Nucleo- Identidad físico-funcional

Es un organelo característico de los eucariontes. Posee múltiples funciones: separa el genoma de otros
compartimentos celulares (compartimentalización), participa activamente en los procesos que incluyen al
genoma (lo contiene, regula su duplicación, segregación, reparación y expresión), organiza funcionalmente
a la cromatina, y en él ocurre la síntesis y ensamblaje del ribosoma.

El núcleo es una estructura que se

puede visualizar mediante la
microscopía, tanto óptica (con
tinciones) como electrónica.
Estructuras
Se puede observar como el nucleolo es una zona muy electrodensa, debido a la alta
presencia de cromatina que es activamente transcrita  Genes donde estan codificados
los RNAribosomales. Es una fábrica de RNA ribosomal y ribosomas, es un lugar muy
activo.
El nucleoplasma está salpicado por lugares más electrodensos.
En la periferia se ven zonas más electrodensas debido a la presencia de heterocromatina,
esta tiene un gran empaquetamiento, pero es silente o sea no se transcribe.

Los poros nucleares son lugares de transito de moléculas desde y hacia el nucleo,
comunican el citosol con el nucleoplasma.
La membrana nuclear es una bicapa, y como hay externa e interna, se tienen 2 bicapas
lipídicas.

Envoltura NUCLEAR
Lamina Nuclear: Es una red formada por filamentos intermedios. Existen laminas
tipo A, formadas por proteinas lamina A y C, estas proteinas son variantes de splicing de
un mismo gen; y laminas tipo B, formadas por proteinas de lámina B1 y B2, las cuales
pertenecen a 2 genes distintos.
Los filamentos intermedios se
ensamblan como monómeros, con un
extremo N-terminal (cabeza), rod
domain, y extremo C-terminal (Ig
tail).Estos monómeros se pueden
ensamblar como dímeros
entrecruzándose, entre los
principales aminoácidos que se
encuentran en el monómero, se
tiene Arginina (R), Lisina (K) y Glutamato (E). El glutamato y la lisina interaccionan por
sus cargas, la lisina con su grupo R positivo, y el glutamato negativo. Estas
interacciones son fundamentales en la formación del dinero, y del autoensamblaje de
las láminas.
Al autoensamblarse los
monomeros forman una
verdadera malla.

La mayoría de las células diferenciadas tienen al menos un

tipo de lámina A, las células embrionarias, el SNC y la capa
profunda de la epidermis tienen poco o nada de láminas A.
En contraste, el musculo esquelético y muchas células
mesenquimales son particularmente ricas en laminas tipo
A. Esto es relevante para entender porque hay tejidos
particularmente afectados por las laminopatías, que se
producen por mutaciones en las láminas tipo A.

Funciones de las láminas:

Se encargan de dar forma y estabilidad al nucleo. Ayudan a conectarlo con el citoesqueleto, permitiendo
el movimiento y mecano/transducción.

Regulan la organización de la cromatina y la expresión génica. Participan en el ensamblaje y

desensamblaje de la envoltura nuclear durante la mitosis. Participan en la síntesis y reparación del DNA.

Se relacionan con el envejecimiento celular; la progeria tiene relación con las laminas
Acoplamiento nucleo-citoesqueleto
El acoplamiento ocurre por el tipo de proteinas que hay en la
lámina, las que son intrínsecas de la membrana interna nuclear, y
como se conectan con el citoplasma. Se pueden hacer mediciones
cuantitativas del acoplamiento mecánico del nucleo mediante
manipulación con una microaguja. Esto consiste en insertar una
aguja a una distancia determinada del nucleo y hacer una retracción
mecánica, para despues soltar la aguja, mediante microscopia con
fluorescencia se puede observar cómo cambian las posiciones de
nucleo y citosol.
Al estudiar ciertas
mutaciones en la
lamina A, se ha observado que al hacer fuerza con la
microaguja en el citoplasma, no existe un movimiento
significativo en el nucleo. Esto puede estar relacionado a
patologias como distrofias musculares o cardiopatias.
Laminopatias: Existen mas de 450 mutaciones en
laminas tipo A. Estas afectan a ciertos tejidos, el porque
son selectivas a algunos de estos es aun estudiado, se
tienen 3 hipotesis: 1) Estructural, 2) Regulacion genica,
3) Interferencia en el desarrollo y diferenciacion

El nucleo ademas es conocido como un mecanotransductor (la mecanotransduccion es el proceso por el

cual la celulas convierten un estimulo mecanico en una señal bioquimica). Existen 3 mecanismos que
evidencias la presencia de senales mecano-bioquimicas en el nucleo: 1)Cambios conformacionales en
proteinas inducidos por fuerza. 2) Estiramiento de la envolutura nuclear 3) Modificaciones en la
cromatina.
El nucleo durante la division celular
Durante la mitosis la envoltura
nuclear se desensambla y
reensambla. Ahora, en eucariontes
más simples que presentan una
mitosis cerrada (levaduras, hongos
filamentosos) esta no se
desensambla.

