Toxicidad de un tratamiento subcrónico con el extracto hidroalcohólico crudo

de Solanum grandiflorum (Ruiz et Pav) en las ratas.

Michel C. de Angelis Pereira 1, José C.T. Carvalho1, Leonardo M. Lima2, Lucélia R.G. Caputo2,
Luciano R. Ferreira2, João E. Fiorini3, Jairo K. Bastos4.
1
Laboratorio de Fitofármacos, Universidad de Alfenas, Rod. MG 179, km 0, CP 23, CEP 37130-
000, Alfenas, Minas Gerais, Brasil.
2
Laboratorio de Patología, Facultad de Ciencias Médicas, Universidad de Alfenas, Alfenas,
Brasil.
3
Laboratorio de Biología y Fisiología de Microorganismos, Universidad de Alfenas, Alfenas,
Brasil.
4
Facultad de Ciencias Farmacéuticas de Ribeirão Preto-USP, Avenida do Café S/N, 14040-903,
Ribeirão Preto-SP, Ribeirão, Brasil.

Recibido el 5 de julio de 2002; recibido en su forma revisada el 5 de julio de 2003; aceptado el 7

de julio de 2003.

RESUMEN

Se evaluó el efecto tóxico del extracto hidroalcohólico crudo (HACE) obtenido a partir
de los frutos de Solanum grandiflorum después del tratamiento subcrónico (p.o. [per
oral: por vía oral]) en las ratas Wistar durante 65 días, utilizando la dosis de 2 mg/kg.
La LD50 (dosis letal media) determinada en los ratones era de 50 mg/kg (p.o.). Al final
del tratamiento, el consumo de agua se mantuvo dentro de los patrones normales. Por
otro lado, el consumo de comida tuvo un 40% de reducción en el período comprendido
entre los días 18 y 40 después del comienzo del estudio. La diuresis mostró una
amplia variación con respecto al volumen, la cual empezó al 8º día de tratamiento
hasta el final del estudio. Este hallazgo fue correlacionado con las observaciones
macroscópicas de los riñones que presentaban nefromegalia (70%), cuando fueron
comparados con el grupo de control. Más aún, para el estudio histopatológico, se
observó degeneración y necrosis glomerular (100%), lesiones tubulares (80%), y
lesiones hipercelulares (100%) en el grupo tratado. El desarrollo ponderal del grupo
tratado se incrementó, comparado con el grupo de control. El peso de algunos de los
órganos, incluyendo los riñones, pulmones, y páncreas, también se incrementó en el
grupo tratado (P <0.05, prueba "t" de Student). Estos datos sugieren que después de
un tratamiento subcrónico del extracto hidroalcohólico crudo de Solanum grandiflorum
la nefrotoxicidad se presenta.

1. INTRODUCCIÓN

La especie de planta Solanum grandiflorum (Ruiz et Pav) conocida popularmente

como “fruta del lobo”, "lobeira" o 'jurubebão" es ampliamente utilizada en la medicina
popular, debido a su propiedades como relajante, sedativo, y antiespasmódico
(Guerra, 1996). También, las cápsulas que contienen almidón de los frutos de
Solanum grandiflorum son empleadas para controlar la diabetes y puede encontrarse
en las farmacias ubicadas alrededor de la región del sur de Minas Gerais, en Brasil.
Los frutos, debido a su olor tenue, gran tamaño, y abundante pulpa dulce con sabor
similar al de la manzana, llamó la atención de muchas personas en las áreas rurales
del Brasil. Algunas personas consideraron a la fruta comestible y no tóxica,
considerando que otros creen que es venenosa (Lorenzi, 1991). Con respecto a la
toxicidad potencial de los extractos de esta planta, sólo existen dos estudios
reportados. Sá et al. (1998), emprendieron un estudio preliminar para investigar el
posible efecto tóxico de esta planta en el sistema reproductor de los ratones y no
encontraron ninguna alteración después del tratamiento de 14 días. Peters et al.
(1998) estudiaron el efecto de la implantación del almidón de Solanum grandiflorum
(10 mg de almidón/0.5 ml de agua destilada/100 g de peso corporal) en las ratas
Wistar y al igual que en los ratones, ellos no detectaron ninguna señal mensurable de
intoxicación, concluyendo que no había ningún efecto de rechazo. No obstante,
considerando las aplicaciones farmacológicas y etnobotánicas de Solanum
grandiflorum, el objetivo de este estudio era investigar los posibles efectos tóxicos
sobre las ratas del extracto hidroalcohólico crudo (HACE) obtenidos a partir de las
frutas utilizando exámenes histopatológicos y hematológicos, así como los parámetros
bioquímicos.

