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Resumen
Objetivos: Evaluar la actividad antiinflamatoria y antioxidante de la fracción flavónica extraída de las hojas de Jungia rugosa Less.
Diseño: Experimental. Lugar: Facultades de Medicina y Farmacia y Bioquímica, Universidad Nacional Mayor de San Marcos, Lima,
Perú. Material biológico: Fracción flavónica extraído de las hojas de Jungia rugosa Less y ratas. Intervenciones: Las hojas de Jungia
rugosa Less fueron recolectadas en el cerro Condorcunca, a 3 500 msnm, distrito de Quinua, departamento de Ayacucho. La activi-
dad antiinflamatoria fue evaluada in vivo usando el método de edema plantar inducido por carragenina y en sangre se cuantificó los
niveles séricos de interleuquinas 1, 6 y proteína C reactiva (PCR); también, se indujo el granuloma, según Sedwicks, evaluándose
por histopatología. La actividad antioxidante fue evaluada in vitro mediante la neutralización del radical 1,1-difenil-2-picril-hidrazilo
(DPPH). Principales medidas de resultados: Actividad antiinflamatoria y antioxidante. Resultados: La inflamación disminuyó en 43,8%,
y los niveles de interleuquinas 1, 6 y PCR lo fueron en 80%, 90% y 78%, respectivamente, al ser comparados con el control (p<0,05),
siendo el efecto dosis dependiente, y brindó un 97,7% de inhibición de radicales DPPH. Conclusión: Se ha demostrado que la fracción
flavónica extraída de las hojas de Jungia rugosa Less es antiinflamatoria y antioxidante.
Palabras clave: Jungia rugosa Less, flavonoide, actividad antiinflamatoria, actividad antioxidante.
Abstract
Objectives: To determine anti-inflammatory and antioxidant activities of Jungia rugosa Less leaves flavones’ fraction. Design: Expe-
rimental. Setting: Faculties of Medicine and Pharmacy and Biochemistry, National University of San Marcos, Lima, Peru. Biological
material: Flavones fraction extracted from Jungia rugosa Less leaves and rats. Interventions: Jungia rugosa Less leaves collected
in Condorcunca’s hill at 3 500 m.a.s.l., Quinua district, Ayacucho department. The anti-inflammatory activity was assessed in vivo in
carrageenan-induced paw edema model and 1, 6 interleukins serum levels and C reactive protein (CRP) were measured in blood;
granuloma was induced according to Sedwicks and studied by histopathology. The antioxidant effect was investigated in vitro by 1,1-
diphenyl-2-picrylhydrazyl (DPPH) radical neutralization. Main outcome measures: Anti-inflammatory and antioxidant effects. Results:
Inflammation reduced in 43,8% and 1,6 interleukins and CRP levels decreased respectively 80%, 90% and 78% compared to control,
in dose-dependent effect (p<0,05), with 97,7% DPPH radicals inhibition. Conclusions: Flavones fraction extracted from Jungia rugosa
Less leaves is anti-inflammatory and antioxidant.
Key words: Jungia rugosa Less, flavonoid, anti-inflammatory and antioxidant activity.
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Introducción tonina-, que inducen permeabilidad inducción de genes que codifican para
vascular (2). Estas sustancias que se la ciclooxigenasa tipo 2 (COX2), la fos-
La inflamación es la respuesta del teji-
liberan en el proceso inflamatorio, de- folipasa A tipo 2 (PLAT2) y el óxido ní-
do vivo vascularizado a la lesión; pue-
de ser causada por agentes biológicos, nominadas ‘sopa algogénica’, actúan en trico sintetasa inducible (iNOS). Otras
físicos o químicos (1). Existe liberación las terminaciones nerviosas activando citoquinas, como IL-2, IL-6 e IL-8, con-
de sustancias mediadoras -bradiquini- el segundo tipo de nociceptor (tipo C) tribuyen a la aparición de manifestacio-
na, prostaglandina, histamina y sero- y generan dolor (3). La IL-1 permite la nes de respuesta inflamatoria (4).
