CO-CULTIVO ORGANOTÍPICO PARA LA PROLIFERACIÓN Y

DIFERENCIACIÓN DE MTECS Y EXPRESIÓN PROMISCUA DE GENES

GRUPO 3
Eva Serrano
Elena Trapero
Sandra Valenciano
Nuria Ventureira
 Índice
1. Objetivos
2. Estructura fisiológica del timo
3. Cómo se hace el cultivo. Morfología de mTEC’s
4. Expresión de marcadores
5. Importancia del modelo 3D OTC
6. Conclusión
1. Objetivos
Debido a la falta de un modelo 3D para el estudio de las células tímicas
epiteliales medulares (mTECs), se plantea el desarrollo de un co-cultivo
organotípico 3D (OTC) con este fin.

Por otra parte, también permitirá el estudio de la expresión promiscua de genes

(pGE) y otros marcadores, la mayoría perdidos en el cultivo 2D y 3D simple.
2. Estructura fisiológica del timo

Órgano linfoide

o Producción de linfocitos T
o Maduración de linfocitos T
o Producción de hormonas
tímicas (timulina, timosina…)
1- Cápsula
2- Lóbulos tímicos
• Corteza
• Médula
 3. Cómo se hace el cultivo. Morfología de mTECs
Modelo 3D de cultivo in vitro de células
mTECs → características similares a las epiteliales dérmicas preexistente
células epiteliales dérmicas
❑ Su diferenciación depende de FoxN1
❑ Sus ES expresan los mismos marcadores Adaptación
moleculares
❑ Reprogramación de TECs en dérmicas
embrionarias (no al contrario)
❑ Modelo 3D OTC de mTECs
Composición:
o Fibroblastos dérmicos humanos
o Scaffold
o mTECs murinas (CD80lo/hi)
o Medio de cultivo
 mTECs* monocapa

Morfología mTECs mTECs CD80lo Bicapa → MEC irregular

en 3D OTC
mTECs CD80hi Agregados → MEC continua

*Las mTECs a los 14 días adquieren una

conformación similar a los cuerpos de Hassal
 14 días

mTECs

mTECs CD80lo

mTECs CD80hi

Queratina 14 (K14)
Vimentina (Vim)
Hoeschst
4. Expresión de marcadores
pGE
CD80lo CD80lo/hi

- + TRAs
Aire Aire

Aire+
RANKL dependiente independiente

Timocitos Ins2 Csnb

IFAPB
RANKL
Receptor Activator of Nuclear Factor
κ B Ligand. Es una proteína de
RANKL
membrane que tiene implicaciones
tanto en el Sistema immune como en
la formación de osteoclastos

Aire
Autoimmune Regulator. Codifica para
un factor de transcripción implicado
en la regulación de la formación de
autoantígenos y selección negativa
en los linfocitos T en el timo.
Aire
 Csnb
Casein-β. Es una proteína presente
en la leche humana.

TRAs

Ins2 IFAPB
Insulin 2. Intestinal Fatty Acid Binding
Protein. Proteína que une ácidos
grasos de cadena larga con alta
afinidad. Principalmente regula el
transporte de ácidos frasos celular y
extracelularmente. Su función
específica dependerá del tejido
donde se esté expresando.
 La cantidad de FoxN1
y CD80 no depende de
RANKL

CD80lo mTECs CD80hi mTECs CD80lo mTECs CD80hi mTECs

FoxN1: factor de transcripción que CD80: glucoproteína que media la

determina la funcionalidad de mTEC y unión entre células presentadoras de
cTEC antígenos y linfocitos T
 CD80lo mTECs CD80hi mTECs CD80lo mTECs CD80hi mTECs

Aire: regulador transcripcional de TRAs (Ins2, I-fabp, Csnb) son el producto

la pGE. Este depende de RANKL de pEG. En CD80lo no se aprecia aumento
tanto en CD80lo como CD80hi de expresión en presencia de RANKL. En
CD80hi sí hay diferencias significativas.
 5. Importancia del modelo 3D OTC

• Resultados más similares a la condición fisiológica que los co-cultivos 2D y 3D

simple.
• Mejor maduración celular
• Cultivos más longevos
• Permite el estudio de los marcadores moleculares tímicos y pEG
• Nuevas vías de investigación
• Aplicaciones: investigación clínica
 6. Bibliografía
• Pinto, S., Schmidt, K., Egle, S., Stark, H. J., Boukamp, P., & Kyewski, B. (2013). An
organotypic coculture model supporting proliferation and differentiation of medullary thymic
epithelial cells and promiscuous gene expression. The Journal of Immunology, 190(3),
1085-1093.
• https://ddd.uab.cat/pub/tesis/2007/tdx-0523108-162338/tdx.html consultada el 20/1/16
• http://leucocitos.org/timo/ consultada el 21/1/16
• http://www.genecards.org/cgi-bin/carddisp.pl?gene=AIRE consultada el 25/1/16
• http://www.nature.com/gene/journal/v4/n1/full/6363929a.html consultada el 25/1/16
• http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC2674722/ consultada el 25/1/16