elaboran hemolisinas que se conocen como estreptolisinas. Hay de dos
tipos:
pág. 38
Estreptolisina O: Proteína que tiene actividad hemolítica en estado reducido

(grupos SH disponibles) pero se inactiva en presencia de oxígeno (Es lábil al
oxigeno). Es responsable de la hemólisis que se aprecia en el agar, cuando
este se corta permitiendo el crecimiento bacteriano en anaerobiosis. Se
evidencia únicamente en ausencia de oxígeno. Es tóxica para leucocitos,
eritrocitos, plaquetas, lisosomas, y tejido cardiaco. PERMITE LA
IDENTIFICACIÓN DE S. pyogenes EN AGAR SANGRE EN AUSENCIA
DE OXÍGENO.
ES ANTIGÉNICA(induce a la formación de anticuerpos): Se combina con
los anticuerpos antiestreptolisina O (ASTO), los cuales aparecen el ser
humano después de una infección causada por cualquier estreptococo que
contenga la estreptolisina O. Este anticuerpo bloquea la hemólisis causada
por la Estp. O.
Es resistente al colesterol: Resiste la inactivación del colesterol y ácidos
grasos de la piel.
Estreptolisina S: Tóxica para leucocitos, plaquetas, y órganos subcelulares.
Es la enzima que produce zonas hemolíticas alrededor de las colonias
estreptocócicas que crecen en las superficies de agar sangre. No es
antigénica, por lo que no estimula la formación de anticuerpos. CUANDO
LA INFECCIÓN ESTA EN LA PIEL O TEJIDOS BLANDOS, NO SE
FORMAN ANTICUERPOS ASTO, porque solo está presente la
Estreptolisina S y esta no es antigénica. NO SE DETERMINAN ASTO.
- Hialuronidasa: Degrada el ácido hialurónico. Contribuye a la

diseminación del microorganismo (factor de diseminación). Son
antigénicas y específicas para cada fuente bacteriana.
- Estreptocinasa (equivalente a la fibrinolisina de los Staphylococcus):

Transforma el plasminógeno del plasma en plasmina, una enzima
proteolítica que digiere fibrina y otras proteínas.
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- Estreptodornasa: Desoxirribonucleasa estreptocócica, despolimeriza

DNA. Contribuye a la licuefacción de exudados y facilita la eliminación
de pus y tejido necrótico, esto contribuye a que los fármacos
antimicrobianos penetren mejor y las superficies infectadas se
restablezcan con mayor rapidez.
- Exotoxina pirogénica (A, B y C). Antes llamada toxina eritrogénica.

Pirogenicidad, citotoxicidad, y aumento de susceptibilidad a los efectos
letales del la exotoxina (Rahs Escarlatina). NO TODOS LOS
PACIENTES QUE POSEAN INFECCIÓN POR
ESTREPTOCOCOS DESARROLLAN ESCARLATINA. SÓLO EN
CASOS QUE LAS CEPAS POSEE EN GEN QUE CODIFICA ESTA
EXOTOXINA.
Todos estos son factores de diseminación.
- Cápsula de Ácido hialurónico. Evita la fagocitosis. Esto permite que el
cuerpo humano no lo reconozca como patógeno. El Ác. Hialurónico
producido por humanos, es similar al de la cápsula del S. pyogenes.
- Pared celular de Peptidoglucano: Contiene el Carbohidrato C. La

pared celular contiene ácido lipoteicóico y proteína F que facilitan la
adherencia a superficies epiteliales de las mucosas por ejemplo, las del
tracto respiratorio.
- Pili: Permite la adherencia.

- Proteína T Y R: Permiten la tipificación bacteriana.
- Proteína F: Permiten la adherencia de la bacteria y la colonización.
pág. 40
DIAGNÓSTICO DIRECTO:
1) GRAM: Observación de cocos gram positivos en cadena.
2) Siembra en agar sangre: Presencia de B- hemólisis en anaerobiosis
(internas en el agar).
3) Prueba de la Catalasa: NEGATIVA.
4) BACITRACINA: Sensible.
pág. 41
Esquema de identificación:
Faringitis:
Tipo de muestra: Exudado Faríngeo
Inoculación: Agar sangre. Incubar 24h en microaerofilia a 35oC.
Luego de 24h de inoculación Tinción de GRAM.
Característicasbacterianas.
Observar características macros. Diagnostico Indirecto:
de las colonias (en agar). 1) LCR (Inmunoensayo)
(Colonias pequeñas B-hemolíticas). 2) PCR
3) ASTO Técnica de Elisa.

Estos anticuerpos no están
presentes en infecciones de
la piel, y no de detectan
Se realiza la prueba de la Bacitracina. cuando el paciente tiene
inflamación purulenta de
Incubación 24h luego de inoculación, garganta, debido a que aún
la infección no ha penetrado
y aplicación de discos (39oC anaerobiosis) al torrente sanguíneo, por lo
tanto no se han generado
estos anticuerpos.
Si sensible, es S. pyogenes.
En caso de muestras de exudado faríngeo no se hace Gram de la

muestra de exudado faríngeo. Se realiza el gram a partir de las colonias
que crezcan en agar sangre luego de 24h de inoculadas. ¿Por qué? Se
observarían demasiadas bacterias provenientes de la boca que no son de
nuestra incumbencia. SÓLO EN CASO DE EXUDADO FARÍNGEO.
pág. 42
GRUPO B:
Streptococcus agalactiae
Beta hemolítico. Posee el carbohidrato C del Grupo B.
Producen hemolisis muy pequeña alrededor de las colonias bacterianas.
Es colonizadora normal (microflora) de la región perianal e intestinal.
Son los principales causantes de infecciones puerperales en los periodos
neonatal y perinatal.
Las mujeres se colonizan con el microorganismo en la vagina y el recto, y la
colonización asintomática se encuentra en el 5-35% de las mujeres
embarazadas. La colonización vaginal viene dada por trasferencia ano-
vaginal de forma intermitente.
En caso de mujeres embarazadas, la descarga urinaria no es completa, lo que
permite la colonización de la bacteria en las vías urinarias bajas de las
madres.
El recién nacido se coloniza a través del canal del parto, por trasmisión
vertical a partir de la madre colonizada.
La trasmisión se presenta sólo en niños nacidos a través del canal del parto.
FACTORES DE VIRULENCIA:
- Fimbrias y ácido lipoteicóico de la pared celular, median la adherencia
bacteriana a las superficies epiteliales.
- Proteasas y colagenasas: Enzimas que degradan proteínas y colágeno,
para facilitar la diseminación bacteriana.
- Beta Hemolisina: Acción citotóxica.
- Bloqueo de los mecanismos inmunológicos (ácido sialico).
pág. 43
- Inducción al choque séptico (SSST asociado a estreptococos grupo A)

Consiste en fiebre, hipotensión, Rash eritematosos, descamación, y
compromiso multiorgánico. Poseen una exotoxina no descrita que
tiene propiedades asociadas a exotoxinas pirogénicas. Los animales
poseen más susceptibilidad a la misma, aunque fue descrita en
humanos primeramente.
El recién nacido a través del canal del parto, podría desarrollar:
- Síndrome de dificultad respiratoria.

- Meningitis.
- Sepsis: “S. agalactiae es la principal fuente o agente etiológico de sepsis
neonatal.”
-
- Otitis.
- Conjuntivitis neonatal.
La infección en el R. N se divide en dos grupos:
a) Enfermedad Precoz: Se presenta la infección entres los primeros 5 días
posteriores al nacimiento (Clínicamente se sospecha, pero se realiza los
cultivos confirmatorios).
Fuente: Madre.
b) Enfermedad Tardía: Se presenta entre 10 días a 3 meses posteriores al
nacimiento.
Fuente: En este caso varía, porque puede ser cualquier individuo en contacto
con el bebé. Madre, padre, personal hospitalario, otros recién nacidos
colonizados con la bacteria y que entraron en contacto con el bebé.
De acuerdo al tiempo en que se desarrolló la infección, se puede
determinar la fuente. También permite determinar si la madre es o no
portadora de la bacteria, para realizar las prevenciones adecuadas e iniciar el
tratamiento.
pág. 44
- Infecciones urinarias en mujeres, y mujeres embarazadas.
- Infecciones en piel y mucosas en R.N.
- Infecciones respiratorias en el R.N.
- Infecciones sistémicas del R.N.
CARACTERÍSTICAS:
A) Cocos Gram positivos de cadena larga. Beta hemolíticos (Frotis)
B) CAMP positiva
C) Bacitracina resistente.
IDENTIFICACIÓN: Si se sospecha de Streptococcus agalactiae.
- Prueba de CAMP: Se siembra la muestra en placa de Agar sangre, al

cabo de 24h se desarrollaron colonias Beta hemolíticas (en
anaerobiosis). Se toma una porción de las colonias Beta hemolíticas
que se desarrollaron, y se siembran en otro agar sangre (junto a otras
muestras de pacientes en cuadrantes). En el centro se coloca una asada
de una cepa de Staphylococcus que se tiene almacenada en la nevera para
esta prueba, la cual es productora de una enzima llamada Beta lisina.
Luego de que se realiza esto, se procede a guardarlo en la estufa
durante 24h más a 35oC.
A las 24h, en la muestra (entre las sembradas en cuadrantes de varios
pacientes) hacia la cual se forme una cabeza de flecha (se aprecia también la
B-hemólisis), se determina que es CAMP positiva, y que hay presencia de
Streptococcus agalactiae, como causante del proceso infeccioso.
IMPORTANTE: En ocasiones, las infecciones neonatales vienen dadas por

Streptococcus pyogenes, cuando el parto se da en malas condiciones, o
atendidas por personal, que posiblemente sea portador de S. pyogenes en
garganta, o tenga faringitis. ¿Cómo se descarta o confirma que la
infección neonatal viene dada por cuál bacteria? NO se diferencia a
pág. 45
través de frotis o agar, debido a que ambos son estreptococos Beta

hemolíticos de características macro y microscópicas similares.
- Adicionalmente a la prueba de CAMP y la utilización del agar sangre,
se hace la prueba de la BACITRACINA. El S. pyogenes es sensible a
esta, sin embargo el S. agalactiae no lo es. Si la prueba de Bacitracina
resulta sensible, estamos en presencia de S. pyogenes, y no de S.
agalactiae.
IMPORTANTÍSIMO: ¿Por qué se utilizan estos
 AGAR Mc Conckey: Es el medio de medios de cultivo (Mc
cultivo selectivo más comúnmente usado Conckey y EMB de
para inhibir el crecimiento de organismos Levine en rl esquema de
Gram positivos. Las sales biliares y el
cristal violeta son los inhibidores activos.
identificación? Ya que se
Permite el desarrollo de TODAS las presume que la infección
especies de Enterobacterias. Inhibe el vino dada por traspaso de
desarrollo de Gram positivos.
bacterias vía recto-urinaria
 EMB de Levine: Medio de cultivo en la madre (ya que el
selectivo: Sus inhibidores activos (contra R.N. desarrolló meningitis
los Gram positivos) son la Eosina Y el azul
de metileno. Tiene altas concentraciones de
temprana) se debe
Lactosa. Es ideal para la diferenciación de distinguir también que la
E. coli. infección venga dada por
 CALDO Tioglicolato: Permite el Enterobacterias tales
crecimiento de microorganismos aerobios y como E. coli, y estos
anaerobios facultativos y estrictos. Las medios diferenciales
sustancias reductoras como tioglicolato de
permiten el crecimiento
sodio, el sulfito de sodio y cisteína
disminuyen el potencial de oxido reducción selectivo o asilamiento de
y proporcionan una anaerobiosis suficiente estas cepas en particular.
y debido a los grupos -SH- de estos Si crecen en el medio,
compuestos, se neutralizan los efectos
bacteriostáticos de los derivados
estamos en presencia de
mercuriales, arsenicales y de otros metales una infección causada por
pesados que pudieran estar presentes en la algún género y especia de
muestra en estudio. El bajo contenido de
Enterobacterias (estas son
agar le otorga la propiedad de ser un medio
fluido y retarda la dispersión de CO2 y O2. colonizadoras normales
Debido a todas estas características del tracto gastrointestinal
desarrollan microorganismos aerobios, como flora normal).
anaerobios facultativos y estrictos.
pág. 46
ESQUEMA DE IDENTIFICACIÓN.
Muestra. LCR
(Paciente que desarrolló Meningitis temprana)
Inoculación en Agar sangre, o agar chocolate (Gc), Agar EMB de

Levine, Caldo Thioglycolato. (Permite el crecimiento de distintas cepas
bacterianas para orientarnos en el análisis)
Incubación durante 24h en microaerofilia A 35oC
Se observan las Características Se observan las Características de

las colonias (Agar) las bacterias (Frotis-GRAM).
(B – hemolisis)
S. agalactiae
Pruebas:
- Bacitracina,
- CAMP (incubación 24h 35oC)
Anaerobiosis.
Si CAMP está positiva y Bacitracina resistente: S. agalactiae
Si CAMP está negativa y Bacitracina sensible: S. pyogenes.
Si negativa para ambas, otras especies como Enterococos, Grupo D, Viridans.
pág. 47
“Una misma bacteria puede causar varios tipos de infección, y varias bacterias
pueden causar el mismo tipo de infección.”
ALFA HEMOLÍTICOS:
Streptococcus pneumoniae:
No se clasifican en grupos porque NO POSEEN CARBOHIDRATO C.
Producen una hemolisis Alfa, es decir, no lisan totalmente a los eritrocitos,
ni degradan completamente la hemoglobina, produciendo un halo verdoso
alrededor de las colonias en las placas de agar sangre.
Se desarrolla mejor en Microaerofilia, en ambientes de 5 – 10% de CO2.
Son de forma lanceolada, u ovalada, no son completamente esféricos, y se
presentan en forma alargada. Comúnmente llamados neumococos.
Se forman en parejas (Diplococos) en placas de agar sangre. Son Gram
positivos.
Habitan como flora normal de la mucosa nasal y faringe, de manera
preferente en la nasofaringe posterior.
Poseen una capsula que permite la clasificación y tipificación
antigénica de los misma con antisueros específicos.
Alrededor de cada colonia se observa una zona de aclaramiento. Esa
zona corresponde a la Cápsula. Es decir, la capsula de S. pneumoniae se puede
observar al microscopio óptico común. Este es su principal factor de
virulencia. Hay más de 90 serotipos de este polisacárido.
El material capsular permite que eludan la fagocitosis. La vacuna
antineumocócica disponible contiene polisacáridos capsulares de cada uno de
los 23 serotipos asociados con más frecuencia a esta enfermedad.
La vacuna antineumocócica se realiza a partir de antisueros con
anticuerpos generados contra los diferentes serotipos de capsulas de S.
pneumoniae. Además, provee protección importante, sin embargo, esta
pág. 48
protección se ve reducida en personas con enfermedades o cuadros clínicos

de base (linfomas, HIV, transplante renal, esplenectomía.)
Las vacunas son creadas de acuerdo a los serotipos comunes de los
lugares en que son creadas. Lo que quiere decir, que una persona inmunizada
contra algún serotipo de S. pneumoniae puede ser infectado por otro serotipo
de la misma bacteria.
FERMENTAN LA GLUCOSA, PRODUCIENDO ÁCIDO LÁCTICO
(FERMENTADOR HOMOLÁCTICO).
Son sensibles a la optoquina, lo que los diferencia de S. viridans ya que
estos no son sensibles a la optoquina.
CARACTERÍSTICAS:
- Diplococos lanceolados Gram Positivos.
- Capsulado (polisacárido). Hasta la actualidad hay más de 90 serotipos
basados en el polisacárido de las capsulas.
- El desarrollo bacteriano se facilita con el ambiente.
- Se desarrolla mejor en MICROAEROFILIA (5-10%CO2)
Locales (hábitat natural o cerca del mismo):
- Otitis, sinusitis.
Invasivas (cuando la bacteria entra al torrente sanguíneo e infecta otras
zonas):
- Neumonía, meningitis, sepsis, artritis, peritonitis.
IMPORTANTE:
Streptococcus pneumoniae es el primer causal de NEUMONÍA TÍPICA
EN PACIENTES DE LA COMUNIDAD.
Refiere a que es el causante de neumonía típica en pacientes no