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La inflamación es una respuesta pro- Métodos 60% de humedad, con 12 horas de luz
tectora, cuyo principal objetivo es librar y oscuridad. Se inyectó vía subcutánea
al organismo del elemento causante del Para aislar los flavonoides, primero se 20 mL de aire en el área intracapsular
daño celular, como microbios y toxinas, maceró las hojas secas molidas con del lomo, formándose una bolsa de aire
y de las consecuencias de ese daño, con etanol al 80%, con doble extracción, de forma oval que se conservó por re-
formación de células y tejidos necróti- evaporación a sequedad del extrac- inflación con 10 mL de aire a los 3 y 6
cos. Sin la inflamación, las infecciones to, desengrasado con éter de petróleo, días. El sétimo día, los animales fueron
se diseminarían y las heridas nunca con la finalidad de eliminar grasas, ce- distribuidos aleatoriamente en 6 grupos
cicatrizarían. Por otro lado, la inflama- ras, pigmentos y otros metabolitos que de 5 ratas y tratados vía oral como en
ción no curada adecuadamente es la pudieran interferir con la extracción el caso anterior. Tres horas después, se
base de las reacciones de hipersensibi- de los flavonoides. Se extrajo líquido- inyectó 2 mL de carragenina al 1% di-
lidad y enfermedades crónicas, como la líquido con acetato de etilo, utilizando suelta en solución salina, directamente
artritis reumatoide, la aterosclerosis y la embudo de separación, para recuperar en la bolsa; los animales fueron sacrifi-
fibrosis pulmonar (5). finalmente la fracción de acetato de cados después de 48 horas con una do-
etilo (fracción flavónica) y evaporarla a sis letal de tiopental (1 000 mg/kg). Se
La región andina de nuestro país po- sequedad. Los flavonoides presentes en
see una variada flora y dentro de ella, aplicó a la bolsa de aire una inyección
la fracción acetato de etilo, extraído de
muchas especies con reconocida activi- de 5 mL de solución salina conteniendo
las hojas de Jungia rugosa Less ‘matico
dad benéfica para la salud. Dentro de 0,1% de ácido etilendiaminotetraacéti-
de puna’, fueron verificados con la re-
estas especies se encuentra Jungia ru- co (EDTA) y luego se realizó una inci-
acción de Shinoda, por cromatografía
gosa Less ‘matico de puna’, una especie sión pequeña en la pared de la bolsa, y
en capa fina y por técnicas espectrales
vegetal que crece en la región andina de el contenido de la bolsa de aire fue re-
UV (13).
nuestro país, cuyas hojas son utilizadas movido cuidadosamente usando una pi-
como desinflamante y cicatrizante (6). La actividad antiinflamatoria fue peta Pasteur estéril. Se obtuvo 3 mL de
Las plantas contienen flavonoides, evaluada por el método de edema de exudado, al cual se midió las proteínas
compuestos polifenólicos con efectos pata inducida por carragenina, según totales, y se realizó estudio histopatoló-
antiinflamatorios, antimicrobianos, Winter (14). Se utilizó 30 ratas Holtz- gico del granuloma inducido por carra-
antivirales, antiulceroso, antioxidante, mann procedentes del Instituto Nacio- genina. La evaluación histopatológica,
antihepatotóxico y antihipertensivo (7). nal de Salud, machos de 220 ± 20 g. Los según Devi (16), se realizó con trozos de
Inhiben gran variedad de enzimas, animales fueron aclimatados durante piel conteniendo los granulomas, los
como la ciclooxigenasa, lipooxigenasa, una semana, luego sometidos a ayuno cuales fueron lavados suavemente con
NADPH oxidasa y xantina oxidasa, los con libre acceso de agua, 12 horas an- solución salina, para remover la sangre
radicales libres y reducen el estrés oxi- tes del inicio del ensayo, y distribuidos y los detritos adheridos al tejido. Estos
dativo (8-11). Los flavonoides, polifenoles aleatoriamente en 6 grupos de 5 ratas, fueron fijados en solución de formol al
y el alfa tocoferol poseen capacidad an- y tratados vía oral de la siguiente ma- 10%, tamponado por 7 días. Posterior-
tioxidante (12). nera: a) grupo control: polisorbato de mente, se procedió a realizar cortes
sodio al 3%; b) grupos con estándares de 3 µ de espesor con ayuda de un mi-
En el presente trabajo se logró con- farmacológicos de ibuprofeno 120 mg/ crótomo, y se coloreó con hematoxilina
tribuir al acervo científico y etnofar- kg y dexametasona 2 mg/kg; c) grupos y eosina. Después de la deshidratación
macológico de la planta medicinal con fracción flavónica de 25, 50 y 100 y limpieza de las láminas, se efectuó ob-
en estudio, para lo cual se planteó los mg/kg, correspondientemente. servación microscópica, siendo las cali-
siguientes objetivos específicos: 1) De-
Media hora después se inyectó 0,1 ficaciones ausencia de macrófagos (0),
terminar la actividad antiinflamatoria
mL de carragenina al 1% en la aponeu- una forma con macrófagos (+), macró-
y antioxidante de la fracción flavónica
rosis subplantar de la pata derecha. El fagos mas linfocitos (++) y macrófagos
extraída de las hojas de Jungia rugosa
diámetro de la pata inyectada y la con- modificados (+++).
