CURSO: INMUNOLOGIA PRÁCTICA

CICLO: IV
DOCENTES RESPONSABLES DE PRÁCTICA:
REYES RUÍZ AYDA LILIANA
SEMESTRE: 2022-II HERNANDEZ APARCANA, NOHELIA MELIZA
MENDOZA YÁÑEZ, CÉSAR AUGUSTO
 UNIVERSIDAD PRIVADA SAN JUAN
BAUTISTA FACULTAD DE CIENCIAS DE
LA SALUD ESCUELA PROFESIONAL DE
MEDICINA HUMANA
“Dr. Wilfredo Erwin Gardini Tuesta”

ACREDITADA POR SINEACE

RE ACREDITADA INTERNACIONALMENTE
POR RIEV

PRACTICA N°01
OBSERVACION DE ELEMENTOS FORMES DE LA SANGRE

OBJETIVO: Identificar los elementos formes de la sangre

que participan en la respuesta inmune
 MARCO TEÓRICO
Las células sanguíneas se producen en la médula ósea. La médula ósea es el material esponjoso
ubicado en el centro de los huesos que produce todos los tipos de células sanguíneas.
Existen otros órganos y sistemas en nuestro cuerpo que ayudan a regular las células sanguíneas.
Los nódulos linfáticos, el bazo y el hígado ayudan a regular la producción, destrucción y
diferenciación (mediante una función específica) de las células. La producción y el desarrollo de
nuevas células en la médula ósea es un proceso denominado hematopoyesis.
Las células sanguíneas producidas en la médula ósea se forman como células madre. Una célula
madre (o célula hematopoyética) constituye la fase inicial de todas las células sanguíneas. A medida
que las células madre maduran, se desarrollan varias células distintas, como glóbulos rojos,
glóbulos blancos y plaquetas. Las células sanguíneas inmaduras se llaman blastos. Algunos blastos
permanecen en la médula ósea para madurar y otros viajan a otras partes del cuerpo para
convertirse en células funcionales y maduras.
COMPONENTES DE LA SANGRE
ERITROCITOS
LEUCOCITOS
 GRANULOCITOS O POLIMORFONUCLEARES
NEUTROFILO
EOSINOFILO
BASÓFILO
 AGRANULOCITOS
MONOCITOS