hospitalizados, es decir, del común.
pág. 49
- Adherencia a las células a las que les producirán daño (pilis o fimbrias).
- Cápsula polisacárida. SU PRINCIPAL FACTOR DE VIRULENCIA.
Antifagocitaria, inhibe la activación de complemento.
- Neumolisina: Toxina que destruye la membrana de los glóbulos rojos,
responsable de la hemolisis visible (halo verdoso) apreciable en el agar
sangre, e inhibe la fagocitosis.
- Neuraminidasa: Enzima que hidroliza las glucoproteínas y
glucopéptidos celulares, ayudando a la diseminación y multiplicación.
- Proteasas IgA: Impide la acción de la inmunoglobulina A. En este caso
IgA1 (presente o predominante en suero). Facilita la adherencia y
colonización inicial.
Los niños son más propensos a infección por S. pneumoniae debido a

que sistema inmune aún no está completamente desarrollado, y
justamente el anticuerpo que hereda el bebé es IgA a través de la leche
materna. Esto implica que la destrucción de este anticuerpo permite la
proliferación e invasión por parte de esta bacteria.
Su virulencia viene dada por la cápsula bacteriana, y su capacidad de
multiplicación en los tejidos.
FACTORES DE RIESGO:
- Virulencia Intrínseca. Algunas cepas de esta bacteria son más
virulentas que otras. Esto implica, que si la cepa es más virulenta, la
enfermedad será más grave.
- Intervalo de colonización y comienzo de enfermedad (Mientras más
corto sea el tiempo entre el cual comenzó la colonización, y el tiempo
en que se manifestó la enfermedad, esta por supuesto, será más severa).
- Entorno: Colegios, guarderías, universidades. El hacinamiento, las
altas temperaturas, crean mayor propensión a la colonización,
desarrollo, e infección por parte de S. pneumoniae.
pág. 50
- Edad: Es más frecuente en niños y en ancianos, ya que tiene en sistema

inmune más debilitado.
- Inmunocomprometimiento e inmunosupresión.
EPIDEMIOLOGÍA:
- Productora de enfermedades a nivel mundial.
- Existen cepas resistentes a la penicilina y antibióticos de uso común.
- ES LA PRINCIPAL CAUSA DE NEUMONÍA EXTRA-
HOSPITALARIA.
- Los tipos 1-8 son causantes de casi el 75% de neumonía neumocócica,
decesos en casos de bacteriemia neumocócica.
- SEGUNDA CAUSA DE MENINGITIS A NIVEL MUNDIAL.
- Es agente causal de Otitis media.
- Agente causal de sinusitis (La sinusitis es principalmente causada por
bacterias anaerobias, pero puede ser causada también por S.
pneumoniae. EN ESTE CASO, SI EL MEDICO SOSPECHA QUE LA
INFECCION VIENE DADA POR ESTE BACTERIA, SOLICITA
UN ANÁLISIS DE MUESTRA DE HISOPADO NASAL. Si
sospecha que es anaerobia, solicita un hemocultivo.
- Resistencia heterogénea a muchos tipos de antibióticos, incluyendo
betalactámicos, cloranfenicol, etc.
- Resistencia a la penicilina: cepas PEN-I, PEN-R.
DIAGNÓSTICO:
- Colonias redondas, alargadas (a las 24h de la siembra en agar) y
mucosas (la mucosidad depende del tamaño de la cápsula; mientras la
capsula es de mayor tamaño, se nota mayor mucosidad en las colonias
crecidas en agar.).
- Producción de halo verdoso alrededor de las colonias (alfa hemólisis).
- Aspecto umbilicado (centro hundido) a 48h.
- Sensibilidad a la optoquina (clorhidrato de etilhidrocupreína).
Mayor a 14mm.
pág. 51
La sensibilidad a la optoquina, permite diferenciar a S. viridans de S.

pneumoniae, debido a que estos tienen un desarrollo bacteriano similar,
pero S. viridans no es sensible a la optoquina (No se realiza
antibiograma).
Actualmente, el S pneumoniae ha creado resistencia a la optoquina. Para
confirmación, se realiza la prueba de solubilidad en bilis.
- Solubilidad en bilis: Ocurre lisis bacteriana de S. pneumoniae por
exposición a sales biliares al (10%).
 En un tubo de ensayo con caldo bilis al 10%, se agregan colonias
bacterianas (se observa turbidez). Se guarda en estufa a 35oC
durante 30min.
Si al finalizar el plazo, ya no se observa turbidez, sino transparencia en

el caldo, se confirma el diagnostico de S. pneumoniae. En caso
contrario, la bacteria no es S. pneumoniae.
pág. 52
ESQUEMA DE TRABAJO: Paciente con neumonía.
Tipo de muestra: ESPUTO

Se realiza coloración de Gram,
Se reporta polimorfonucleares,
(mayor a 40% la muestra es ideal),
Mononucleares, (cuantificados)
Inoculación: Agar sangre
Cuando se hace Gram de esputo, no nos
Agar chocolate, Mc. Conckey, interesa reportar al médico las bacterias
que se están apreciando. Interesa saber
EMB de Levine. cuánta cantidad de polimorfonucleares,
mononucleares, se están observando y
reportarlos cuantificadamente.
Se incuba 24h, 35oC (Microaerofilia 5 -10% CO2) Si la muestra es de esputo NO SE LE

COLOCA CALDO DE
ENRIQUECIMIENTO antes de
sembrarlo.
Tinción Gram a partir de colonias.
Se siembra en agar chocolate, agar
sangre (QUE SON LOS
PRINCIPALES), pero también en
Observación de las características de las colonias EMB de Levine, Mc. Conckey, (estos
que crecieron en el agar (Macroscópica). son medios selectivos).
El antibiograma se realiza en AGAR

SANGRE, ya que estas bacterias no
Identificación bioquímica: crecen en un medio que no contenga
sangre.
- Optoquina
Si la prueba de optoquina es resistente,
- Solubilidad en bilis. se debe investigar otras posibilidades,
porque el único estreptococo alfa
hemolítico productor de neumonía
típica es S. pneumoniae.
Si es sensible S. pneumoniae.
En la observación macroscópica se
Se realiza el ANTIBIOGRAMA. observa mucosidad y alfa hemolisis.
Ceftriaxona, cefotaxima, eritromicina,

tetraciclina y cloranfenicol
pág. 53
La tasa de los adultos portadores es de un 29% y la tasa de portadores

infantiles hasta un 60%. En preescolares es más elevada llegando hasta un
97%.
Produce alta morbilidad en adultos mayores de 75 años.
La mayor incidencia de infecciones pulmonares neumocócicas la poseen
pacientes con enfermedades de base, diabéticos y alcohólicos.
Si la cepa es resistente a la penicilina, debe determinarse la C.I.M.
PREVENCIÓN:
Pacientes esplenectomizados deben poseer la vacuna antineumocócica
obligatoriamente.
Vacunación a viajeros.
Vacunación a niños.
Vacuna conjugada antineumocócica (contiene polisacáridos capsulares con la
proteína CRM [197] de la difteria) en recién nacidos.
El personal médico debe estar vacunado.
pág. 54
ESTREPTOCOCOS ALFA HEMOLÍTICOS
GRUPO viridans.
Son resistentes a la optoquina.
Crean un halo verdoso en el agar o alfa hemólisis.
Cocos Gram positivos en cadenas.
Constituyen parte de la flora normal del tracto respiratorio superior y el
tracto urogenital.
- S. mitis.
- S. mutans
- S. oralis.
- S. sanguis.
- S. salivarius.
- S. milleri o intermedius.
Hábitat: Cavidad oral.

Cuando el sistema inmune está debilitado, por un cepillado busco, estas
bacterias que forman parte de la flora normal de la boca, pueden penetrar al
torrente sanguíneo a través de la lesión provocada por la erosión, y causar
una infección.
- Son causantes de caries, las cuales son una puerta de entrada para la
colonización e infección de estas S. sanguis.
- Producen infecciones por lesiones en la mucosa oral.
- Infecciones en boca, absesos periodontales y periapicales.
- Bacteriemias persistentes que requieren hemocultivos seriados.
- Endocarditis bacteriana, particularmente en individuos con las
válvulas cardíacas dañadas. Constituyen el agente causal del 30 a 40%
de endocarditis bacteriana subaguda.
pág. 55
- Asociado a infecciones en prótesis valvulares.

- Absesos cerebrales.
- Absesos paravalvulares.
- Glomerulonefritis asociada a complejos inmunes circulantes.
- Meningitis (menos frecuente).
- Síndrome de Distrés Respiratorio del Adulto.
- Hipotensión y shock asociado a SDRA.
- Epiglotitis.
- Artritis séptica.
- Osteomielitis vertebral secundaria a bacteriemia.
- Pericarditis y queratitis infecciosa cristalina.
El S. viridans puede aislarse poco frecuentemente en casos de neumonías y
meningitis en pacientes inmunocomprometidos.
SINTOMAS:
- Fiebre
- Cansancio
- Pérdida de peso
- Soplos cardíacos.
En casos de endocarditis se toma muestra de sangre para hemocultivo.
En casos de hemocultivo se guarda la muestra en su frasco para hemocultivo,

se espera el cumplimiento de las 24h en incubación en estufa, y se obtiene la
muestra. Cuando no se aprecia turbidez visible, se debe realizar el repique a
ciegas, para obtener la carga bacteriana que va a ser sembrada en medio
sólido.
En caso del Grupo viridans, puede que se realice una tinción de Gram y se
observen cocos gram positivos en cadenas, sin embargo, estas bacterias no
crezcan en agar. Esto se debe a que en este grupo hay una cepa bacteriana
que es Piridoxaldependientes.
- Los estreptococos piridoxaldependientes necesitan Vitamina B6 para
desarrollarse y crecer.
¿Qué se hace? Antes de tomar la muestra, al frasco de recolección debe
agregársele vitamina B6, luego se procede a incubar el frasco de la muestra
pág. 56
en la estufa, y de ese frasco se toma la porción bacteriana que va a ser

sembrada en el agar. Esta es la única forma de que las bacterias crezcan en el
medio sólido (agar sangre) al ser sembradas.
FACTORES DE VIRULENCIA
- Fimbrias que median la adherencia bacteriana, agregación y

conjugación.
- Cápsula bacteriana que resiste a la fagocitosis.
- Glicocálix (también llamado pseudocápsula), interviene en la
formación de sarro dental, forma placas en superficies protésicas o
inertes, también lo proseen los Staphylococcus coagulasa
negativos.
- Ácidos lipoteicóico y teicóicos que permiten la adhesión de carácter
antigénico.
- Carbohidratos que permiten la adhesión, agregación y conjugación.
- Proteínas parietales que permiten la colonización tisular y formación
de placa bacteriana en superficies inertes y membranas epiteliales.
- Glucosiltransferasas: Enzimas que hidrolizan la sacarosa de la dieta
(un disacárido de glucosa y fructosa) y une los residuos de glucosa
entre sí, por medio de uniones alfa-1,6 y alfa-1,4, glucosídicas, para
formar glucanos insolubles. Estos confieren la propiedad a la bacteria
de adherirse a las superficies lisas de los dientes y formar la placa
dentaria.
Anteriormente, se trataban todos los casos de infecciones por S.
viridans con penicilina, pero se han visto cepas resistentes a la misma, por lo
cual se realiza antibiogramas con alguna penicilina, cefotaxima, ceftriaxona,
imipenem, vancomicina, eritromicina, y tetraciclina.
Para su detección, se realiza la prueba de la optoquina. Es resistente a
la optoquina.
pág. 57
GRUPO D
ENTEROCOCOS.
Anteriormente, los enterococos pertenecían al grupo D, debido a que

producen las mismas infecciones
- Bacteriemias
- Infecciones urinarias.
Cuando se hacen estudios de alimentos para el consumo humano, uno de los
microorganismos que se evalúan con mayor entereza es el género
Enterococos.
Los animales son sus principales portadores.
IMPORTANCIA DE SU ESTUDIO:
Poseen una elevada resistencia a múltiples antimicrobianos, incluyendo a la
Ampicilina y Vancomicina.
El personal asistencial hospitalario, es el principal agente de diseminación de
estos microorganismos, entre el resto del personal y los pacientes, que luego
los transmiten a la comunidad.
GRUPO D:
- S. bovis
- S. equinus
- S. bovis (subespecie) gallitycus. Esta especie fermenta el Manitol
(Manitol positivo), causante de endocarditis bacteriana y carcinoma
de colon.
 Todos los estreptococos del grupo D no son hemolíticos, y son

PYR negativos.
 Se desarrollan en presencia de bilis e hidrolizan esculina
(positivos para bilis y esculina).
 No crecen o se inhiben en presencia de NaCl al 6.5%.
 Son parte de la microflora normal intestinal.
pág. 58
Pyr - A - Enterococos.
Prueba rápida, utilizada fundamentalmente para la identificación de Streptococcus pyogenes y Enterococcus spp.
Es útil para la caracterización preliminar de Streptococcus, Enterococcus y de microorganismos similares a estreptococos.
Fundamento
Los discos contienen el sustrato: pirrolidonil-beta-naftilamida, y la prueba consiste en determinar la presencia de la enzima l-
pirrolidonil arilamidasa .
Los microorganismos que contienen dicha enzima, pueden hidrolizar el sustrato presente en los discos en forma rápida, con
liberación del grupo pirrólico, el cual, reacciona con el reactivo revelador: N-N dimetilamino cinamaldehído.
Esta es una prueba presuntiva específica tanto para los estreptococos b hemolíticos del grupo A, como para los Enterococcus spp; y
permite diferenciar los estreptococos del grupo A de otras especies de Streptococcus.
Es altamente sensible y reemplaza a la bacitracina y a la prueba de tolerancia a la sal (crecimiento en NaCl al 6.5%).
A menudo se usa esta prueba junto con la prueba de leucinaaminopeptidasa (LAP).
Debe tenerse en cuenta que algunas especies de Staphylococcus (S. lugdunensis, S. scheleiferi, S. haemolyticus y S. intermedius) son
generalmente PYR positiva, por lo que se puede utilizar para diferenciar Staphylococcus.
Metodología
Siembra
A partir de un cultivo puro, hacer una suspensión densa en 50 µl de solución fisiológica estéril, y agregar un disco de PYR-A-
ENTEROCOCOS.
Incubación
Durante 30 minutos a 35-37 °C, en aerobiosis.
Cuando se utiliza para diferenciar Staphylococcus, la incubación se debe realizar, según algunos investigadores, durante 2 horas a
35–37 ºC, en aerobiosis.
-Agregar una gota de reactivo revelador.
-Dejar a temperatura ambiente, hasta 5 minutos.
Resultados
Positivo: observación de color rosa-rojo en el disco.
Negativo: la suspensión y/o el disco permanecen incoloros o de color amarillo.
VANCOMICINA
Microorganismos Hemólisis PYRasa Disposición
(30ug)
Estreptococo grupo A ß + S Pares o cadenas
Estreptococo grupo B ß, g, a - S Pares o cadenas
Estreptococo grupo C ß - S Pares o cadenas
Estreptococo grupo G ß - S Pares o cadenas
S. grupo viridans a, g - S Pares o cadenas
Enterococcus spp. a, ß , g + S Pares o cadenas
Pares, tétradas, cadenas,
Gemella spp. a, g + S
acúmulos
Aerococcus viridans a, g + S Pares, tétradas, acúmulos
Pediococcus spp. a, g - R Pares, tétradas, acúmulos
Lactococcus spp. a, g -(2) S Pares o cadenas
Leuconostoc spp. a,g - R Pares o cadenas
Observaciones: +: Más del 90% de las cepas presentan reacción positiva.

