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Heliyon 8 (2022) e09264

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Artículo de investigación

Contaminación microbiana de mezclas de diesel-biodiesel en tanque de almacenamiento;

un análisis de la morfología de la colonia

a a b
Leily Nurul Komariah a,*, susila arita , muhammad rendana , Cindi Ramayanti ,
Ni Luh Suriani , desi erisna
C d

a
Ingeniería Química, Departamento Facultad de Ingeniería Universitas Sriwijaya, Palembang, South Sumatera, 30139, Indonesia
b
Ingeniería Química, Departamento Politécnico Estatal de Sriwijaya, Palembang, Sumatra del Sur, 30139, Indonesia
C
Programa de estudios de biología, Facultad de Matemáticas y Ciencias Naturales, Universidad de Udayana, Denpasar, Bali, 80232, Indonesia
d
Laboratorio de Ingeniería Energética Universitas Sriwijaya, Indralaya, South Sumatera, 30662, Indonesia

INFORMACIÓN DEL ARTÍCULO RESUMEN

Palabras clave: La contaminación del combustible es un problema importante que viene con la utilización de biodiesel. El crecimiento microbiano es una de
biodiésel las principales causas de contaminación durante el manejo y almacenamiento del combustible. Este trabajo intenta identificar los tipos, formas
Unidad de formación de Colonia y perfiles de crecimiento de microorganismos en muestras de combustible. Se presenta la morfología de las colonias microbianas para analizar
Contaminación
el potencial de contaminación del combustible. El diésel, el biodiésel y las mezclas se almacenan en tanques de acero inoxidable (SS) y vidrio,
Crecimiento microbiano
donde cada uno se coloca en interiores y exteriores durante los 90 días de almacenamiento.
Tanque de almacenamiento
La morfología de las colonias microbianas se observa a través de un microscopio con un aumento de 1000 y la cantidad se calcula mediante
un contador de colonias digital. La contaminación microbiana en todas las muestras se considera alta contaminación cuando la Unidad
Formadora de Colonias (UFC) es superior a 105 L1 . Las formas de colonia están mucho más variadas
biodiésel
enpuro
mezclas
(B100).
queLa
entransformación
diésel puro (B0)
dey
las colonias microbianas se acelera después de 60 días de almacenamiento. Los resultados revelan que el número de colonias bacterianas
que crecen en B20 es mayor y más variado, sin embargo, la contaminación en B100 es significativamente mayor. Esto se indica por un
aumento de 1,5 veces en la acidez de B20 y un aumento de 2,5 veces en el contenido de agua en comparación con la condición inicial.

1. Introducción Los microbios se encuentran comúnmente en los tanques de almacenamiento de

El biodiésel sigue siendo la mejor alternativa al diésel fósil. En
En Indonesia, el mandato del gobierno para una mezcla más alta de biodiésel en el combustible
diésel aumentará hasta un 40 % el próximo año. Un aumento en el porcentaje de biodiesel
puede potencialmente causar problemas de contaminación que lleven a mayores problemas
operativos. La alta calidad y la estricta higiene del combustible para evitar daños, fallos de
funcionamiento y acortar la vida útil de los dispositivos son necesarios recientemente para la
tecnología moderna de motores diésel.
En general, el biodiesel tiene baja estabilidad a la oxidación, alta capacidad de lubricación
y es muy higroscópico. Muchos estudios informaron que el biodiesel es más propenso que el
diesel de petróleo debido a la contaminación y degradación [1, 2, 3, 4, 5, 6]. Esta susceptibilidad
del biodiesel está asociada con la composición química del biodiesel y varía considerablemente
dependiendo de la materia prima utilizada [6]. El biodiésel se degrada mediante la absorción de
vapor de agua, la autooxidación y el ataque microbiano [7, 8]. El aumento de las poblaciones
de microorganismos ha mostrado la capacidad de degradar el tanque de almacenamiento de
combustible y causar corrosión [9, 10, 11, 12].
combustible, los sistemas de transporte y las cadenas de suministro de combustible. La
producción de biopelículas se desencadena por el crecimiento microbiano en los tanques de
almacenamiento y las tuberías, que pueden bloquear los filtros y las tuberías, así como
aumentar el desgaste de las bombas y los sistemas de inyección. La contaminación del
combustible acorta la vida útil del filtro y puede provocar falta de combustible, problemas en el
motor y posibles daños al equipo de inyección de combustible [13]. Confirma que la
biodegradación de hidrocarburos es una parte integral de la vida microbiana [14].
Los microorganismos que se encuentran en el petrodiesel, el biodiesel y sus mezclas
pueden variar mucho. La mayoría de los investigadores mencionaron que casi todas las
variantes de microorganismos, como bacterias, hongos y levaduras, se pueden encontrar en el
combustible diesel y el biodiesel, como se presenta en la Tabla 1.
Numerosos investigadores informan de la presencia de una diversidad microbiana compleja
en el combustible diésel y el biodiésel. Diferentes especies tienen diferentes mecanismos de
degradación, lo que proporciona resultados diferentes [10, 24, 25, 26, 27, 28].
La diversidad, la tasa de crecimiento y el patrón de los microorganismos pueden verse afectados por
los componentes del combustible, como el carbono y las fuentes de energía, la estructura de la cadena de