• Proceden de un progenitor mieloide

común
• Se diferencian a macrófagos al
extravasarse en los tejidos
• Son de forma redonda u ovalada,
Núcleo variable, generalmente en
forma de riñón ,
• Citoplasma sin gránulos
• Presentan gran actividad fagocitaria
LINFOCITOS
• Son células de la inmunidad
adaptativa
• Presentan clases distintas diferentes
en sus funciones y productos
proteínicos
• Son de forma redonda o irregular,
su núcleo
• Es morado voluminoso y ocupa la
mayor parte de la célula, el
citoplasma es azul y sin
granulaciones
• Su número aumenta con las
infecciones
LINFOCITOS
• Son células de la inmunidad
adaptativa
• Presentan clases distintas diferentes
en sus funciones y productos
proteínicos
• Son de forma redonda o irregular,
su núcleo
• Es morado voluminoso y ocupa la
mayor parte de la célula, el
citoplasma es azul y sin
granulaciones
• Su número aumenta con las
infecciones
 PLAQUETAS
• Las plaquetas son pequeñas
células anucleares de color
púrpura.
• Normalmente se visualiza al
menos una plaqueta por campo
de inmersión en aceite y siete
plaquetas por campo de 100
aumentos; menos de este
número debe alertar al
observador de una posible
trombocitopenia.
 MATERIAL DIDACTICO
• Pizarra virtual
• Material de apuntes
• Sala de Zoom
• Equipo multimedia
• Computadora
• Microscopios
• Colorante Wright o Giemsa
• Alcohol yodado
• Agua destilada
• Láminas portaobjetos limpias y desengrasadas
• Lancetas hematológicas
• Algodón estéril
• Varillas de coloración
• Láminas coloreadas de sangre con Wright
• Papel lente.
• Aceite de cedro
• Guantes
• Contenedor de descarte
 DESARROLLO DE LA PRÁCTICA
La práctica se desarrolla de forma grupal y de acuerdo a la metodología de la asignatura
A. Obtención de sangre capilar:
• Desinfectar el dedo anular con alcohol yodado y algodón y con
una lanceta estéril punzar el dedo y dejar caer una gota de
sangre sobre un extremo de la lámina portaobjetos
• Con ayuda de otra lámina portaobjeto formar un ángulo de 45° y
realizar un frotis, tratando de esparcir homogéneamente la gota
de sangre sobre la superficie de la lámina.
• Dejar secar la preparación y proceder luego a la coloración con
Wright o Giemsa.
 DESARROLLO DE LA PRÁCTICA
B. Coloración
1. Cubrir el frotis con colorante Wright o Leishman por 1 minutp
2. Sin eliminar el colorante agregar agua destilada y dejar actuar por 10’
3. Eliminar luego el colorante y lavar suavemente con agua de caño
4. Dejar secar la lámina coloreada
5. Una vez que la lámina coloreada se haya secado, observar al
microscopio con el objetivo de 100X y aceite de inmersión
 RESULTADOS
Observa y diferencia cada uno de los elementos encontrados en el frotis de sangre periférica
 Frotis sanguíneo y tinción Giemsa
TUTORIAL:
https://www.youtube.com/watch?v=rmKx5JWmo4I
Tinción wright
https://www.youtube.com/watch?v=ksAplYiF3Io&t=96s
 CUESTIONARIO
1. Mencione las posiciones preferenciales de los linfocitos
a nivel de los órganos linfoides periféricos.
2. Cuáles son las estructuras especializadas involucradas
en el proceso de recirculación de los linfocitos?
3. En el frotis de sangre periférica, qué aspectos
morfológicos se evalúa en los eritrocitos?
¿Qué anomalías pueden encontrarse? Leucocitos y
plaquetas.
REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS:
Duarte, M. Manual del hemograma y el frotis de sangre periferica. Bogotá:
Universidad de los Andes, Facultad de Medicina, Ediciones Uniandes, 2013
247 pp.

Salazar A, Sandoval A, Armendariz J. Biología Molecular. Fundamentos y

aplicaciones en las ciencias de la salud. 1ra. Ed. Mexico D.F: MacGraw Hill:2013
GRACIAS
CURSO: INMUNOLOGIA-PRÁCTICA

CICLO: IV

SEMESTRE: 2022-II
 UNIVERSIDAD PRIVADA SAN JUAN BAUTISTA
FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD
ESCUELA PROFESIONAL DE MEDICINA HUMANA
“Dr. Wilfredo Erwin Gardini Tuesta” ACREDITADA POR SINEAUCE
RE ACREDITADAINTERNACIONALMENTE POR RIEV

SEGUNDA SEMANA
OBJETIVO:
Identificar la estructura y localización de los diferentes órganos linfoides
primarios y secundarios en el ratón a través de sus características
morfológicas.

DOCENTES RESPONSABLES DE PRÁCTICA

REYES RUIZ AYDA LILIANA

HERNANDEZ APARCANA NOELIA MELIZA
MENDOZAYÁÑEZ CÉSAR AUGUSTO
ÓRGANOS DEL SISTEMA
LINFÁTICO PRIMARIOS Y
SECUNDARIOS EN LA
ESPECIE HUMANA
ÓRGANOS LINFOIDES EN RATONES
 IDENTIFICACIÓN DE ÓRGANOS LINFOIDES EN
VERTEBRADOS
PROCEDIMIENTO:
1° Sacrificar al ratón por dislocación cervical
2° Fijar al ratón con alfileres a la tabla de disección
3° Realizar una incisión en V en la piel del ratón en la región abdominal
del mismo (región ventral), retirar con cuidado la piel del ratón hacia los
lados y ubicar los:
• Órganos linfoides primarios: Médula ósea y Timo
• Órganos linfoides secundarios y periféricos:
- Bazo -Ganglios axilares
- Ganglios inguinales - Ganglios mesentéricos
- Placas de Peyer
DISECCIÓN
Responda a las siguientes preguntas:

1.¿Cuál es la diferencia entre plasma y suero?