-: Menos del 10% de las cepas presentan reacción positiva.
* (2) Lactococcus garviae es la única especie de Lactococcus que da la prueba del PYR positiva.
* Cualquier zona de inhibición alrededor del disco de vancomicina se considera sensible.
Limitaciones
Siempre se debe correlacionar los resultados positivos con las características de la colonia y la disposición en la coloración de Gram
a partir de medio líquido, debido a que no solo los estreptococos Grupo A y Enterococcus spp. Son los únicos microorganismos que
dan positiva la prueba: algunas bacterias no hemolíticas tales como Aerococcus viridans (100%), algunas especies de lactobacillus (7%),
algunas especies de gemella (73%), los estreptococos con deficiencia nutricional, algunas cepas de estreptococos Grupo C y G dan
positiva la prueba, y Facklan encontró también, que el 4% de las cepas de S. viridans son positivas para la prueba PYR.
pág. 59
Los Estreptococos grupo D presentan el ácido lipoteicóico del grupo D en

sus pareces celulares.
El S. bovis está presente en las heces de personas infectadas.
Manifestaciones Clínicas:
El S. bovis en circulación sanguínea trae patologías tales como:
- Bacteriemia.
- Endocarditis asociada a enfermedad hepática.
- Endocarditis de válvulas naturales y protésicas.
- Carcinoma de colon.
- Enfermedad inflamatoria intestinal,
- Diverticulitis
- Pólipos colónicos.
- Colitis ulcerosa idiopática
- Enterocolitis crónica por radiación.
- Meningitis
- Abscesos cerebrales
La mayoría de estos patógenos son sensibles a la penicilina, pero se han
hallado algunas cepas con resistencia a la misma, por lo cual debería hacerse
antibiograma.
Antibióticos de recomendación para Antibiograma:
Aminoglucósidos:
- Amikacina
- Netilmicina
- Tobramicina
- Gentamicina
- Estreptomicina
 Ampicilina
 Cefalosporinas
 Vancomicina
pág. 60
ENTEROCOCOS:
Cocos gram positivos.

Habitantes normales del tracto gastrointestinal y biliar, y en menor cantidad
la vagina y la uretra masculina.
Son importantes agentes causales de infecciones adquiridas en la comunidad
y nosocomiales, y bacteriemias nosocomiales.
Poseen resistencia a las cefalosporinas y penicilinas de diversas generaciones,
aminoglucósidos, y a la vancomicina.
Tienen acido teicóico del grupo D de Lancefied en su pared celular.
Por lo general no son hemolíticos, pero a veces pueden generar hemolisis
alfa.
Son PYR positivos.
Crecen en presencia de bilis, e hidrolizan la esculina (positividad para
esculina biliar).
Crecen en NaCl al 6.5%
Se desarrollan bien a temperaturas entre 10 a 45oC.
Se desarrollan a pH de 9.6
Son más resistentes a la penicilina G que los estreptococos.
Algunas cepas (pocas) contiene plásmido que codifica la síntesis de
Betalactamasa.
Cepas resistentes a la vancomicina.
LOS FACTORES QUE DETERMINAN SU PATOGENICIDAD NO SE
CONOCEN ESPECÍFICAMENTE.
Algunos que se han encontrado:
- Citolisinas (una forma de hemolisina frente a eritrocitos humanos).
pág. 61
- Sustancia de agregación: Proteína ligada a la superficie, codificada por

un plásmido que produce la aglutinación de microorganismos para
facilitar el intercambio de plásmidos. Interviene en la adherencia a
membranas epiteliales, colonización y multiplicación bacteriana.
- Feromonas, péptidos pequeños secretados por microorganismos que
producen trasferencia de ADN plasmídico por conjugación entre cepas.
Quimiotaxis para neutrófilos, lo que colabora con el aumento de la
respuesta inflamatoria.
- Ácidos lipoteicóicos también actúan como factores de virulencia,
produciendo factor de necrosis tumoral.
- Bacteriocinas: AS-48 posee actividad lítica para un amplio espectro de
bacterias gram positivas y gram negativas.
- Gelatinasa y hialuronidasa que contribuyen a la diseminación del
microorganismo.
- Bacteriemia
- Endocarditis
- Infecciones agudas del tracto urinario
- Infecciones intraabdominales y pelvianas.
- Infecciones en tejidos blandos y heridas,
- Sepsis neonatal.
- Meningitis (raramente) asociado a enfermedades de base.
- Cistitis
- Pielonefritis
- Prostatitis
- Absesos perinéfricos
FACTORES DE RIESGO:
- Inmunosupresión e Inmunocomprometimiento.
- Diabetes.
- Edad (niños y neonatos)
- Tumores malignos
pág. 62
- Infecciones de base
- Intervenciones quirúrgicas previas infectadas en cavidad abdominal,
tracto gastrointestinal, urinario o respiratorio.
- Uso de antibióticos de amplio espectro.
La sepsis enterocócica neonatal tiene un inicio precoz acompañado de fiebre
y Distrés respiratorio infantil. Siendo más frecuente si tienen algún
dispositivo de acceso perinéfrico o sondas para alimentación.
Producen entre el 5-10% de todos los casos de endocarditis, y son la quinta
causa más frecuente de endocarditis protésica valvular.
ANTIBIOTICOTERAPIA:
Tienen CIM elevada para penicilinas y cefalosporinas.
Resistencia a la vancomicina (E. feacaclis, y E. faecium)
No son sensibles a la sinergia.

Susceptibilidad a trimetropin sulfametoxazol (TMP-SMZ) in vitro,
pero resistencia in vivo debido a que utilizan folatos del medio para
inactivar los antimicrobianos.
Para antibiograma: LOS MISMO ANTIMICROBIANOS DE GRUPO D.
- Aminoglucósidos (estreptomicina)
- Gentamicina
- Penicilinas (meticilina)
- Cefalosporinas.
- Glucopéptidos.
Vancomicina y teicoplanina: Glucopéptidos, inhiben la formación de la
pared celular:
Existen múltiples fenotipos de resistencia:
 Van-A: Se manifiesta por una gran resistencia a la vancomicina y

teicoplanina.
pág. 63
 Van-B: Son resistentes a la vancomicina pero susceptibles a la

teicoplanina.
 Van-C: Moderada resistencia a la vancomicina. Es constitutivo en
especies halladas con menor frecuencia.
 Van-D: Resistencia moderada a la vancomicina y resistencia leve o
susceptibilidad a la teicoplanina.
 Van-E: Moderadamente resistente a la vancomicina y susceptible a la
teicoplanina.
pág. 64
STAPHYLOCOCUS
Género Staphylococcus:
- Cocos gram positivos

- Tendencia a agruparse en racimos
- Inmóviles (MIO negativo)
- No esporulados.
- Anaerobios facultativos (75% CO2 Y 25% DE O2)
- Nutricionalmente poco exigentes.
- Tolerantes a altas concentraciones de sal.
- Resisten la desecación.
- Crecen en medios de cultivo convencionales.
- Fermenta glucosa y carbohidratos produciendo pigmentos de un color
blanco hasta amarillo intenso.
PRUEBAS DE DETECCIÓN:
 Tinción de Gram (Gram positivos – tiñen violeta)

 Catalasa (Son catalasa positivos)
 Coagulasa (Positivo solo para S. aureus)
 DNAsa: Positivo solo para S. aureus. Halo trasparente alrededor del
crecimiento bacteriano.
 Manitol: Coagulasa positivos hidrolizan el manitol (color amarillo);
coagulasa negativos no hidrolizan el manitol (color rojo o púrpura)
 Ureasa Positivos
 Arginina y lisina: Positivos
 Novobiocina: Diferencia S. saprophyticus (resistente) de S. epidermidis
(sensible).
 Fenilalanina positivos.
 Sacarosa: Positiva.
 Trehalosa: Positiva.
pág. 65
Manitol Salado Agar.
Medio de cultivo selectivo y diferencial, utilizado para el aislamiento y diferenciación de estafilococos.

Es recomendado para el aislamiento de estafilococos patogénicos a partir de muestras clínicas, alimentos,
productos cosméticos y otros materiales de importancia sanitaria.
También, este medio puede utilizarse para el cultivo de especies halófilas de Vibrio, si no se dispone de
medios apropiados (TCBS Medio, Medio Marino, etc.), aunque algunas especies pueden no desarrollar.
Fundamento
Se trata de un medio altamente selectivo debido a su alta concentración salina. Los estafilococos coagulasa
positiva hidrolizan el manitol acidificando el medio; las colonias aparecen rodeadas de una zona amarilla
brillante. Los estafilococos coagulasa negativos, presentan colonias rodeadas de una zona roja o púrpura. Las
colonias sospechosas, se repicarán en un medio sin exceso de cloruro de sodio para efectuarles,
posteriormente, la prueba de la coagulasa.
En el medio de cultivo, el extracto de carne y la pluripeptona, constituyen la fuente de carbono, nitrógeno,
vitaminas y minerales, el manitol es el hidrato de carbono fermentable, el cloruro de sodio (que se encuentra
en alta concentración) es el agente selectivo que inhibe el desarrollo de la flora acompañante, y el rojo fenol
es el indicador de pH.
Las bacterias que crecen en un medio con alta concentración de sal y fermentan el manitol, producen ácidos,
con lo que se modifica el pH del medio y vira el indicador de pH del color rojo al amarillo.
Los estafilococos crecen en altas concentraciones de sal, y pueden o no fermentar el manitol.
Los estafilococos coagulasa positiva fermentan el manitol y se visualizan como colonias amarillas rodeadas
de una zona del mismo color.
Los estafilococos que no fermentan el manitol, se visualizan como colonias rojas, rodeadas de una zona del
mismo color o púrpura.
Fórmula (en gramos por litro) Instrucciones

Extracto de carne 1.0
Pluripeptona 10.0 Suspender 111 g de polvo por litro de agua
d-Manitol 10.0 destilada. Reposar 5 minutos y mezclar
calentando a ebullición durante 1 o 2 minutos.
Cloruro de sodio 75.0 Distribuir y esterilizar en autoclave a 118-
Agar 15.0 121°C durante 15 minutos.
Rojo de fenol 0.025
pH final: 7.4 ± 0.2
Siembra
Sembrar en superficie un inoculo denso de la muestra.
Incubación
De rutina: durante 18-24 horas a 35-37 °C, en aerobiosis.
La American Public Health Association (A.P.H.A) recomienda la incubación durante 3 días a 32 °C, en
aerobiosis.
Resultados
Microorganismos Crecimiento Características de las colonias

Staphylococcus aureus ATCC 25923 Excelente Amarilla
Staphylococcus epidermidis ATCC
Bueno Roja
14990
Escherichia coli ATCC 25922 Inhibido Inhibido
Klebsiella pneumoniae ATCC 700603 Inhibido Inhibido
Características del medio

Medio preparado: rojo
pág. 66
El género Estafilococos está constituido por 35 especies distintas, de las

cuales, S. aureus tiene la mayor importancia médica.
Crecen en casi todos los medios bajo condiciones aerófilas o de

Microaerofilia.
Otras especies (COAGULASA NEGATIVAS):
- S. epidermidis
- S. lugdunensis
- S. haemolyticus
- S. saprophyticus
Staphylococcus aureus:
- Colonias de consistencia cremosa.
- COAGULASA POSITIVA
- Las colonias están rodeadas de un halo amarillo-dorado.
- Halo de Beta hemolisis o hemolisis completa en agar sangre.
EPIDEMIOLOGÍA:
1) Entrada: Nasal (portadores), mucosas, heridas, heridas por continuidad
en la piel sana, ingestión, vía endovenosa.
2) Diseminación rápida y fácil.
3) Enfermedades: Conjuntivitis, ántrax, abscesos, endocarditis, impétigo,
celulitis, neumonías, diarrea, vómitos, endolftalmitis, otitis interna,
infecciones en prótesis articulares, infecciones urinarias, osteomielitis,
síndrome de shock tóxico, y síndrome estafilocócico de piel escaldada.
Infecciones endógenas: Ocasionadas por colonización.
- Contacto directo con objetos contaminados.
- Factores individuales.
pág. 67
Factores de colonización de portador (enfermo o sano) a otro

individuo:
En caso de que la enfermedad sea trasmitida de un individuo a otro deben
existir ciertos factores predisponentes.
- Defensas del paciente (inmunosupresión, o Inmunocomprometimiento)
- Presencias de alteración en piel y mucosas.
- Ser sometido a algún proceso quirúrgico o invasivo.
Factores de colonización dependientes de microorganismo:
Son los mecanismos que posee el microorganismo que le permiten el

colonizar un tejido, multiplicarse e invadir tejidos profundos, causando daño,
y diseminándose por el torrente sanguíneo.
Estadísticamente:
- El 20-30% de la población puede estar colonizada por S. aureus.