* Autor correspondiente.
Dirección de correo electrónico: leilynurul@unsri.ac.id (LN Komariah).

https://doi.org/10.1016/j.heliyon.2022.e09264 Recibido el
20 de octubre de 2021; Recibido en forma revisada el 29 de diciembre de 2021; Aceptado el 6 de abril de 2022
2405-8440/© 2022 El(los) autor(es). Publicado por Elsevier Ltd. Este es un artículo de acceso abierto bajo la licencia CC BY (http://creativecommons.org/licenses/by/4.0/).
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acero y materiales de vidrio. Uno de los tanques se almacena en el interior, el resto se

Tabla 1. Microorganismos típicos detectados en tanques de almacenamiento de diésel y biodiésel.
encuentra en el exterior. La observación tuvo una duración de 90 días, donde las muestras
Combustibles diesel comunes Mezclas de biodiesel-diesel se toman cada 30 días. La muestra de aceite se toma de la zona de 1/4 del nivel de la altura

bacterias
Bacterias reductoras de sulfato (SRB), Actinetobacter, Bacillus sp.,
Flavobacterium, Acinetobacter y Clostridium sporogenes, Flavofacterium
micrococo diffusum, Micrococcus sp., Pseudomonas
sp., Pseudomonas aeruginosa, Serratia
marcescens, Sarcina sp., Hydrogenomonas
sp., Clostiridum sp., Gordonia sp., etc.
levaduras Cándida, Saccharomyces, Torula, Candida sp., Candida famata, Candida
Hansenula lypolytica, Candida silvícola, Candida
tropicalis, Rhodotorula sp., Saccharomyces
sp., etc.
Moldes/ Hormoconis resinae, Cladosporium Acremonium sp., Aspergillus sp.,
Hongo resinae, Aspergillus, Penicillium, Aspergillus fumigatus, Cladosporium sp.,
Fusarium y Botrytis Fusarium oxysporum, Penicillium sp.,
Penicillium citrinum, Penicillium funiculosm,
Trichiderma sp., Paecilomyces sp.
Moniliella y Byssochlamys, Phyla sp.,
Pseudallescheria boydii., Hormoconis
resinae, Fusarium sp., Aureobasidium
pullulans, Moniliella wahieum,
Byssochlamys nivea, etc.
del tanque desde el fondo, que es la posición sospechosa de interfaz agua-aceite. Un
microscopio y un contador de colonias se utilizan para observar la morfología de las colonias
de microbios y cuantificar el microorganismo. Las muestras de aceite se tomaron por succión
utilizando un tubo vertical. El punto de muestreo se encuentra en la zona inferior, precisamente
a la cuarta parte del nivel de aceite desde el fondo. El método de medición del índice de
acidez está de acuerdo con la norma ASTM D664 y el contenido de agua usando la titulación
culombimétrica de Karl Fischer de acuerdo con la norma ASTM D1796. La morfología de la
colonia se utiliza para identificar la presencia de microorganismos. En este trabajo se
configura un contador de colonias Stuart Digital para la cuantificación de microorganismos.
El recuento de placas se utiliza para estimar el número de células presentes en función de
su capacidad para formar colonias en condiciones específicas de medio nutritivo, temperatura
y tiempo. Los recuentos de colonias totales se cuantifican por la extensión de colonias de
microorganismos visibles desarrolladas en placas de agar nutritivo en incubación a 24–37 C.
Luego se identifica como Unidad formadora de colonias (UFC), UFC/ml significa unidad
formadora de colonias por ml de muestra. Las concentraciones de unidades formadoras de
colonias se pueden expresar usando notación logarítmica, donde el valor mostrado es el
logaritmo en base 10 de la concentración.
El número de microbios (UFC) por ml o gramo de muestra se calcula dividiendo el