Para estudiar el desensamblaje se

ha hecho uso de la digitonina, la cual
es un detergente que permite hacer
perforaciones controladas en la
membrana plasmática, sin afectar
las membranas de los organelos.

Al desensamblar la envoltura
nuclear se aumenta la
permeabilidad del nucleo.

En este proceso además las láminas, algunas nucleoporinas, y proteinas de membrana interna de la
envoltura nuclear son fosforiladas.

Ergo, se tiene que: la forma del nucleo es

dinámica, existe una conversación entre
nucleo-celula.

El ensamblaje y desensamblaje de la
envoltura nuclear durante la mitosis depende
de un ciclo de fosforilación y desfosforilación,
sincronizado al ciclo celular.

Las láminas son elementos que dan

estabilidad al nucleo, propiedades mecánicas
y participan en la organización y regulación
del genomas. También existe una relación
entre estas y el envejecimiento. (Hutchinson
Gilford Progeria Syndrome)
Complejo poro nuclear

En la primera imagen se puede observar cómo existe una gran cantidad de complejos poro nucleare, y que
no son estructuras huecas. En la segunda imagen se tiene una vista del complejo desde el citosol, donde se
aprecia que estos poseen una estructura radial octamérica que posee un eje central. Y, en la tercera imagen
se tiene una vista del complejo desde el nucleo , donde se aprecia el canasto del poro nuclear.

Acá se tiene una vista lateral hacia el

complejo poro nuclear, se puede apreciar
que este posee proteinas intrínsecas de
membrana, para anclarse a la membrana
nuclear. (complejos de proteinas
transmembrana). El canal mide
aproximadamente 50 nm de diámetro.

Estructura del complejo poro nuclear

El poro nuclear
está formado
por entre 8 y
64 repeticiones
de alrededor de
30 proteinas.

Nup: Nucleoporinas, son las proteinas que conforman el poro, el número que las acompaña corresponde
al tamaño que poseen en kD. El complejo poro nuclear es la entidad más compleja de la célula.

Transporte a través del poro nuclear

Por el pasan moleculas menores a 30kDA libremente (diámetro entre 5-9 mm), el transporte es
bidireccional, selectivo y simultaneo en ambas direcciones.
 Las proteinas que se transportan al
nucleo son sintetizadas y plegadas en el
citosol.

Nuclear Localization Signal

(NSL)
NIS (Import): Es una secuencia de
aminoácidos característicos que van al
nucleo, usualmente son positivos.

NES (export): Potenciales secuencias de

exporte nuclear. Contienen aminoácidos
hidrofóbicos como leucinas. Para
observar su funcion se van eliminando
secuencias para ver si hay cambios en el
exporte nuclear.

Para que el funcionamiento del

transporte a través del complejo poro-
nuclear se requieren: factores
citoplasmáticos y energia.

Karioferinas: Poseen numerosos

nombres: factores citoplasmáticos,
receptores, entre otros. Pero
corresponden a la familia de
proteinas de importe (importinas) y
exporte (exportinas) nuclear. Estas
interaccionan con las NSL.

La direccionalidad del transporte a través del poro nuclear está dada por la hidrolisis asimétrica de GTP
por la proteína GTPasa monomérica RAN.
 Cuantificación de la capacidad y velocidad
de transporte a través del NPC: 0,6Um/seg
= 150 translocaciones/NPC/seg

Transporte de mRNA a través del NPC

Etapas de control de calidad, ensamblan la partícula

ribonucleoprotéica que es la transportada en el nucleo.

La direccionalidad del transporte de la partícula

ribonucleoproteína (mRNP) está dada por distintas helicasas,
una en el citoplasma y otra en el nucleoplasma. Ambas ocupan
ATP.

Ergo, se tiene que el transporte pasivo incluye a moleculas

menores a 30~50kDa, 5~9 nm de diámetro. Y, el transporte
activo es bidireccional de proteinas, pasan complejos
ribunucleoproteicos, partículas virales, las subunidades mayor y
menor del ribosoma.
Mencionar también que el importe y exporte puede ser regulado por señales. Por ejemplo, se tiene el
transporte del factor de transcripción NFAT4, el cual reside en el citoplasma y con un estímulo se
transloca al nucleo. En el laboratorio se estudia codificando el gen con un marcador fluorescente en un
plasmidio.

El ionóforo de calcio es una molecula

soluble en líquidos que transporta
iones. Se utiliza como un estímulo
artificial para aumentar la
concentración de calcio en la célula.

Cuerpos nucleares
Corresponden a organelos que no poseen membrana. Son variados en función, tamaño, forma. No son
inherentes al núcleo. Estos organelos concentran proteínas de manera específica, o sea compartimentan
funciones particulares.