2. Diga qué entendemos por fórmula leucocitaria,
cuáles son los valores normales en el adulto y
¿qué significado tienen esos valores normales?
3.¿Qué es la histamina y cuál es su importancia?
4.¿Qué es la anemia y cuál es su origen?

Video tutorial:
Órganos linfoides
https://www.youtube.com/watch?v=fyiI6Q7NkaM
23:07 min.
REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS:

Male D. Inmunología. Edit. Elsevier, Ed. 9, año 2021.

Murphy, Kenneth - Weaver, Casey - Mowat, Allan,

Inmunología de Janeway, Edit. Manual Moderno, Ed. 9, Año 2019.
Elibro. https://elibro.net/es/ereader/upsjb/131274?page=1
Gracias
CURSO: INMUNOLOGIA- PRÁCTICA

CICLO: IV
DOCENTES RESPONSABLES DE PRÁCTICA:
• AYDA LILIANA REYES RUÍZ
SEMESTRE: 2022-II • NOHELIA MELIZA HERNANDEZ APARCANA
• CÉSAR AUGUSTO MENDOZA YÁÑEZ
 UNIVERSIDAD PRIVADA SAN JUAN
BAUTISTA FACULTAD DE CIENCIAS DE
LA SALUD ESCUELA PROFESIONAL DE
MEDICINA HUMANA
“Dr. Wilfredo Erwin Gardini Tuesta”

ACREDITADA POR SINEACE

RE ACREDITADA INTERNACIONALMENTE
POR RIEV

PRACTICA N° 03
IDENTIFICACIÓN DE PROTEINAS SERICAS UTILIZANDO ELECTROFORESIS

Objetivos:
• Determinar la presencia de proteínas séricas presentes en una muestra
de sangre periférica humana mediante electroforesis
• Observar el patrón electroforético del plasma sanguíneo
• Relacionar el perfil electroforético con diversas enfermedades
ELECTROFORESIS DE PROTEINAS SERICAS

MARCO TEORICO

La electroforesis de proteínas séricas es un método que permite separas las proteínas

del plasma humano en fracciones.
La prueba consiste en aplicar el suero de un paciente en un gel y someterlo a un
campo eléctrico. Las proteínas del suero recorren diferentes distancias, en razón del
tamaño y peso molecular, formando fracciones o bandas.
En este tipo de muestras es posible identificar a albúmina, alfa-1-globulina,
Alfa-2-globulina, beta globulina y gammglobulina, siendo posible estimar su
concentración posteriormente.
El patrón electroforético de estas proteínas brinda información importante para el
médico, auxiliando en el diagnóstico de múltiples enfermedades como el mieloma
múltiple, cirrosis, diversos procesos inflamatorios, neoplásicos, infecciosos o de
naturaleza inmune
PATRON ELECTROFORETICO EN PLASMA
PERFIL ELECTROFORÉTICO:
 ELEMENTOS NECESARIOS PARAUNA
ELECTROFORESIS
Para realizar una electroforesis se requiere
de una serie de elementos
ELECTROFORESIS EN GELES DE AGAROSA
ELECTROFORESIS EN ACETATO DE CELULOSA
 ELECTROFORESIS DE PROTEINAS SERICAS EN
ACETATO DE CELULOSA
Materiales: Preparación de reactivos
• Fuente de alimentación 0-300vOLTIOS - Tampón de electroforesis (Tris):
• Una cubeta de electroforesis con puentes Mezclar los 100 ml del tampón Tris Hippurate
• Aplicador semimicro con 4 depósitos concentrado con 1000 ml de agua destilada (se puede
• Micropipetas preparar menos cantidad respetando siempre las
• Cubetas proporciones).
• Agitador - Líquido decolorante (Ácido cítrico):
• Estufa - Disolver 1 paquete de ácido cítrico en 1000ml de
Reactivos: agua desionizada.
• Tiras de acetato de celulosa (Cellogel) - Agitar hasta que el polvo se disuelva
• Disolución tampón completamente
• Tiras Mylar (soportes para transparentar
• Líquido colorante (Rojo Ponceau
• Líquido decolorante (ácido cítrico)
• Solución transparentadora
Muestra:
• Suero o plasma
Preparación de la muestra: Pipetear 30 microlitros de
muestra en las salientes del aplicador
 PROCEDIMIENTO
1 2
1. Tomar una tira de Cellogel y sumergirla en una
cubeta que contenga 100 ml de tampón. Agitar en el
agitador de bandeja durante 10 – 15 minutos.
2. Sacar la tira de la cubeta (el tampón se recupera) y
retirar el exceso de tampón poniéndola entre 2
láminas de papel de filtro.
3. Posicionar la tira Cellogel sobre el puente con la cara
porosa hacia arriba, las tiras vienen con un corte en
una de sus esquinas, ese corte debe estar en la parte
inferior derecha del operador.
4. Introducir el puente en el interior de la cubeta.
5. Cargar el aplicador múltiple con 30 ul del suero en
cada muesca.
6. Bajar el aplicador sobre las muescas varias veces
para que se cargue correctamente.
7. Descargar las muestras sobre un papel de filtro
situado en la mesa (se desecha esta primera tanda).
 PROCEDIMIENTO
1
8. Volver a cargar las muestras de nuevo y descargar las
muestras sobre la tira de acetato de celulosa.
9. La siembra se hace a 2 cm del cátodo (polo (-)).
Mantener pulsado el aplicador durante 10 segundos
para cerciorarnos que la muestra penetre en la tira.
10. Rellenar completamente los 2 compartimentos de la
cubeta con tampón de electroforesis.
2
11. Se enciende la fuente de alimentación y se aplican
200 V (voltaje constante) durante 35 minutos
12. Transcurrido el tiempo se desconecta la fuente de la
red y se saca la tira Cellogel del puente.
13. Se traslada la tira cortándole ambos extremos
(dejamos sólo la parte donde se encuentra el suero ya
fraccionado) a un recipiente con el líquido colorante 3
(Rojo Ponceau).
14. Agitar durante 5 minutos. Posteriormente recuperar
el Rojo Ponceau a su frasco y lavar suavemente con agua
destilada para retirar el exceso de colorante.
 4
2
PROCEDIMIENTO 1