- En el 20% de la población esta colonización es prolongada, ya que son
portadores de S. aureus.
- En el 50% de los casos los pacientes pueden tener una colonización
intermitente, es decir, pueden pasar periodos de vida colonizados y
periodos de su vida no colonizados.
Colonización más frecuente en:
- Personal sanitario
- Diabéticos insulinodeficientes.
- Nefrópatas en hemodiálisis.
- Pacientes con enfermedades dermatológicas
- Usuarios de drogas parenterales.
pág. 68
S. aureus es un microorganismo muy importante en el ámbito

hospitalario (infecciones asociadas a los cuidados de la salud), porque es uno
de los principales agentes causales de infecciones, no sólo de piel, sino de
heridas quirúrgicas, prótesis, catéteres, llegando a producir sepsis, shock y
muerte.
RESISTENCIA:
Es frecuente hallar cepas de S. aureus de origen nosocomial resistentes a
Oxacilina y Vancomicina, que eran los antibióticos de elección para
infecciones estafilocócicas.
En el hospital Ruíz y Páez aproximadamente en el 20% de la infecciones por
cepas de S. aureus, hay resistencia a la Oxacilina. No se han hallado, cepas
con resistencia a la Vancomicina.
En ciudades como Cumaná, San Tomé, El Tigre, y Maturín, sí se han
detectado S. aureus resistentes a la Vancomicina.
- Pared celular: Compuesta por Peptidoglucano (polímeros de N-
acetilglucosaminas y N-acetilmuramicos ligados en forma cruzada):
confieren forma y estabilidad (rigidez) al microorganismo. También
actúa como endotoxina (toxina que se libera al lisarse la bacteria
desprendiendo fragmentos de lipopolisacáridos), la cual actúa como
determinantes antigénicos (TOLL TIPO 6 – Peptidoglucano, TOLL
TIPO 4 – lipopolisacáridos) que desencadenan una respuesta
inmunológica severa.
El Peptidoglucano:
 Estimula la producción de IL-1

 Estimula quimiotaxis y agregación linfocitaria.
 Activa el complemento.
 Induce la producción de opsoninas.
- Ácido teicóico: Polímeros de ribitol. Está compuesto por polímeros
de fosfatos que son específicos de especie (Está presente en todos los
estafilococos pero existen diferencias en su constitución bioquímica –
pág. 69
posición del grupo fosfato, aminas, etc.) Se encuentran en la porción

externa y median la unión del microorganismo a superficies mucosas
en general. Facilitando la unión al a fibronectina (proteína presente
en la matriz extracelular de la mayoría de los tejidos de los tejidos, o
intravascularmente).
Proteínas externas:
 Proteína fijadora de colágeno

 Proteína fijadora de fibronectina
Ambas están unidas al Peptidoglucano y median la unión o
adhesividad a los epitelios.
- Factor de agregación o coagulasa ligada (Proteína A): Activa el
complemento.
ENZIMAS:
- Catalasa
- Coagulasa: Libre y ligada.
- Hialuronidasa
- Betalactamasas
 Metalobetalactamasas
 Psenilicobetalactamasas
- Otras enzimas: Estafilocinasa: Actúa como fibrinolisina: Lisa el
coagulo.
TOXINAS:
- Alfa, beta y gamma (actúan como hemolisinas) La hemotoxina alfa
interviene en la lesión tisular alterado la permeabilidad del tejido y
ocasionando inflamación. La betatoxina degrada esfingomielina. La
hemotoxina gamma actúa en procesos diarreicos de S. aureus.
- Leucocidina de Phanton Valentine: Destruye eritrocitos humanos y
de conejo (hemolisina). Es un factor de virulencia importante en
infecciones extra hospitalarias ocasionadas por S. aureus resistentes a
la meticilina.
pág. 70
- Toxinas Exfoliativas: A y B. Son epidemolíticas (lisan las células

epiteliales). Producen descamación generalizada de la epidermis
(epidermólisis estafilocócica). Son superantígenos.
 La toxina A es producto de un gen cromosómico y es
termoestable (resiste ebullición por 20 minutos).
 La toxina B es producto de un plásmido y es termolábil.
- Enterotoxinas: Son superatígenos. Termoestables y resistentes a la
acción de las enzimas intestinales.
- TSST-1 Toxina del síndrome de Shock tóxico: Superantígeno,
produce síndromes como fiebre y afectación multiorgánica, exantema
descamativo. Se detecta en el 20% de las cepas de S. aureus.
INFECCIONES POR S. aureus:

Características clínicas: Localizado con tendencia a diseminación /
Supurativas con tendencias a absesos / Diseminadas orgánicamente.
- Puede aparecer como un grano (infección del folículo piloso o absceso).
Inflamación circunscrita y dolorosa que supura del centro y cicatriza
con rapidez cuando se drena el pus. La pared de fibrina evita la
diseminación en piel sana.
- En contaminación directa de una herida. Se disemina rápidamente.
- Luego de la diseminación sobreviene la bacteriemia, endocarditis,
osteomielitis hematógena aguda, meningitis o infección pulmonar.
- La localización orgánica conlleva a la disfunción orgánica y supuración
focal intensa.
- En intoxicación alimentaria no hay fiebre, hay diarrea autoregulada y
fiebre. Rápida convalecencia.
- Síndrome de shock tóxico, fiebre alta de ascenso brusco, vómitos,
diarrea, mialgias, exantema escarlatiniforme e hipotensión con
insuficiencia cardíaca y renal en casos más graves. Puede experimentar
recidiva.
INFECCIONES DE LA PIEL:
- Foliculítis
- Ántrax
pág. 71
- Celulitis
- Mastitis
- Impétigo
- Forúnculos
- Hidradenitis supurativa
SÍNDROMES CAUSADOS POR TOXINAS:
- Síndrome estafilocócico de piel escaldada
- Síndrome de Shock Tóxico.
- Toxinfección sanitaria o gastroenteritis.
INFECCIONES INTERNAS:
- Bacteriemia
- Septicemia
- Endocarditis
- Infecciones de las vías respiratorias
- Artritis séptica
- Osteomielitis
CULTIVO:
Crecen fácilmente en medios en cultivo convencionales.
Colonias de S. aureus crecen en agar a 37oC.
En agar sangre la producción de betahemolisis puede darse hasta varios días
después.
Colonias de consistencia cremosa.
S. aureus
- Fermenta el manitol (único entre los estafilococos)
- Se cultiva en medios que contienen NaCl a 7.5%. Este es un mecanismo de
diferenciación en una microflora mixta. Las demás bacterias se inhiben ante
la concentración de sal, sin embargo esta no.
Para detectar portadores nasales de S. aureus se utiliza agar manitol salado.
pág. 72
TIPO DE MUESTRA:
- Pus superficial
- Aspirado traqueal
- Sangre
- Liquido cefalorraquídeo dependiendo del lugar del proceso infeccioso.
TRATAMIENTO:
- Penicilinas resistentes a las Betalactamasas (Isoxazolilpenilicinas -
Nafcilina, cloxacilina, meticilina)
- Cefalosporinas de primera generación (Resistentes a las
Betalactamasas / Cefalotina, cefadroxilo, cefazolina).
- Fluoroquinolonas.
- Lincosaminas
- Aminoglucosidos
- Glucopéptidos (Vancomicina y Teicoplanina).
90% de las cepas son resistentes a la penicilina debido al mal uso de
antibióticos de amplio espectro.
65% de las cepas son resistentes a la Nafcilina.
ESTAFILOCOCOS COAGULASA NEGATIVO DE INTERÉS MÉDICO:

S. epidermidis:
Asociado a infecciones de los cuidados de la salud. Sus infecciones ocurren
en dispositivos protésicos (catéteres, válvulas auriculares, etc.) donde las
bacterias se aíslan a sí mismas formando una biopelícula y esto las hace más
resistentes al tratamiento. Es más resistente a los antimicrobianos que S.
aureus.
El 75% de las cepas son resistentes a la Nafcilina.
UREASA POSITIVA
OXIDASA NEGATIVA
FERMENTA GLUCOSA, FRUCTOSA Y LACTOSA.
pág. 73
MANITOL NEGATIVA
SENSIBLE A LA NOVOBIOCINA
DNASA NEGATIVA
S. saprophyticus: Está relacionado a infecciones urinarias.

TRATAMIENTO DE ELECCIÓN PARA COAGULASA NEGATIVOS:
- VANCOMICINA.
RESISTENTE A LA NOVOBIOCINA.
pág. 74
GÉNERO Neisseria:
Diplococos gram negativos (se tiñen de rosa

pálido).
Bacterias de interés médico:
- N. gonorrhoeae (su único reservorio es el ser humano)
- N. meningitidis. (coloniza las vías aéreas superiores en portadores, que
luego diseminan el microorganismo y causan los brotes epidémicos.)
No habitan como flora normal al humano, sin embargo N. meningitidis
puede colonizar la faringe en portadores que luego diseminaran la
bacteria causando infección.
Son exigentes para su crecimiento: NECESITAN SANGRE PARA

CRECER.
Tienen una parte aplanada, a través de la cual se adhieren o unen al otro
coco, adoptando la forma de un grano de café, redondeadas, y con
aplastamiento central.
EL GRAM SE REALIZA A TRAVÉS DE:
- Pus
- LCR
- Colonias que se obtengan en agar sangre o agar chocolate.
Inmóviles (MIO NEGATIVO)
Aerobios (crecen mejor en microaerofilia)
No esporulados
CATALASA (tiene la enzima catalasa que transforma el peróxido de
hidrogeno en H2O y O2) Y OXIDASA (fermenta la glucosa hasta CO2
gaseoso en aerobiosis) POSITIVOS
PRESENTAN FIMBRIAS (permiten la adherencia epitelial)
pág. 75
Capsulados
Exigentes para desarrollo (sólo crecen en medios que contengan sangre y
cierta humedad)
Temperatura óptima de crecimiento es de 35oC
Sensibles a la desecación, cambios de pH y temperatura.
ESPECIES NO PATÓGENAS PERO OPORTUNISTAS:
- N. sicca
- N. lactamica
- N. subflava
- N. flava
- N. perflava
- N. mucosa.
- N. flavescens
- N. cinérea
- N. polysaccharea
Forman parte de la flora normal del tracto respiratorio superior. Patógenas

únicamente oportunistas.
N. meningitidis:
1. El antígeno CAPSULAR ha permitido diferenciar a los meningococos
en 13 serogrupos:
- A, B, C, D,
- E29,
- H, I, J, K, L,
- X, Y, Z,
- W135
De estos serogrupos; A, B, C, y W135 son los serotipos presentes en las
vacunas más comúnmente porque son los que más frecuentemente
producen infecciones, las cuales siempre vienen en brotes epidémicos.
pág. 76
Importancia de la presencia de la capsula: Permite clasificarlos, y la creación

de vacunas antimeningocócicas.
OTROS ANTÍGENOS:
2. Proteínas de membrana externa
3. Antígeno lipopolisacárido (endotoxina)
4. Pilis o fimbrias.
Los antígenos capsulares y lipoproteínas son los responsables de la
virulencia del microorganismo.
Los pilis y la cápsula facilitan la fijación al tejido en donde van a producir el
daño, e invasión a las células de las mucosas.
Cuando un paciente tiene meningitis, puede también desarrollar una sepsis, y
uno de los síntomas de la sepsis es la formación de petequias (o púrpuras),
las cuales pueden tornarse oscuras. Estas son únicas del género y especie
Neisseria meningitidis.
A partir de las petequias también se puede cultivar al microorganismo.
Las endotoxinas son las responsables de la formación de las petequias.

La capacidad invasiva de la bacteria
Porinas o Proteínas Por (que permiten la entrada de nutrientes hacia la
bacteria, y la expulsión de antimicrobianos.
Lipooligosacárido (LOS): Actúa también como endotoxina. Está
relacionado en gran parte con la toxicidad de las infecciones. Relacionado
con hipotensión, fiebre elevada, shock y muerte.
Endotoxina: Resistencia a la propiedad bactericida del suero.
La cápsula impide la fagocitosis.

Proteínas OPA: Interviene en la adhesión a los receptores de las células
hospedadoras.
pág. 77
CUADROS CLÍNICOS:
1) Rinofaringitis: Goteo nasal trasparente. Muy contagiosa. Entre el 60-
80% de la población adulta presenta anticuerpos contras las cepas
productoras de rinofaringitis en suero, por lo tanto hay menos
propensión a la adquisición de la misma en estos adultos.
2) Meningitis: Se puede presentar en dos formas.
a. Sin podromos: Sin signos y síntomas previos a la enfermedad
(inicio brusco).
b. Meningitis precedida de rinofaringitis, fiebre, etc.
MENINGITIS:
Incubación: El periodo de colonización tarda entre 3-10 días.

Antes de las 48h de iniciado el tratamiento antimicrobiano, el paciente aún
puede, mediante tos, estornudos (…) diseminar cepas patógenos en el medio.
SIGNOS Y SÍNTOMAS:
- Comienzo repentino con hipertermia
- Fiebre
- Cefalea intensa
- Fotofobia
- Náuseas
- Vómitos en escupitajo (vomito que se expulsa de forma violenta).
- Rigidez en la nuca.
- Mal estado general.
- Petequias en sepsis.
Evoluciona a estado de coma en pocas horas.
 Sepsis meningocócica o menigococemia: Síndrome febril con dolores

articulares, exantema y petequias (desde purpúreas hasta negruzcas).
pág. 78
 Sepsis o meningococemia sobreaguda/fuminante: Con purpúrea,

exantema hemorrágico, y shock llamado “Síndrome de Waterhouse –
Friedrichsen”, el cual consisten en coagulación extravascular
diseminada y colapso circulatorio.
Menos frecuentes:
- Artritis
- Conjuntivitis purulenta.
- Neumonía
N. meningitidis es un patógeno exclusivo del humano.
La enfermedad incrementa en frecuencias en dos periodos del año (invierno y

primavera)
Afecta con más frecuencia a niños de corta edad, pero no todos son afectados
por esta infección, y pueden estar exentos a esta enfermedad.
El hacinamiento incrementa la posibilidad de sufrir esta enfermedad, y se
contagia por gotitas de Plügge.
La enfermedad se presenta en brotes epidémicos.
La trasmisión viene dada por:

- Enfermos
- Portadores sanos (a nivel nasofaríngeo).
El humano es el único reservorio.
SEROGRUPO B: Afecta a niños menores de 4 años. Ha desarrollado

resistencia a antibióticos de uso común.
SEROGRUPO C: Afecta a niños mayores de 4 años.
En el cinturón del Sahara en África es endémico el SEROGRUPO A.

El recién nacido está protegido por IgG materno, si nace por el canal del
parto.
ES NECESARIO REALIZAR ANTIBIOGRAMA debido a que ha creado
resistencia a la penicilina: En agar sangre (porque la bacteria no crece en un
medio que no contenga sangre).
pág. 79
ESQUEMA DE PROCESAMIENTO:
Tipo de muestra: LCR, Sangre (en caso de sepsis)
Inoculación en agar sangre o chocolate

Incubación a 35oC Microaerofilia
A las 24h: Se realiza GRAM (-)

Se observan las características (colonias) A partir de las colonias.
- Transparentes (en ambas especies) Diplococos en cadenas.
- En agar chocolate se observan
grisáceas.
Con un palillo de madera se toma una porción para:

- Oxidasa (positiva)
- Fermentan la glucosa y maltosa.
- No fermentan latosa ni sacarosa. (Sacarosa negativa).
Kligler(taco amarillo, bisel rojo)
Neisseria meningitidis.
El diagnostico definitivo lo ofrece el cultivo y las pruebas de
identificación.
OTRAS PRUEBAS (DIAGNÓSTICO INDIRECTO):

Observación del frotis con inmunofluorescencia.
Test serológico con muestra LCR.
Aglutinación en LCR.
(Estas son pruebas de determinación o diagnóstico indirecto, el diagnostico
final lo tiene el cultivo y las pruebas de identificación bioquímica).
pág. 80
FARMACOS PARA ANTIBIOGRAMA:

- Penicilina
- Ampicilina o amoxicilina
- Cloranfenicol
- Cefalosporinas de tercera generación: Cefotaxima, ceftriaxona (Menor
actividad contra gram positivos, mayor actividad contra gram
negativos. Permiten identificar BLEE y mecanismos de resistencia).
Se realiza en agar sangre.
Es importante hallar la concentración mínima inhibitoria (CIM)
IMNUNOPROFILAXIS (VACUNACIÓN):
Se previene mediante el uso de vacunas (niños, ancianos, personal de
salud en especial).
La enfermedad meningocócica invasiva se previene mediante la
vacunación. La eficacia está comprobada para vacunas de los serogrupos A Y
C, aún o ha sido comprobada para el serogrupo B.
QUIMIOPROFILAXIS (ELIMINAR SU PRESENCIA (N. meningitidis) EN

