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Quim. Estrella nueva,vol. 32, núm. 1, 87-91, 2009

Optimización de la metodología para analizar el ácido ascórbico y dehidroascórbico en vegetales

Artigo
flávia milagres campos*, sônia machado rocha ribeiro, ceres m. della lucia e helena maria pinheiro-sant'ana
Departamento de Nutrição e Saúde, Universidade Federal de Viçosa, Av. PH Rolfs, s/n, 36571-000 Viçosa - MG, Brasil paulo
cesar stringheta
Departamento de Tecnología de Alimentos, Universidade Federal de Viçosa, Av. PH Rolfs, s/n, 36571-000 Viçosa - MG, Brasil

recibido el 1/10/08; aceito em 18/8/08; publicado en la web el 15/12/08

En este estudio se probaron diferentes soluciones para extraer vitamina C. Se optó por la cromatografía líquida de alta resolución y las condiciones
se basaron en elución isocrática en columna de fase inversa. El ácido dehidroascórbico se determinó indirectamente después de su reducción con
ditiotreitol. Se demostró que se requiere el uso de ácido metafosfórico para estabilizar la vitamina C y fue necesario neutralizar el pH del extracto
para aplicar ditiotreitol. La recuperación promedio fue del 90% en las muestras de col rizada y tomate. La presencia de aceite no interfirió en la
extracción y la metodología se puede utilizar para analizar verduras salteadas.

Palabras clave: vitamina C; extracción; cromatografía

Introducción La tografía (HPLC) se destaca como un método confiable y generalmente simple.

La vitamina C ha recibido la mayor atención de los investigadores,
principalmente debido a su acción antioxidante. La vitamina C es
necesaria para producir colágeno, y es esencial para la oxidación de
fenilalanina y tirosina y para convertir la folacina en ácido tetrahidrofílico,
y también está involucrada en el proceso de reacción inflamatoria.1,2
Además, es conocida la importancia de la vitamina C en la
biodisponibilidad del hierro dietético no hemínico.3
La principal forma activa de la vitamina es el ácido ascórbico (AA), pero su
forma oxidada, el ácido dehidroascórbico (DHA), también muestra una función
biológica.4Sin embargo, los seres humanos no pueden sintetizar AA, que
necesita ser suministrado a través de los alimentos.1Se sabe que las verduras y
las frutas son las mejores fuentes de vitamina C y es importante determinar su
contenido de AA y DHA. La obtención de datos fiables sobre el contenido de
vitamina C en las hortalizas se ha vuelto imprescindible a la luz de los estudios
epidemiológicos que relacionan la ingesta de hortalizas y la prevención de
enfermedades.
El análisis de vitamina C en alimentos requiere cuidados que pueden variar
dependiendo de la matriz vegetal en estudio. La alteración de la estructura
celular durante los procesos de extracción permite que las enzimas
responsables de la degradación del AA entren en contacto con el sustrato. Por
tanto, puede ser necesario impedir la acción enzimática reduciendo el pH, lo
que favorece la estabilidad del AA. Además, la presencia de metales como el
hierro y el cobre aumentan la oxidación del AA.1y generalmente se recomienda
un agente quelante de metales.5
Agua pura6o se han usado soluciones ácidas para extraer AA de
tejidos vegetales. Los ácidos comúnmente utilizados incluyen ácido
metafosfórico (MPA)5,7-10y ácido oxálico5,11,12solo o en combinación con
otros ácidos y/o disolventes orgánicos, con o sin antioxidantes como
EDTA y BHT.
Se han informado diferentes métodos de análisis para la vitamina C
en los alimentos. El método clásico es el titulométrico que no cuantifica
DHA sino solo AA.13espectrofotometría,14fluorimetría,10,15amperometría,
dieciséiselectroforesis,17,18cromatografía7-9,19y métodos enzimáticos20también
se han utilizado, pero algunos de estos métodos tienen limitaciones con
respecto a la especificidad. Croma líquido de alto rendimiento
* correo electrónico: flaviamilagrescampos@yahoo.com.br
Después de la separación en la columna de cromatografía, el uso de un detector de
matriz de diodos puede mejorar la confiabilidad de la identificación de AA.19Como la
detección de DHA se ve obstaculizada por su débil capacidad de absorción molar,1la
mayoría de los investigadores optan por reducirlo a AA antes de la separación
cromatográfica, haciendo una cuantificación indirecta por diferencia. Entre los
agentes reductores se ha utilizado ampliamente el ditiotreitol (DTT).6,19,21,22
El objetivo de este estudio fue probar la metodología para el análisis
de AA y DHA en vegetales mediante cromatografía líquida de alta
resolución de fase reversa, optimizando los procesos de extracción de
ácido ascórbico y conversión de DHA a ácido ascórbico, utilizando
ditiotreitol (DTT). Además, se verificó la eficiencia de la metodología
optimizada en vegetales con adición de aceite.