Fuente: [1, 2, 7, 10, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23]. número de colonias por el factor de dilución usando la ecuación. (1).

los compuestos, presencia de azufre, almacenamiento y condiciones ambientales UFC PC

¼
(1)
(temperatura, humedad, etc.) ([6, 22]). Los microorganismos pueden desarrollarse en los ml ½ð1xn1Þþð0:1xn2Þ xd
sistemas de combustible y crecer más rápido en condiciones cálidas y calurosas. Los riesgos
de contaminación por combustible diesel aumentan a medida que se ubica en regiones de donde, C = colonia total en cada placa, n1 = volumen en la primera placa, n2 = volumen en
alta humedad [29, 30, 31]. la segunda placa, d = nivel de dilución, factores de dilución = 105 .
Es más probable que la mayoría de los estudios existentes muestren que la degradación Las CFU/ml también se pueden calcular utilizando la ecuación. (2).

y el riesgo de contaminación del biodiésel debido al crecimiento microbiano tienden a ser

lineales con el aumento de la cantidad de biodiésel en la mezcla [ [1, 2, 7, 15, 17, 32 ]. La
conclusión general no es necesariamente generalmente aceptada porque no ha considerado
la complejidad de los patrones de crecimiento de varios tipos de microbios que en realidad
son muy dinámicos y cambiantes según la disponibilidad de nutrientes, las condiciones
ambientales de almacenamiento y los materiales del tanque de almacenamiento. Desde la
perspectiva de los microorganismos, esto también se relacionará con el metabolismo
energético, la formación de endosporas, el requerimiento de oxígeno, la motilidad, etc.
La prevención del crecimiento de microorganismos en los tanques de almacenamiento
de combustible es una preocupación importante para los sectores industriales y/o comerciales
debido a los problemas asociados causados por la corrosión, el taponamiento del filtro y el
bloqueo en el almacenamiento, las líneas de combustible y/o las instalaciones de distribución.
La morfología de la colonia en este estudio también puede funcionar como una forma simple
de cruzar la dinámica confirmada de la comunidad microbiana y también para identificar las
especies predominantes potenciales que son responsables de la degradación y/o
contaminación del biodiesel. La mayoría de los investigadores suponen que las bacterias se
encuentran más comúnmente en el gasóleo contaminado, mientras que los hongos son los
microorganismos más responsables del ataque microbiano al biodiésel.
Sin embargo, pocos estudios vinculan exhaustivamente los cambios en las propiedades
físicas del biodiesel con la morfología de las colonias de microorganismos en diversas
condiciones de almacenamiento. Por lo tanto, llevamos a cabo un estudio novedoso, la
morfología de las colonias microbianas se relaciona con la degradación del combustible y la
posible corrosión de los tanques de acero y vidrio que se llenan con B0, B20 y B100. El
resultado de este estudio dará algunas recomendaciones para el diseño y la operación de
tanques de almacenamiento de mezclas de biodiesel diesel y serán potencialmente generados
y útiles para reducir el riesgo de falla técnica debido a la contaminación microbiana.
2. Métodos
El biodiésel utilizado en este estudio es a base de palma, que se mezcla con la técnica
de mezcla por salpicadura en aceite diésel de petróleo, formando B20.
El diésel de petróleo (B0), el biodiésel puro (B100) y el B20 se almacenan en cada uno de
los dos tanques de almacenamiento cilíndricos con techo plano y de fondo, acero inoxidable
UFC número de colonias x factores de dilución
¼
(2)
ml volumen de la placa de cultivo
El estudio morfológico se realiza y se incuba alrededor de los tanques de almacenamiento
a temperatura ambiente (a una media de 28 C) y humedad relativa (hasta 85%).
Los factores que contribuyen al valor de la incertidumbre para la cuantificación de
colonias microbianas pueden ser variados e influenciados por los factores involucrados e
interrelacionados. Incluyen; dilución (muestreo y pesaje), homogeneización de muestras,
lecturas de contadores de colonias, calibración de equipos, analista/humano, resolución,
estabilidad, sesgo, deriva, repetibilidad y reproducibilidad. En este estudio, utilizamos un
enfoque de análisis de incertidumbre de combinación, aunque no se tienen en cuenta todos
los factores considerados influyentes. En consecuencia, es una función de las incertidumbres
del factor de dilución, la densidad estimada, la lectura del equipo y la incertidumbre de
calibración. Analizamos la distribución de parámetros y el enfoque estadístico de acuerdo
con los intervalos de confianza del 95 % de los parámetros en cada cadena de Markov según
los estudios previos [33, 34].
3. Resultados y discusión
3.1. Aspectos visuales sobre la degradación del combustible
En esta parte, la degradación de diesel y biodiesel se puede comparar por la apariencia
física de las muestras de combustible. Después de 90 días de almacenamiento, se presentó
la detección de contaminación en B0, B20 y B100 de los tanques de vidrio y acero inoxidable,
como se muestra en la Figura 1.
Los síntomas de contaminación microbiana en el combustible diésel pueden verse como
una agregación de biomasa, que se manifiesta como decoloración, turbidez y suciedad. En
este estudio, se observa microscópicamente el proceso de formación de biopelículas,
emulsiones y la presencia de limo/lodo o depósitos en todas las muestras de aceite. La
decoloración o turbidez del aceite ocurre en todas las muestras, pero sorprendentemente, la
decoloración en B0 parece insignificante. No se detectan biopelículas o biomasa en el aceite
dentro de los tanques de almacenamiento B0 y B100, se encuentra una pequeña cantidad
de depósitos en el fondo del tanque, pero en el