15. Pasar la tira al recipiente con líquido

decolorante (Ácido Cítrico), agitar y hacer
sucesivos lavados hasta que quede el fondo
completamente blanco. en este momento ya se
visualizan perfectamente las fracciones.
16. Para transparentar se introduce la tira en la
disolución transparentadora. Agitar durante 1
minuto.
17. Colocar la tira de Cellogel sobre un papel
Mylar. Cortar los bordes y retirar el exceso de
disolución evitando la aparición de burbujas. La
disolución transparentadora se recupera. 3
18. Colocar la película en el interior de una estufa
a 80ºC durante 10 minutos para completar la
transparentización.
19. Sacar de la estufa y dejar enfriar.
20. Escanear la película y realizar la densitometría
con el programa informático Scion. 5
 CUESTIONARIO
1. ¿CUALES SON LOS PRINCIPIOS DE LAS PRUEBAS DE
INMUNOELECTROFORESIS?

2. ¿CUALES SON LOS VALORES NORMALES DE LAS PROTEINAS SERICAS

EN EL ADULTO?

3. ¿CUALES SON LAS CONDICIONES ASOCIADAS CON NIVELES

ANORMALES DE GLOBULINA Y ALBUMINA?
https://www.youtube.com/watch?v=NL1usCc0n38 Electroforesis en ADN en gel de agarosa
4.18m
VIDEO TUTORIAL

https://www.youtube.com/watch?v=_8xftsCIwYo ELECTROFORESIS DE PROTEÍNAS

https://www.youtube.com/watch?v=_8xftsCIwYo Electroforesis
https://www.youtube.com/watch?v=ALPi5GUyR1E ELECTROFORESIS DE de proteinasSERICAS
PROTEÍNAS
EN TIRAS DE ACETATO DE CELULOSAA
REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS
Salazar A, Sandoval A, Armendariz J. Biología Molecular.
Fundamentos y aplicaciones en las ciencias de la salud. 1ra.
Ed. Mexico D.F: MacGraw Hill:2013

Lomonte, B. (2007) Manual de Métodos Inmunológicos, 138

pp. Universidad de Costa Rica.
Acceso libre en: http://www.icp.ucr.ac.cr/~blomonte/
GRACIAS