experimental
preparación de muestras y materiales
Las verduras escogidas para este estudio fueron las coles (Brassica
oleracea, variedad acephala), cultivar Manteiga y tomate (Lycopersicum
esculentum), variedad Santa Cruz, debido a que son muy consumidas en
Brasil y son muy diferentes en su estructura, lo que permitió evaluar la
eficiencia del método de extracción y el análisis de dos tipos diferentes de
plantas.
Las hortalizas se adquirieron con un grado de desarrollo
adecuado: tomates con coloración roja uniforme y hojas de berza de
tamaño estándar comercial.
Se llevó a cabo el siguiente experimento para probar la aplicación del
método en verduras salteadas y la interacción con el aceite: las hojas de
berza se lavaron con agua corriente, se secaron sobre toallas de papel, se
dividieron por la mitad y se picaron. Una de las mitades tiene vitamina C
extraída justo después de picar. A la otra mitad se le añadió aceite de soja,
en la proporción de 7 g de aceite por 50 g de col. La muestra con aceite
fue sometida al proceso de extracción.
reactivos y otros materiales
Se utilizaron: agua ultrapura, producida en un sistema
Milli-Q (Millipore, USA), ácido metafosfórico (pa) (Merck,
88
Alemania), ditiotreitol (DTT) (Sigma Aldrich, Alemania), ácido sulfúrico
(H SO ) (pa)
2
(Mallinckrodt,
4
EE. UU.), ácido L-ascórbico estándar y ácido
acético (grado HPLC, Brasil).
Las muestras se filtraron a través de papel de filtro (Quanty, Brasil) y antes
de la inyección las muestras se filtraron en unidades de filtración Millex HV de
polietileno de 0,45 µm de porosidad (Millipore, Brasil).
extracción de vitamina c
Los métodos de extracción de vitamina C se probaron utilizando las
siguientes soluciones de extracción: solo agua, según lo propuesto por Gökmen
y otros.,6Ácido metafosfórico (MPA) al 4,5% según el método propuesto por
Giannakourouy otros.9y solución de extracción que consiste en MPA al 3%,
ácido acético al 8%, EDTA 1 mM y SO 0,15 MH, basado
2
en
4
Frankey otros.,8con
algunas modificaciones.
Los procesos de extracción tuvieron la siguiente secuencia y solo se
alteraron las soluciones extractoras: los vegetales se lavaron con agua
corriente y se retiraron las partes no comestibles. Se agregaron quince
mL de la solución de extracción a 5 g de muestra; a continuación, la
muestra se molió en un microtriturador durante 5 min y se filtró al vacío a
través de papel de filtro. Los filtrados se diluyeron en agua al volumen de
25 mL y se centrifugaron durante 15 min a 2683 xg (4000 rpm). El
sobrenadante se almacenó a 5 °C hasta el análisis cromatográfico que se
realizó el mismo día.
Se destaca que las muestras se mantuvieron alejadas de la luz solar y de la luz
artificial durante todo el período de análisis mediante el uso de cristalería de color
ámbar o papel de aluminio.
reducción de dha
El DHA se cuantificó por diferencia entre el contenido total de AA (después
de la reducción de DHA a AA) y el contenido de AA antes de la conversión de
DHA.
Se utilizó DTT como agente reductor de DHA. Se probaron cuatro
concentraciones diferentes de DTT. A 1 mL del extracto de muestra se le
agregaron las siguientes soluciones: 1 mL de solución de DTT a 4, 8, 10 y 50 mM
y 1 mL de solución de DTT a 10 y 50 mM, con adición de 0,5 mL de tampón
Trizma (pH 9,0). Se añadió el tampón para elevar el pH durante el tiempo de
reacción hasta alrededor de 5,5.
Durante la reacción las soluciones se mantuvieron a temperatura
ambiente, protegidas de la luz, por periodos entre 10 y 120 min.