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Figura 1. Aspecto visual de todas las muestras de combustible B0, B20 y B100 en tanque SS y tanque de vidrio después de 90 días.

Figura 2. Cambios en las propiedades físicas después de 90 días de almacenamiento. (a) Tanques de vidrio, (b) Tanques SS.

B20 almacenado en el tanque de vidrio, la presencia de un lodo espeso y pegajoso es claramente dedicado a las propiedades físicas específicas del combustible de petróleo, como el contenido de
visible. Como se ve en la Figura 4, es claro que todo el aceite almacenado ha sido contaminado en agua y el índice de acidez. Se considera que están fuertemente relacionados con el nivel de
diferentes niveles. Se detecta aceite turbio que contiene biomasa de flocosa blanca en muestras de contaminación del combustible, que está directamente relacionado con el crecimiento microbiano.
B20 y B100. Además, se vio un bulto de biomasa marrón en B20, que se estaba acumulando Los cambios más pronunciados en las propiedades ocurren en los parámetros de contenido de agua
especialmente en el tanque de vidrio inferior. y los índices de acidez del combustible almacenados durante más de 90 días. En este estudio, el
mayor cambio ocurrió en los tanques de almacenamiento de vidrio colocados al aire libre, como se
Los cambios en el aspecto físico de las muestras de combustible indican que se ha producido muestra en la Figura 2.
degradación debido a diversas causas y fuentes de contaminación, en particular microorganismos. El El cambio más extremo es el aumento brusco del contenido de agua de B100 en los tanques
deterioro del combustible puede resultar en turbidez, deslaminación o formación de depósitos. En B100 y SS, esto se debe a las temperaturas elevadas, el clima local o el clima, como el calentamiento
este estudio, se encontró una turbidez significativa en B20 y biomasa en forma de limo después de de los tanques inducido por la luz solar.
más de 90 días de almacenamiento.
El cambio de color se ha detectado desde el día 60. Los cambios en el color del aceite y la presencia
de biomasa demuestran la agresividad del crecimiento de microorganismos en las mezclas biodiesel- Tabla 2. Identificación de colonias, forma general y cromogénesis
diesel. La biomasa se encontró más en B20 que en las muestras de biodiesel y diesel oil. Según lo
identificación de colonias/morfología-relativa-dominante
informado por Amaral et al. [30, 35] encontraron que B20 presentaba una película viscosa al final del
forma de Borde textura/ color, tamaño elevación
sexto mes de envejecimiento, debido a la presencia de glicéridos y productos de degradación
colonia consistencia
oxidativa. Algunos microorganismos tienen la capacidad de descomponer la estructura del hidrocarburo
B100 Irregular irregular, flóculo no pigmentado, plano y
en el diésel [25]. Sin embargo, esta condición es particularmente adversa para varios autores [1, 2,
lobulado irregular y ancho Mediano a grande elevado
20, 36], que concluyeron que la degradación ocurre más rápido en B100 que en B0 y se mezcla.
B20 Irregulares, irregular, disperso, No pigmentado, plano

circulares lobulado adyacente pequeño

B0 Circular irregular, disperso, no pigmentado, plano

lobulado adyacente puntiforme,

pequeño
3.2. Degradación del combustible, contaminación microbiana y cambios en las propiedades físicas

Las colonias microbianas en B0, B100 y B20 tenían diferentes apariencias, formas y patrones de
distribución. La forma de las colonias bacterianas en B100 fue relativamente más prominente y el
El crecimiento microbiano a altos niveles puede cambiar las cualidades del combustible, patrón de distribución fue razonablemente consistente, tanto en tanques de vidrio como de acero
especialmente después de un largo período de almacenamiento. En este estudio, las observaciones son másinoxidable.