2. EXPERIMENTAL

2.1. Material vegetal

Los frutos de Solanum grandiflorum fueron recolectados en octubre de 1997 en una
granja localizada cerca de la ciudad de Alfenas (MG), en Brasil, y fueron identificados
por José Carlos Tavares Carvalho. Un espécimen de comprobante (‘voucher’) ha sido
depositado en el Herbario de la Universidad de Alfenas (número de registro: 123).

2.2. Preparación del extracto alcohólico crudo obtenido a partir de los frutos
Los frutos frescos recolectados fueron cortados en pedazos pequeños, en una
licuadora. Cuarenta y cinco kilogramos de biomasa fueron extraídos mediante
maceración empleando 50 litros de etanol (70%) durante 7 días a la temperatura del
medio ambiente. Después de la filtración, el solvente fue evaporado bajo vacío, para
luego realizar una liofilización, rindiendo 1.5 kg de HACE.

2.3. Caracterización fisicoquímica del HACE

Para esta caracterización, una alícuota del extracto fue sometida a los métodos
descritos por Korolkovas (1984). Los siguientes parámetros fueron analizados:
contenido de cenizas, pérdida por sequedad, porcentaje de extracción, densidad,
viscosidad, presencia de alcaloides y saponinas (Matos, 1988).

2.4. Evaluación de la toxicidad después del tratamiento subcrónico con HACE

2.4.1. Animales
Se utilizaron ratas Wistar macho que pesaban entre 150 y 170 g. las mismas fueron
divididas en dos grupos y se mantuvieron en jaulas metabólicas a la temperatura de la
habitación, con los ciclos de oscuridad y de luz de 12 horas cada uno.
2.4.2. Tratamiento
El grupo de control negativo (n = 10) sólo recibió el vehículo, mientras que el grupo
tratado (n = 10) recibió el HACE a la dosis de 2 mg/kg, la cual corresponde a la dosis
recomendada para el uso en humanos en el producto comercial. El tratamiento se
realizó durante 65 días, a través de un ‘gavage’1, siempre en el mismo momento del
día. Durante el período de tratamiento, los siguientes parámetros fueron controlados:
peso cada 5 días, ingestión de comida y agua, y diuresis diaria.

2.4.3. Evaluaciones hematológicas, bioquímicas, e histopatológicas

Para estas evaluaciones, se utilizó el método descrito por Carvalho (1998). Se
realizaron las evaluaciones histopatológicas de los riñones, cerebros, corazón, hígado,
pulmones, el páncreas, estómago, e intestino.

2.4.4. Determinación de la LD50

Para la determinación de las dosis letales medias, se utilizaron los ratones macho (n =
20), con pesos entre 20 y 25 g, los cuales recibieron dosis crecientes del HACE por
vía oral. El número de animales muertos fue expresado en porcentajes y la LD 50 se
estableció mediante el método de probits (Sokal y Rohlf, 1995).

2.5. Análisis estadístico

Para los resultados obtenidos en la evaluación histopatológica, se empleó el
porcentaje de ocurrencia. Para la comparación de los promedios obtenidos a partir de
las otras pruebas, se utilizó la prueba "t" de Student y sólo se consideraron como
estadísticamente significativos los valores con un P <0.05 (Sokal y Rohlf, 1995).

3. RESULTADOS Y DISCUSIÓN

En la caracterización fisicoquímica del HACE obtenido a partir de las frutas de

Solanum grandiflorum, los se encontraron siguientes resultados: residuos secos
(18.53%), contenido de cenizas (0.74% del residuo seco), pérdidas por sequedad
(81.47%), densidad (10,696 g/ml), viscosidad (16,203 cP [centiPoises]), y reacción
positiva para los alcaloides cuando se utilizaron los reactivos de Dragendorff, Mayer, y
Burchard.

La LD50 encontrada en los ratones después de la administración oral del HACE era de
50 mg/kg. Utilizando esta dosis, después de 30 minutos los animales mostraron
depresión, seguida por la pérdida de coordinación, y la presencia de piloerección.