También se probó la adición de ácido sulfúrico 0,4 M para reducir el
pH en la solución antes de la inyección cromatográfica.
condiciones cromatográficas
Se ensayaron dos condiciones cromatográficas. Uno, esbozado por
Giannakourouy otros.9consistió en una elución isocrática, detección en el
rango UV, utilizando una fase móvil de agua ultrapura con pH ajustado a
2.2 con MPA, a un caudal de 1 mL/min. La fase móvil propuesta por
Frankey otros.8también se probó, con alteración en el agente
amortiguador: fosfato de sodio monobásico (NaH PO4) 1 mM y EDTA
2
1
mM, pH ajustado a 3.0 con ácido fosfórico (H PO ), flujo de 1 mL/min,
3 4
elución isocrática y detección a 245 nm . En ambas condiciones se utilizó
una columna Lichospher 100 RP18, 250 mm x 4 mm, 5 µm (Merck,
Alemania). Un sistema de cromatografía líquida de alta resolución,
Shimadzu, equipado con una bomba de alta presión, modelo LC-10AT VP;
inyector automático con loop de 50 µL, modelo SIL-10AF; un detector de
matriz de diodos UV-visible modelo SPD-M10A; controlado por el software
Multi System, Class VP 6.12, se utilizó para el análisis.
El AA en las muestras se cuantificó mediante la curva de
calibración. La solución madre estándar (1 mg/mL AA) se preparó en
agua ultrapura y se prepararon soluciones de varias concentraciones
Camposet al. Quim. Estrella nueva
diluyendo la solución madre en la solución de extracción. Diariamente se
prepararon nuevas soluciones estándar. La concentración real de las soluciones
se calculó a partir de la siguiente ecuación:
C (µg/mL) = ABS x 104/ mi1% 1cm
donde C era la concentración real, ABS era la máxima
absortividad (leída a 245 nm) en solución tampón de fosfato,
pH 2,0 1cm
y Efue
1% el coeficiente de absortividad molar (560).1
Resultados y discusión
Optimización de la extracción y análisis cromatográfico de
vitamina c
La extracción de vitamina C de las coles usando solo agua demostró
ser ineficiente porque la cantidad de AA detectada fue unas 30 veces
menor que la cantidad detectada cuando las muestras se extrajeron con
una solución de MPA al 4,5%; como se muestra en la Figura 1. De igual
forma, la extracción de las muestras de tomate con agua no dio buenos
resultados, y el contenido de AA en los extractos de las muestras
extraídas con solución de MPA fue alrededor de un 40% mayor que las
muestras extraídas con agua pura. Estos resultados están en línea con el
informe de Frankey otros.8en un estudio que cuantificó AA en frutas y
verduras. Según los autores, la extracción de AA solo con agua era
suficiente cuando se trataba de frutas, pero se demostró que la adopción
de este método para las verduras de hoja provocaba la pérdida de AA
durante el proceso de extracción, especialmente en la lechuga, cuyo pico
de AA ni siquiera se detectó. El AA puede haberse degradado durante la
extracción con agua, o la extracción puede haber sido incompleta, debido
a las diferencias inherentes a los vegetales. En el presente estudio, la
degradación o ineficiencia en la extracción de AA durante el uso de agua
pura se mostró claramente para las coles. Aunque la pérdida de AA
durante la extracción con agua fue menor en el tomate, la pérdida fue
bastante considerable.
Figura 1.Contenido de ácido ascórbico (mg/100 g) en col y tomate. Agua: solución
extractora constituida por agua pura. MPA al 4,5 %: solución de extracción compuesta
por ácido metafosfórico al 4,5 %
Además según Frankey otros.,8se puede suponer durante la
extracción con agua que la enzima ascorbato oxidasa, presente en las
verduras de hoja, no se inactivó por completo. El rango óptimo de pH de
reacción de la enzima está entre 5,0 y 6,5.23El pH osciló entre 5,7 y 6,1 en
los extractos de berza sin adición de MPA, mientras que en los extractos
que contenían MPA el pH estuvo siempre por debajo de 2,0. Es probable
que en las soluciones que contenían MPA al 4,5% se inactivara la
ascorbato oxidasa, ya que a pH por debajo de 4 su actividad es
prácticamente nula. Cuando se comparó la extracción con agua en berza
y tomate, la degradación de AA pudo haber sido mayor en las muestras
de berza debido a que el pH de los extractos estaba en el
vol. 32, nº 1 Optimización de metodología para análisis de ácido ascórbico y dehidroascórbico
rango óptimo de acción de la ascorbato oxidasa. En los extractos de tomate, al
ser el pH de 4,4, debido a la acidez del propio tomate, la enzima actuó de forma
menos eficiente y consecuentemente la degradación de AA fue menor. La
ascorbato oxidasa se indica como la principal enzima involucrada en la
degradación enzimática de AA.4
Sin embargo, se observó que utilizando MPA al 4,5% como solución
extractora y una fase móvil compuesta por agua ultrapura, pH 2,2
ajustada con MPA, durante varias semanas, hubo una pérdida de calidad
en los datos, con aparición de dobles picos para AA y pérdida de calidad
en la resolución (Figura 2A). Esta situación puede deberse a la
acumulación de cristales de MPA en la columna de cromatografía, con la
consiguiente alteración de la protonación del AA durante el paso por la
columna, ya que una alta concentración de iones de hidrógeno mantiene
al AA completamente protonado.2Otros autores han reportado problemas
en el uso de MPA. Yo estaba24informaron dificultad para disolver MPA en
agua ionizada y problemas al pesar MPA causados por su calidad
higroscópica.