PORTADORES SANOS):
Se toman muestras de exudado faríngeo para detectar al portador.
Esto se realiza sólo en personas más cercanas al contacto con el tracto
nasofaríngeo del paciente.
El antibiótico recomendado para tratar al portador es penicilina,
eritromicina o rifampicina, o una quinolona (ciprofloxacina,
levofloxacina), para eliminar su estado de portador.
Al médico tratante y enfermeras se les somete a tratamiento con
rifampicina para evitar el contagio y la diseminación a la comunidad.
pág. 81
N.gonorrhoeae:
Agente causal de la gonorrea.
La gonorrea es causante de una secreción purulenta matinal a través de la
uretra peneana.
En mujeres no se observa secreción, se necesita la prueba del Papanicolaou.
En recién nacidos (que nacen a través del canal del parto), pueden existir
infecciones oculares llamadas Oftalmías gonocócicas u oftalmia neonatorum.
La bacteria:
- Exigente para el desarrollo
- Sensible a factores ambientales.
- Su trasmisión se realiza a través del contacto mucosa-mucosa.
Medio de cultivo para su crecimiento: Debe tener sangre.
Cuando la muestra es tomada de un medio que contiene una amplia
flora bacteriana, se debe sembrar la muestra en un medio selectivo, que
impida el crecimiento bacteriano en la mayoría de las bacterias
colonizadoras, excepto en las posibles sospechosas que son las de interés
clínico.
MUESTRAS: Secreción matinal, muestra de secreción endocervical.
 AGAR THAYER MARTIN: Permite la muestre de los cocos gram

positivos, bacilos gram negativos, y hongos (VCN):
 V – Vancomicina: Cocos gram positivos
 C – Colistín: Bacilos gram negativos
 N – Nistatina: Hongos.
 Para cultivos de zonas estériles se utiliza agar sangre o chocolate.
En caso de una secreción uretral masculina se puede informar
GONORREA, al ver el frotis a partir de la muestra y observar:
1) Diplococos gram negativos en gran cantidad

2) Abundantes polimorfonucleares.
Solo en caso de secreción uretral del hombre.
pág. 82
En caso de un gram de secreción endocervical no se informa gonorrea,

debido a que la mujer en la vagina tiene una bacteria como colonizadora
normal, de características muy similares a N. gonorrhoeae, llamada
Acinetobacter baumanii, la cual puede ser causante de confusión al momento de
la observación del GRAM.
De esta manera, en la mujer siempre debe esperarse el cultivo para dar
un informe.
1) Infección localizada: Lesiones localizadas en la mucosa del aparato
genital. Suscritas al aparato genital.
En mujeres a veces no se observa el flujo, o en otras oportunidades se aprecia
un flujo verdoso. Esto se debe a los intrincados pliegues cervico-uterinos de
la mujer, que no permiten la salida de este flujo hacia el exterior.
En hombres, la secreción es visible y matinal.
2) Infección diseminada: Se propaga con contigüidad a los órganos
vecinos o por vía sanguínea a órganos distantes. Más frecuente en
mujeres.
OTRAS SINTOMATOLOGÍAS:
En hombres: Ardor al miccionar, uretritis (inflamación de la uretra),
secreción purulenta matinal, disuria.
En mujeres: Localización primaria en endocervix. Muchas veces se presenta
de forma asintomática.
Las cepas necesitan de hierro para crecer. Las mujeres tenemos una enzima
que impide la captación de hierro por parte de la bacteria e impide que la
carga bacteriana infectante aumente, evitando así la hiperproducción de flujo.
La bacteria se aísla más fácilmente en mujeres mestruantes.
A veces presenta leucorrea o prurito.
pág. 83
COMPLICACIONES EN AUSENCIA DE TRATAMIENTO:
Enfermedad gonocócica aguda o blenorragia/gonococcia:

Hombre: Prostatitis, epididimitis, absesos periuretrales.
Mujeres: Enfermedad inflamatoria pélvica (EIP), salpingitis gonocócica
(Diseminación a las trompas de Falopio ocasionando fibrosis y obliteración
de las mismas), endometritis, e infertilidad en 20% de los casos de salpingitis.
LA INFECCION DISEMINADA ES MÁS FRECUENTE EN MUJERES:

- Artritis séptica (En caso de muestras de líquido sinovial o articular, la
bacteria se aprecia en el GRAM pero no crece en ningún medio de
cultivo. Se desconoce de forma precisa el por qué, se presume que el
medio es hostil – Tóxico - para la bacteria, y esta sólo se observa pero
en su forma NO VIABLE.)
- Dermatitis
- Endocarditis posterior a Gonococemia.
LOCALIZACIONESEXTRAGENITALES DE LA GONOCOCIA:
- Gonococia Anorectal
- Gonococia faríngea
- Infecciones en recién nacidos (Oftalmia neonatorum)
OTROS MEDIOS DE CULTIVO:

- Agar Thayer Martin (Agar Chocolate suplementado con VCN).
- Agar Thayer Martin modificado (Agregando STX)
- Agar NYC / New York City (Agar base peptona, almidón
suplementado con eritrocitos de caballo).
pág. 84
ESQUEMA DE IDENTIFICACIÓN:
Tipo de muestra:
Secreción cervicouterina
Secreción uretral matinal (GRAM DIRECTO MUESTRA)
Exudado faríngeo, secreción anorectal
Liquido articular (sólo se realiza GRAM)
Inoculación M.C. selectivo
35oC en Microaerofilia.
24h Se observan c. colonias: Se realiza el GRAM

- Transparentes o grisáceas. Directo de la muestra(SUM)
Pruebas bioquímicas: De la colonia (SCUF)
- Oxidasa positiva Diplococos GRAM negativos.
- Oxida carbohidratos
- Fermentan la glucosa y maltosa.
- No fermentan latosa ni sacarosa. (Sacarosa negativa).
Kligler(taco amarillo, bisel rojo)
N. gonorrhoeae.
Otras pruebas:
- Coaglutinación
- Inmunofluorescencia (observación de frotis)
pág. 85
- ELISA (ocurre reacciones cruzadas).

SUM: Secreción uretral masculina
SCUF: Secreción cervicouterina femenina
DIAGNOSTICO: Se basa en:
1) Observación directa del gram (Diplococos gram negativos)
2) Cultivo e identificación macroscópica de las colonias.
3) Cultivo / identificación fenotípica: Luego de las 24h de cultivo, se
introduce a la bacteria en caldo de glucosa, caldo maltosa, caldo
lactosa, sacarosa (sacarosa y lactosa negativo). IDENTIFICACIÓN
FENOTÍPICA: Cómo se expresa la bacteria en diferentes sustratos.
4) Antibiograma.
PREVENCIÓN:
- Diagnóstico y tratamiento precoz de los casos.
- Investigación y tratamiento de contactos.
- Exámenes periódicos a la población de alto riesgo.
- Educación sanitaria de la población.
Gonorrea y Meningitis son enfermedades de denuncia sanitaria obligatoria.
- Uso de preservativos
- Evitar promiscuidad
- Tratamiento en pareja
- Denuncia de casos y pesquisa.
- Aplicación de eritromicina en ojos de recién nacidos para que no
desarrollen la enfermedad.
TRATAMIENTO:
- Penicilinas
- Tetraciclinas
- Fluoroquinolonas
- Ceftriaxona intramuscular.
- Azitromicina.
pág. 86
Medio selectivo de Thayer-Martin para el aislamiento de Neisserias patógenas.
Fundamento
Las dificultades que presenta la recuperación de N. gonorrhoeae y N. meningitidis de los materiales clínicos, se deben a
las exigencias nutricionales de estos microorganismos, y en los materiales de origen genital, oral o anal, al desarrollo
invasor de la abundante flora saprófita. El medio de Thayer-Martin permite el correcto aislamiento y recuperación de
las Neisserias patógenas dentro de las 24 h, con una ausencia casi total de contaminantes. El medio de cultivo se
prepara a partir del Agar Base GC, con el agregado de hemoglobina, un suplemento de enriquecimiento (Britalex) y
una mezcla antimicrobiana (VCNT: Vancomicina, colistina, nistatina y trimetoprima).
Composición
1. Agar Base GC:

Este medio de cultivo se emplea como medio basal para la preparación del medio Thayer Martin original o modificado
y agar chocolate con o sin enriquecimiento.
Fórmula (en gramos por litro)
Pluripeptona 15.0
Almidón soluble 1.0
Fosfato dipotásico 4.0
Fosfato monopotásico 1.0
Cloruro de sodio 5.0
Agar 15.0
pH final: 7.2 ± 0.2
4. Mezcla antimicrobiana VCNT:

Se la utiliza en la preparación del medio T.M. como inhibidora de los organismos contaminantes. Cada ml de la
solución, agregado a 100 ml de medio de cultivo da una concentración final de:
Vancomicina 3.0 µg/ml

Colistina 7.5 µg/ml
Nistatina 12.5 U/ml
Trimetoprima 5.0 µg/ml
Incubación
Incubar las placas a 35-36°C en recipientes con cierre hermético, en cámara húmeda y atmósfera de CO2, durante 18 a
72 h. En la mayoría de los casos se obtiene un crecimiento precoz y abundante entre las 18 y las 24 h.
Identificación
Las colonias de gonococos y meningococos obtenidas en este medio selectivo son usualmente opacas, grisáceas,
convexas, de 1-4 mm de diámetro. Luego de 48 h de incubación pueden transformarse en colonias mucoides.
Coloración de Gram: diplococos Gram negativos. Se sugiere proseguir con este esquema de identificación.
Microorganismos T.M. T.M. A.N C22°C OXI GLU MAL

N. gonorrhoeae + + - - + + -
N. meningitidis + + - - + + +
Acinetobacter spp. - + + + - -* -
Neisseria spp. - + + + + V V
Moraxella spp - + V V + - -
Moraxella
(Branhamella) - + + + + - -
catarrhalis
pág. 87
ENTEROBACTERIAS:
Son colonizadoras habituales de diferentes mucosas, en especial el
tracto gastrointestinal y genitourinario produciendo infecciones a nivel de
esas localizaciones.
En enfermos hospitalizados (Nivel intrahospitalario):
Causa más frecuente de infecciones asociadas a los cuidados de la salud,
produciendo amplia variedad de cuadros clínicos.
Son responsables de in tercio de las bacteriemias, más de la mitad de
las infecciones entéricas y la mayoría de las infecciones urinarias.
TAXONOMÍA:
- Escherichia coli
- Klebsiella pneumoniae (infecciones intrahospitalarias)
- Enterobacter cloacae, Enterobacter aerogenes
- Pantoea agglomerans
- Serratia marcescens
- Hafnia alvei
- Proteus mirabilis, P. vulgaris, P. penneri.
- Providencia spp.
- Morganella morganii
- Citrobacter freundii
- Salmonella spp, Shigella spp, Yersinia spp.
SE NECESITA LA EPIDEMIOLOGÍA de un paciente para dar un

diagnostico (Criterios de Kass – Anexos)
- Pacientes embarazadas – infecciones asintomáticas
- Muestra de orina por punción suprapúbica debería ser estéril.
pág. 88
GENERALIDADES:
- Bacilos gram negativos.
- No esporulados.
- Móviles e inmóviles (Klebsiella y Shigella son atricos o aflagelados).
- Catalasa positivos
- Oxidasa negativos
- Hábitat: Tubo intestinal del hombre y animales, suelo, vegetación.
LAS PRUEBAS DE CATALASA Y OXIDASA permiten la

diferenciación de los bacilos GRAM NEGATIVOS no fermentadores de
la glucosa.
Una oxidasa es una enzima que cataliza una reacción
de oxidación/reducción empleando oxígeno molecular (O2) como aceptor de
electrones. En estas reacciones el oxígeno se reduce a agua (H2O) o
a peróxido de hidrógeno (H2O2). Las oxidasas son una subclase de
las oxidorreductasas.
- Fermentan la glucosa y en su mayoría la lactosa (Excepto Hafnia spp,
Proteus spp, Salmonella spp, Shigella spp, Yersina spp.)
- Son aerobios o anaerobios facultativos.
- Reducen nitratos a nitritos.
EN COPROCULTIVO (DIARREA) IMPORTAN MÁS LAS
BACTERIAS LACTOSA NEGATIVO. EXCEPTO:
En el caso de Proteus spp. Es colonizadora normal del intestino, es lactosa

positiva para no está asociada a procesos diarreicos.
- Pared celular: Mureina, lipopolisacárido (Endotoxina), lipoproteínas,
fosfolípidos y proteínas como porinas.
- Muchos forman cápsulas, y muchos de ellos poseen pilis o fimbrias.
pág. 89
- Cápsula: Antígeno K (Vi): Inhibición de la fagocitosis, Shigella spp,

Escherichia spp, Salmonella spp.
- Endotoxina Antígeno O
- Flagelo Antígeno H (Peritricos en su mayoría / flagelo polar).
- Antígeno factor de colonización de las fimbrias: CFA I y II.
- Fimbrias S y P.
- Resistencia a la acción bactericida del suero.
- Resistencia a los antimicrobianos.
- Exotoxinas.
pág. 90
ENTEROBACTERIAS.
Las enterobacterias se dividen en dos grupos:

1) Patógenos primarios
2) Patógenos oportunistas
(Klebsiella spp. y Escherichia spp. se ubican entre ambas clases de
patógenos.)
Patógenos primarios:
- E. coli enteropatógena
- Salmonella entérica
- Shigella: boydi, dysenteriae, flexneri, sonnei.
- Yersinia enterocolítica, pestis, pseudotuberculosis.
Oportunistas: El resto de los patógenos.
- Ampliamente distribuidos en la naturaleza y son de flora normal.

- Significancia clínica: Son causantes de infecciones intestinales y
extraintestinales/ infecciones nosocomiales/ adquiridas en la
comunidad/ exógeno y endógeno.
- Resistencia microbiana (BLEE, Carbapenemasas)
FACTORES PREDISPONENTES:
Locales:
- Intubación de la tráquea
- Litiasis renal.
- Sondas urinarias.
- Dispositivos intrauterinos.
- Litiasis vesicular.
- Perforación intestinal.
- Catéteres vasculares.
pág. 91
ENFERMEDADES QUE FACILITAN INFECCIONES

OPORTUNISTAS:
1) Diabetes
2) Cirrosis hepática
3) Hemopatías malignas
4) Insuficiencia renal.
5) Pacientes que reciben tratamientos prolongados con corticoides.
6) Pacientes con SIDA
7) Neonatos.
Escherichia coli:
Fue descrita en 1885 por Theodor Von Escherich.
Producen colonias con brillo metálico (no todas).

E. coli ENTEROPATÓGENA:
pág. 92
pág. 93
SINTOMAS
- Vómito
- Diarrea
- Dolor Abdominal
- Fiebre
- Pérdida de electrolitos que conduce a la deshidratación.
PUERTA DE ENTRADA: Boca.
PUERTA DE SALIDA: Recto.
INFECCIONES DEL APARATO URINARIO:
E. coli, causa más común de infección del aparato urinario (90% de

infecciones primarias en jóvenes sexualmente activas).
E. coli nefropatogénica produce hemolisina.
pág. 94
SEPTICEMIA:
Cuando las defensas normales del hospedero sin inadecuadas. E coli puede
producir septicemia.
Los recién nacidos son más susceptibles a septicemia por E. coli.
La septicemia puede ser consecuencia de infección en el aparato urinario.
MENINGITIS:
E. coli, causa principal de meningitis en lactantes.
Cepas de E. coli poseen el Antígeno K1.
INFECCIONES RESPIRATORIAS:
Oportunista en pacientes debilitados o inmunodeprimido (adquisición
nosocomial)
INFECCIONES INTRAABDOMINALES:
Se asila de pacientes con apendicitis perforadas (peritonitis), abscesos
secundarios a Diverticulitis.
DIAGNÓSTICO:
1) Clínica y epidemiología
2) Toma correcta de la muestra clínica
3) Medios de transporte adecuados: Stuart Modificado o Cary Blair, para
heces.
pág. 95
EXAMEN DIRECTO:
Gram excepto a las heces.
Azul de metileno para leucocitos fecales.
Cultivo en medios selectivos y no selectivos
Pruebas bioquímicas.
Pruebas de susceptibilidad.
Producción de INDOL +
ROJO DE METILO +
CITRATO DE SIMMONS -
PRODUCCIÓN DE H2S -
Presencia de UREASA -
FENILALANINA DESAMINASA -
LISINA DESCARBOXILASA +/- (Tardío)
ARGININA DIHIDROLASA -
ORNITINA DESCARBOXILASA +/-
MOTILIDAD -
Fermentación de LACTOSA +/-
Fermentación de SACAROSA -
Fermentación de MANITOL +
Fermentación de TREHALOSA +
Presencia de OXIDASA -
Producción de DNAsa -
NITRATO - NITRITO +
VOGES PROSKAUER +
TREHALOSA +
CRITERIOS:
Colonias brillo metálico.
Fermentadoras tardías de la lactosa o no fermentadoras.
No produce H2S (Kligler: Taco amarillo/Bisel rojo)
pág. 96
Pruebas fundamentales:
- Rojo de Metilo
- Indol
- Trehalosa
- Lactosa
- Citrato (Lo diferencia de Citrobacter spp.)
- Ureasa
- Voges Proskauer
ESQUEMA DE TRABAJO: E. COLI.
Tipo de muestra: Diarrea tipo secretora o invasiva (Se enriquece en caldo

tetrationato), LCR (recién nacidos), SANGRE/hemocultivo (recién nacidos),
ORINA (se siembra directamente en agar).
1) Sembrar en agar: Sangre, EMB de Levine, Mc Conckey, SS.
2) Incubar durante 24h (35ºC).
Características Macroscópicas Características microscópicas:
- Colonias Brillo metálico - Bacilos gram negativo.