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La contaminación de B100 y B20 en tanques de vidrio se puede detectar por los grandes cambios
en el contenido de agua y los niveles de ácido. Para el almacenamiento de B20, el aumento en el
contenido de agua alcanzó hasta el 153 % desde la condición inicial, mientras que el índice de
acidez se elevó al 53 %. Mientras que, en una muestra de B100, mostró cambios más extremos
donde el índice de acidez aumentó 1,8 veces y el contenido de agua aumentó 3,5 veces desde la
condición inicial. Combustible
el almacenamiento en tanques SS aún muestra cambios en el contenido de ácido y agua incluso en
Figura 3. Perfil de colonia microbiana para B0, B20 y B100 en tanques de almacenamiento.
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niveles más bajos que en los tanques de vidrio. Esta condición sugiere que los factores que
permiten la entrada de aire a través de los espacios de la tapa del tanque y el aumento de la
temperatura exterior hacen que el crecimiento de microorganismos sea más dramático.
Durante el período de almacenamiento, se sabe que la temperatura promedio alrededor del
tanque de almacenamiento fue de 28 C, y la humedad del aire promedió 88%. Se cree que esta
condición acelera la proliferación de
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relativamente uniforme. Esta condición indica el tipo y transformación de

Tabla 3. Número de colonias bacterianas en muestras de fuel oil después de 90 días de almacenamiento.
el tipo de microorganismo que crece en él.

Tanque
En general, las colonias se formaron en la muestra B20 el día 90 de almacenamiento.
Condición de almacenamiento Unidad formadora de colonias (UFC/mL) en muestra de combustible
tendía a ser similar a los asentamientos de colonias en B0. Al mismo tiempo,
B0 B20 B100
la transformación del crecimiento de colonias en B20 tendía a ser aleatoria. B20
Interior SS 2,60,Eþ07 3,40,Eþ07 6,60,Eþ07
almacenados en los primeros 30 días mostraron patrones de formación de colonias similares en
Vidrio 6,20,Eþ07 1,13,Eþ08 1,17,Eþ08
ambas muestras almacenadas en tanques de SS y tanques de vidrio. Sin embargo, después de más
Exterior SS 8,60,Eþ07 1,24,Eþ08 1,06,Eþ08
de 30 días de almacenamiento, en B20, que se almacenó expuesto a la luz, un
Vidrio 6,63,Eþ07 1,45, Eþ08 1,08,Eþ08
ocurrió una fase en la que las colonias parecían combinarse para formar flóculos y
luego se esparce en pequeñas colonias con una distribución uniforme.

microorganismos Se identifica que las muestras iniciales de biodiesel tienen agua