Figura 2. Cromatografía de muestras de tomate (A) MPA al 4,5%, agua
acidificada en fase móvil, pH 2,2 con MPA; (B) solución de extracción MPA al 3%,
fase móvil NaHPO4 1 mM, EDTA 1 mM, pH ajustado a 3,0 con HPO; (C) solución
2 3 4 NaH
de extracción 3% MPA, 8% ácido acético, 0,3 NH4 SO y 1 mM EDTA, fase móvil 1
2 Para superar esta situación, fue necesario reducir el pH de la
mM NaH PO4, 1 mM EDTA, pH ajustado a 3,0 con H PO
2 3 4 solución antes de la inyección, con 0,4 MH
Para superar este problema y mantener MPA porque se considera uno de
los mejores ácidos para la conservación de AA,1solución de extracción
89
se preparó con una concentración más baja de MPA (3%) y el pH en la fase
móvil se elevó de 2,2 a 3,0, usando H PO en lugar de MPA3para4 ajustar el
pH. Estas medidas se basaron en el hecho de que H PO tiene una menor
tendencia
3 4
a la cristalización que MPA y un pH muy bajo podría dañar la
durabilidad de la columna de fase inversa. Sin embargo, con la alteración
de la fase móvil, la resolución máxima de AA se volvió muy pobre, como
se muestra en la Figura 2B). Una vez más, la solución de extracción se
modificó a una mezcla que contenía MPA, ácido acético, ácido sulfúrico y
EDTA. En este caso no hubo pérdida en la eficiencia de extracción y la
resolución de pico mejoró considerablemente con el uso de estas
condiciones (Figura 2 C).
Optimización del proceso de reducción de dha
Se probaron diferentes concentraciones de DTT y varios tiempos de
reacción para reducir el DHA presente en las muestras. La adición de 1 mL de
DTT (4 u 8 mM) a 1 mL de extracto de berza y tomate, que contenía 4,5 % de
MPA, resultó en pérdidas o aumentos de AA como máximo del 4 %, después de
tiempos de reacción de 75, 90 y 120 min, como propuesto por Gökmen y otros.6
Por lo tanto, se intentó aumentar la concentración de DTT utilizando una
solución a 50 mM, pero los resultados no cambiaron.
La acción del DTT fue muy baja al pH de las soluciones extractoras
que contenían MPA (1,5 a 2,0), y fue necesario elevar el pH de los
extractos antes de su adición, ya que el DTT actúa mejor a un pH cercano
a la neutralidad.25Para ello se utilizó de 0,5 a 1,5 mL de tampón Trizma 0,5
M, pH 9,0, para obtener un pH final entre 5,5 y 6,0. Se evitó un aumento
aún mayor en el pH porque el rango de pH de estabilidad de AA es 4-6.26
Se optó por utilizar el tampón Trizma (pH 9,0) porque al volumen utilizado
el tampón fosfato (pH 7,0) no fue suficiente para elevar el pH del extracto.
La reducción del pH del extracto antes de la inyección demostró no ser
necesaria, cuando se utilizó una fase móvil acidificada con MPA, pH 2.2, debido
a que el AA fue estable en solución a pH 6.0 después de 15 min, como se
muestra en la Figura 3. Es posible que la ascorbato oxidasa puede haber sido
inactivada durante la extracción con MPA, lo que no permitió que la enzima
volviera a actuar después de que el pH volviera a 6,0 durante el tiempo de
reacción de DTT.
figura 3. Contenido de vitamina C (mg/100 g) en tomate, extraído con MPA al
4,5%, tras 10, 30 y 50 min de reacción con ditiotreitol y tampón Trizma.