(Lactosa negativo)
Pruebas bioquímicas
Antibiograma.
1) Diferenciar Microorganismos Típicos:

- Bacilos gram negativos pequeños cortos
- Capsulas grandes e irregulares de Klebsiella, menos en Enterobacter, y
poco común en otras especies.
pág. 97
2) Cultivo: Análisis macroscópico: Forman colonias lisas, circulares,

convexas, con bordes bien diferenciados.
3) Características de crecimiento/Diferenciación bioquímica:
a. Patrones de fermentación de los CHO

b. Actividad de los aminoácidos descarboxilasas y otras enzimas.
4) Características de Crecimiento:
a. Cultivo en medios diferenciales con colorantes y CHO.
Distinguen colonias fermentadoras de lactosa
(PIGMENTADAS) de las no fermentadoras (NO
PIGMENTADAS).
b. Medio de Agar Triple Hierro (TSI): Permite diferenciar a los
bacilos gram negativos entéricos.
5) Medios de cultivo de elección para aislamiento de bacilos

entéricos:
a. Medios diferenciales: Permiten el desarrollo de la mayor parte
de las especies.
i. Agar Mc. Conckey.
ii. Agar Eosina Azul de Metileno
iii. Agar Xilosa, lisina, desoxicolato (XLD).
TRATAMIENTO:
No se dispone de una terapia especifica / Sulfonamidas, ampicilinas,
Cefalosporinas, Fluoroquinolonas, y aminoglucósidos. Indispensable realizar
pruebas de susceptibilidad.
pág. 98
PREVENCIÓN:
Lavado de manos
Asepsia rigurosa, sobre todo en personal de salud.
Esterilización de equipos
Desinfección
Cuidados del aparato genitourinario.
ENTEROBACTERIAS OPORTUNISTAS:
En pacientes hospitalizados: Son causantes de brotes epidémicos.

Transmisión a través del personal sanitario.
En pacientes de la comunidad: Están relacionados con infecciones del
tracto urinario, entre otras.
En pacientes hospitalizados inmunocomprometidos en hospitales
provocan:
- Neumonías
- Sepsis
- Meningitis
- Absesos abdominales
- Infecciones urinarias.
- Infecciones en heridas expuestas.
- Lesiones del tracto digestivo inferior y rotura de apéndice: Materia
fecal se disemina y provoca infecciones (peritonitis).
Factores relacionados con auge hospitalario:
- Uso de técnicas de diagnóstico y terapias agresivas
- Estancia hospitalaria prolongada
- Desarrollo de resistencia
pág. 99
- Enfermedades predisponentes: Hematológicas, neoplasias, cirrosis

hepáticas, leucemias, hematopatías malignas, diabetes.
Klebsiella spp.
Actúa como patógeno primario y como oportunista.
- Produce colonias mucosas a las 24h de la siembra en medio de cultivo.
Productora de mucopolisacárido/ Cápsula prominente.
En Agar EMB de Levine fermenta la lactosa, y presenta un color
púrpura alrededor de las colonias en el agar.
- 100% inmóviles (MIO negativo)
- Encapsulados
- Fermentador rápido de la lactosa (Kligler taco amarillo)
- Ureasa positivo
- Citrato positivo.
FACTORES RELACIONADOS VIRULENCIA KLEBSIELLA:

- Sobrevivencia en ambientes hospitalarios (Resistencia a
antimicrobianos de uso común).
- Capsula C
- Fimbrias que median la adherencia.
- Adhesinas no fimbriales.
- Lipopolisacáridos
- Exotoxinas.
CAPSULA (Atgo K): Está relacionada directamente con su virulencia. Es
gruesa y de aspecto mucoide, impide la fagocitosis, y retrasa la migración
de leucocitos hacia el área de infección/ interviene con citoquinas.
pág. 100
TIPOS DE INFECCIÓN: Origina especialmente:

- Bacteriemias
- Infecciones urinarias
- Neumonías.
Es responsable del 14% de las infecciones intrahospitalarias.
En casos de DIARREA:
Propiedades enteroagregativas similares a las de E. coli; es decir:

- Se produce en intestino delgado
- Es responsable de diarrea infantil persistente
- Adherencia agregativa.
CRITERIOS PARA IDENTIFICAR A KLEBSIELLA COMO AGENTE

CAUSAL DE DIARREA:
- La muestra proviene de niños menores de 2 años.

- Cuando la muestra es sembrada en agar, el crecimiento bacteriano de
las colonias de Klebsiella superan el 50%.
- Estudios virales y parasitarios negativos.
- No se encontraron bacterias productoras de diarrea propiamente.
Se hace la aclaración: Se aisló Klebsiella ocupando más del 50% de las

colonias bacterianas de la muestra.
Por su propiedad enteroagregativa similar a la de E. coli ha sido considerada
como causante atípica de diarrea.
ESPECIES DE Klebsiella:
- K. pneumoniae
- K. oxitoca (diarreas en niños)
- K. Ozaneae (infecciones en cara)
- K. rhinoescleromatis (infecciones en cara).
pág. 101
En caso de NEUMONÍA: Los infectados por K. pneumoniae poseen una

enfermedad de base o preexistente (inmunocomprometidos):
- Población susceptible
- Pacientes con fibrosis quística
- Alcohólicos (Broncoaspiración de saliva, que fluya hacia el pulmón y
las bacterias presentes en la saliva causan la infección).
- Esplenectomizados (al igual que en el caso de S. pneumoniae, también
son presa fácil de adquirir infección por K. pneumoniae.)
ANTIBIOGRAMA:
Fármacos para antibiograma:
- AMC: Amoxicilina/ácido clavulánico (Centro del agar Müller-Hinton)
- IMP: Imipenem
- CRO: Cefoperazona
- CAZ: Ceftazidima
- PIP: Piperacilina
- AMX: Amoxicilina
- TIC: Ticarcilina
Sinergia entre AMC e IMP indica la presencia de BLEE.
K. pneumoniae COMO PRODUCTORA DE INFECCIONES URINARIAS:

- Pacientes con obstrucción de las vías urinarias (Litiasis renal)
- Diabetes
- Pacientes tratados con antibioticoterapia.
NEUMONÍA:
- Más frecuente en pacientes hospitalizados (A diferencia de S.
pneumoniae que es el principal agente causal de neumonía de la
comunidad, K. pneumoniae es el principal agente causal a nivel
intrahospitalario)
- Pacientes con enfermedades pulmonares preexistentes (EPOC)
pág. 102
- Alcohólicos
- Inmunocomprometimiento.
- Diabéticos
Cuando una muestra de esputo en caso de neumonía por K. pneumoniae
llega al laboratorio, posee una consistencia gelatinosa e incluso restos
de sangre.
OTRAS ENFERMEDADES QUE PUEDE PRODUCIR:

- Peritonitis Produce colonias grandes de consistencia
- Otitis media crónica mucoide con excesiva filancia.
- Cistitis Fermentadoras de la lactosa:
- Mastoiditis crónica
- Meningitis. - Se aprecian con pigmentación rosada
alrededor de las colonias en agar Mc.
UREASA POSITIVA. Conckey, y fucsia mexicano alrededor de
las colonias en agar EMB de Levine.
Pruebas Bioquímicas K. oxytoca K. pneumoniae

Producción de INDOL + -
ROJO DE METILO - -
CITRATO DE SIMMONS + +
Producción de H2S - -
UREASA + +
FENILALANINA DESAMINASA - -
LISINA DESCARBOXILASA + -
ARGININA DIHIDROLASA - -
ORNITINA DESCARBOXILASA - -
MOTILIDAD - -
Fermentación de LACTOSA + +
Fermentación de SACAROSA + +
Fermentación de MANITOL + +
Fermentación de TREHALOSA + +
NITRATO – NITRITO + +
OXIDASA DE KOVAC - -
DNAsa - -
VOGES PROSKAUER + +
pág. 103
ESQUEMA DE TRABAJO Klebsiella spp.
Muestra: Esputo (con sangre/característica clásica de neumonía por

Klebsiella), Sangre (hemocultivo), Orina (paciente inmunocomprometido
/obstrucción de las vías renales/ orina se siembra directamente en agar).
Sembrar en agar: Sangre, EMB de Levine, Mc. Conckey (Aerobiosis o

anaerobiosis/ 35ºC /24h).
Características Macroscópicas Características Microscópicas.

- Colonias grandes redondas - Bacilos Gram negativos
- Mucosas con mucha filancia
- Lactosa positiva:
o Rojo/Mc.Conckey.
o Púrpura/EMB de Levine
Pruebas Bioquímicas:
- Kligler (Taco y Bisel Amarillos)
- Ureasa (Positiva/Fucsia)
- MIO (Motilidad/Indol/Orinitina):
o Motilidad: 100%Negativa
o Indol: Negativo
o Ornitina: Negativa (Lo diferencia de Enterobacter spp.)
- Citrato: Positivo
- Lisina: Positiva
- Arginina: Negativa
- Fenilalanina: Positiva.
pág. 104
Antibiograma:
- Amoxicilina / Ac. Clavulanico
- Imipenem
- Cefoperaxona
- Ceftazidima
- Piperacilina
- Amoxicilina
- Ticarcilina.
NOTAS:
- Klebsiella oxytoca se aisla en casos de diarrea en niños menores de 2

años cuando no se encuentra ningún otro agente bacteriano causante
de forma típica de diarrea. (Indol + a diferencia de K. pneumoniae).
- Se sospecha de neumonía en pacientes hospitalizados, alcoholicos,
inmunosuprimidos o con enfermedades de base, esplenectomizados.
pág. 105
ENTEROBACTER:
TODOS BACILOS GRAM NEGATIVOS.

Se diferencian en las colonias.
SON SIMILARES A LAS COLONIAS DE Klebsiella. Se diferencian en que

las colonias de Klebsiella son muy gelatinosas y mucoides.
El género Enterobacter incluye 14 especies o biogrupos, entre los

cuales:
- E. cloacae
- E. aerogenes
Son los más frecuentes en casos de infecciones intrahospitalarias (son

más fáciles de aislar en ese medio).
Infecciones en cualquier localización del cuerpo.
- En pacientes tratados con antibióticos de amplio espectro, más
especialmente cefalosporinas.
- Presentan múltiples mecanismos de resistencia a Betalactámicos.
- Son móviles a diferencia de Klebsiella.
- Prueba de Motilidad en medio MIO O ZING POSITIVA.
Son causantes de brotes epidémicos asociados a los procesos de la salud.
Produciendo patologías tales como:
 Bacteriemias.
 Neumonía,
 Infecciones urinarias
 Infecciones de heridas quirúrgicas
Se propagan a través de las manos del personal sanitario.
pág. 106
EN AGAR MC. CONCKEY, SI LA COLONIA BACTERIANA

FERMENTA LA LACTOSA, ALREDEDOR DE LA COLONIA SE
FORMA UN HALO ROSADO. En caso de que no fermente la lactosa, el
halo será trasparente.
EN AGAR EMB DE LEVINE FORMAN UN HALO MORADO
(Alrededor de las colonias si fermentan la lactosa).
Pruebas Bioquímicas E. cloacae E. aerogenes

INDOL - -
ROJO DE METILO - -
VOGES PROSKAUER + +
PRODUCCIÓN DE H2S - -
UREASA +/- -
LISINA DESCARBOXILASA - +
ARGININA DIHIDROLASA + -
ORNITINA DESCARBOXILASA + +
MOTILIDAD + +
FERMENTACIÓN DE LACTOSA + +
FERMENTACIÓN DE SACAROSA + +
OXIDASA - -
pág. 107
ESQUEMA DE TRABAJO DE Enterobacter spp.

Muestra: Sangre/ LCR/ Orina / Esputo (neumonía intrahospitalaria) /
muestras de heridas.
Se siembra en agar: Sangre, EMB de Levine, Mc. Conckey, SS

(Aerobiosis/anaerobiosis/ 24hrs /35ºC)
Características Macroscópicas Características Microscópicas

- Colonias muy mucosas - Bacilos gram negativos
- Lactosa positivo (M.C./EMB)
Pruebas Bioquímicas (Más relevantes):
- Kligler (Fondo amarillo y bisel amarillo)

- Rojo de metilo: Negativo
- Indol: Negativo
- Motilidad: Negativa
- Voges Proskauer: Positiva
- Ureasa: Negativa (tardíamente positiva).
- Citrato: Positivo
- Ornitina: Positiva
- Arginina / Lisina (Ver cuadro de pruebas bioquímicas/Diferenciación
de especies).
Realizar antibiograma: Resistencia a Penicilinas y Cefalosporinas.
Productores de Betalactamasas.
pág. 108
Serratia spp:
Genero bacteriano oportunista.

Bacilos gram negativos.
Desarrolla colonias pigmentadas (productoras de pigmento).
Pigmento rojo: Prodigiosina.
Forma colonias rojas, naranja o rubí en Agar Mc. Conckey.
CITRATO POSITIVO
FERMENTADORA LENTA DE LA LACTOSA (+24H)
ESPECIES:
- S. marcescens
- S. rubidea
Se desarrollan mejor en ANAEROBIOSIS
- DNAsa
- Gelatinasa
- Lipasa.
ASOCIADO A INFECCIONES INTRAHOSPITALARIAS EN FORMA
DE BROTES EPIDÉMICOS.
Posee múltiples mecanismos de resistencia.
LA MAYORIA DE LAS INFECCIONES PRODUCIDAS POR
SERRATIA:
Pacientes hospitalizados:
- Infecciones urinarias, meningitis, peritonitis.
- Infecciones como osteomielitis, artritis séptica, endocarditis.
- Infecciones como linfadenitis, e infecciones cutáneas.
pág. 109
TIENE RESISTENCIA NATURAL A LA POLIMIXINA B, lo que

constituye una forma de identificación, ya que actualmente no todas las
cepas de Serratia tienen la capacidad de producir pigmento.
Posee resistencia primaria a numerosas penicilinas y cefalosporinas.
+/- el 10% de cepas de Serratia marcescens son resistentes a la:
- Cefotaxima,
- Ceftriaxona,
- Piperacilina/Tazobactam o sulbactam,
- Aminoglucósidos (Hepatotóxicos, hematotóxicos, nefrotóxicos, etc.)
- Fluoroquinolonas,
- Cotrimoxazol.
PREDISPOSICIÓN A LA INFECCIÓN:
- Enfermedades de base (TBC)
- Inmunosupresión
- Edad
- Uso de dispositivos intravasculares
- Soluciones parenterales contaminadas
- Drogadicción.
pág. 110
Pruebas Bioquímicas S. marcescens S. rubidea

INDOL - -
ROJO DE METILO + -
PRODUCCIÓN DE H2S - -
UREASA - -
FENILALANINA DESCARBOXILASA - -
LISINA DESCARBOXILASA + +
ARGININA HIDROLASA - -
ORNITINA DESCABOXILASA + -
MOTILIDAD + +
DNASA + +
LIPASA + +
GELATINASA + +
OXIDASA - -
VOGES PROKAUER + +
FERMENTACIÓN DE TREHALOSA + +
FERMENTACIÓN DE LACTOSA +/- (tardío) + tardío
FERMENTACIÓN DE GLUCOSA - +
pág. 111
ESQUEMA DE TRABAJO: Serratia spp.