contenido por encima de los estándares de calidad debido al almacenamiento de posproducción
condiciones y transporte. El alto contenido de agua disuelta en el combustible,
especialmente B20 provocará la formación de microgotas, que son
culminado o pico la productividad del crecimiento de microorganismos en
agua libre que se encuentra en el fondo del tanque. En tanques de vidrio y tipo SS a
la capa de agua y aceite es visible en el fondo del tanque. La proliferación de microorganismos
crece bajo tales condiciones fundamentales. Un
aumento en el contenido de agua del biodiesel puede deberse a una inadecuada
condiciones de almacenamiento, especialmente las altas temperaturas. La presencia de agua
conduce a la hidrólisis de los ésteres, lo que resulta en la formación de ácidos grasos libres
ácidos y glicerol [2, 37, 38].
Un aumento en el contenido de agua en el combustible es idéntico a un aumento en
su acidez. Se sabe que el combustible diesel a base de petróleo con alto contenido de azufre
contenido provoca un aumento en los números de ácido, pero en este estudio, el cambio
durante el almacenamiento no fue más del 11%. Esta condición indica que el
la adición de un 20% de biodiesel al combustible desencadena significativamente el crecimiento y
metabolismo de los microorganismos. Las temperaturas ambiente más altas también favorecen
el crecimiento de microorganismos.
3.2.1. Morfología de colonias microbianas
Las propiedades de las colonias pueden ayudar a evaluar la capacidad de la bacteria
identidad. Las colonias bacterianas pueden ser bastante diversas dependiendo de la especie.
Las diferentes formas de colonias en el tipo de combustible almacenado en metal y vidrio.
tanques indican diferencias en la dominancia de los microorganismos que
crecer en el aceite. La Tabla 2 muestra la forma, borde, textura, consistencia,
color, tamaño y elevación de la colonia formada en cada muestra de combustible después
90 días de almacenamiento.
Como se ve en la Figura 3, las colonias componen una amplia distribución con pequeños
tamaños en condiciones de almacenamiento expuestas al medio ambiente (tanque de vidrio). En
Por el contrario, la forma de las colonias bacterianas en B0 y B20 estuvo dominada por
los pequeños asentamientos. Por lo tanto, tiende a propagarse muy juntos y
3.3. Cantidad de colonia microbiana
En la mayoría de las estimaciones de UFC, se supone que cada colonia es distinta y
generada por una sola célula microbiana viva, como se presenta en la Tabla 3. Por lo tanto,
la concentración de unidades formadoras de colonias se puede expresar mediante logaritmos
notación, donde el valor mostrado es base logarítmica 10 (Log CFU).
El número de bacterias detectadas en la placa de muestra en el Colony
El contador de cada muestra de aceite aumentó con el tiempo de almacenamiento. En
en general, el número de colonias microbianas en muestras de aceite almacenadas en vidrio
tanques era más que los almacenados en los tanques de las SS. Como se ve en la Figura 4, el
número de colonias formadas en B20 es equivalente al de B100 y/o
tiende a ser mayor.
Los resultados de la medición en esta sección contienen una incertidumbre que
proviene de diversas fuentes. Refiriéndose a varios estudios, el más
fuentes significativas de incertidumbre para cantidades biológicas derivadas son aquellas
relacionado con el valor asignado del calibrador del usuario final, el largo plazo
precisión intermedia, y el sesgo [39, 40, 41]. El error de calibración
depende de la precisión del estándar de calibración. Error de calibración
del fabricante del equipo del contador de colonias se puede estimar
por límite de error dividido por 2 [33]. La referencia de calibración del contador de colonias
estándar utilizado se refiere a los datos del fabricante (Stuart Colony Counter) que
también es confirmado e informado por [42, 43, 44]. Los resultados de la prueba muestran que
el factor de incertidumbre para leer los datos digitales del contador de colonias es 0,1 log
CFU y el porcentaje de incertidumbre de calibración está en el rango de 1.19–6.8%.
Para simplificar la expresión matemática, solo tenemos
consideró toda la serie de dilución como un proceso que da como resultado la
factor de dilución, F. Un resultado típico con pasos de dilución 1:10 y superiores,
presentando el factor de dilución f ¼ 106 , la incertidumbre estándar wf ¼ 0.02 (2
%). En la operación de contador de colonias, la relación promedio entre las colonias encontradas y
las colonias reales en una imagen fue de 0,75 con un estándar de desviación
de ¼ 0,26 que indica una subestimación general del número de colonias. De

Figura 4. Logaritmo de las unidades formadoras de colonias en B0, B20 y B100 en SS y Glass Tanks.