Sin embargo, como se tuvieron que alterar las condiciones de
cromatografía y la solución de extracción, como ya se informó,
también se tuvo que modificar la forma de usar DTT. La inyección de
muestras con tampón DTT y Trizma en la fase móvil 2que4contenía
3
PO
4
, EDTA y H PO no tuvo éxito porque no se detectó el pico AA.
2
SO.
4
Se utilizó la solución tampón Trizma para neutralizar el pH del
extracto y luego se le agregaron soluciones de DTT a 10 y 50 mM. La
cantidad de DTT necesaria dependía del contenido de DHA presente
90
en la muestra Basado en informes de otros autores.5,6y en las pruebas se
concluyó que el uso de DTT 50 mM no resultó en una mayor conversión
que cuando se usaron 10 mM. Por lo tanto, se utilizó una solución de DTT
40 mM diluida en el propio tampón. Cuando la solución de DTT y el
tampón se mezclaron con la muestra, la concentración final de DTT fue de
20 mM. Es decir, se añadió 1 ml del extracto a 1 ml de solución tampón
que contenía DTT 40 mM que dio como resultado una solución en la que
el DTT se diluyó a 20 mM.
De manera similar, no se necesitó un tiempo de reacción prolongado. El
uso de DTT 20 mM requirió 10 minutos de reacción. No hubo diferencia en la
conversión de DHA cuando el tiempo de reacción se duplicó a 20 min.
A continuación, se convirtió el DHA de la siguiente manera: se añadió
1 ml de tampón Trizma 0,5 M (pH 9,0) que contenía DTT 40 mM a 1 ml de
muestra. Después de 10 min de reacción, a temperatura ambiente y
protegido de la luz, se interrumpió el proceso agregando 0,5 mL de SO 0,4
M,2 obteniendo
4
un pH final cercano a 2, e inmediatamente después se
realizó la inyección.
extracción y análisis en col rizada con aceite
Para comprobar la influencia de la presencia de aceite en la extracción y
análisis de vitamina C, se analizaron paralelamente muestras de col rizada
similares en forma natural y con adición de aceite. El tratamiento térmico
(salteado) no se aplicó a las muestras de col con aceite para no confundir la
influencia de la presencia de aceite y las pérdidas causadas por el calor. La
extracción, la conversión de DHA y el análisis cromatográfico se llevaron a cabo
de acuerdo con la metodología optimizada informada anteriormente en este
estudio. El único ajuste necesario fue en el tampón Trizma y se agregaron
volúmenes
2 4
de HSO: 1,5 ml de tampón Trizma que contenía DTT 40 mM, para
alcanzar un pH cercano a 5,5. Se añadió ácido sulfúrico
2 4)
(H SO para reducir el pH
antes de la inyección: 1,5 ml de SO 0,4 MH . 2 4
Se observó que la adición de aceite no influyó en la extracción de vitamina
C ni en la conversión de DHA. El coeficiente de variación medio de los
contenidos de AA en las muestras con y sin aceite fue de 1,53%. La
recuperación de AA de las coles con aceite fue del 95,5 % (media de tres
repeticiones). Por lo tanto, se puede afirmar que el método optimizado aquí se
puede utilizar para analizar coles salteadas.
validación de la metodología
La curva estándar se construyó con 5 puntos, cada punto por triplicado.
Los rangos de concentración fueron de 16,5 a 206,1 µg/ml y la pureza de la
solución estándar fue del 97 %. La concentración real se calculó utilizando un
coeficiente de absortividad molar de 560, a 245 nm y pH 2,0. La longitud de
onda máxima y el coeficiente de absortividad molar dependen del estado iónico
de la molécula y, por lo tanto, están influenciados por el pH del medio.27En
solución ácida, el ácido ascórbico existe predominantemente en forma
ionizada. Dentro del rango de pH de 5-10, el ácido ascórbico es
predominantemente como anión.1Bui Nguyen28
presentó coeficiente de absortividad molar de 682,88 a 246 nm (solución
ácida) y Aldrigue29presentó un coeficiente de 699,12 a 263 nm, utilizando
agua como disolvente.