Muestra: Sangre / Orina y LCR (Se siembran directamente en agar) / Pus
(se realiza gram directo con ssf para diluir).
Se siembra en agar: Sangre, EMB de Levine, Mc. Conckey, SS (24hrs/35ºC

/ Anaerobiosis – se corta el agar).
Características macroscópicas: Características microscópicas:

- Colonias pigmentadas (Prodigiosina) - Bacilos gram negativos
- Kligler (Fondo rojo / Bisel amarillo)
- No producen H2S Se toman las colonias de Agar
- Indol: Negativo EMB de Levine para las
- Rojo de metilo: Positivo pruebas bioquímicas.
- Citrato: Positivo
- Ureasa: Negativo
- Fenilalanina/Arginina: Negativas Se sospecha de Serratia spp. en
- Lisina/Ornitina: Positivas casos de:
- Motilidad: Positiva
- Inmunocomprometidos
- Polimixina B: Resistente - Tuberculosis
- Drogadicción
- Soluciones parenterales
contaminadas.
Antibiograma:
- Pacientes hospitalizados.
- Cefotaxima
- Ceftriaxona
- Piperacilina/Tazobactam/Sulbactam
- Aminoglucósidos
- Fluoroquinolonas
- Cotrimoxazol
pág. 112
Citrobacter spp.
Mismo esquema de trabajo de E. coli. Se diferencia

en Citrato de Simmons para la cual presenta positividad.
ESPECIES:
- Citrobacter freundii es productora de H2S y son
- C. freundii lactosa positivo a diferencia de E. coli.
- C. diversus - Producen colonias brillo metálico.
- C. amalonticus.
COLONIAS CON BRILLO METALICO EN AGAR EMB DE LEVINE y

HALO PÚRPURA PORQUE FERMENTA LA LACTOSA.
En AGAR MC CONCKEY PRODUCE HALO ROSADO fuerte, cepas con
brillo metálico.
LACTOSA POSITIVO (A veces de forma tardía).
CITRATO POSITIVO, A DIFERENCIA DE E. coli. Esta es la prueba
que diferencia a ambas cepas bacterianas, que macroscópicamente son
muy parecidas.
Se parece en colonias a la Escherichia coli en que sus colonias producen

o lucen con brillo metálico.
Produce H2S (Sólo y ESPECÍFACAMENTE Citrobacter freundii). Taco
negro en Kligler.
En AGAR SS (Salmonella-Shigella) se forman colonias negras por
acción del H2S de Citrobacter freundii.
- Infecciones urinarias
- Infecciones en heridas.
- Infecciones en neonatos (sólo Citrobacter diversus) meningitis y
absesos cerebrales.
En niños, si se presentan infecciones urinarias, lo primero que se plantea es
deformación de las vías urinarias.
pág. 113
Proteae:
Los principales patógenos humanos son:
- P. vulgaris
- P. mirabilis
Antes éstos pertenecían a este género:
- Morganella morgani
- Providencia stuarti; P. rettigeri; P. alalifaciens
FERMENTADOR TARDÍA O DE LA LACTOSA
PRODUCE H2S (Taco negro en Kligler)

UREASA POSITIVO. Tienen la enzima ureasa en gran cantidad, tanto que
cuando están como agente causales de infecciones urinarias alcalinizan la
orina por la liberación de aminas por descarboxilación).
MUY MOVIL (MIO POSITIVO)
CITRATO POSITIVO
Proteus en agar sangre produce un oleaje o efecto Swarmi:
Se debe a que las bacterias del género Proteus son móviles y buscan
unirse o adherirse entre ellas y forman este efecto.
Provoca la precipitación de sales amoniacales por alcalinización,
induciendo la formación de cálculos urinarios.
Proteus: Causante de PIE DIABETICO (la más frecuente).

- Providencia Producen mismo tipo de infección que
- Morganella Proteus.
pág. 114
Pruebas Bioquímicas P. mirabilis P. vulgaris

INDOL - +
ROJO DE METILO + +
CITRATO DE SIMMONS + -
PRODUCCIÓN DE H2S + +
OXIDACIÓN DE LA GLUCOSA + +
FERMENTACIÓN DE LACTOSA - -
VOGES PROSKAUER +/- -
UREASA + +
FENILALANINA DESAMINASA + +
LISINA DESCARBOXILASA - -
ARGININA HIDROLASA - -
ORNITINA DESCARBOXILASA + -
MOTILIDAD + +
TREHALOSA + -
DNASA +/- +
OXIDASA - -
LIPASA + +/-
Proteus mirabilis: Causante de infecciones urinarias y heridas. Más

frecuentemente aislada en seres humanos. Sensible a ampicilina y
cefalosporinas.
Proteus vulgaris: Resistente a ampicilina y cefalosporinas. Causante de
infección en pacientes inmunosuprimidos e inmunocomprometidos.
pág. 115
ESQUEMA DE TRABAJO Proteus spp.

Tipo de muestra: Orina /Muestras de heridas.
Se siembra en agar: Sangre/chocolate, Mc. Conckey, EMB de Levine, SS.

(24hrs / Aerobiosis o anaerobiosis).
Características macroscópicas Características Microscópicas

- Colonias pequeñas redondas - Bacilos gram negativos
- Efecto Swarmi
- Colonias agrupadas
- Mucoides/filancia.
- Olor característico
- Rojo: Mc.C. /Púrpuras: EMB
Pruebas bioquímicas (se toman colonias de EMB de Levine).

- Kligler
- Indol
- Fenilalanina/ureasa (alcalinizan fuertemente el medio).
- Motilidad
- Citrato
- Ornitina.
pág. 116
Plesiomonas shigeloide
Hábitat:
Intestino de animales acuáticos (agua salada):
- Invertebrados acuáticos
- Anfibios
Anteriormente pertenecía a la familia Vibrionaceae.
UNICA ENTEROBACTERIA OXIDASA POSITIVA.

- Aerobios y anaerobios facultativa
- Nitrato positivo
- Catalasa positivo.
- Presenta algunos flagelos polares (anfitrico)
LAS ENTEROBACTERIAS EN GENERAL SON CATALSA POSITIVAS.
Presentan reacción cruzada con algunos tipos de Shigella, de ahí deriva su
nombre.
- No halófila (No habita en lugares con concentraciones de sal)
- Sensible al compuesto O/129 (Se utiliza para identificación).
- DESCARBOXILA :
 Arginina
 Lisina
 Ornitina.
- Sus mecanismos de enteropatogenicidad aún no se han determinado.
- Enterotoxina parecida a la de Vibrio cholerae.

- ÚNICA ENTEROBACTERIA DE INTERES CLÍNICO, JUNTO
CON E. coli, QUE ES PRODUCTORA DE DIARREA, por ambos
mecanismos (toxigénico/secretor e invasivo)
Diarrea Toxigénica o Secretora: Acuosa.

Diarrea Invasiva: Moco o sangre.
pág. 117
- Enterotoxina
- Citolisina
- Hemolisina
- Elastina
- Plásmido >120MD.
PRODUCE DIARREA 4-6 DÍAS.
Produce Colitis pseudomembranosa si la diarrea es benigna.
Diarrea relacionada con el:

- Consumo de aguas contaminadas
- Natación en agua contaminadas
- Consumo de alimentos acuáticos contaminados.
- Cortadas y heridas en manipulación de animales acuáticos.
- Heridas, úlceras y quemaduras en contacto con agua o animales
contaminados.
- Países de clima tropical o cálido.
PUEDE PRODUCIR:
- Septicemia en pacientes con sistema inmune debilitado.
- Colitis
- Osteomielitis
- Síntomas parecidos a la apendicitis.
- Meningitis.
pág. 118
DIAGNÓSTICO:
MUESTRA: Cualquier tipo en cualquier parte del cuerpo
Relacionado con el proceso infeccioso del paciente.
Inoculación en: TINCIÓN DE GRAM

Agar Sangre, Chocolate. A partir de la muestra:
Agar EMB de Levine o - Polimorfonucleares,
Agar Mc. Conckey. - Bacilos Gram (-)
Caldo Thioglycolato.
Incubación: 24h/ 35oC
Observar Características de colonias. Tinción GRAM (colonias)

Bacilos Gram (-)
Identificación Bioquímica.
- Catalasa positivos
- Ureasa positivos
- MIO positivos
- Arginina, lisina, ornitina positivos.
- CITRATO POSITIVA (UNICA)
- Sensible a O/129
P. shigeloide.
ANTIBIOGRAMA (CIM)
pág. 119
EXTRA: ¿UNA MUESTRA DE ORINA SE SIEMBRA EN UN CALDO?

NO. Necesitamos trabajar directamente con la muestra de orina.
Conocer carga bacteriana (cuantas colonias crecieron), y porcentaje de
polimorfonucleares.
Salmonella, Shigella, Yersinia
Patógenos primarios.
Están relacionados con procesos diarreicos.
Salmonella spp:
Sus infecciones se asocian al consumo de alimentos mal cocidos o mal
procesados, aguas contaminadas, y consumo de detritos humanos o animales.
TAXONOMÍA: Con el tiempo, sólo habrá S. entérica y el resto serán

subespecies.
- S. bongoni
- S. entérica
- S. typhi.
CARÁCTER´SITICAS:
- Bacilos Gram negativos.
- En su mayoría son móviles (Mio positivo)
- Producen ácidos y gas a partir de Glucosa (fermentación acido mixta)
 OF- glucosa
 Of – Xilosa
 Of – Maltosa POSITIVOS
 Rojo de metilo
pág. 120
 Voges Proskauer
- MANITOL Y RIBITOL POSITIVAS.
- Agar XLD: Colonias negra por producción de H2S
- UREASA NEGATIVO
- Fenilalanina negativo ( no contiene enzima desaminasa).
- Producen H2S (Kligler taco negro) EXCEPTO Salmonella typhi
UNICA QUE produce ácido sin fermentar.
- Presentan antígenos somáticos y flagelares (Clasificación bacteriana).
- Desarrollo similar al del Género Proteus.
ANTÍGENOS SOMÁTICOS: Grupos:

- Antígeno O ubicación en grupos sobre la base de la bacteria (A, B,
C1,C1, D, E)
ANTÍGENOS FLAGELAR: Serotipos:

- H (A1, A1, B1, B2)
ANTIGENOS CAPSULARES (VI)
ANTÍGENO DE FIMBRIAS.
RESERVORIO:
Cualquier animal.
FACTORES DE VIRULENCIA
- Capsula (Antígeno Vi)
- Respuesta a estímulos ambientales
 Resiste ácidos (resiste pH ácido estomacal)
 Resiste frío.
- Plásmidos: Crecimiento y vida intracelular, resistencia a factores
bactericidas del suero, y adherencia.
pág. 121
- Factores cromosómicos: Invasinas: Permiten a la bacteria invadir el

lugar en donde van a causar el daño.
- Enterotoxina: Aumenta la producción de AMPc (Enterotoxina
similar a la toxina Termolábil (LT) de E. coli.).
- Citotoxinas: Afecta síntesis proteica, produciendo ruptura del epitelio
gastrointestinal permitiendo la penetración y propagación.
- LPS: Supervivencia de la bacteria, permite la filtración a través de la
mucosa gástrica. Resistencia a las propiedades bactericidas del suero.
Impide la fagocitosis.
- Sideróforos: Captación de Fe.
- Flagelos polares (> invasividad).
- Proteína de Shock Térmico: Permite la supervivencia a los
macrófagos).
- Tres tipos de Adhesinas.
Periodo de incubación: 12-72h
Puede presentarse en dos formas:
- Especies diferentes a S. typhi pueden producir enterocolitis y

diarrea.
- S. typhi produce la fiebre tifoidea.
En ambas presentaciones el género produce septicemia.
FIEBRE TIFOIDEA:
Infección producida por Salmonella Typhi.

Único reservorio de S. typhi es el hombre.
Se observa más en edad escolar y poco frecuente en preescolar.
Tamaño del inoculo: 105 y 109 bacterias. (Muy Grande)
pág. 122
PRIMERA SEMANA:
- Elevación lenta y progresiva de la temperatura (aparece y reaparece/
fiebre ondulante).
- Bradicardia.
- Malestar general.
- Dolor de cabeza en área frontal.
- Tos.
- Leucopenia y leucocitosis.
Al principio el paciente no nota la infección porque puede manifestarse con
un ligero estreñimiento, antes de la llegada de la diarrea.
SEGUNDA SEMANA:
- Hay postración.
- La fiebre en 40oC.
- Bradicardia.
- Se observan puntos rojos diseminados tórax y abdomen (Característico
de la fiebre tifoidea).
- Abdomen distendido y dolorido en cuadrante derecho inferior.
- Hay esplenomegalia
- Hepatomegalia (hígado inflamado).
Esta bacteria puede albergarse en bazo o vesícula biliar, incluso en
portadores (se recomienda extracción de vesícula en portadores):
En la segunda semana se toma sangre, se separa el suero para serología:
- Se separa el suero para serología: Determinar si tiene anticuerpos

para Salmonella.
- Sangre para hemocultivo.
TERCERA SEMANA:
- Fiebre elevada (continúa)/Hospitalización.
- Si no se trata al paciente pueden ocurrir complicaciones tales como:
 Hemorragias intestinales por congestión de las Placas de
Peyer.
pág. 123
 Perforación intestinal (a nivel del íleon).

 Puede dar lugar a la peritonitis.
 Abscesos que pueden (entrar al torrente sanguíneo)
tonarse a: encefalitis, colecistitis y endocarditis.
o Si el paciente se cura, puede quedar en estado de portador.
- Al final de la tercera semana, inicios de la cuarta, se vuelve a
tomar suero de la muestra de sangre para determinar Anticuerpos
contra Salmonella.
PARA SEROLOGÍAS SE DEBE:
- Muestra basal: Al inicio de la primera semana.