Less ‘matico de puna’ en ratas con in-
tralateral fueron determinados con el Para la determinación de inter-
ducción de inflamación aguda y cróni-
micrómetro digital a 0, 0,5, 1, 2, 3, 5 y 7 leuquinas 1 (IL-1) e interleuquinas 6
ca; y, 2) Explicar el posible mecanismo
horas después de inducir la inflamación (IL-6) se empleó el método inmunoen-
de acción antiinflamatorio, al determi-
y aplicar los tratamientos; el edema fue sayo de quimioluminescencia (17), para
nar los niveles de las interleuquinas 1
expresado como el incremento del diá- lo cual los animales fueron aclimatados
y 6, proteína C reactiva y la actividad
metro de la pata inflamada en mm. durante una semana, luego sometidos a
antioxidante por comparación del efec-
to, haciendo uso de estándares farma- El segundo método empleado fue ayuno con libre acceso de agua 12 ho-
cológicos con la fracción flavónica ex- bolsa de aire en ratas, según Sedwick (15). ras antes del inicio del ensayo. Se les
traída de las hojas de Jungia rugosa Less Los animales fueron aclimatados duran- distribuyó aleatoriamente en 6 grupos
‘matico de puna’. te una semana, entre 21 y 25 ºC y 50 y de 5 ratas, tratados vía oral como los
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Efecto antiinflamatorio y antioxidante de los flavonoides extraídos de las hojas de Jungia rugosa Less ‘matico de puna’
Edwin Enciso y col.
casos anteriores y media hora después densidad de reflexión fue directamen- Resultados
se inyectó 0,1 mL de carragenina al 1%, te proporcional a la concentración de
en la aponeurosis subplantar. Se repitió PCR en la muestra. Para determinar si De 1 kg de hojas secas se obtuvo un
los tratamientos a las 3 y 5 horas; a las el lavado había sido adecuado, el colo- rendimiento de la fracción flavónica de
7 horas, se tomó 3 mL de sangre por rante de detección de lavado fue leído a 11,5 g, que representó un 1,15%. Por
punción cardíaca, se separó el suero 540 nm inmediatamente después de la otro lado, se cuantificó el contenido de
y se procedió a evaluar los niveles de segunda incubación . flavonoides, obteniéndose un 99,9% de
IL-1, IL-6 y proteína C reactiva. pureza. Los flavonoides fueron verifica-
La actividad antioxidante se realizó dos con la reacción de Shinoda, dando
Para determinar los niveles de IL-1 e mediante el método de neutralización una coloración roja, indicando la pre-
IL-6 se empleó la preuba inmunológica del radical 1,1-difenil-2-picrilhidrazilo sencia de flavonoides tipo flavona, lo
de electroquimioluminiscencia utilizan- (DPPH) (19), para lo cual se preparó so- cual fue corroborado por cromatografía
do el inmunoanalizador Elecsys 2010, lución metanólica de DPPH de 20 µg/L, en capa fina y por técnicas espectrales
para lo cual se incubó 30 μL de suero solución metanólica de la fracción fla- UV (13).