Se detectó buena linealidad, con alto coeficiente de determinación (R2
=0,9996). El límite de detección fue de 50 µg/L determinado en relación a
un pico cuya área era tres veces mayor que la línea de base. La
repetibilidad del método se probó mediante seis inyecciones consecutivas
de 30 µL de AA estándar a 50 µg/mL. Los resultados en forma de
desviación estándar relativa fueron 1,70 % para el área del pico y 0,59 %
para el tiempo de retención.
Las pruebas de recuperación se llevaron a cabo mediante la adición de 0,5
a 1,0 mg de AA a las muestras de col rizada y tomate. La recuperación
promedio fue del 90 % para las coles (media de cuatro repeticiones, entre 83 y
99 %) y del 90 % para los tomates (rango de 85 a 93 %).
Camposet al. Quim. Estrella nueva
contenido de aa y dha en las muestras
En la tabla 1 se muestran los contenidos de AA, DHA y vitamina C total en
las muestras analizadas. Alrededor del 21 % de la vitamina C total en las coles
se detectó en forma de DHA y el 17 % de la vitamina C total en el tomate. Estos
valores fueron diferentes a los reportados por Gökmeny otros.6
donde el DHA representó alrededor del 41% de la vitamina C total del tomate
(7,9 mg/100 g AA y 5,4 mg/100 g DHA). Aunque no analizaron las coles, estos
autores reportaron no haber detectado AA en vegetales de hoja como el perejil
y la menta sino un alto contenido de DHA (218.4 mg/100 g en perejil y 50.3 mg/
100 g en menta). Estos resultados pueden deberse a que la extracción se realizó
solo con agua que puede haber provocado la oxidación de AA a DHA durante el
proceso de extracción, con reversión después de agregar DTT. Con la ruptura
de las estructuras de las células vegetales durante la extracción, se incrementó
la exposición al oxígeno y la actividad de la ascorbato oxidasa puede haber
procedido libremente, porque el pH en los extractos de vegetales de hoja
estaba cerca de la neutralidad.
tabla 1. Contenido de ácido ascórbico (AA), ácido dehidroascórbico (DHA)
y vitamina C total en vegetales
Verdura AA (mg/100 g) DHA (mg/100 g) Vitamina C (mg/100 g)
berza 83,38 ± 8,67 24,21 ± 4,94 113,47 ± 7,92
Tomate 16,54 ± 3,77 3,03 ± 0,58 17,94 ± 0,75
Medias de 3 observaciones + desviación estándar
En hortalizas con pH bajo, como el tomate, la extracción con agua
parece dañar menos la AA, aunque de forma expresiva. En hortalizas de
hoja, la extracción sin reducción del pH condujo a una oxidación casi total
de AA.
Resultados similares a los hallazgos de este estudio fueron
informados por Willsy otros.30en tomate, donde el DHA representó el 7%
de la vitamina C total (18,7 mg/100 g de AA y 1,5 mg/100 g DHA). En otro
estudio, que determinó el DHA después de la separación cromatográfica y
la detección por fluorimetría, el porcentaje de DHA en relación con el
contenido total de vitamina C en tomates fue solo del 2,4%.15
Desafortunadamente, pocos estudios han analizado el DHA en vegetales, lo que
restringe la comparación de resultados. Del mismo modo, se encontraron pocos
estudios que involucren el análisis de AA en coles por HPLC. Los valores detectados
para tomate en el presente estudio estuvieron dentro del rango reportado por otros
autores, considerando la gran diversidad de cultivares disponibles.7,31
CONCLUSIONES
Agregar MPA a la solución de extracción contribuyó a la conservación
de AA durante el proceso de extracción y fue una medida indispensable
en el caso del análisis de vegetales. Sin embargo, para mejorar la
repetibilidad del método fue necesario reducir la proporción de MPA y
agregar otros ácidos y EDTA para estabilizar el AA.
Fueron necesarias pequeñas cantidades de DTT para convertir DHA en AA, pero
el pH de la solución debe neutralizarse para que la reacción se desarrolle de manera
eficiente. El pH necesitaba ser reajustado a 2,0 antes de la inyección.
La metodología propuesta aquí fue eficiente en la extracción de AA de
vegetales, incluidos los vegetales de hoja con la adición de aceite y
demostró ser específica. Aunque la necesidad de ajustar el pH de los
extractos para la conversión de DHA introdujo más pasos en el análisis,
esto resultó en la mejora de la calidad de los datos obtenidos.
expresiones de gratitud
Los autores agradecen a la FAPEMIG por la beca de Maestría en
Ciencias al primer autor.
vol. 32, nº 1 Optimización de metodología para análisis de ácido ascórbico y dehidroascórbico
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