Estos cumplen 3 requerimientos para su clasificación: 1) Son visibles microscópicamente (el menos en
algún periodo en la célula). 2) Concentran de manera específica proteínas y RNAs que los caracterizan. 3)
Mantienen un intercambio dinámico y regulado de sus componentes con el nucleoplasma
 Debido a que los cuerpos
nucleares concentran/poseen
proteinas específicas, estos pueden
ser identificados marcando estas
mediante fluorescencia u otras
técnicas que permiten su
visibilización en el microscopio.
SRSF2: Serina Arginina Splicing Factor 2.
Marcado en verde. Se ven los speckle
nucleares
A1:
A2: nucleolina
A3: merge
S6'GFP: Marca proteinas ribosomicas
Fib- RFP: Asiste al ensamblaje del ribosoma

nucleolo
Hitos e investigaciones en el descubrimiento de la funcion del nucleolo: Se estudio la síntesis de
ribosomas usando un mutante anucleolate (sin nucleolo) de Xenopus laevis, en los experimentos hechos
se demostró que en el mutante sin nucleolo no había sintetización de los ribosomas 27S y 18S. Aunque si
una pequeña cantidad de estos que vendrían formados desde el ovocito. Se observo que estos organismos
sin nucleolo eran incapaces de sintetizar RNA ribosomales.
Mediante la técnica de hibridación de acidos nucleicos se demostró que DNA complementario al RNA
ribosomal reside en el nucleolo. (La sonda es complementaria a la secuencia de acidos nucleicos buscada,
y esta sonda posee marcas en ciertos nucleótidos para así poder visualizar los acidos buscados)
 El nucleolo contiene el DNA que codifica para los RNA ribosomales 18S y 28S, y su falta impide la
síntesis de los RNAs ribosomales.
 El nucleolo es el lugar de síntesis de los RNA ribosomales
 En el nucleolo se sintetizan también otros RNAs, se procesan los tRNAs, y ensamblan otros
complejos ribonucleoproteicos como la telomerasa.
 El número y tamaño de los nucleolos no
es igual en todas las células, depende de
la necesidad de síntesis de proteinas.
Nuclear speckles
Son gránulos intercromatinicos que son ricos en SRSF2 y poseen una proteína llamada SON que es
intrínseca de estos. Se ha propuesto que cumplen 2 funciones: 1) Sitios de almacenamiento de factores de
procesamiento del pre-mRNA, 2)Centros de control de la expresión génica.
Son centros de procesamiento de splicing para mRNA. Entre los componentes de los speckles nucleares
(que además de sus respectivas funciones sirven para la identificación del speckle mediante fluorescencia)
se tienen: a) Proteinas SR (ricas en serina y arginina) que participan en el splicing, estas pueden ser
estables como SRSF2 o transitorias; b) Varios RNAs pequeños como los UsnRNAS, RNAs largos no
codificantes estructurales como MALAT1; c) mRNA identificados por la cola poli A.
La proteína RCO2 se localiza en el centro de los speckles nucleares y el mRNA en la periferia.
Los speckles nucleares son dinámicos, para hacer esta observación se graba un video sobre una
microscopia de fluorescencia donde se marca la proteína SON y el DNA, además se ha inhibido la
transcripción incubando las células con DRB, el cual inhibe las kinasas implicadas en la elongación.
Con esto se observó que los speckles nucleares pueden fusionarse, crecer, cambiar de forma,
intercambiar componentes con el nucleoplasma, etc. Cuando se inhibe la transcripción se puede
observar un mayor definición de los speckles, y más concentrados. Existe un continuo intercambio
entre speckles nucleares y el nucleoplasma, las proteinas ricas en S y R cuando son fosforiladas salen
del speckle hacia el nucleoplasma y viceversa.

¿Como se forman los organelos sin membrana?

Mediante la condensación de macromoléculas, por esto también poseen el nombre de condensados
biomoleculares. Se produce una separación de fases liquido-liquido, en donde las interacciones proteína-
proteina y proteína-RNA condensan y forman una estructura estable pero dinámica. Una vez que
alcanzan cierta concentración, forman una fase separada, agrupando componentes similares lo que
permite incrementar la velocidad de reacción o el secuestro de moleculas.
Las condiciones ambientales (pH, fuerza
iónica, temperatura) influyen en la formación
de los condensados biomoleculares.

Las proteinas involucradas en la formación de los condensados,

poseen la característica de poseer regiones intrínsecamente
desordenadas: no forman estructuras globulares y son ricas en
repeticiones de algunos aminoácidos. Estan en un estado de
orden-desorden continuo, inducido por interacción con otra
molecula (RNA o proteina) o por una modificación
postraduccional.
El ensamblaje de macromoléculas multivalentes (muchas
repeticiones de un mismo dominio) en estructuras
poliméricas, disminuye la solubilidad p8ermitiendo la
formacion de un condensado con distintas propiedades fisicoquímicas respecto al medio que lo rodea.