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Figura 5. Perfil de crecimiento de colonias en B0, B20 y B100 en (a) tanque SS (b) tanque de vidrio (al aire libre).
experimentos de calibración de dilución, se encuentra que la incertidumbre estándar relativa de
los inóculos de 1 ml es w = 2 % y la de las mediciones de 0,1 ml es igual a w = 8 %, como también
lo informa [43].
La cantidad de microbios que crecen en los tanques de acero inoxidable es menor que en los
tanques de vidrio, tanto en interiores como en exteriores. El aumento de la cantidad microbiana
es lineal con la composición de biodiesel en el combustible y solo se aplica a las muestras
almacenadas en el tanque SS. El mayor crecimiento microbiano ocurrió en la muestra B20.
La cantidad es relativamente mayor que la microbiana detectada en B100 y B0 en todas las
condiciones de almacenamiento. B20 parece ser más propenso a la degradación que B100. Esta
condición está relacionada con los cambios extremos en las propiedades físicas que ocurren
durante el almacenamiento. Horel y Schiwer [22] explicaron que los componentes de los
combustibles de hidrocarburos más fácilmente degradables son los compuestos de cadena media
que pueden promover el rápido crecimiento de las comunidades microbianas locales. Las mezclas
de biodiésel (B20) todavía están dominadas en un 80 % por aceite de petróleo, por lo que
contienen alcanos de cadena lineal (parafina). Este enlace molecular tiende a ser degradado más
fácilmente por los microorganismos que por los aromáticos y los alquenos (olefinas). Como
describe Groysman [45], los microorganismos no crecen mucho en combustibles con más olefinas
y compuestos aromáticos, esto se debe a que los microbios consumen hidrocarburos de mayor
peso molecular disponibles en el combustible. Sin embargo, la presencia de aromáticos y
oxigenados en los combustibles, así como la adición de biodiesel en las mezclas, provocan un
aumento de la solubilidad en agua de los combustibles.
Las colonias de microorganismos que crecen en el aceite diesel de petróleo generalmente
provienen de grupos de hongos y bacterias. Es muy probable que la presencia de una mezcla al
20 % de biodiésel detenga el crecimiento de ciertas especies, pero desencadene el crecimiento
de otras especies del mismo género y/o diferentes con patrones de crecimiento diferentes. Esta
condición está relacionada con los nutrientes aportados y la reducción del 20% del contenido de
azufre en el aceite. Los posibles microorganismos que sobreviven y crecen se vuelven más
diversos con el tiempo de almacenamiento.
Como afirman Martín-Sánchez et al. [7], la diversidad de microorganismos contenidos en la
mezcla de mezclas de biodiesel se considera baja, pero tiene una mayor capacidad de
supervivencia, debido a la disponibilidad de una cantidad de nutrientes completos y energía. Hubo
un ligero cambio de crecimiento bacteriano a crecimiento de hongos con el aumento de biodiesel
en las mezclas de combustible.
De la comparación que se observa en la Figura 5, el aumento de colonias bacterianas en dos
tipos de tanques de almacenamiento, ambos tendieron a mostrar un aumento progresivo. Muestra
un aumento dramático después de 60 días de almacenamiento. La proliferación de microorganismos
en muestras B20 mostró patrones de crecimiento más volátiles que B0 y B100 que fueron
aumentos relativamente constantes. En un tanque de vidrio al aire libre, las poblaciones
microbianas más altas se observaron en B20.
La cantidad de UFC producida en B100 es en promedio un 56 % mayor que la condición
inicial, en comparación con el 34 % y el 36 % respectivamente en B0 y B20. Este término se
correlaciona con la variedad de nutrientes y las fuentes excedentes de carbono proporcionadas
por los medios de crecimiento de microorganismos, así como con el nivel más bajo de azufre en
la mezcla de combustible debido al mayor uso de biodiesel en las mezclas. Los resultados de
nuestro estudio también están en línea con un estudio
6
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por Manuel Restrepo-Florez et al. [46] también asumieron que la cantidad de microbios que crecen
en B100 es relativamente menor que B20 y B0. Los recuentos microbianos presentan un fuerte
aumento durante el primer mes de almacenamiento debido a un exceso de fuentes de carbono. A
concentraciones más altas de biodiesel, se observa una disminución estadísticamente significativa
en los recuentos microbianos. También se encuentra una reducción estadística en los recuentos
microbianos en muestras de biodiésel puro (B100) después de 50 días de almacenamiento.
Mientras que la actividad microbiana es detectada por Mitter et al [47] en las primeras 5 semanas
de contaminación del combustible.
En base a este estudio se obtiene que la cantidad de biodiesel en las mezclas no es
constantemente lineal con la tasa de degradación del combustible por ataques microbianos. Estos
hallazgos son muy diferentes a otros estudios previos. Pero todas las muestras de combustible,
con y sin biodiesel, son particularmente susceptibles a ataques microbianos en un período de
almacenamiento de 2 meses o más. La dinámica de colonias que se muestra a partir del análisis
morfológico demuestra que los microorganismos que sobreviven en muestras de combustible en
condiciones de almacenamiento respaldan su crecimiento con energía y disponibilidad de
nutrientes.
4. Conclusión
La morfología de las colonias y el cambio en las propiedades del combustible indican cambios
en la atmósfera de los medios de cultivo microbianos para ganarse la vida. La mezcla de B0 y
B100 provoca la oscilación del crecimiento de colonias microbianas, además de exacerbar el nivel
y la tasa de deterioro del combustible. El nivel de
la contaminación microbiana que ocurre en todas las muestras de combustible se clasifica como
alta contaminación (superior a 105 L-1). El análisis de la morfología de las colonias muestra un
cambio potencial en el tipo de microorganismo (bacterias a hongos) con el aumento de biodiésel
en las mezclas de combustible (B20). En un tiempo de almacenamiento o incubación de más de
60 días, la cantidad de microorganismos cambia y crece dramáticamente, especialmente en B20
almacenada en tanques de vidrio.
La tasa de contaminación microbiana en B20 parecía ser más rápida que en otros, pero el peor
deterioro del combustible ocurrió en B100, especialmente en los tanques de vidrio colocados al
aire libre. El combustible almacenado en los tanques de almacenamiento tiene abundantes
nutrientes y suficiente energía para que los microorganismos crezcan más en riesgo de
contaminación y degradación del combustible. Estos hallazgos afectarán significativamente las
estrategias de manejo y almacenamiento de combustible, incluido el diseño de los tanques de almacenamiento.
Declaraciones
Declaración de contribución del autor
Leily Nurul Komariah: concibió y diseñó los experimentos; Realizó los experimentos; analizó
e interpretó los datos; Reactivos, materiales, herramientas de análisis o datos aportados; Escribió
el papel.
Susila Arita: Concibió y diseñó los experimentos; Reactivos, materiales, herramientas de
análisis o datos aportados.
Muhammad Rendana: analizó e interpretó los datos; Escribió el papel.
Machine Translated by Google