con un anticuerpo monoclonal bioti- vónica de 10, 50 y 100 µg/mL, blanco
nilado específico anti-IL-1 y anti-IL-6. con metanol:agua (2:1) para ajustar el Los grupos tratados con los están-
Luego, tras añadir un anticuerpo mono- espectrofotómetro a cero, blanco de dares y la fracción flavónica mostraron
clonal marcado con quelato de rutenio muestra con 0,75 mL de muestra y 1,5 diámetros promedio de inflamación me-
mL de metanol y patrón de referencia nores al grupo control y a las 5 y 7 horas
y micropartículas recubiertas de estrep-
(estándar) con 1,5 mL de DPPH y 0,75 de tratamiento hubo mejor recupera-
tavidina, los anticuerpos formaron con
mL de agua destilada. Las muestras ción del proceso inflamatorio inducido
el antígeno de la muestra un complejo
fueron tratadas con el reactivo DPPH, en ratas, con valor p<0,05 (figura 1).
sándwich. La mezcla de reacción fue
trasladada a la célula de lectura donde, realizándose la lectura a 517 nm. En la figura 2 se observa la eficiencia
por magnetismo, las micropartículas se Los datos fueron procesados uti- antiinflamatoria dosis dependiente de
fijaron temporalmente a la superficie lizando el paquete estadístico SPSS 32,8%, 38,4% y 43,8%, a las dosis de
del electrodo. Los elementos no fija- (statistical package for social sciences), 25, 50 y 100 mg/kg, respectivamente,
dos fueron eliminados posteriormente efecto próximo al ibuprofeno (47,7%) y
versión 17,0. Se consideró significativa
con el reactivo ProCell. Al aplicar una superior a dexametasona (40,95%).
una p<0,05, con intervalo de confianza
corriente eléctrica definida, se produjo del 95%. Se aplicó el análisis de varian- En las figuras 3, 4 y 5 se observa los
una reacción quimioluminiscente, cuya za (Anova) a los valores obtenidos, al niveles de interleuquina 1 (IL-1), inter-
emisión de luz se midió directamente administrar los diferentes tratamientos. leuquina 6 (IL-6) y proteína C reacti-
con un fotomultiplicador. Para determi- Se determinó la media y error estándar va (PCR), evaluados a las 7 horas de
nar los niveles de proteína C reactiva, de los valores individuales obtenidos la administración de la carragenina. Se
se utilizó los analizadores VITROS de para los animales de cada grupo. aprecia que el ibuprofeno no fue eficaz
bioquímica y el sistema integrado VI-
TROS 5600 (18), para lo cual se le depo-
sitó en 10 μL de suero, que se distribuyó
uniformemente desde la capa difusora
a las capas subyacentes. La PCR de la
muestra se unió a las perlas de captu-
ra vinculadas a la PC y al anticuerpo
anti-PCR marcado con peroxidasa de
rábano picante, para formar un com-
plejo insoluble en forma de sándwich
en la primera incubación. La posterior
adición a la lámina de 12 μL de líquido
de inmunolavado VITROS eliminó los
materiales no fijados del área de lectura,
a la vez que proporcionó el peróxido de
hidrógeno necesario para la oxidación
del leucoderivado mediada por la enzi-
ma. La densidad de reflexión del colo-
rante fue medida después de la adición
del líquido de inmunolavado VITROS, Figura 1. Diámetro de inflamación promedio al evaluar la actividad antiinflamatoria de
al final de la segunda incubación. Esta la fracción flavónica extraída de las hojas de Jungia rugosa Less ‘matico de puna’.
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Discusión
La evaluación de la actividad antiin-
flamatoria se ha realizado utilizando
carragenina. Cabe resaltar que se ha
preferido trabajar con carragenina y no
con otros agentes irritantes, porque el
edema que produce es menos modifi-
cado por factores ajenos a los propia-
mente característicos de la inflamación Figura 3. Niveles de interleuquina 1 (IL-1).
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