Los factores observados en la evaluación de toxicidad de Solanum grandiflorum

comprendieron el desarrollo ponderal, consumo de comida, diuresis, y otros
(Carvalho, 1998). El desarrollo ponderal y el consumo de agua para el grupo de
control y para el grupo tratado (HACE, a 2 mg/kg) se mantuvo dentro de los promedios
establecidos para esta especie animal (Figura 1a). Con respecto al consumo de
comida, el grupo tratado con el HACE tenía resultados similares comparados a los del
grupo de control hasta el día 18 de tratamiento. Sin embargo, después del día 23
1
Gavage. Alimentación forzada por medio de una sonda nasogástrica.
había una disminución en el consumo de comida para el grupo tratado. Este hecho
puede deberse a la presencia de alcaloides en el HACE que puede causar la
depresión del sistema nervioso central (Costa et al., 1998).

Figura 1. (a) Efectos de la administración del HACE (2 mg/kg, p.o.) durante 65

días sobre el consumo de agua y (b) la diuresis. Cada punto representa el volumen
promedio del agua y de la orina en un grupo de 10 ratas. *P <0.05, prueba "t" de
Student.

Los riñones son particularmente sensibles a muchos productos químicos. El flujo de la

sangre renal parece ser el hecho más importante que predispone a los riñones a las
alteraciones inducidas por los químicos (Hook y Goldstein, 1993). Con respecto a la
diuresis, el grupo tratado con el HACE presentó una amplia variación del volumen de
orina después del 8º día de tratamiento, la cual se mantuvo así hasta el final del
tratamiento (Figura 1b). Este hecho está relacionado con las alteraciones
macroscópicas de los riñones en los animales tratados, los cuales presentaron
nefromegalia (70% de los casos) comparados con los del grupo de control (Tabla 1).
También, los resultados histopatológicos mostraron degeneración y necrosis
glomerular (100%), lesiones tubulares (80%), y lesiones hipercelulares (100%) para el
grupo tratado.

Tabla 1. Efecto del tratamiento oral durante 65 días con el HACE (2

mg/kg) de Solanum grandiflorum, con respecto a los parámetros
hematológicos y bioquímicos, y sobre el peso de los órganos.
Grupo de control Grupo tratado
Parámetro
Creatinina 0.63 ± 0.08 mg/dl 0.62 ± 0.09 mg/dl
Glucosa 52.8 ± 7.82 mg/dl 51.2 ± 4.99 mg/dl
Úrea 48.4 ± 1.69 mg/dl 45.6 ± 4.11 mg/dl
Eritrocitos 5.48 ± 0.19 tera/l 5.83 ± 0.17 tera/l
Hemoglobina 13.78 ± 0.81 g/dl 14.1 ± 0.15 g/dl
Hematocrito 46.0 ± 1.47% 46.4 ± 0.40%
MCV 84.18 ± 2.58 fl 79.88 ± 2.55 fl
MCH 25.13 ± 0.87 pg 24.24 ± 0.55 pg
MCHC 30.03 ± 2.01% 30.04 ± 0.32%
Leucocitos 8200 ± 668 por l 9480 ± 1069 por l
Segmentados 1561 ± 380 por l 2313 ± 520 por l
Linfocitos 6593 ± 283.7 por l 7099.6 ± 698 por l
Plaquetas 338.25 ± 60.8 por l 489.8 ± 35.7 por l
Órganos
Hígado 14.86 ± 0.63 g 13.4 ± 0.4 g
Bazo 1.88 ± 0.63* g 4.19 ± 0.2 g
Pulmón 1.88 ± 0.21* g 5.44 ± 0.6 g
Estómago 1.9 ± 0.42* g 5.44 ± 0.6 g
Corazón 1.05 ± 0.21* g 4.4 ± 0.4 g
Los números representan el promedio de 10 animales por cada grupo.
* P <0.05, prueba "t" de Student.

No se observó ninguna alteración una vez realizados los análisis bioquímicos y

hematológicos (Tabla 1). Además, se sabe que las saponinas alteran la permeabilidad
de las células, por consiguiente, las mismas podrían ser en parte responsables del
daño de los riñones, debido a que los frutos de Solanum grandiflorum son muy ricos
en saponinas (Harborne y Baxter, 1995).

Estos resultados sugieren que la ingestión subcrónica del extracto hidroalcohólico de

los frutos de Solanum grandiflorum es nefrotóxica. Estos resultados sirven como una
alarma para evitar el uso indiscriminado de esta planta, sobre todo cuando los
consumidores presentan algún tipo de daño renal que puede conducir a una falla renal
final.