LN Komariah et al. Heliyon 8 (2022) e09264

Cindi Ramayanti: realizó los experimentos; reactivos aportados, [15] C. Ye, TH Ching, BA Yoza, S. Masutani, QX Li, degradación comebólica de
biodiesel mezclado por Moniliella wahieum Y12T y Byssochlamys nivea M1, Int.
materiales, herramientas de análisis o datos.
Biodeterioro. Biodegradable 125 (2017) 166–169.
Ni Luh Suriani: analizó e interpretó los datos. [16] AO de Azambuja, F. Bücker, PD de Quadros, K. Zhalnina, R. Dias, BB Vacaro, C. Correa, MF Ferr~ao, FA
Desi Erisna: realizó los experimentos. de Oliveira Camargo, E. Triplett, FM Bento, Composición de la comunidad microbiana en combustible
diésel almacenado en Brasil con contenido variable de azufre, mediante secuenciación de alto rendimiento,
Fuel 189 (2017) 340–349.
Declaración de financiación
[17] M. Moreira de Souza, TS Colla, F. Bücker, MF Ferr~ao, C. te Huang, R. Andreazza, F. Anast acio de Oliveira
Camargo, FM Bento, Potencial de biodegradación de Serratiamarcescens para mezclas de diésel/

Esta investigación no recibió ninguna subvención específica de agencias de financiación en biodiésel , En t. Biodeterioro. Biodegradable 110 (2016) 141–146.

los sectores público, comercial o sin fines de lucro.

[18] G. Boelter, JC Cazarolli, SA Beker, PD de Quadros, C. Correa, MF Ferr~ao,
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Declaración de disponibilidad de datos comportamiento de hongos deteriogénicos durante el almacenamiento simulado de diesel, biodiesel y
mezcla B10 en Brasil, Environ. ciencia contaminar Contr. Ser. 25 (2018) 30410–30424.

Datos incluidos en el artículo/material complementario/referenciados en el artículo. [19] G. Sørensen, Dv Pedersen, AK Nørgaard, KB Sørensen, SD Nygaard, Estudios de crecimiento microbiano
en mezclas de biodiésel, Bioresour. Tecnología 102 (2011) 5259–5264.
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Declaración de declaración de intereses
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Los autores declaran no tener conflicto de intereses. [21] F. Bücker, NA Santestevan, LF Roesch, RJ Seminotti Jacques, M. do CR Peralba, FA de O. Camargo, FM
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No hay información adicional disponible para este documento.
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Agradecimientos [24] AU Soriano, LF Martins, E. Santos de Assumpç~ao Ventura, FH Teixeira Gerken de Landa, E. de Araújo
Valoni, FR Dutra Faria, RF Ferreira, MC Kremer Faller, RR Val erio, D. Catharine de Assis Leite, F. Lima
do Carmo, RS Peixoto, Aspectos microbiológicos del biodeterioro del biodiesel y biodiesel/mezclas de
Los autores agradecen al Laboratorio de Ingeniería de Energía Renovable de la Universitas
diesel, Int. Biodeterioro. Biodegradable 99 (2015) 102–114.
Sriwijaya y al Centro Sawit por brindar apoyo a las instalaciones y los datos técnicos durante el
trabajo, y a la Clínica SAFE por su apoyo en el análisis de datos y sugerencias sobre la preparación [25] MF Imron, SB Kurniawan, N. 'Izzati Ismail, SRS Abdullah, Desafíos futuros en la biodegradación del diésel
por aislamientos bacterianos: una revisión, J. Clean. Pinchar. 251 (2020) 119716.
del manuscrito.

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