- Muestra avanzada: Quince días luego del inicio de la enfermedad.
MUESTRA SEGÚN LA CURVA DE ENFERMEDAD TIFOIDEA:

- Hemocultivo: Positivo durante la primera semana en el 80% de los
casos.
- Mielocultivo (Médula ósea) Positivo en el 90% de los casos.
- Coprocultivo: Positivo al final de la primera semana (porque al
principio el paciente puede debutar con estreñimiento).
- Urocultivo: Positividad en la primera semana.
- Cultivo de aspirado duodenal: Sospecha de portadores.
- También se pueden hacer cultivos de las rosetas propias de la
Salmonella en la segunda semana de manifestación de la enfermedad.
SALMONELOSIS:
Es una enterocolitis: Diarrea común, nauseas, vómitos, dolor abdominal.
Diarrea mucosa (mecanismo invasivo). No se ofrece antibioticoterapia, ya que

las diarreas bacterianas son autoreguladas.
pág. 124
Pruebas Bioquímicas S. typhi S. bongori

CITRATO DE SIMMONS - +
PRODUCCIÓN DE H2S + (leve) -
ORNITINA DESCARBOXILASA - +
PRODUCCIÓN DE GAS/GLUCOSA - +
LACTOSA - -
GLUCOSA - +
SACAROSA - +
UREASA - -
MOTILIDAD + +
OF – GLUCOSA + +
OF – XILOSA + +
OF – MALTOSA + +
ROJO DE METILO + +
VOGES PROSKAUER + +
MANITOL + +
RIBITOL + +
FENILALANINA DESAMINASA - -
INDOL - -
ARGININA DIHIDROLASA - +
CRECIMIENTO EN KCN - +
pág. 125
ESQUEMA DE TRABAJO DE Salmonella spp.

Muestra: Heces (Enriquecimiento en caldo tetrationato) / Sangre
(hemocultivo) / LCR (Mielocultivo) /Rocetas (segunda semana F. tifoidea).
Sembrar en agar: Mc. Conckey, EMB de Levine, Verde Brillante,

Salmonella – Shigella, XLD (35ºC/24hrs).
Características Microscópicas: Bacilos Gram negativos.
Características Macroscópicas:
- Agar Mc. Conckey (Colonias transparentes: No fermentan la lactosa).
- Agar EMB de Levine: Colonias transparentes, pequeñas, lisas.
- Agar SS: Traslúcidas, opacas, negruzcas alrededor de S. typhi por
producción de H2S.
- Agar XLD: Pigmentación ROSA/ROJA con centro negruzco.
- Agar Verde Brillante: Inhibe S. typhi. Las colonias se observan
blancas, o transparentes sobre fondo rojo (contiene rojo fenol que vira
de color cuando hay fermentación de carbohidratos).
Pruebas Bioquímicas (Diferenciación entre especies):
- Producción de H2S
- Sacarosa
- Citrato
- Arginina
- Ornitina
Antibiograma:
- Penicilinas
- Cloranfenicol
- Tetraciclinas
- TMZ
pág. 126
- Nitrofuranos
- Quinolonas
- Cefalosporinas
Pruebas Serológicas (Fiebre tifoidea / Antisueros)
- Basal
- Avanzada
- Tercera semana
NOTAS:
Salmonella Typhi: Único reservorio es el humano. Causante de Fiebre

Tifoidea.
Salmonella entérica y Salmonella bongori: Productoras de enterocolitis. No se
necesita terapia antibiótica.
1) Fiebre tifoidea: Muestras serológicas para reacciones de aglutinación

con antisueros para Salmonella typhi.
a. Muestra basal: Al inicio de los síntomas
b. Muestra avanzada: A los 15 días de manifestar la enfermedad.
c. Tercera semana del transcurso de la enfermedad.
2) Enterocolitis: Diarrea común, nauseas, vómitos, dolor abdominal,
diarrea mucosa (mecanismo invasivo).
a. Enterotoxina termolábil similar a ETEC/LT. Producción de
anticuerpos. Activa AMPc.
b. Citotoxinas: Ruptura del epitelio intestinal.
c. Invasivas: Invasión del epitelio gastrointestinal.
3) Septicemia por S. typhi, S. entérica, S. bongori ()hemocultivo).
4) Meningitis: Mielocultivo.
Tamaño del inoculo: 105 y 109 bacterias.
pág. 127
MEDIOS DE CULTIVOS:
- Medios selectivos: Seleccionan e inhiben.
o EMB de Levine: Eosina, azul de metileno/ Inhibe gram +.
o Mc. Conckey: Rojo neutro y sales biliares / Inhibe gram +
o Desoxicolato: Inhibe gram +
- Medios diferenciales: Diferencia a bacterias por su metabolismo.

o XLD: Xilosa, lisina Desoxicolato / aislamiento e identificación
de enterobacterias; diferencia principalmente entre Salmonella y
Shigella.
o Salmonella – Shigella: Sales biliares y verde brillante. Inhibe
gram + y Proteus spp.
 Salmonella: Colonias traslucidas, ocasionalmente opacas,
con centro negruzco por producción de H2S (únicamente
S. typhi.
 Shigella: Colonias trasparentes, traslucidas, opacas, lisas.
o Verde brillante: Diferencia entre especies de Salmonella. Inhibe
el crecimiento de S. typhi.
Shigella spp: E. coli productora de toxina

SHIGA/STEC. Toxina Shiga causante de:
- Colitis hemorrágica
Bacilo Gram negativo - Insuficiencia renal.
- Anemia hemolítica.
Productora de diarrea.
- Síndrome hemolítico urémico.
Inmóvil.
Aerobio y anaerobio facultativo.
No posee enzima descarboxilasa (lisina, ornitina y arginina negativos)
Lactosa negativo (Kligler bisel rojo, taco amarillo)
Fermenta glucosa sin producción de gas.
pág. 128
ESTA MUY RELACIONADO CON E. coli ENTEROINVASIVA.

- Intestino Grueso
- Produce cuadro disentérico
- Sus toxinas destruyen a las células epiteliales invadiendo los tejidos.
Son sensibles a condiciones adversas:
 Es lábil a los ácidos, sales biliares, desecación.

 Sensible al frio.
LA MUESTRA DE HECES PARA DETERMINACIÓN DE SHIGELLA
DEBE PROCESARSE DE INMEDIATO PARA EVITAR SU LISIS POR
LAS CONDICIONES ADVERSAS DEL MEDIO, los ácidos producidos por
otras bacterias pueden lisar a Shigella.
Se mantiene a temperatura ambiente durante meses.

ESPECIES:
- S. dysenteriae Producen diarrea invasiva, y lo que se conoce como
- S. flexneri. DISENTERÍA.
- S. boydi.
- S. sonnei.
(Están en orden de patogenicidad desde mayor a menor).
GASTROENTERITIS:
La Shigella no atraviesa la lamina propia, quedándose así en el intestino. No
pasa a la sangre y NO PRODUCE SEPSIS.
Se encuentra más que todo en agua.
SIGNOS Y SINTOMAS:
- Incubación de 1-7 días.
- En algunas personas sólo se presentan deposiciones blandas.
- Disentería bacilar (diarrea con moco y sangre)
pág. 129
LA DISENTERÍA BACILAR ES CONSECUENCIA DE FACTORES DE

VIRULENCIA:
1) Adherencia e invasión de las células de la mucosa intestinal.
2) Citotoxinas que producen: Inflamación y ulceración (moco y sangre).
3) Toxinas: Shiga (Neurotoxina – produce convulsiones). Relacionado
con Síndrome Urémico Hemolítico (SUH).
4) Toxinas Shiga ET-1, Shiga ET-2
5) Lipopolisacárido.
HUMANO ES EL ÚNICO RESERVORIO DE Shigella.

TRANSMISIÓN:
Persona – Persona
Vehículos: Ingestión de fómites, aguas contaminadas, alimentos

contaminados.
TAMAÑO DEL INOCULO:
Inoculo pequeño: 100 a 200 células.
EPIDEMIOLOGÍA:
- Más frecuente en niños de 2 a 3 años.
- Diarreas autolimitadas o autoreguladas que duran entre 7-10 días
(Sólo hidratación del paciente).
AGARES:
- Agar SP ASS
- Agar Shigella SP XLD
- Agar Mc. Conckey.
pág. 130
IDENTIFICACIÓN DE Shigella spp.

1) Disentería: S. flexneri y S. dysenteria / Diarrea invasiva con moco y
sangre. Enterotoxina similar a la de E. coli (STEC enteroinvasiva).
2) Gastroenteritis: S. boydi, S. sonnei.
3) Infecciones urinarias (Excepciones: inmunocomprometidos):
4) Vulvovaginitis: S. flexneri /Secreción sanguinolenta que se confunde
con gonorrea.
Pruebas Bioquímicas S. dysenteria S. flexneri S. boydi S. sonnei

INDOL - - - -
ROJO DE METILO + + + +
CITRATO - - - -
VOGES PROSKAUER - - - -
PRODUCCIÓN DE H2S - - - -
UREASA - - - -
SACAROSA - - - -
TREHALOSA + + + +
MANOSA + + + +
ORNITINA - - - +
MANITOL - + + +
MALTOSA - - - +
MOTILIDAD - - - -
Diferenciación entre especies:

- Ornitina (S. sonnei)
- Manitol (S. sonnei)
- Maltosa (S. dysenteria)
pág. 131
ESQUEMA DE TRABAJO DE Shigella spp.
Muestras: Heces, orina, secreción vaginal, secreción cutánea.
Sembrar en: Agar Mc. Conckey, EMB de Levine, SS, XLD.
Características macroscópicas Características microscópicas

- Colonias lactosa positivo - Bacilos gram –
- Transparentes o traslúcidas, lisas
- Sin producción de H2S
- En agar XLD con fondo rojo por utilización y fermentación de
carbohidratos del medio.
Pruebas bioquímicas:
- Indol (+) (Para diferenciar de E. coli, y Salmonella spp. (-))

- Citrato (-)
- Rojo de Metilo (+)
- Ureasa (-)
- Motilidad (-)
- Producción de H2S (-)
- Lactosa (-)
NOTAS:
No es causante de sepsis o bacteriemia.

No atraviesa la lámina basal epitelial.
Rompe las capas mucosas.
pág. 132
Yersinia spp:
Coco bacilo Gram (-)
Inmóvil a los 37oC, pero móvil a los 30oC (movimiento tipo sombrilla)
Psicrófila.
Oxidasa negativo
Catalasa positiva
ESPECIES:
- Y. pestis
- Y. enterocolítica.
Crecen en agar Mc. Conckey a temperatura ambiente.

(Se incuba dejándola 24h en el mesón)
- Sus colonias son transparentes.
No productoras de Betahemólisis.
Ureasa positivo.
Móviles: Tienen flagelos Peritricos.
EN VENEZUELA NO TENEMOS YERSINIOSIS.
- Enterotoxinas: Proteína V y W
- Sideróforos.
RESERVORIO:
pág. 133
- Agua, alimentos contaminados, suelo.

- Puede afectar a los cerdos, perros, gatos y humanos.
INFECIÓN:
- Productora de diarrea
- Infamación de los ganglios mesentéricos (Adenitis mesentérica).
- Linfadenitis.
- Gastritis.
MUESTRA:
- Heces
- Linfa (Ganglios linfáticos)
Las muestras deben enriquecerse al frio en la nevera – Es Psicrófila).
INCUBACIÓN EN AGAR Mc. Conckey o agar Sangre a 22oC.
Produce colonias pequeñas y transparentes.
LACTOSA POSITIVO
UREASA POSITIVO
MIO POSITIVO (sólo a 30oC) (Movimiento en la parte superior en
forma de sombrilla).
pág. 134
IDENTIFICACIÓN DE Yersinia spp.

Muestras: Heces (Las muestras deben enriquecerse al frio en la nevera/
Yersinia spp es PSICRÓFILA), linfa.
Inocular en agar: Mc. Conckey (sólo crece en este agar), a temperatura

ambiente (22ºC) Durante 24hrs.
Características Macroscópicas Características Microscópicas

- Colonias transparentes rodeadas
- Rodeadas de rosa fuerte (Lactosa +)
- Sin hemólisis.
- Ureasa + - Rojo de metilo (+)

- Oxidasa – - Citrato (-)
- Catalasa + - Gas a partir de glucosa (+)
- Motilidad 30ºC (+) / 37ºC (-)
- Lactosa (-)
- Lisina, Arginina, Fenilalanina (-)
- H2S (-)
Yersinia pestis y enterocolítica son los principales patógenos a diferenciar.
Prueba bioquímicas Y. pestis Y. enterocolitica

Ornitina - +
Oxidación de Ramnosa - +
pág. 135
BIBLIOGRAFÍA:
 Brooks, Geo. F., et al. Microbiología Médica (Jawetz, Melnick y

Adelberg). 25ª Edición, 2010. Editorial Mc. Graw- Hill.
 Washington C. Winn, et al. Diagnóstico Microbiológico de Kóneman.
18 Ed. 2008. Edit. Panamericana.
pág. 136

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UNIVERSIDAD DE ORIENTE – NÚCLEO DE BOLIVAR

Escuela de Cs. De la salud “DR. FRANCISCO BATTISTINI CASALTA”.

TEMA NÚMERO 1: FUNCIONES DEL BIOANALISTA

BACTERIOLOGÍA: Es rama de la microbiología. Y estudia la relación

 Relaciones benéficas: Flora normal/Activación del sistema

 Fase Pre- Analítica del diagnóstico de Laboratorio:

- Cultura/Raza - Herencia - Trabajo

“Una misma cepa bacteriana puede ser causante de muchos tipos de

El GRAM nos orienta para, en casos urgentes, notificar al médico,

Las técnicas de aglutinación pueden dar resultados cruzados por

¿Cuándo el diagnostico directo puede ser definitivo?

bacteria muy similar a la Neisseria gonorreae que se ve reflejada en el

- En caso de una secreción vaginal, si se observan a través de un

 El Bioanalista tiene el deber de reportarle al médico:

¿Qué son colonias bacterianas?

Con el diagnostico directo va a apreciarse:

Pruebas de Susceptibilidad: Si los discos se colocan de forma específica

FUNCIONES DEL BIOANALISTA BACTERIÓLOGO.

1) Participar en el control y prevención de infecciones hospitalarias y

TEMA NÚMERO 2: TOMA DE MUESTRAS

La toma de muestra es fundamental debido a que nos permite

 Culturette: Es un dispositivo, que en su parte inferior posee una

 Medio Stuart Modificado

 Cajitas de recolección para muestras de esputo: Cajita sellada.

La muestra de orina debe refrigerarse una vez recolectada, ya que el

EL LÍQUIDO CEFALORAQUÍDEO, Y LA SANGRE PARA

1) Infecciones del tracto respiratorio superior:

Nota: A pesar de que el alcohol y el agua oxigenada, son agentes

C) Exudado Faríngeo: La faringitis es una enfermedad causada

4) El paciente debe abrir bien la boca, y se debe presionar bien la

 FARINGITIS ESTREPTOCÓCICA: Dentro de las bacterias, la

D) Absceso periodontal: Causada por bacterias anaerobias

Cualquier absceso en cualquier parte del cuerpo, debe tomarse la

Investigación de portadores de Staphylococcus aureus.

La piel es la principal barrera (posee S. aureus como colonizadora),

F) Otitis: Muestra Ótica, y se obtiene a través de secreción ótica.

G) Diagnóstico de Neumonía Típica:

 Parámetros de evaluación de muestra de ESPUTO con tinción

Debe ser procesada de inmediato, debido a la autolisis bacteriana.

 Broncoscopía en Lavado Broncoalveolar:

H) Esputo para TUBERCULOSIS:

de Ziehl Neelsen porque todas las bacterias decoloradas se tiñe con

que crezca en LCR, debido a que en el momento de extracción de la

TOMA DE MUESTRAS SEGUNDA CLASE:

J) Piel y tejidos blandos:

1) Para realizar la asepsia y antisepsia se deben emplear almohadillas

1) Lavarse las manos con agua y jabón previamente.

1) Lavar manos con agua y con jabón.

 Infecciones Urinarias en NIÑOS:

 En caso de un paciente con sonda:

L) Infecciones de transmisión sexual:

En caso de N. gonorrhoeae la muestra de gota marginal, que puede

Pero hay otra bacteria que es de vida intracelular obligada

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 En caso de Gardnerella vaginalis la lesión va a ser del fondo del saco

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